CN102492759B - 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 - Google Patents
一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102492759B CN102492759B CN201110385820.3A CN201110385820A CN102492759B CN 102492759 B CN102492759 B CN 102492759B CN 201110385820 A CN201110385820 A CN 201110385820A CN 102492759 B CN102492759 B CN 102492759B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powder
- maize yellow
- aspergillus niger
- peptide
- corn peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 141
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 141
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 95
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 239000000843 powder Substances 0.000 title claims abstract description 72
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 58
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 title claims abstract description 58
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 31
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 31
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 25
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 23
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 22
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 20
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 20
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 claims description 13
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 12
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 5
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims description 4
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims description 4
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 abstract 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 abstract 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 abstract 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 18
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 7
- 241001062009 Indigofera Species 0.000 description 7
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 7
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 7
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 7
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 7
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 7
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000002929 anti-fatigue Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000007483 microbial process Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于食品生物化工技术领域，特别公开了一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法。本发明所采用的菌种为黑曲霉，培养基的主要成分为玉米黄粉、麸皮和水再配以适量的蔗糖和磷酸氢二钾，发酵完成后加水浸提可溶性玉米肽，后经离心、抽滤、脱色、超滤、凝胶层析得到可溶性玉米肽溶液。本方法具有工艺简单、成本低廉、副产物少，同时所得玉米肽水溶性高、安全性好等优点。
Description
（一） 技术领域
本发明属于食品生物化工技术领域，特别涉及一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法。
（二） 背景技术
