CN102482683B - 能够提供热耐受性的转录调节因子的表达 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及的是用以在一种植物中产生期望的表型的方法，所述的方法是通过对植物中基因表达的操控来实现的。本发明方法涉及到对一种碱性螺旋‑环‑螺旋(bHLH)亚组1b基因的表达或者活性所具有的表达水平进行增强的手段，其中所述期望的表型能够导致降低的花朵败育以及增加的产量，该期望的表型例如是相对于一种野生型对照植物而言在热胁迫之后而具有的增强的耐热性。本发明包括通过所述方法制备得到的植物。本发明也涉及可有效的用于所述方法之中的核酸序列和构建体，同时涉及生成及分离该植物的方法，其中所述的植物具有增强碱性螺旋‑环‑螺旋(bHLH)亚组1b表达或活性的表达。

Description

能够提供热耐受性的转录调节因子的表达
相关申请的参考
本申请要求享有2009年6月30日提交的美国临时申请No.61/221813的优先权。上述文献中的内容作为一个整体在本发明中被引入作为参考。
发明领域
本发明属于所述的植物分子生物学的领域并且涉及到具有新的表型的转基因植物，用以制造这样的植物的方法以及可以被有效的用在这样的方法之中的多核苷酸和多肽。更为具体的，本发明涉及到一种转录调节因子的表达以及转基因植物，其中该转基因植物具有增强的转录调节因子活性，从而能够制造出具有有益表型的植物。
发明背景
环境胁迫是导致农作物的产量显著增加的原因。通过对玉米和大豆在1982-1998年间在美国各地的生产与气候变化之间的关系进行研究(参见Lobell及Asner于2003年发表的文章)发现即使是逐渐变化的温度也能够对作物的产量产生可以预见的影响。对于玉米和大豆而言，已经可以估计到，当生长温度上升至超过季节的最适宜温度后，每上升一度，产量会降低17％。单子叶植物和双子叶植物对于热胁迫而言都是敏感的，特别是在开花以及种子萌发的过程中，热胁迫会转化成为一种对种子产量的显著性的影响(参见Young等人于2004年发表的文章；Sato等人于2002年发表的文章；Angadi等人于2000年发表的文章；Carlson于1990年发表的文章；Wahid A等人于2007年发表的文章)。在野外，热胁迫通常伴随着其他的环境胁迫，例如干旱，干旱能够进一步的加重所述的植物生产力所承担的负担。热胁迫能够给植物带来大量的细胞影响，例如，改变的膜流动性及渗透性，蛋白质的聚合作用及蛋白质的变性，由上述的原因所导致的细胞损害可能会在植物的生长及发育过程中产生有害的变化，该变化能够影响植物的存活能力。已经表明植物具有一种与生俱来的基本的及可获得的热耐受能力，且多种不同的植物品种都存在一种普遍的热应答机制(参见Kapoor等人于1990年发表的文章；Vierling于1991年发表的文章；Flahaut等人于1996年发表的文章；Burke等人于2000年发表的文章；Hong以及Vieling于2000年发表的文章；Massie等人于2003年发表的文章；Larkindale等人于2005年发表的文章)。许多研究已经被实施用来对某些基因及途径进行识别和鉴定，其中所述的基因及途径是在植物的热耐受性中所涉及到的基因和途径。例如，被大家所关注的热休克转录因子(HSF)和热休克蛋白(HSP)基因，在存在植物生长激素如脱落酸及乙烯时，对这些基因在对热胁迫所进行的应答中所具有的任务和所产生的作用的阐述。虽然并不清楚植物是怎样对热进行感知的，但显而易见的是这涉及到多种信号途径以及细胞组成成分(参见Larkindale等人于2005年在PlantPhysiol《植物生理学》138：882-897中发表的文章)，并且在环境胁迫与营养胁迫之间存在着信号途径的串扰，其中所述的环境胁迫及营养胁迫例如是，热休克胁迫、水胁迫/干旱、寒冷胁迫、氧化胁迫和重金属胁迫。
转录因子是DNA结合蛋白质，其中DNA结合蛋白质能够与特异性的启动子序列或者增强子序列进行相互作用，并且改变相关基因所进行的基因表达。当该转录因子所结合的特异性序列与一组基因相关联时，整个途径可以被进行同等程度的调节，同时发生上调节或者去调节，这种调节是利用各种不同的组成性基因来实现的。在对一种刺激所进行的应答中，转录因子能够同时对一组基因进行改变，其中所述的刺激例如是环境胁迫，营养状态或者病原体侵袭，例如，或者可以是一种信号途径(如荷尔蒙信号途径)的组成部分。转录因子呈现出模块结构，并主要依据所述的DNA结合结构域进行分类。一些转录调节因子是多种信号级联的参与者。根据其他调节因子及途径组成成分的存在或不存在，得到被调节的所述的途径以及下游基因是可以改变的。所述的转录调节因子是以一种网络的形式来进行相互作用的，而所述的结果则取决于众多的相互作用的因素。
转录活化作用主要是经由转录因子而被进行介导的，其中所述的转录因子能够与增强子元件以及启动子元件进行相互作用。转录因子与这样的DNA元件所进行的结合构成了转录开始的一个至关重要的步骤。每一个转录因子能够与存在于启动子之中的其特异性的结合序列进行结合，并且对上述经过连结的编码区域的表达进行激活，其中所述的激活是经由与辅助活化因子和/或蛋白质之间的相互作用来实现的，所述的辅助活化因子和/或蛋白质属于转录复合体中的一部分。
转录因子碱性螺旋-环-螺旋蛋白39(bHLH39)是存在于阿拉伯芥(Arabidopsisthaliana)中的最大的转录因子家族之一中的一个成员，是由多达162个蛋白质所构成的(参见Heim等人于2003年发表的文章，Toledo-Ortiz等人于2003年发表的文章，Bailey等人于2003年发表的文章)。这个蛋白质家族区别于其他的转录因子的特征在于它所具有的碱性螺旋-环-螺旋结构域(bHLH)。研究表明碱性区域对于DNA结合是至关重要的，而疏水性的螺旋-环-螺旋区域对于同型二聚体以及异型二聚体的形成是必需的。碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质可以具有多个结合伴侣，并且因此能够对不同的子集基因所具有的表达水平进行调节，这种调节作用取决于其当时的伴侣(参见Zhang等人于2003年发表的文章)。一些功能性研究已经在一系列细胞工程中涉及到碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质，其中所述的细胞工程例如是根表皮细胞的命运决定(参见Tominaga，R等人于2007年发表的文章)，花青素的制备(参见Ramsay等人于2003年发表的文章)，发光信号(参见Martinez-Garica等人于2000年发表的文章)以及铁的吸收(参见Ling等人于2002年发表的文章)。
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质所具有的碱性区域是由大约15-17个残基所组成的，该碱性区域负责与存在于靶向基因的启动子之中的顺式元件进行结合。已经预测到在全部的阿拉伯芥(Arabidopsis)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质中有百分之七十五能够与核心基序结合，其中已知的核心基序是E-box(5’CANNTG-3’)(参见Toledo-Ortiz等人于2003年发表的文章)。可以根据是两个关键性残基的存在来预测E-box所具有的特异性，其中所述的两个残基是谷氨酸-85以及精氨酸-88。碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，以及与它最为接近的三个阿拉伯芥(Arabidopsis)同系物(碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38、碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100和碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101)中都含有所述的关键性的谷氨酸以及精氨酸，因此被预测为能够与这种基序进行结合。所述的E-box结合类型可依据所述的两种重要核苷所具有的结合优先次序进行进一步的划分。根据两个残基精氨酸-89和组氨酸-81的存在，已经可以预知碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39能够与G-box基序CACGTG进行结合。精氨酸-89以及组氨酸-81负责与存在于G-box之中的两个重要的“CG”核苷进行接触并且对所述的相互作用进行稳定化处理。在其他三个阿拉伯芥(Arabidopsis)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39同系物中也找到了这两个关键性的残基。在全部的95个同系物中所述的四个关键性的残基都是保守性的，除了两种情形之外，其中鹰嘴豆(Cicer arietinum)同系物具有取代了组氨酸-81的精氨酸，而葡萄(Vitis vinifera)同系物具有取代了谷氨酸-85(附图1)的缬氨酸。
用于支持碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所具有的结合特异性的进一步的证据来自于对大米定向同源基因OsIRO2所进行的报道，其中所述的定向同源基因能够与5’-CACGTGG-3’进行结合(参见Ogo等人于2006年发表的文章)。在OsIRO2中，存在于核心结合基序之外的残基同样非常有可能对结合特异性产生影响。
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质能够以二聚体的形式与它们的DNA靶向进行结合，并在螺旋-环-螺旋结构域中编码结合伴侣特异性。由完整的人类Max-DNA复合体所具有的晶体结构中所得到的证据表明，残基亮氨酸99对于二聚体的形成是至关重要的(参见Brownlie等人于1997年发表的文章)。在全部的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39同系物中除了葡萄(Vitis vinifera)同系物之外，这个残基都是保守型的。在全部的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39同系物之间能够表现出超过95％的保守性的其他残基包括精氨酸-100，酪氨酸-124，异亮氨酸-125，以及脯氨酸-126。在位置126上对于脯氨酸的需求似乎是特别针对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100，以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101而言的，这表明这个残基对于促进二聚化作用特异性而言是重要的，其中所述的特异性是针对这个组而言的。
根据存在于DNA结合结构域以外的结构相似度，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39与其他的10个碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质相似，它们共同形成了亚组1b(参见Heim等人于2003年发表的文章)。所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39和与其最为接近的阿拉伯芥(Arabidopsis)同系物碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38具有79％的相似度，并且它们以一前一后的位置关系存在于所述的基因组之中，这表明了一种近代的进化复制(recentevolutionary duplication)。所述的亚组1b中的其他成员包括碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101。在下文的表格A中表示出的是存在于阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及其他三种阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b成员之间的相似度百分数(根据Clustal W序列比对方法)。
表格A：存在于阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39、阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38、阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101之间的相似度百分数