玉米蛋白粉是玉米加工淀粉过程中的主要副产物，虽然玉米蛋白粉中的蛋白质含量高达60%以上，但是由于其具有特殊的气味和色泽，口感粗糙，水溶性差以及严重缺乏赖氨酸、色氨酸等人体必须氨基酸致使其一般只能用作廉价的饲料，利用效率很低。虽然如此，玉米蛋白含有植物蛋白中少见的高比例亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸等疏水性氨基酸以及高含量的支链氨基酸和中性氨基酸，正是这种不平衡的氨基酸组成使得玉米蛋白成为生理活性肽的来源。
玉米活性肽是以玉米蛋白粉为原料，经水解得到的分子量很小，但活性很高的肽段分子组成的混合物，相对于氨基酸或蛋白质而言，玉米活性肽更易于人体吸收，并且在大范围pH下完全溶于水，无浑浊现象和沉淀物产生，去除了不良风味和过敏成分等。此外，玉米活性肽的热稳定性很好，组分不改变，功能不丧失，且无毒副作用，是一种安全可靠的天然食品蛋白。实验研究表明，玉米蛋白经酶解后制得的玉米活性肽具有抗高血压、促进酒精代谢、防治肝性脑病、抗氧化，抗疲劳等生理功能，因此，玉米活性肽是一种安全稳定且性能良好的生理活性肽。
玉米活性肽良好的溶解性使其改善了玉米蛋白质的许多不良性质，并表现出高浓度、低黏度、稳定性高等许多优良特性，利用此性质可以将其应用到如高蛋白流体食品等普通营养食品中；同时可以利用其抗高血压、促进酒精代谢、抗氧化、抗疲劳等生理功能，开发成运动饮料、醒酒饮料等功能饮料及其他功能性食品。随着科技的发展，人们生活水平的提高及保健意识的增强，玉米活性肽的药食同源性将更加显示出其广阔的应用前景。
黑曲霉，广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中，其产物对人体安全无害，是重要的发酵工业菌种。
目前，一般多采用酶法生产玉米肽，用于玉米蛋白水解的酶，仅限于少数几种微生物蛋白酶、动物蛋白酶和植物蛋白酶。植物蛋白酶如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等效率低，受外界环境因素影响大，成本高，不适合工业化生产；动物蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶等虽酶解效果好，但是价格太高，副反应多，同样也不适合工业化生产；微生物蛋白酶酶解效果较好，副反应少，但是价格相对较高，酶解产物在很大程度都存在着苦味问题，还需进行脱苦工艺。而微生物发酵法生产玉米多肽不需要蛋白酶的提取过程，而是直接利用微生物在生长过程中产生的各种酶类，此酶系非单一蛋白酶而是多种蛋白酶混合的复合酶系，包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶等一系列蛋白酶。同时通过微生物作用对某些苦味肽基团进行修饰和重组，使小肽之间、小肽与氨基酸之间发生移接、重排，制得的玉米蛋白肽基本无苦味和异味，且具有溶解性好、口感好、溶解粘度小、受热不凝固、安全性强等优点，这样不需要添加脱苦设备，简化生产工艺，可有效的降低生产成本，且在营养价值上也具有较大的潜能。
（三） 发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种工艺简单、副产物少、产品水溶性高的黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法，以黑曲霉发酵玉米黄粉为原料，主要包括如下步骤：
（1）往玉米黄粉中添加碱性盐浸泡、离心洗涤、烘干去除脂肪，然后将玉米黄粉配置成悬浮液，添加耐高温α-淀粉酶酶解，离心洗涤后烘干；
（2）将经过前处理的玉米黄粉与麸皮、蔗糖、K2HPO4和蒸馏水混合制成固态发酵培养基，在固态发酵培养基内接入活化的黑曲霉，于24~42℃下发酵培养2~5天；
（3）将发酵完全的培养基加入蒸馏水浸提后，进行离心处理得到上清液即为发酵液粗品，发酵液粗品采用中空纤维柱过滤截流，得到的滤液用活性炭进行脱色，然后浓缩、分离、得到玉米肽溶液，最后经蒸发浓缩、冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
本发明的创新之处在于使用黑曲霉进行固态发酵制备可溶性玉米肽，采用固态发酵在培养过程中无需震荡培养，培养条件相较于液态发酵简单，可以大大提高产物的反应效率、降低成本，玉米活性肽的转化率达到约22.151%，本发明制备的玉米肽的分子量主要集中在1517～6228。
固态发酵是微生物在没有或基本没有游离水的固态基质上的发酵方式，固态基质中气、液、固三相并存，即多孔的固态基质中含有水和水不溶性物质并存。与其他培养方式相比，固态发酵具有如下优点：（1）培养基简单，且来源广泛；（2）投资少，能耗低，技术较简单；（3）产物的产率较高；（4）基质含水量低，可大大减少生物反应器的体积，不需要废水处理，环境污染较少，后处理加工方便；（5）发酵过程一般不需要严格的无菌操作，更利于工业化生产。
本发明的更优方案为：
步骤（1）中，往每克玉米黄粉中添加16ml浓度为40g/L的Na2CO3，于40℃下浸泡10min后离心洗涤5次，将其置于50℃烘箱内烘干；将玉米黄粉与水按1:5的固液比配制成悬浮液，添加5%耐高温α-淀粉酶，置于60℃、150rpmin摇床中酶解，然后经离心洗涤10次，再置于50℃烘箱内烘干。
对原料进行预处理的目的在于，去除原料中的脂肪和淀粉，以减少玉米肽产品中脂含量和糖含量，使得玉米肽产品能更好地好呈现粉末状。
步骤（2）中，所述活化黑曲霉所采用的种子培养基的组成为0.2gNaNO3、0.1gK2HPO4、0.05gKCl、0.05gMgSO4、0.001gFeSO4、3.0g蔗糖、100mL蒸馏水，自然pH值，于121℃、0.25MPa条件下灭菌20min。凉至室温后，加入3~4环黑曲霉AS3.350斜面菌种，在30℃、220rpm条件下活化36h。
所述固态发酵培养基的组成为1.00g蔗糖、0.04g K2HPO4、10~19g经前处理的玉米黄粉、1~10g麸皮、30~65%蒸馏水，起始pH为3.0~7.0；活化黑曲霉在固态发酵培养基中，于33℃下发酵培养84h。
所述固态发酵培养基的优选组成为1.00g蔗糖、0.04g K2HPO4、17g经前处理的玉米黄粉、3g麸皮、50%蒸馏水，起始pH为5.5。
发酵条件的优化：
（1）含水量的优化：比较各培养基中含水量质量分数范围为30%～70%时，其他条件相同的情况下，含水量为50%时，所得玉米肽的转化率最高。
（2）配料比的优化：比较各培养基中玉米黄粉与麸皮的质量比范围为10:10~19:1时，其他条件相同的情况下，玉米黄粉与麸皮的质量比为17:3时，所得玉米肽的转化率最高。
（3）起始pH值的优化：比较各培养基中起始pH值范围为3.0~7.0时，其他条件相同的情况下，起始pH值为5.5时，所得玉米肽的转化率最高。
（4）发酵温度的优化：比较各培养基置于不同培养温度，范围为24~42℃，其他条件相同的情况下，培养温度为33℃时，所得玉米肽的转化率最高。