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38都是在寻找DNA的下游靶向的过程中被识别出来的，其中所述的DNA与一个指(Dof)转录因子结合，该转录因子为ocs-元件结合因子(OBP3)，可以由水杨酸进行诱导。在这种情况下，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39被称为ORG3，同时碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38被称为ORG2。已经表明，在OBP3过表达细胞系中，所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38被进行了协同调节并且具有增强的表达，而在OBF3功能缺失的细胞系中，所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38被进行了去调节(参见Kang等人于2003年发表的文章)。随后，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39和碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38与存在于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b之中的跟它们最为接近的两个同系物一同表现出能够对由铁缺乏所介导的胁迫产生应答，其中所述的最为接近的两个同系物是碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101。已经对所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38的表达相对于铁缺乏所产生的作用进行了研究。转录调节因子FIT(阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋29)(AtbHLH29)已经表明可以与碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38或者碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39发生相互作用，并以转录的形式对所述的铁吸收基因FRO2和IRT1进行调节。已经发现，通过FIT所进行的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38或者阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39发生的过表达能够改变FRO2以及IRT1所具有的表达类型，产生组成性的活化作用，并且导致铁缺乏的耐受性(参见Yuan等人于2008年发表的文章)。FRO2是三价铁螯合物还原酶，是土壤中铁含量增加的形成原因，而铁含量的增加是用以增加铁的溶解性及生物可利用率所必需的过程。随后，铁通过铁转运蛋白IRT1进行了跨膜转移。在烟草植物中，在所述的35S启动子的控制下，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(AtbHLH)38或者阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(AtbHLH)39蛋白质发生的异位表达可使所述的核黄素合成和排泄，这种合成和排泄是一种已知的对铁缺乏环境的防御机制(参见Vorwieger等人于2007年发表的文章)。
在转录调节途径中，利用第一种转录调节因子对第二种转录调节因子进行调节是很普遍的，这取决于所述的相互作用的因子所具有的网络结构。单个的转录调节因子可以在各种各样不同的途径中发挥作用，从而产生各种各样不同的生理学结果或者生物化学结果。已经在一些MYB转录因子与一些碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质之间发现了这样的一种关联性(参见Ramsay以及Glover于2005年发表的文章)。
MYB转录因子家族是由至少198个基因构成(参见Yanhui等人于2006年发表的文章)，并且已经被提议在一系列广泛的过程中具有调节功能，其中所述的过程涉及从生长到防御应答的形成。根据不完整的MYB重复的存在与否以及存在的数量对植物的MYB蛋白质进行分类，其中每一个不完整的MYB重复是由大约52个氨基酸所构成的。所述的MYB结构域能够形成一种螺旋-扭转-螺旋构象并且呈现出所述的DNA结合结构域。MYB蛋白质所具有的三个主要的组已经被划分成为R1R2R3-MYB，R2R3-MYB以及MYB相关蛋白质。
在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所述的R2R3-MYB家族蛋白质是由125个蛋白质构成，并且其特征是在它们的N-末端上具有R2R3DNA结合结构域(参见Kranz等人于1998年发表的文章，以及Stracke等人于2001年发表的文章)。这些基因参与了许多的生物学过程，包括调节荷尔蒙作用、次级代谢(参见Paz-Ares等人于1987年发表的文章)、控制细胞的形态形成(参见Oppenheimer等人于1991年发表的文章)、分裂组织、花朵以及种子的发育(参见Kirik等人于1998年发表的文章，Schmitz等人于2002年发表的文章)以及对各种不同的环境因素所进行的应答(参见Kranz等人于1998年发表的文章；Jin以及Martin于1999年发表的文章；Meissner等人于1999年发表的文章)。
发明概述
本发明是基于下述的发现而产生的：一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因转录调节因子的过表达能够生成一种植物，相对于一种野生型的植物而言，上述生成的植物具有一种改变的表型，例如增强的热胁迫耐受性，在热胁迫过程中减少的花朵败育，以及增加的产量。
更为具体的，本发明涉及到对一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39或者碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101进行的作为转录调节因子的识别，其中当所述的转录调节因子发生过表达时，将生成具有一种热胁迫耐受性的表型的植物。
在一个方面中，所述的发明提供了一种用以制备转基因植物的方法，所述的方法是通过下述的方式来实现的：利用一种载体对一种植物、一种植物组织培养物、或者一个植物细胞进行转化，其中所述的载体中含有一种核酸构建体，所述的核酸构建体能够增强一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因所具有的表达或者活性，从而获得一种植物、组织培养物或者一个植物细胞，它们具有增强的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的表达或者活性，并且使所述的植物进行生长或者从所述的植物组织培养物或者植物细胞中使植物进行新生，在所述的方法中能够产生一种植物，相对于野生型植物而言，所生成的植物具有增强的热胁迫耐受性。
因此，本发明提供了一种用以制备植物的方法，所述的植物具有改善的性质，其中该方法包括增强一种内生性的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因所具有的表达或者活性，所述的植物具有一种有利的表型或者具有改善的性质。在一种特定的实施方式中，本发明提供了一种用以制备植物的方法，所述植物相对于一种野生型的植物而言具有增强的热胁迫的耐受性，其中该方法包括转基因植物的产生以及植物基因组的修饰，且所述的转基因植物的产生以及植物基因组的修饰是通过使用在本发明中所描述的方法来实现的。
热胁迫耐受性指的是植物所具备的对抗热削弱作用的能力并且在性能上优于一种野生型植物，其中所述的热削弱作用能够减少野生型植物的产量。对于本发明中使用的术语，术语“增强的热胁迫的耐受性”指的是当与一种相对应的野生型植物所具备的热胁迫耐受性相比时，一种植物的热胁迫耐受性更强。例如，相对于一种野生型的植物而言具有增强的热胁迫耐受性的植物可以具有比所述的相对应的野生型的植物高5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％或者更高的热胁迫耐受性。
在本发明所描述的方法涉及对一种内生性的或者异源性的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因具有的活性进行增强，这种增强是通过过表达或者启动子的修饰作用来实现的，在所述的方法中能够生成一种植物，所述的植物相对于一种野生型植物而言具有一种有利的表型或者改善的性质，例如具有增强的热胁迫耐受性。在一个方面中，该发明提供了一种用以制备植物的方法，其中所述植物相对于一种野生型的植物而言具有增强的热胁迫的耐受性，该方法是通过下述的方式来实现的：向一个植物细胞内导入一种核酸构建体，其中所述的核酸构建体能够对所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因或者蛋白质所具有的表达或者活性进行增强。例如，相对于一种野生型的植物而言，一种具有增强的热胁迫耐受性的植物是通过下述的方式来制备得到的：a)提供一种核酸构建体，所述的核酸构建体中含有一个启动子，所述的启动子与一种核酸构建体发生了可操作性的连接，其中所述的核酸构建体能够表达碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的活性；b)将所述的核酸构建体插入到一种载体之中；c)利用所述的载体对一种植物、组织培养物、或者一种植物细胞进行转化，从而获得一种具有增强的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b活性的植物、组织培养物或者植物细胞；d)植物进行生长或者从组织培养物或植物细胞中使植物再生，所述的植物相对于一种野生型的植物而言具有增强的热胁迫耐受性。构建体包括一种启动子，例如是一种组成性启动子，一种组织特异性的启动子或者是一个可诱导型的启动子。优选的，所述的组织特异性启动子是一种根启动子(root promoter)。一种优选的可诱导型的启动子是一种热诱导型启动子或者干旱诱导型启动子。
本发明所提供的是一种转基因植物，该转基因植物具有有利的表型或者改善的性质，例如增强的热胁迫耐受性，并且该转基因植物是利用在本发明中所描述的方法制备得到的。
另一个方面本发明提供了一种植物，该植物的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因中具有一种非天然存在的诱变，其中所述的植物能够增强的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的表达或者活性，并且相对于一种野生型的植物而言该植物具有增强的热胁迫耐受性。增强的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的表达或者活性指的是：相对于野生型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)而言，在一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因的DNA水平、RNA水平或者蛋白质水平上发生了2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、或者75倍的增加或者增强，或者相对于野生型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)活性而言，在碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的活性方面发生了2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、或者75倍的增强。
进一方面涉及一种植物，该植物含有一个内生性的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因，其中所述的基因具有与其可操性连接的改变的启动子序列。增强子元件的插入或者启动子的诱变是本发明所设想的，而增强子元件的插入或者启动子的诱变能够导致增强的基因表达。