（5）发酵时间的优化：比较各培养基发酵时间不同，范围为48~120h，其他条件相同的情况下，发酵培养84h时，所得玉米肽的转化率最高。
在单因素实验的基础上，选取对玉米肽转化率影响较大的4个因素，设计4因素3水平的正交实验，因素和水平如下表所示，优化出黑曲霉固态发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的最佳工艺条件：发酵温度为33℃，发酵时间84h，含水量50%（水占培养基的质量比），配料比（玉米黄粉与麸皮的质量比）17:3，以此理论最佳组合在最佳pH值5.5条件下进一步实验，得到肽转化率为22.151%。
步骤（3）中，所述发酵液粗品采用截流分子质量104u的中空纤维柱过滤截流，脱色后的滤液浓缩至蛋白质浓度为20ng/ml，后经柱层析分离，得到玉米肽溶液，经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
本方法具有工艺简单、成本低廉、副产物少，同时所得玉米肽水溶性高、安全性好等优点。在试验中，比较了枯草芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉三种菌种发酵制备玉米可溶性玉米肽，发现采用黑曲霉发酵相较于其他两种菌种所得玉米肽的转化率最高；而且，黑曲霉是重要的发酵工业菌种，其产物对人体安全无害。得到的玉米活性肽可作为添加剂应用到保健食品、医药等领域。
（四） 具体实施方式
实施例1：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为16:4（共20g），水的添加量为培养基总质量的53%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于31℃霉菌培养箱内培养84h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为18.695%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例2：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为18:2（共20g），水的添加量为培养基总质量的53%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于33℃霉菌培养箱内培养90h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为22.151%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例3：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为18:2（共20g），水的添加量为培养基总质量的47%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于31℃霉菌培养箱内培养78h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为19.339%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例4：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为16:4（共20g），水的添加量为培养基总质量的47%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于35℃霉菌培养箱内培养90h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为18.892%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例5：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为17:3（共20g），水的添加量为培养基总质量的50%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于31℃霉菌培养箱内培养90h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为19.837%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例6：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为18:2（共20g），水的添加量为培养基总质量的50%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于33℃霉菌培养箱内培养78h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为20.513%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
实施例7：
（1）原料前处理 称取2份50g玉米黄粉分装在2个1000mL烧杯中，分别加入800mL 16mL/g Na2CO3溶液中40℃下浸泡10min，离心洗涤，滤渣置于50℃烘箱内烘干。此后，按照玉米黄粉与水的固液比为1:5的比例配制悬浮液，添加5%耐高温ɑ-淀粉酶，置于60℃、150r/min摇床中酶解，直至加入碘液不变蓝为酶解完全。后经离心洗涤10次，再将玉米黄粉置于50℃烘箱内烘干。
（2）发酵培养 精确称取蔗糖1g，K2HPO4 0.04g，玉米黄粉（脱淀粉后）与麸皮的质量比为17:3（共20g），水的添加量为培养基总质量的53%（质量比），于250mL三角瓶中，121℃下灭菌30min。冷却后接入经活化的黑曲霉，置于35℃霉菌培养箱内培养78h。发酵完全后，加水浸提，离心得到玉米活性肽溶液粗品。测定其肽转化率为19.145%。
（3）玉米肽的分离纯化
发酵液粗品采用截留分子质量104u的中空纤维柱过滤截留，得分子量在104u以下的滤液。利用活性炭将滤液进行脱色处理，再将脱色后的滤液进行浓缩至20mg/mL（蛋白质浓度），后经 Sephadex G-25柱层析分离，分离条件：上样浓度10mg/mL，上样量1 mL，流速0.5 mL/min，得到玉米肽活性成分。将得到的玉米肽溶液经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
Claims (4)
1.一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法，以黑曲霉发酵玉米黄粉为原料，其特征为，主要包括如下步骤：