本发明进一步提供了一种转基因种子，该转基因种子是由本发明中所述的转基因植物所生成的，其中所述的种子能够生成一种植物，所述的植物相对于一种野生型的植物而言具有一种有利的表型或者改善的性质，例如增强的热胁迫耐受性。
在另外一种实施方式中，本发明提供了核酸，用以在一种植物细胞中进行核酸的表达，从而生成一种转基因植物，其中所述的转基因植物相对于一种野生型的植物而言具有一种有利的表型或者改善的性质，例如增强的热胁迫耐受性。
在本发明的某些方面中，在序列识别号1-17、29-52、79-83以及89-97中描述了能够编码一种野生型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因的范例性的序列或该序列的一部分。序列识别号1-17描述了编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39基因的范例性序列。序列识别号29-52描述了编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38基因的范例性序列。序列识别号79-83描述了编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101基因的范例性序列行。序列识别号89-97描述了编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100基因的范例性序列。所述的发明进一步的提供了组合物，该组合物中含有本发明中所述的核酸，其中该核酸是用来在一种植物细胞中进行表达，从而生成在本发明中描述的转基因植物。
除非另外定义，否则在本发明中所使用到的全部的技术术语以及科学术语将具有发明所属技术领域的普通技术人员普遍所理解的含义。尽管那些与本发明中所描述的方法及材料相类似或者相等价的方法及材料可以被用来进行对本发明的实践或者测试，但是在下文中描述了更为适合的方法及材料。在本发明中所提及到的全部的公开出版物，专利申请，专利，以及其他的参考文献中的全部内容被引入作为参考。如果存在矛盾之处，本发明的说明书，包括定义，将占主导地位。除此之外，所述的材料、方法、以及实施例仅仅是描述性质的且并不会限制本发明。
本发明所具有的其他的技术特征以及进步将通过随后的详细描述以及权利要求而变得显而易见，并且这些技术特征以及进步将被涵盖在随后的详细说明以及权利要求的范围内。
附图的简要说明
附图1是对各种不同的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(AtbHLH)蛋白质所进行的ClustalW序列比对，其中所述的蛋白质包括阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101。
详细说明
本发明在一定程度上是基于对下述植物的发现而产生的，该植物相对于一种野生型的对照而言具有改善的农艺学性质，例如，增强的热胁迫耐受性。更为具体的，本发明是基于下述的发现而产生的，一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b转录调节因子的过表达能够赋予所述植物以一种改善的农艺学性质，例如，相对于一种野生型的对照而言增强的热胁迫的耐受性，其中所述的热胁迫耐受性能够导致花朵败育的减少以及产量的增加。
已经展现出所述的令人惊奇的结果：碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39亚组1b所发生的过表达足以能够赋予热耐受性。根据微阵列以及凝胶迁移检测(EMSA)分析，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39是Myb68的一种下游靶向，其中所述的Myb68是另外一种转录因子，当所述的转录因子发生过表达时能够提供热耐受性。微阵列分析表明在35S-碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39中的IRT1所发生的基因表达没有受到显著性的影响，这意味着由碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所赋予的热耐受性是经由一种不同于铁剥夺应答的单独的途径来发生的。
因此本发明提供了用以提高(例如，增强)植物的热胁迫耐受性的方法，该方法是通过对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因或多肽的表达或活性进行增强的方式来实现的：。用以对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的表达或活性进行增强的方法是本领域所已知的。例如，与一种野生型(例如，对照)的植物相比，具有增强的热胁迫耐受性的植物是通过下述的方式来制备得到的：向一个植物细胞中导入一种核酸构建体，该核酸构建体能够对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因或者多肽所具有的表达或活性进行增强。所述发明也包括通过本发明的方法制备得到的转基因植物以及通过所述的转基因植物得到的种子，其中所述的种子能够生成一种具有增强的热胁迫耐受性的植物。
为了方便起见，在进一步说明本发明之前，对说明书、实施例以及后附的权利要求中使用到的某些术语进行了定义。对这些定义的解读应当根据本发明公开的其余部分内容以及本领域普通技术人员的理解。
除非另外定义，否则在本发明中所使用到的全部的技术术语以及科学术语将具有发明所属技术领域的普通技术人员普遍所理解的含义。尽管那些与本发明中所描述的相类似或者相等价的方法及材料可以被用来进行对本发明的实践或者测试，但是在下文中描述了更为适合的方法及材料。在本发明中所提及到的全部的公开出版物，专利申请，专利，以及其他的参考文献中的全部内容被引入作为参考。如果存在矛盾之处，本发明的说明书，包括定义，将占主导地位。除此之外，所述的材料、方法、以及实施例仅仅是描述性质的且并不会对本发明构成限制。
“启动子序列”，或者“启动子”，指的是能够诱导一种发生了可操作性的连接的基因序列在一种植物细胞内转录的核酸序列。启动子包括例如(但不局限于)组成性启动子，组织特异性启动子例如一种根启动子(root promoter)，可诱导型启动子例如一种干旱诱导型启动子，一种热诱导型启动子或者一种内生性启动子例如一种在正常情况下与目标基因进行了连接的启动子，其中所述的目标基因即为碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因，或者是一种隐秘的启动子序列或者合成性的启动子序列，所述的启动子序列能够指导一个基因在一个植物细胞内所进行的表达，其中所述的植物细胞在正常情况下不能够与一种可以表达的基因进行连接。
术语“表达框架”指的是一种载体构建体，其中基因或者核酸序列被进行了转录。除此之外，表达的mRNA可以翻译成为一种多肽。
术语“表达”或者“过表达”可以交替使用并且指的是一种基因所进行的表达，其中所述的表达能够使得所述的转基因或者可操作性的连接的基因表达。相对于一种相对应的野生型细胞而言，可以提升存在于所述细胞中的整体表达水平。
术语“非天然存在的诱变”指的是能够向一种植物或者植物群体中导入诱变或者遗传性改变的任何方法。例如，化学诱变例如乙烷磺酸甲酯或者甲烷磺酸乙酯，快中子诱变，DNA插入手段例如T-DNA插入或者定点诱变方法。同样被包括在内的是能够诱导遗传性的改变的方法，例如兆碱基核酸酶方法，其中所述的兆碱基核酸酶是一种特定类型的“DNA剪刀”，它们能够在存活的细胞中的具体位点上切断一条染色体。
术语“热胁迫”指的是一种条件，在这种条件下植物的生长或者生产力受到了抑制，这种抑制是相对于另外一种植物而言的，在另外一种植物中热并不是一种限制因素。
术语“热胁迫的耐受性”指的是一种植物在热胁迫的条件下所具有的胜过野生型植物的能力。
术语“干旱胁迫”指的是一种条件，在这种条件下植物的生长或者生产力受到了抑制，这种抑制是相对于另外一种植物而言的，在另外一种植物中水并不是一种限制因素。术语“水-胁迫”与所述的干旱水胁迫是同义的并且是可以交替互换使用的。
术语“干旱耐受性”指的是一种植物在干旱胁迫的条件下或者在水份有限的条件下所具有的胜过野生型植物的能力，或者是在生长及发育的过程中可以使用较少的水份的能力。
术语“干重”指的是已经通过干燥取出大部分细胞水分的植物组织，同时所述的术语与所述的术语生物量是同义的并且可以进行交替互换使用的。
术语“无效的”被定义为一种转基因细胞系的独立的胞系，其中所述的兄弟姊妹已经丧失了所述被插入的转基因并且因此被用来作为一种对照的细胞系。
本发明中使用了许多不同的标准缩略语，例如g：克；WT：野生型；DW：干重；WUE：水利用效率；d：天数。
术语“碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b”指的是碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39转录调节因子，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38转录调节因子，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100转录调节因子或者碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101转录调节因子。在一些情形中该术语碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)可以被用来指代碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b，例如上下文适当时。
术语“碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)核酸”指的是碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)核酸的至少一部分。与之相类似的，术语“碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白质”或者“碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)多肽”指的是它们的至少一部分。对于一种核酸而言，一部分指的是至少21个核苷酸的长度且一种蛋白质或者多肽的一部分指的是至少7个氨基酸。术语“AtbHLH”指的是一种阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因。术语“Bn bHLH”指的是一种甘蓝型油菜(Brassica napus)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因。
确定存在于两个或者多个序列之间的同源性
为了确定存在于两个氨基酸序列之间或者两个核酸之间的同源性百分数，对所述的序列进行比对，其目的在于进行最佳的比较(例如，可以向用于进行比较的所述序列中的任意一个之中导入空位，其目的在于在所述的序列之间进行最佳的比对)。在此之后对相对应的氨基酸位置或者核苷位置上的所述的氨基酸残基或者核苷进行比较。当占据在所述的第一条序列的一个位置上的氨基酸残基或者核苷与存在于所述的第二条序列的相对应的位置上的氨基酸残基或者核苷相同时，则表示在那个位置上所述的分子是具有同源性的(即，当在本发明中被进行使用时，氨基酸或者核酸所具有的“同源性”等价于氨基酸或者核酸的“同一性”)。
可以依照存在于两条序列之间的同一性的程度，来确定所述的核酸序列的同源性。所述的同源性可以通过使用本领域已知的计算机程序来进行确定，例如在所述的GCG程序包里提供的GAP软件。参见，Needleman以及Wunsch(于1970年)发表的文章。为了进行核酸序列的比较，使用具有下述设置的GCG GAP软件：GAP建立罚分(creation penalty)为5.0并且GAP扩展罚分为0.3，在上文中所提及的所述相类似的核酸序列所具有的编码序列能够表现出一定程度的同一性，其中所述的一定程度的同一性是与在序列识别号：1中所表示的所述的DNA序列所具有的编码序列部分相比优选为至少具有70％，75％，80％，85％，90％，95％，98％，或者99％的同一性。
术语“序列同一性”指的是在一段特定区域内所进行的比较中，在逐个残基进行比较的基础上两个多核苷酸序列或者多肽序列相同的程度。术语“序列同一性的百分数”是通过下述的方式来进行计算的：在要进行比较的区域内对两条经过了最佳比对的序列进行比较，对存在于两条序列之上的具有相同的核酸碱基(例如，在核酸的情况下，为A，T，C，G，U，或者I)的位置的数量进行确定，从而获得所述的匹配位置的数量，用所述的匹配位置的数量除以存在于所述的比较区域之中的位置的总数量(即，窗口的大小)，并且将所述的结果乘以100从而获得所述的序列同一性的百分数。当在本发明中被进行使用时，术语“本质上的同一性”代表的是一个多核苷酸序列所具有的一种特征，其中所述的多核苷酸包括这样的一条序列，当在一个要进行比较的区域内与一种参考序列进行比较时，该序列具有至少80％的序列同一性，优选具有至少85％的同一性并且通常具有90％至95％的序列同一性，更为通常的情况是具有至少99％的序列同一性。术语“阳性残基的百分含量”是通过下述的方式来进行计算的：在要进行比较的区域内对两条经过了最佳比对的序列进行比较，如上文中所定义的，对存在于两条序列之上的具有相同的并且保守的氨基酸取代的位置的数量进行确定，从而获得所述的匹配位置的数量，用所述的匹配位置的数量除以存在于所述的比较区域之中的位置的总数量(即，窗口的大小)，并且将所述的结果乘以100从而获得所述的阳性残基的百分含量。
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的表达以及活性的增强表达
本发明的一个方面涉及的是用以使碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的表达以及活性进行增强或者过表达的手段以及方法，这能够导致碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质的表达以及活性的增强。术语“碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的表达或者活性”涵盖了这些水平的增加。增强的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的表达或者活性指的是与野生型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)相比，在一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的DNA水平、RNA水平或者蛋白质水平上发生了2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、或者75倍的增加或者增强，或者相对于野生型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的活性而言，在碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质的活性方面发生了2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、或者75倍的增强。
用以编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的序列或者是上述序列的一部分包括例如：序列识别号：1-17，29-52，79-83以及89-97，其中所述的序列或者序列的一部分能够被用来制备用于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的表达的构建体。
表达构建体能够以任意组成性的方式在所述的植物体内或者在特定的组织内提供过表达。或者可供选择的可以对表达作用进行工程化处理，使其发生在对一种暂时性的刺激因素所进行的应答中，其中所述的刺激因素是受到空间、环境的调节的。
用以进行基因表达的策略对于技术人员而言应当是显而易见的，包括那些没有在这里进行讨论的策略以及那些将在未来形成的策略。
对阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)同系物所进行的识别
可以使用数据库序列搜索工具对阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b(AtbHLH)所具有的同系物进行识别，其中所述的数据库序列搜索工具例如是所述的基本局部比对搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool)(BLAST)(参见Altschul等人于1990年发表的文章以及Altschul等人于1997年发表的文章)。通过使用所述的BLOSUM-62(模块替换矩阵)得分矩阵可以对所述的tblastn或者blastn序列分析程序进行使用(参见Henikoff以及Henikoff于1992年发表的文章)。所述的BLAST报告所具有的输出值能够提供一个得分，该得分已经考虑到了具有相类似的或者相同的残基所进行的比对以及为了对所述的序列进行比对而需要的任何的空位。所述的得分矩阵能够指定一个得分，用以对任何可能的序列对进行比对。所述的P值反映的是我们预期看到一个得分偶然出现的次数。较高的得分是优选的并且一种低的临界值P值临界值是优选的。这就是所述的序列同一性的标准。所述的tblastn序列分析程序被用来对一种多肽序列进行查询，其中所述查询是针对存在于一个核苷酸数据库中的序列所具有的六种方式的翻译来进行的。得到小于-25的P值，优选的小于-70，并且更为优选的小于-100，被识别为属于具有同源性的序列(范例性筛选的序列标准)。所述的blastn序列分析程序被用来针对一种核苷酸序列数据来进行一种核苷酸序列的查询。同样在这种情形中，较高的得分是优选的并且一种优选的临界值P值为小于-13，优选的小于-50，并且更为优选的小于-100。
可以经由标准的聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因进行分离。在一个碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因所具有的保守区域内使用引物并且进行聚合酶链式反应(PCR)扩增能够生成所述的目标基因的片段拷贝或者完整长度的拷贝。模板可以是DNA，染色体组或者cDNA文库，或者是RNA或者mRNA，用以利用逆转录酶聚合酶链式反应(RtPCR)技术一同进行使用。可以使用序列比较工具来对保守性的区域进行识别，其中所述的序列比较工具例如是BLAST或者CLUSTAL W。可以使用在本申请的其他内容中所使用到的以及所描述到的适合的引物。
或者可供选择的，可以对一个来自于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的序列所具有的一个片段进行32P的放射性标记，其中所述的放射性标记是通过随机引物法来进行标记的(参见Sambrook等人于1989年发表的文章)并且利用所述的片段对一种植物染色体组文库(所述的范例性的受试多核苷酸)进行筛选。作为例子，根据Stockinger等人的描述(参见Stockinger等人于1996年发表的文章)对植物总DNA进行分离，其中所述的植物总DNA来自于阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)，烟草(Nicotiana tabacum)，醋栗番茄(Lycopersicon pimpinellifolium)，甜樱桃(Prunus avium)，欧洲酸樱桃(Prunuscerasus)，黄瓜(Cucumis sativus)，或者水稻(Oryza sativa)。对大约2至10微克的每一种DNA样本进行限制性消化，将其转移至尼龙膜(Micron Separations，Westboro，Mass.)之上并且使其进行杂交。杂交反应的条件为：42℃，50％的甲酰胺，5倍的SSC，20毫摩的磷酸盐缓冲液1倍的Denhardt’s，10％的右旋糖酐硫酸酯，以及100微克/毫升的青鱼精液DNA。在室温(RT)条件下进行四次低度严格的洗涤，其中所述的洗涤是在2倍的SSC、0.05％的十二烷基肌氨酸钠及0.01％的焦磷酸钠中进行的，在此之后在55℃下进行高度严格的洗涤，其中所述的洗涤是在0.2倍的SSC、0.05％的十二烷基肌氨酸钠及0.01％的焦磷酸钠中进行的。进行高度严格的洗涤直至依照Walling等人的描述在所述的洗脱液中不能够检测到计数为止(参见Walling等人于1988年发表的文章)。对阳性的分离物进行识别，纯化以及测序。可以利用其他的方法来进行杂交，例如所述的ExpressHybTM杂交溶液，所述的杂交溶液可以从Clontech处获得。
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的重组表达载体以及宿主细胞
本发明中的另外一个方面涉及的是载体，优选的为表达载体，在所述的载体中含有核酸，所述的核酸能够编码碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因或者是它们的染色体组序列或者是序列的一部分，以及它们的类似物或者同系物。当在本发明中被进行使用时所述的术语表达载体包括这样的载体，所述的载体被设计成为能够提供所述的核酸序列的转录。可以对经过转录的序列进行设计用以表达所述的基因构建体，从而增加一种内生性的基因活性的整体表达或者活性，其中所述的基因活性与所述的经过转录的序列之间存在关联性。所述的经过表达的序列可以是一种内生性的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b编码蛋白质或者来自于一种异源性的品种。
经过转录的核酸可以被翻译成为一种多肽产物或者蛋白质产物。所述的多肽可以是一种具有不完整的长度的、所述的内生性蛋白质的突变体或者经过修饰的变体。当在本发明中被进行使用时，所述的术语“载体”指的是这样的一种核酸分子，所述的核酸分子能够对与其进行了连接的另外一个核酸进行运送。一种类型的载体是一种“质粒”，其中所述的质粒指的是一种环状的双链DNA环，可以在所述的环内连结另外的DNA片段。另外一种类型的载体是一种病毒载体，其中另外的DNA片段可以被连结至所述的病毒染色体组之中。某些载体能够在一种宿主细胞内进行自发性的复制，其中所述的宿主细胞是所述的载体被导入进去的细胞(例如，具有一种细菌性的复制起源的细菌性载体)。其他的载体能够经由向所述的宿主细胞中的导入而被整合到宿主细胞的染色体组之中，并且从而连同所述的宿主染色体组一同被进行复制。此外，某些载体能够对基因的表达进行指导，其中所述的基因是与所述的载体进行了可操作性的连接的基因。这样的载体在本发明中被称之为“表达载体”。一般而言，能够在重组DNA技术中发挥效用的表达载体通常是以所述的质粒的形式存在的。在本说明书中，“质粒”以及“载体”是可以进行交替互换使用的，因为所述的质粒是最为普遍的被使用的载体形式。然而，本发明意在包括能够提供等同功能的其他形式的表达载体，例如病毒性载体或者植物转化载体，双元载体或者其他的载体。
在本发明中重组表达载体中包括本发明中所述的一种核酸，其中所述的核酸是以一定的形式存在的，所述的形式适合使所述的核酸在一种宿主细胞内进行表达，这意味着所述的重组表达载体包括一个或者多个调控序列，所述的调控序列与需要进行表达的所述的核酸序列之间发生了可操作性的连接，其中所述的调控序列是依据被用来进行表达的所述的宿主细胞来进行选择的。在重组的表达载体之中，“可操作性的连接”意在说明所述的目标核苷酸序列与所述的调控序列进行了连接，所述的连接是以一种特定的方式来实现的，其中所述的方式能够允许所述的核苷酸序列进行表达(例如，在一种体外转录/翻译系统之中或者在一个宿主细胞之中，当所述的载体被导入到所述的宿主细胞之中时)。
术语“调控序列”意在包括启动子，增强子以及其他的表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。这样的调控序列在例如Goeddel(于1990年)发表的文章中被进行了描述。调控序列包括那些能够指导一种核苷酸序列在许多类型的宿主细胞之中进行组成性的表达的序列，以及那些能够指导所述的核苷酸序列仅仅在某些宿主细胞(例如，组织特异性的调控序列)或者诱导型启动子之中进行表达的序列(例如，诱导对非生物性因素所产生的应答，其中所述的非生物因素例如是环境条件，热，干旱，所述细胞或者生物体所具有的营养状况或者生理学状况，例如病原体应答)。适合的启动子的例子包括例如组成性启动子，脱落酸(ABA)诱导型启动子，组织特异性启动子以及非生物性或者生物性胁迫诱导型启动子。所属领域的技术人员应当能够认识到，对所述的表达载体进行的设计可以取决于例如这样的因素：需要被进行转化的所述的宿主细胞的选择，期望得到的所述的蛋白质的表达水平，以及表达的时机和位置，等等。本发明中所述的表达载体可以被导入到宿主细胞之中从而生成蛋白质或者肽，包括融合蛋白质或者肽，其中所述的蛋白质或者肽是利用本发明中所描述的核酸来进行编码的(例如，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质的变体形式，融合蛋白质，等等)。