（1）往玉米黄粉中添加碱性盐浸泡、离心洗涤、烘干去除脂肪，然后将玉米黄粉配置成悬浮液，添加耐高温α-淀粉酶酶解，离心洗涤后烘干；
（2）将经过前处理的玉米黄粉与麸皮、蔗糖、K2HPO4和蒸馏水混合制成固态发酵培养基，在固态发酵培养基内接入活化的黑曲霉，于33℃下发酵培养84h；所述固态发酵培养基的组成为1.00g蔗糖、0.04g K2HPO4、17g经前处理的玉米黄粉、3g麸皮、50%蒸馏水，起始pH为5.5；
（3）将发酵完全的培养基加入蒸馏水浸提后，进行离心处理得到上清液即为发酵液粗品，发酵液粗品采用中空纤维柱过滤截流，得到的滤液用活性炭进行脱色，然后浓缩、分离、得到玉米肽溶液，最后经蒸发浓缩、冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
2.根据权利要求1所述的黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法，其特征在于：步骤（1）中，往每克玉米黄粉中添加16ml浓度为40g/L的Na2CO3，于40℃下浸泡10min后离心洗涤5次，将其置于50℃烘箱内烘干；将玉米黄粉与水按1:5的固液比配制成悬浮液，添加5%耐高温α-淀粉酶，置于60℃、150rpmin摇床中酶解，然后经离心洗涤10次，再置于50℃烘箱内烘干。
3.根据权利要求1或2所述的黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述活化黑曲霉所采用的种子培养基的组成为0.2gNaNO3、0.1gK2HPO4、0.05gKCl、0.05gMgSO4、0.001gFeSO4、3.0g蔗糖、100mL蒸馏水，自然pH值，于121℃、0.25MPa条件下灭菌20min；凉至室温后，加入3~4环黑曲霉AS3.350斜面菌种，在30℃、220rpm条件下活化36h。
4.根据权利要求1或2所述的黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述发酵液粗品采用截流分子质量104u的中空纤维柱过滤截流，脱色后的滤液浓缩至蛋白质浓度为20ng/ml，后经柱层析分离，得到玉米肽溶液，经50℃、80r/min旋转蒸发浓缩，后经冷冻干燥得到固体玉米肽粉末。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110385820.3A CN102492759B (zh) | 2011-11-29 | 2011-11-29 | 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110385820.3A CN102492759B (zh) | 2011-11-29 | 2011-11-29 | 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102492759A CN102492759A (zh) | 2012-06-13 |
| CN102492759B true CN102492759B (zh) | 2014-04-30 |
Family
ID=46184621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110385820.3A Active CN102492759B (zh) | 2011-11-29 | 2011-11-29 | 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102492759B (zh) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104164463A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-11-26 | 泰安生力源生物工程有限公司 | 一种纤维副产品同化无机氮的低水分生料固态发酵方法 |
| CN104222480A (zh) * | 2014-10-10 | 2014-12-24 | 哈尔滨派特纳生物科技开发有限公司 | 一种利用玉米酒精蒸馏废水制备玉米蛋白肽的方法 |
| CN105506039B (zh) * | 2016-02-01 | 2019-05-21 | 浙江工业大学 | 米曲霉发酵虾壳制备抗氧化肽的方法 |
| CN105767453B (zh) * | 2016-03-21 | 2020-02-18 | 华南理工大学 | 一种玉米肽的制备方法及应用 |
| CN105994938A (zh) * | 2016-05-23 | 2016-10-12 | 吉林省农业科学院 | 一种复合菌固态发酵玉米蛋白粉的制作方法 |
| CN109554428B (zh) * | 2019-01-28 | 2020-09-04 | 江南大学 | 一种发酵法高效制备低苦味抗氧化玉米低聚肽的方法 |
| CN111035595A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-04-21 | 银川凤仪堂生物工程有限公司 | 一种粗粮复合酶解发酵物的制备方法及在护肤品中的应用 |
| CN113403361B (zh) * | 2021-06-11 | 2024-01-26 | 江南大学 | 一种高价值活性寡肽的制备方法 |
| JP7454201B1 (ja) | 2023-02-10 | 2024-03-22 | 株式会社フジワラテクノアート | 糸状菌固体培養物の製造方法、及び糸状菌固体培養物 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101126103A (zh) * | 2007-08-17 | 2008-02-20 | 黑龙江省宏达生物工程有限公司 | 微生物发酵法制备高f值玉米蛋白肽的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101531700B (zh) * | 2008-03-12 | 2010-12-08 | 中国食品发酵工业研究院 | 一种玉米低聚肽的制备方法 |
| CN102246890A (zh) * | 2010-05-20 | 2011-11-23 | 盐城工学院 | 利用玉米芯生产生物蛋白饲料的制作方法 |
| CN102154251A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-08-17 | 江南大学 | 一种利用黑曲霉生产羧肽酶的方法 |
-
2011