可以对本发明中所述的重组表达载体进行设计，用于在原核细胞或者真核细胞之中进行碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因、碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质、或者是上述基因或蛋白质中的一部分的表达。例如，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因或者碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b蛋白质可以在下述的细胞内进行表达：细菌性细胞例如大肠杆菌(Escherichia coli)，昆虫细胞(使用杆状病毒表达载体)，酵母细胞，植物细胞或者哺乳动物细胞。适合的宿主细胞在Goeddel(于1990年)发表的文章中被进行了进一步的讨论。或者可供选择的，可以在体外对所述的重组表达载体进行转录以及翻译，其中所述的转录以及翻译是通过例如使用T7启动子调控序列以及T7聚合酶的方式来实现的。
在一种实施方式中，本发明中所述的核酸在植物细胞中被进行了表达，其中所述的表达是通过使用植物表达载体来实现的。植物表达载体系统的例子包括在脓杆菌属(Agrobacterium)中发现的肿瘤诱导(Ti)质粒或者所述质粒的一部分，花椰菜花叶病毒(CaMV)DNA以及载体例如pBI121。
为了在植物中进行表达，除了所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸之外，所述的重组表达框架中将含有启动子区域，一个转录激发位点(如果需要被进行转录的所述的编码序列中缺乏一个位点的话)，并且任选的含有转录末端/聚腺苷酸化序列，其中所述的启动子区域能够在一种植物细胞中发挥作用。可以从与所述的启动子序列相同的基因中获得所述的末端/聚腺苷酸化区域或者可以从不同的基因中获得上述的区域。通常情况下被包括在内的是存在于所述框架的5’末端以及3’末端之上的专一的限制性酶位点，从而允许其容易的插入到一种预先存在的载体之中。
适合的启动子的例子包括来自于植物病毒的启动子例如来自于花椰菜花叶病毒(CaMV)的所述的35S启动子(参见Odell等人于1985年发表的文章)，来自于基因的启动子例如大米肌动蛋白(参见McElroy等人于1990年发表的文章)，泛素(参见Christensen等人于1992年发表的文章)；pEMU(参见Last等人于1991年发表的文章)，MAS(参见Velten等人于1984年发表的文章)，玉米H3组蛋白(参见Lepetit等人于1992年发表的文章，以及Atanassvoa等人于1992年发表的文章)，来自于根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的T-DNA的5’-启动子或者3’-启动子，Smas启动子，肉桂醇脱氢酶启动子(参见美国专利No.5683439)，Nos(胭脂氨酸合成酶)启动子，rubisco启动子，GRP1-8启动子，ALS启动子(参见WO 96/30530)，一种合成性的启动子，例如Rsyn7，SCP以及UCP启动子，核酮糖-1，3-二磷酸羧化酶，果实特异性启动子，热休克启动子(热休克启动子HSP81.1或者热休克启动子HSP18.2)，种子特异性启动子，根特异性启动子，即uclacyanin2(UCC2，At2g44790)以及来自于各种不同的植物基因中的其他的转录激发区域，例如，包括各种不同的opine激发区域，例如，章鱼碱，甘露碱，以及胭脂氨酸。在一些情形中，可以使用一种与所述的目标基因(例如，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH))进行了关联的启动子来进行构建体的表达，其中所述的构建体能够作用于所述的目标基因，所述的启动子例如是所述的天然阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(AtbHLH)启动子。其他的调控元件包括终止子，聚腺苷酸化序列，以及编码信号肽的核酸序列，其中所述的调控元件可以被连接在一个碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b之上，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b能够编码核酸序列用以在植物细胞中进行表达，信号肽能够允许在一个植物细胞内进行定位或者允许从细胞中进行所述蛋白质的分泌。这样的调控元件以及用于添加这样的元件的方法或者利用所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因所具有的调控元件对这些元件进行替换的方法是已知的并且包括，但不局限于，3’末端和/或聚腺苷酸化区域，例如根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)胭脂氨酸合成酶(nos)基因所具有的区域(参见Bevan等人于1983年发表的文章)；马铃薯蛋白酶抑制剂II(PINII)基因所具有的区域(参见Keil等人于1986年发表的文章并且在本发明中被引入作为参考)；以及An等人(于1989年)发表的文章；以及花椰菜花叶病毒(CaMV)19S基因所具有的区域(参见Mogen等人于1990年发表的文章)。
植物信号序列，包括但不局限于，信号肽编码DNA/RNA序列，其中该序列能够作用于所述的植物细胞的细胞外基质的蛋白质(参见Dratewka-Kos等人于1989年发表的文章)以及所述的皱叶烟草(Nicotiana plumbaginifolia)扩展基因(参见De Loose等人于1991年发表的文章)，或者是能够作用于所述的液泡蛋白质的信号肽，类似于甘薯的储藏蛋白基因(参见Matsuoka等人于1991年发表的文章)以及大麦外源凝集素基因(参见Wilkins等人于1990年发表的文章)，或者是能够引起蛋白质的分泌的信号例如PRIb信号(参见Lund等人于1992年发表的文章)，或者能够作用于所述细胞质体的蛋白质的信号例如油菜籽烯酰基-酰基载体(ACP)还原酶的信号(参见Verwoert等人于1994年发表的文章)，它们都可以被用在本发明之中。
在另外一种实施方式中，重组表达载体能够指导所述的核酸在一种特定的细胞类型之中进行优先的表达(例如，组织特异性调控元件被用来对所述的核酸进行表达)。组织特异性的调控元件是本领域内已知的。例如，与一种编码序列进行关联的、在所述的TAIR数据库中被识别为At2g44790(P4790)的所述的启动子是一种根特异性启动子。尤其可以被用来与本发明中所述的核酸进行连接的是可以在植物中进行操作的表达系统。这包括这样的系统，该系统受到一种组织特异性启动子的控制，以及那些涉及到下述启动子的系统，其中所述的启动子能够在全部的植物组织中进行运行。
器官特异性启动子同样是本领域熟知的。例如，查耳酮合成酶-A基因(参见vander Meer等人于1990年发表的文章)或者二氢黄酮醇-4-还原酶(dfr)启动子(参见Elomaa等人于1998年发表的文章)能够在特异性的花朵组织中指导表达。同样可以利用的是patatin(马铃薯块茎特异性蛋白)I类启动子，该启动子只能够在马铃薯块茎中通过转录的方式进行活化并且可以用来在所述的块茎之中作用于基因表达(参见Bevan于1986年发表的文章)。另外一种马铃薯特异性的启动子是颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS)启动子(参见Visser等人于1991年发表的文章)。
可以通过使用已知的操作步骤的方式对其他的器官特异性启动子进行分离，其中所述的器官特异性启动子适合用于一种期望的靶向器官。这样的控制序列在一般情况下会与某些基因进行关联，其中所述的基因能够在所述的目标器官内进行唯一的表达。在一种典型的高等植物中，每一个器官中都含有数以千计的mRNA，这些mRNA是不存在于其他的器官系统之中的(在Goldberg于1986年发表的文章中对此进行了评论)。
上述得到的表达系统或者表达框架可以被连结在一个重组载体之中或者可以对所述的表达系统或者表达框架进行构建使之被包含在一种重组载体之中，其中所述的重组载体适合被用来进行植物的转化。在所述的载体之中同样可以含有一个可选择的标记基因，通过所述的标记基因，可以在培养物中对经过转化的植物细胞进行识别。所述的标记基因可以编码抗生素抗性。这些标记物可以包括对下述物质的抗性：G418，潮霉素，博来霉素，卡那霉素，以及庆大霉素。或者可供选择的所述的标记基因能够编码一种除草剂耐受性基因，其中所述的基因能够提供对草铵膦或者草甘磷类除草剂的耐受性。在对所述的植物细胞进行转化之后，含有所述的载体的那些细胞将能够被识别出来，这种识别是凭借它们所具有的在一种培养基上生长的能力来进行的，其中在所述的培养基中含有所述特定的抗生素或者除草剂。在一般情况下，具有细菌性来源或者病毒性来源的复制序列同样可以被包括在内，从而允许所述的载体在一种细菌性宿主或者噬菌体宿主中被进行克隆，优选的被包括在内的是一种具有宽泛的宿主范围的具有原核性来源的复制。一种用于细菌的可选择的标记物同样可以被包括在内，从而允许对承载着所述的目标构建体的细菌细胞进行筛选。适合的原核性可选择的标记物同样包括对抗生素的抗性，其中所述的抗生素例如是卡那霉素或者四环素。
编码额外功能的其他DNA序列同样可以存在于所述的载体之中，正如本领域所已知的那样。例如，在对农杆菌(Agrobacterium)进行转化的情形中，T-DNA序列将同样被包括在内，用来随后被转移到植物的染色体之中。
本发明中的另外一个方面涉及的是宿主细胞，其中在该宿主细胞中被导入了本发明中所述的一种重组表达载体。术语“宿主细胞”以及“重组的宿主细胞”在本发明中可以进行交替互换使用。可以理解的是这样的术语不仅仅指的是所述的具体的宿主细胞，同时还指的是这样的细胞所具有的后代或者其潜在的后代。由于某些修饰作用可能发生在后代之中，这样的后代事实上并不能够等同于所述的母本细胞，但这样的后代仍然被涵盖在本发明所使用的所述术语的范围之内，其中所述的修饰作用归因于变异或者环境的影响。
可以经由传统的转化技术或者转染技术将载体DNA导入到原核细胞或者真核细胞之中。当在本发明中被进行使用时，所述的术语“转化”以及“转染”意在指代各种不同的本领域公认的技术，用于将外源的核酸(例如，DNA)导入到一个宿主细胞之中。
本发明中所述的宿主细胞，例如存在于培养物之中的原核宿主细胞或者真核宿主细胞，可以被用来制造(即，表达)本发明中所述的多肽，其中所述的多肽是在本发明中的一种多核苷酸的开放阅读框内被进行编码的。因此，本发明进一步的提供了使用本发明中所述的宿主细胞用以制备一种多肽的方法。在一种实施方式中，所述的方法包括在一种适合的培养基中对本发明中所述的宿主细胞进行培养(在所述的宿主细胞内已经导入了一种重组的表达载体，其中所述的表达载体能够编码本发明中所述的多肽)，这样一来能够制造出所述的多肽。在另外一种实施方式中，所述的方法进一步的包括从所述的培养基或者所述的宿主细胞中分离所述的多肽。
许多细胞的类型都可以作为适合的宿主细胞，用于进行多肽的表达，其中所述的多肽是在本发明中所述的一种多核苷酸的开放阅读框内被进行编码的。植物宿主细胞包括，例如，能够被用来作为适合的宿主而被用于本发明中所述的一种多核苷酸的表达的植物细胞包括来自于各种不同的植物品种的表皮细胞，叶肉以及其他的基本组织，以及存在于树叶、茎、花朵、器官、和根中的维管组织，其中所述的不同的植物品种例如是阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)，烟草(Nicotiana tabacum)，甘蓝型油菜(Brassica napus)，玉米(Zea may)，水稻(Oryza sativa)，陆地棉(Gossypium hirsutum)以及橹豆(Glycinemax)。
经过转化的植物细胞以及转基因植物
本发明包括原生质体，植物细胞，植物组织以及植物(例如，单子叶植物或者双子叶植物)，其中这些物质被下述的物质进行了转化：一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸，一种含有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸的载体或者一种含有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸的表达载体。当在本发明中被进行使用时，“植物”并不仅仅意在包括完整的植物，同时还包括植物的一个部分(即，细胞，以及组织，包括例如，叶片，茎，芽，根，花朵，果实以及种子)。
所述的植物可以是任何类型的植物包括，例如，来自于下列属的品种：阿拉伯芥属(Arabidopsis)，芸苔属(Brassica)，稻属(Oryza)，玉蜀黍属(Zea)，高粱属(Sorghum)，短柄草属(Brachypodium)，芒属(Miscanthus)，棉属(Gossypium)，小麦属(Triticum)，大豆属(Glycine)，豌豆属(Pisum)，菜豆属(Phaseolus)，番茄属(Lycopersicon)，三叶草属(Trifolium)，大麻属(Cannabis)，南瓜属(Cucurbita)，蔷薇属(Rosa)，葡萄属(Vitis)，胡桃属(Juglans)，草莓属(Fragaria)，莲属(Lotus)，苜蓿属(Medicago)，红豆草属(Onobrychis)，胡芦巴属(Trigonella)，豇豆属(Vigna)，柑橘属(Citrus)，亚麻属(Linum)，老鹳草属(Geranium)，木薯属(Manihot)，胡萝卜属(Daucus)，萝卜属(Raphanus)，芥属(Sinapis)，颠茄属(Atropa)，辣椒属(Capsicum)，曼陀罗属(Datura)，天仙子属(Hyoscyamus)，烟草属(Nicotiana)，茄属(Solanum)，碧冬茄属(Petunia)，毛地黄属(Digitalis)，牛至属(Majorana)，Ciahorium，向日葵属(Helianthus)，莴苣属(Lactuca)，雀麦属(Bromus)，天门冬属(Asparagus)，金鱼草属(Antirrhinum)，萱草属(Hemerocallis)，Nemesis，天竺葵属(Pelargonium)，稷属(Panieum)，狼尾草属(Pennisetum)，毛茛属(Ranunculus)，千里光属(Senecio)，蛾蝶花属(Salpiglossis)，黄瓜属(Cucumis)，Browaalia，毒麦属(Lolium)，燕麦属(Avena)，大麦属(Hordeum)，黑麦属(Secale)，云杉属(Picea)，Caco，以及杨属(Populus)。
本发明也包括来自于所述的被转化的植物的细胞，组织，包括例如，叶片，茎，芽，根，花朵，果实和种子以及后代。
用于将外源基因导入到植物之中的众多方法是已知的并且可以被用来将一个基因插入到一个植物宿主中去，所述的方法包括生物学的植物转化方案以及生理学的植物转化方案(参见，例如，Miki等人(于1993年)在“Methods in Plant Molecular Biology andBiotechnology《植物分子生物学以及生物技术方法》”中发表的文章“Procedure forIntroducing Foreign DNA into Plants《用以向植物中导入外源DNA的操作方法》”，Glick与Thompson编辑，CRC出版公司，波卡拉顿，第67-88页；以及Andrew Bent发表的文章“Floral dipping：a simplified method for Agrobacterium-mediated transformationof Arabidopsis thaliana《花苞浸泡法：一种用以对阿拉伯芥进行农杆菌介导的转化的简易方法》”，Clough SJ和Bent AF(于1998年))。随着所述的宿主植物的变化来选择所述的方法，并且该方法包括化学转染方法例如磷酸钙，聚乙二醇(PEG)转化方法，微生物介导的基因转移例如农杆菌(Agrobacterium)(参见Horsch等人于1985年发表的文章)，电穿孔法，原生质体的转化方法，微注射，花朵浸泡法以及基因枪轰击法。
由农杆菌(Agrobacterium)介导的转化方法
为了向植物中导入一种表达载体而被最为广泛利用的方法是以所述的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以及发根农杆菌(A.rhizogenes)所具有的天然的转化系统为基础的，其中上述的两种农杆菌是植物的病原性细菌，能够以遗传学的方式对植物细胞进行转染。所述的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以及发根农杆菌(A.rhizogenes)分别所具有的Ti质粒以及Ri质粒能够携带一种基因，所述的基因负责进行植物的遗传转化(参见，例如，Kado于1991年发表的文章)。在Gruber等人(于1993年)发表的文章以及Moloney等人(于1989年)发表的文章中提供了对所述的农杆菌(Agrobacterium)的载体系统的描述以及对用以进行由农杆菌(Agrobacterium)介导的基因转移的方法的描述。
可以通过将开花的植物浸泡在一种农杆菌(Agrobacterium)培养物中的方法容易的制备出转基因的阿拉伯芥(Arabidopsis)植物，这是基于Andrew Bent发表的文章“Floral dipping：a simplified method for Agrobacterium-mediated transformationof Arabidopsis thaliana《花苞浸泡法：一种用以对阿拉伯芥进行农杆菌介导的转化的简易方法》”，Clough SJ以及Bent AF于1998年发表的文章为基础的。使野生类型的植物进行生长直至所述的植物已经同时具有了待放的花朵以及开放的花朵。使所述的植物在一种农杆菌(Agrobacterium)培养液中进行1分钟的倒置，其中在所述的培养液中带有适宜的基因构建体。在此之后在一个盘子中将植物进行水平放置并且对其进行两天的覆盖用以保持湿度并且在此之后将其扶正并且装袋使其继续生长并且进行种子的发育。大量的收集成熟的种子。
直接基因转移
一种用于进行植物转化的普遍适用的方法是微注射介导的转化作用，其中DNA被携带在所述的微注射粒子的表面之上，所述的微注射粒子具有大约1至4微米的尺寸。利用一种基因枪装置将所述的表达载体导入到植物组织中去，其中所述的基因枪装置能够对所述的微注射粒子进行加速使之达到300至600米/秒的速度，这种速度足以能够穿透所述的植物细胞的细胞壁以及细胞膜(参见Sanford等人于1993年发表的文章；Klein等人于1992年发表的文章)。
同样可以依照在美国专利5240842以及美国专利6809232中描述的气溶胶束注射(ABI)的方法来实现植物的转化。气溶胶束技术被用来对潮湿的或者干燥的粒子进行加速使之达到能够使所述的粒子穿透存活细胞的速度。气溶胶束技术利用的是一种惰性气体的射流胀大，其中所述的射流胀大发生在当所述的气体从一个具有较高的气体压力的区域经由一个小孔流向一个具有较低的气体压力的区域的过程中。上述经过膨胀的气体能够对气溶胶液滴进行加速，其中在所述的气溶胶液滴中含有需要被导入到一个细胞或者组织中去的核酸分子。所述的被加速的粒子被放置在一个能够撞击到一种优选的靶向的位置上，所述的靶向例如是一个植物细胞。所述的粒子被构建成为具有足够小的尺寸的液滴，这样一来所述的细胞能够在所述的穿透作用中存活下来。可以根据所属领域中已知的标准技术使所述的经过转化的细胞或者组织进行生长从而生成一种植物。
转化体的传代
从单个的植物原生质体或者各种不同的外植体中进行所述植物的发育或者传代都是本领域所熟知的(参见Weissbach以及Weissbach于1988年发表的文章)。这种传代以及生长的过程通常情况下包括下述的步骤：对经过转化的细胞进行筛选，从通常的胚胎形成阶段到所述的生根芽阶段对那些个体细胞进行培养。对转基因的晶胚以及种子进行类似方式的传代。其后将上述得到的转基因的生根芽种植在一种适宜的植物生长培养基例如土壤之中。
可以通过本领域所熟知的方法来实现所述植物的发育或者传代，其中在所述的植物中含有通过来自于叶片外植体中的农杆菌(Agrobacterium)而被导入的所述的外源的、外生性的基因，所述的基因能够编码一种目标多肽，其中所述的方法例如是在(Horsch等人于1985年发表的文章中)进行描述的方法。在这个操作步骤中，在存在有一种选择试剂的条件下对转化体进行培养，并且所述的培养是在一种培养基内进行的，所述的培养基能够在所述的种植张力条件下对被进行转化的芽的传代进行诱导，正如(在Fraley等人于1983年发表的文章中)所描述的。具体的，美国专利No.5349124(说明书被引入到本发明中作为参考)详细的描述了经过遗传转化的莴苣细胞的生成以及由此得到的植物，其中所述的细胞以及植物能够表达杂交的晶体蛋白质，所述的晶体蛋白质能够向这样的植物提供抵抗鳞翅目幼虫的杀虫活性。
通常情况下这种操作步骤能够在两个月至四个月的时间内生成芽并且在此之后将那些芽转移到一种适宜的诱导根生成的培养基中，其中在所述的培养基中含有所述的选择试剂以及一种抗生素用以防止细菌的生长。在此之后将芽移植到土壤或者其他的介质之中从而允许所述的根的生成，其中所述的芽在存在所述的选择试剂的条件下已经生根从而形成苗。这样的操作步骤将依据所使用的特定的种植张力而存在变化，这样的变化将是本领域所熟知的。
优选的，上述经过传代的植物是自花授粉的，从而提供纯合型的转基因植物，或者使来自于所述的传代植物的花粉与农艺学上重要的长有种子的植物进行杂交，其中所述的农艺学上重要的植物优选的是近交系。与之相反，来自于那些重要品系的植物的花粉可以被用来对经过传代的植物进行授粉。可以使用本领域技术人员所熟知的方法对本发明中所述的一种转基因植物进行栽植，其中在所述的转基因植物中含有一种期望的多肽。
一种优选的转基因植物是一种独立的分离体(segregate)并且能够将所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因构建体遗传给其后代。一种更为优选的转基因植物对于所述的基因构建体而言是纯合型的，并且能够在有性杂交时将所述的基因构建体遗传给所有的后代。来自于一种转基因植物的种子可以在田野里生长或者在温室里生长，并且上述得到的性成熟的转基因植物能够进行自花授粉从而生成纯育植物。来自于这样的植物的所述后代能够变成纯育品系，可以针对所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b基因的增强的表达作用对所述的纯育品系进行评价。
制造转基因植物的方法
同样被包含在本发明之中的是制造一种转基因植物的方法，其中所述的转基因植物与一种经历了热胁迫的野生型植物相比，具有增强的热胁迫耐受性，减少的花朵败育，以及增加的产量。所述的方法包括向一个或者多个植物细胞中导入一种化合物，其中所述的化合物能够增强碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b在所述植物中的表达或者活性，从而生成一种转基因植物细胞，并且从所述的转基因细胞中进行一种转基因植物的传代。所述的化合物可以是，例如，(i)一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b多肽；(ii)一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸，它的类似物，同系物，直系同源物，一部分，变体或者补体；(iii)一种能够增强碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸的表达的核酸。能够增强一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸的表达的核酸可以包括启动子元件或者增强子元件。所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸可以是内生性的或者是外生性的，例如是一种阿拉伯芥(Arabidopsis)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸，所述的核酸可以被导入到一种芸薹属(Brassica)品种或者谷物品种之中。优选的，所述的化合物是一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸序列，其中所述的核酸序列对于被进行转化的所述的品种而言是内生性的。或者可供选择的，所述的化合物是一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸序列，其中所述的核酸序列对于被进行转化的所述的品种而言是外生性的，并且与所述的内生性的靶向序列相比具有至少70％，75％，80％，85％，90％或者更高的同源性。