- 2011-11-29 CN CN201110385820.3A patent/CN102492759B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101126103A (zh) * | 2007-08-17 | 2008-02-20 | 黑龙江省宏达生物工程有限公司 | 微生物发酵法制备高f值玉米蛋白肽的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 固态发酵豆粕制备大豆肽发酵条件的优化;姜曼;《万方学位论文》;20110415;第6页第2.2.4.1节，第23页图3.1和第2-3段，第29页第1段，第45页第2-3段 * |
| 姜曼.固态发酵豆粕制备大豆肽发酵条件的优化.《万方学位论文》.2011, |
| 李鸿梅等.玉米蛋白粉制备玉米肽脱脂及水解工艺研究.《吉林农业大学学报》.2006,第28卷(第3期), |
| 玉米蛋白粉制备玉米肽脱脂及水解工艺研究;李鸿梅等;《吉林农业大学学报》;20060630;第28卷(第3期);摘要,第249页右栏 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102492759A (zh) | 2012-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102492759B (zh) | 一种黑曲霉发酵玉米黄粉制备可溶性玉米肽的方法 | |
| CN102669423B (zh) | 一种辣木提取物及其制备方法和辣木饲料添加剂 | |
| CN104886523B (zh) | 一种具有提鲜作用的调味品的制作方法 | |
| CN103907987B (zh) | 一种多菌种混合连续发酵制备山楂果醋饮料的方法 | |
| CN106190699B (zh) | 一种糙米红曲酒的制备方法 | |
| CN102028091B (zh) | 一种纳豆菌发酵法制备低分子鱼肽的方法 | |
| CN103421645A (zh) | 一种核桃多肽酒及其制作方法 | |
| CN106509140A (zh) | 一种发酵型大豆乳清饮料及其制备方法 | |
| CN110301601A (zh) | 一种含有褐藻寡糖的可溶性海带粉及其酶法生产方法 | |
| IT8224870A1 (it) | Miglioramento in e relativo a un enzima per decomposizione di un carboidrato ad alto peso molecolare, il carboidrato isolato ad alto peso molecolare, un metodo per la selezione di un microorganismo produttore di tale enzima e un metodo per la produzione di tale enzima | |
| CN102559538B (zh) | 高产l-天冬氨酸酶的大肠埃希氏菌及其应用 | |
| CN102296032B (zh) | 转葡糖苷酶及其制备和固定化方法 | |
| CN105852104A (zh) | 一种保健型速溶蛋白粉的制作方法 | |
| CN103789267B (zh) | 一种改进的海马神经元原代培养方法 | |
| CN106173721B (zh) | 一种大豆糖蜜红茶菌发酵饮料及其制备方法 | |
| US20210321643A1 (en) | Method for preparation of nitrite ion-containing allium tuberosum fermentate and composition thereof | |
| KR100690506B1 (ko) | 현미상황버섯추출물을 이용한 식혜음료제조방법 | |
| CN104522798B (zh) | 一种发酵磷虾饮料及其制作方法 | |
| CN106119116A (zh) | 利用食品饮料生产废水培养的单细胞蛋白复合酶制剂制备酵母自溶物的方法及所制酵母产品 | |
| CN103966291A (zh) | 酵母蛋白胨 | |
| CN104388502A (zh) | 一种混合菌种固态发酵制备米糠活性肽的方法 | |
| CN107574213A (zh) | 一种利用纳豆菌发酵制备玉米肽的方法 | |
| Kumar et al. | Continuous hydrolysis of raffinose family oligosaccharides in soymilk by fluidized bed reactor | |
| CN107460178B (zh) | 一种甘露聚糖酶制备方法及其提取精制装置 | |
| CN115261358A (zh) | 一种茶饮料加工专用单宁酶的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 250000 Science Park, West New Town University, Ji'nan, Shandong Patentee after: Qilu University of Technology Address before: 250353 College of food science and biotechnology, College of science and technology, West Metro University, Shandong, Ji'nan Patentee before: Shandong Institute of Light Industry |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 250000 science and Technology Park, Xincheng University, Jinan, Shandong Province Patentee after: Qilu University of Technology (Shandong Academy of Sciences) Country or region after: China Address before: 250000 science and Technology Park, Xincheng University, Jinan, Shandong Province Patentee before: Qilu University of Technology Country or region before: China |