在各种不同的方面中，与一种野生型的植物相比(即，未经过转化的)，所述的转基因植物具有一种改变的表型。改变的表型指的是所述的植物具有一种或者多种特征，所述的特征是不同于所述的野生型植物的。例如，当所述的转基因植物与一种化合物发生了接触时，其中所述的化合物能够增强所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b核酸的表达或者活性，所述的转基因植物与一种经历了热胁迫的野生型植物相比，具有增强的热胁迫耐受性，减少的花朵败育，以及增加的产量。
所述的植物可以是任何类型的植物包括，例如，来自于下列属的品种：阿拉伯芥属(Arabidopsis)，芸苔属(Brassica)，稻属(Oryza)，玉蜀黍属(Zea)，高粱属(Sorghum)，短柄草属(Brachypodium)，芒属(Miscanthus)，棉属(Gossypium)，小麦属(Triticum)，大豆属(Glycine)，豌豆属(Pisum)，菜豆属(Phaseolus)，番茄属(Lycopersicon)，三叶草属(Trifolium)，大麻属(Cannabis)，南瓜属(Cucurbita)，蔷薇属(Rosa)，葡萄属(Vitis)，胡桃属(Juglans)，草莓属(Fragaria)，莲属(Lotus)，苜蓿属(Medicago)，红豆草属(Onobrychis)，胡芦巴属(Trigonella)，豇豆属(Vigna)，柑橘属(Citrus)，亚麻属(Linum)，老鹳草属(Geranium)，木薯属(Manihot)，胡萝卜属(Daucus)，萝卜属(Raphanus)，芥属(Sinapis)，颠茄属(Atropa)，辣椒属(Capsicum)，曼陀罗属(Datura)，天仙子属(Hyoscyamus)，烟草属(Nicotiana)，茄属(Solanum)，碧冬茄属(Petunia)，毛地黄属(Digitalis)，牛至属(Majorana)，Ciahorium，向日葵属(Helianthus)，莴苣属(Lactuca)，雀麦属(Bromus)，天门冬属(Asparagus)，金鱼草属(Antirrhinum)，萱草属(Hemerocallis)，Nemesis，天竺葵属(Pelargonium)，稷属(Panieum)，狼尾草属(Pennisetum)，毛茛属(Ranunculus)，千里光属(Senecio)，蛾蝶花属(Salpiglossis)，黄瓜属(Cucumis)，Browaalia，毒麦属(Lolium)，燕麦属(Avena)，大麦属(Hordeum)，黑麦属(Secale)，云杉属(Picea)，Caco，以及杨属(Populus)。
实施例
实施例1：同源性基因的识别
在NCBI(美国国立生物技术信息中心)的蛋白质、核苷酸、以及EST数据库和TIGR(美国基因组研究所)的unigene数据库(1e-01)中对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39及其阿拉伯芥(Arabidopsis)同系物碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100，以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101进行基本局部比对搜索工具(Blast)的搜索。基因组序列数据库是用于下述的品种的，其中所述的品种所具有的完整的序列是已知的，例如大米和高粱。为了证实序列的确属于所述的目标序列的直系同源物，需要在此之后在所述全部的阿拉伯芥(Arabidopsis)蛋白质数据库中对所有推定的同系物进行基本局部比对搜索工具(blast)搜索，并且最先命中阿拉伯芥(Arabidopsis)的不是所述的四个目标序列中的一个的任何序列将被过滤出去，不需要对其进行任何进一步的分析。为了使存在于多个命中目标之间冗余最小化，通过使用所述的cap3组装程序对所有的EST序列命中目标进行组装，用以确保他们在至少40个核苷酸的范围内具有最少为90％的同一性，其中在所述的40个核苷酸的范围内具有最多5个空位。通过使用所述的EMBOSS程序getorf对开放阅读框进行测定。
对阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101所进行的基本局部比对搜索工具(Blast)搜索能够从40种不同的品种之中找到96个同源序列。序列的保守性被限定在DNA结合结构域以及二聚化结构域内，在这个区域以外只存在极小的保守性或者不存在保守性。在单子叶植物以及双子叶植物中都发现了同系物，这表明在植物中存在着一种重要的功能需求。已经在农艺学重要的品种中找到了阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的同系物，也在用于生物燃料的品种中找到了阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的同系物，其中所述的农艺学重要的品种例如是大米以及玉米，用于生物燃料的品种例如是短柄草(Brachypodium)以及柳枝稷(Switchgrass)。
根据在所述的短柄草(Brachypodium)基因组数据库中所进行的基本局部比对搜索工具(Blast)搜索，存在有这组基因的的三个同系物，并且全部的三个都与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38最为相似。对于所述的三个同系物中的两个而言存在EST证据。至于所述的第三种同系物是否是一种假遗传因子或者是编码一种功能性蛋白质的密码，还需要被进行测定。
在另外的两个单子叶植物品种大米以及高粱中，从这个组中只找到了一个同系物，并且在两个品种中所述的同系物都与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38最为接近。在大米以及高粱之中，所述的基因能够编码至少两个接合变体。
在甘蓝型油菜(Brassica napus)之中存在至少两个这个组的同系物，一个蛋白质与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39具有紧密的同源性，并且另外一个与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38具有紧密的同源性。然而，在所述的甘蓝型油菜碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39同系物中含有一个无义突变，所述的无义突变能够形成对一种部分蛋白质的编码，其中在所述的部分蛋白质中不含有DNA结合结构域或者二聚化结构域。已经利用几次EST对这一发现进行了证实，并且这个发现也同样发生在芜菁(Brassica rapa)之中。
实施例2：载体的构建
对所述的双元载体pBI121进行最优化处理，用以进行阿拉伯芥(Arabidopsis)以及不同农作物的转化。通过SmalI以及EcolCR1的消化作用和重新连结作用对存在于pBI121之中的GUS基因进行删除，从而得到载体pBI121ΔGUS。这种载体被用来对用于进行过表达的基因进行克隆。将所述的GUS基因所具有的C-末端上的1.1Kb的部分从pBI121中分离出来作为一个EcoR V-Sac I片段(pBI121上的位置6613-7715)并且在pBI121ΔGUS上的所述的Sma I以及Sac I位点处对其进行克隆，从而得到pBI121tGUS(所述的GUS基因所具有的N-末端的部分被进行了删除)。所述的载体被用来制造基因去调节的回形(Hairpin)构建体，其中所述的构建体是利用部分的GUS序列作为所述的环或者间隔来进行构建的。
存在于所述的载体pBI121之中的所述的NPTII基因及其衍生物中含有一个定点诱变(在pBI121的位置3383上有一个从G到T的诱变，氨基酸取代E182D)。与其野生型相比，上述经过诱变的酶表现出低了几倍的酶活性(参见1990年在PNAS《美国科学院院刊》87：3435-3439中发表的文章)。为了对不同的农作物所具有的转化效率进行提高，利用野生型(WT)-NPTII基因对载体pBIΔGUS和pBItGUS进行恢复：利用另外一个确实具有相同序列的Nhe I-BstBI片段对一个Nhe I-BstB I片段(0.9kb，位置2715-3648)进行取代，其中所述的另外一个片段仅仅具有一个核苷酸的差别。通过限制性消化作用从质粒pRD400中对所述的片段进行分离，其中在所述的质粒中含有所述的野生型(WT)-NPTII基因(参见1990年在PNAS《美国科学院院刊》87：3435-3439中发表的文章；1992年在Gene《基因》122：383-384中发表的文章)。上述经过修饰的载体分别被称之为pBI300ΔGUS以及pBI300tGUS。同样从所述的pBI300ΔGUS中对所述的野生型(WT)-NPTII基因进行分离并且在pBI121内的相对应的位点上对其进行克隆，其中所述的基因是作为一个Nhe I-Hind III片段(2.2kb)被进行分离的。这种方式建立了载体pBI300GUS。为了使这些载体区别于其他，将含有所述的野生型(WT)-NPTII基因的基于pBI121的双元载体指定为pBI300系列。
为了使用Basta作为一种选择试剂，将Basta抗性标记物亚克隆至pBI121之中。通过聚合酶链式反应(PCR)从载体pEGAD中对1.3kb的Ase I片段进行扩增，其中在所述的片段中含有所述的Basta选择标记物(35S-Bar-nosT)，其中在所述的聚合酶链式反应(PCR)中使用到了一种含有Pme I位点的正向引物以及一种含有Hind III位点的反向引物。在存在于pBI121、pBIΔGUS以及pBItGUS中的所述的PmeI位点(位置2492)以及Hind III(位置4950)位点之间对所述的片段进行克隆。作为结果，在这些载体中所述的卡那霉素选择标记物(Pnos-NPTII-nosT)被所述的Basta选择标记物进行了取代。为了使这些载体区别于其他，将含有所述的Basta选择标记物基因的基于pBI121的双元载体指定为pBI800系列。
pBI300载体中含有所述的野生型(WT)-NPTII基因，该基因能够受到胭脂氨酸合成酶(nos)启动子的驱动。由于所述的启动子在单子叶植物中并不是活化的，因而为了进行单子叶植物的转化，必须利用一种强劲的启动子对其进行取代。出于这一目的，需要将所述的短柄草TIF1基因(BdTIF1，也被称之为BdGOS2)启动子克隆至所述的pBI300系列的载体之中，用以对所述的野生型(WT)-NPTII基因进行驱动。通过聚合酶链式反应(PCR)对所述的短柄草TIF1启动子序列(所述的ATG起始密码子的-1至-2548，包括所述的第一个外显子，第一个内含子以及所述的第二个外显子的一部分)进行扩增并且在存在于热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68-pBI300(基于pBI300的载体，在所述的载体之中含有所述的阿拉伯芥热休克蛋白81.1启动子以及阿拉伯芥Myb68编码序列，详细内容请参见下文)中的所述相对应的位点之上对其进行克隆，其中所述的启动子序列是被作为一种PmeI-NheI片段来进行扩增的。作为结果，所述的TIF1p启动子被放置在所述的野生型(WT)-NPTII基因的5’上游处，在它们之间存在有一个大约120bp(包括65bp的所述的胭脂氨酸合成酶启动子)的小片段。为了除去所述的120bp的片段，对所述的野生型(WT)-NPTII编码序列以及侧翼上的载体序列进行扩增，并且将它们连结至所述的质粒之上，其中所述的编码序列以及载体序列是作为一个Nhe I-Sal I片段(2.1Kb)来进行扩增的，所述的质粒被利用Nhe I以及Sal I进行了消化。上述的克隆得到了载体热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68-pBI500。将含有所述的野生型(WT)-NPTII基因的基于pBI121的载体指定为pBI500系列，其中所述的载体是由短柄草TIF1启动子来进行驱动的。同样利用所述的35S启动子序列对所述的热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68序列进行取代，其中所述的35S启动子序列作为一种Hind III-BamH I片段是通过限制性消化作用从pBI300ΔGUS中被分离出来的。这生成了载体pBI500ΔGUS。
实施例3：碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b的过表达构建体
构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39：
通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从阿拉伯芥(Arabidopsis)中对所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39(At3g56980)编码序列进行扩增，其中在扩增中使用到了正向引物BHLH039FW-XbaI以及反向引物BHLH039RV-BamH I。在所述的双元载体pBI300ΔGUS以及pBI800ΔGUS所具有的Xba I以及BamH I位点上对所述的聚合酶链式反应(PCR)产物(0.8Kb)进行克隆，从而分别建立了构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39-pBI300以及35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39-pBI800。
构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101：
通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从阿拉伯芥(Arabidopsis)中对所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101(At5g04150)编码序列进行扩增，其中在所述的扩增中使用到了正向引物BHLH101FW-XbaI以及反向引物BHLH101RV-BamH I。在双元载体pBI300ΔGUS以及pBI800ΔGUS所具有的Xba I以及BamH I位点上对所述的聚合酶链式反应(PCR)产物(0.7Kb)进行克隆，从而分别建立了构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101-pBI300以及35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101-pBI800。
构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38：
使用与上文中的描述相同的策略，通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从阿拉伯芥(Arabidopsis)中对所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38(at3g56790)编码序列进行扩增，其中在所述的扩增中使用到了含有Xba I位点的正向引物以及含有Bam HI位点的反向引物，并且在所述的双元载体pBI300ΔGUS所具有的Xba I以及BamH I位点上对所述的聚合酶链式反应产物进行克隆，从而建立了构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38-pBI300。
构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100：
使用与上文中的描述相同的策略，通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从阿拉伯芥(Arabidopsis)中对所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100(At2g41240)编码序列进行扩增，其中在所述的扩增中使用到了含有Xba I位点的正向引物以及含有Bam HI位点的反向引物，并且在所述的双元载体pBI300ΔGUS所具有的Xba I以及BamH I位点上对所述的聚合酶链式反应产物进行克隆，从而建立了构建体35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100-pBI300。
构建体热休克蛋白(HSP)81.1-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39：
在所述构建体的构建中涉及到几个步骤。首先，对所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)热休克蛋白基因HSP81.1(At5g52640)所具有的启动子序列(所述的ATG起始密码子的-401至-1)进行聚合酶链式反应(PCR)的扩增，其中所述的扩增利用的是含有Sal I以及Xba I末端的引物，所述的引物来自于阿拉伯芥(Arabidopsis)染色体组DNA，并且在pBI101的相同位点上对其进行克隆，从而对所述的35S启动子进行替代。这种载体被命名为pHSP81.1-GUS。测序揭示出了在所述的启动子中在位置-266处发生了由T到C的定点诱变并且在位置-121处发生了由C到T的定点诱变。所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)秧苗的GUS染色表现出与在文献中报道的相一致的热感应表达曲线，其中利用这种构建体对所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)秧苗进行了转化。因此这样的诱变并不能够显著的对所述的启动子所具有的功能性产生影响。其次，对来自于新英格兰生物实验室(New England Biolabs)的MCS2-oligo进行退火并且将其连结至pHSP81.1-GUS上，其中已经利用Xba I以及Sma I对pHSP81.1-GUS进行了消化。这种方式形成了载体pHSP81.1MCS-GUS。第三，通过SmaI以及EcolCRI的消化作用，以及载体的自我重新连结作用，对所述的GUS序列进行删除。这种方式能够生成pHSP81.1MCSΔGUS。第四，为了进行Myb68的过表达，在所述的XbaI以及BamH I位点上对所述的阿拉伯芥Myb68编码序列(At5g65790)进行克隆。第五，按照上文中所描述的方法，利用野生(WT)序列对所述的诱变的NPTII序列进行取代，从而生成载体热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68-pBI300。最终，在所述的Xba I以及BamH I位点上对作为一个Xba I-BamH I片段的所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39编码序列进行克隆从而对所述的阿拉伯芥Myb68序列进行取代，得到构建体热休克蛋白81.1-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI300。同样的，所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39编码序列所具有的所述的Xba I-BamH I片段对存在于热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68-pBI500之中的所述的阿拉伯芥Myb68序列进行了取代，从而获得了所述的载体热休克蛋白81.1-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500。
构建体花青苷(UCC)2-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39：
阿拉伯芥(Arabidopsis)花青苷2基因(UCC2，At2g44790)在所述的根系之中进行了非常高水平的表达。在所述植物的其他部分之中，它所进行的表达是可以检测到的但是存在于非常低的水平之上。在所述的根系之中其所具有的细胞特异性表达曲线与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所具有的表达曲线是相类似的，即，主要在内皮和皮层以及轴管中进行表达。通过聚合酶链式反应(PCR)对所述的UCC2基因启动子序列(所述的ATG起始密码子的-1至-1475)进行扩增，其中在所述的扩增中使用到了一个含有Sal I位点的正向引物(P790-Sal-F)以及含有XbaI位点的反向引物(P790-Xb-R)。在所述的载体热休克蛋白81.1-阿拉伯芥Myb68-pBI300(参见上文)所具有的Sal I以及Xba I位点上对所述的花青苷2(UCC2)启动子的聚合酶链式反应产物(PCR)进行克隆，用以替代所述的阿拉伯芥Myb68编码序列。上述得到的载体被命名为花青苷-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI300。构建体短柄草生物素合成酶(BdBS)-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500：
通过聚合酶链式反应(PCR)对作为Sal I-Xba I片段的短柄草生物素合成酶(BdBS)基因启动子(所述的ATG起始密码子中的-1至-553)进行扩增并且将其在HSP81.1-AtbHLH39-pBI500中进行克隆用以取代所述的热休克蛋白(HSP)81.1启动子。上述得到的载体被命名为短柄草生物素合成酶-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500。
构建体短柄草花青苷(BdUCC)-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500：
在基因组序列super-67中找到了所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)花青苷2基因所具有的最为接近的短柄草同系物。在被进行比对的区域内所述的序列与阿拉伯芥(Arabidopsis)花青苷2具有34％的同一性。对所述的开放阅读框进行确定。通过对所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)TAIR8蛋白质所具有的被翻译的蛋白质序列进行逆向的基本局部比对搜索工具(blast)搜索可以发现其与阿拉伯芥(Arabidopsis)花青苷1最为相似，其中所述的花青苷1是花青苷2的一种接近的同系物。在阿拉伯芥(Arabidopsis)中，花青苷1与花青苷2存在相类似的表达类型但是其总的来说具有相对较弱的表达。对作为一个Sal I-Xba I片段的所述短柄草花青苷同系物(BdUCC)启动子所具有的启动子序列(所述的ATG起始密码子中的-22至-1405)进行扩增并且将其在热休克蛋白81.1-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500中进行克隆用以取代所述的热休克蛋白(HSP)81.1启动子。上述得到的载体被命名为短柄草花青苷-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋39-pBI500。
实施例4：短柄草碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的克隆
存在三种与所述的阿拉伯芥(Arabidopsis)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b具有高同源性的短柄草碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)基因，其中所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b包括碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101。全部的三种短柄草同系物都与阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38最为接近。对于同系物#1(super-13.506)而言具有有力的EST证据：所述的5’部分与存在于EST DV488230中的序列相同而所述的3’部分与DV488393相同，其中在所述的DV488393中含有polyAs。然而，DV488393中同样含有显然属于一种内含子的序列。因此，所述的精确的开放阅读框仍然需要被进行确定。通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对所述的推定的编码序列(BdbHLH39H1)进行克隆，其中在所述的克隆中使用到了正向引物BdH1-Xb-F(含有一个Xba I位点)以及反向引物BdH1-Bm-R(含有一个BamH I位点)，并且将其克隆至存在于一个载体之中的相对应的位点之上从而制成构建体热休克蛋白81.1-短柄草碱性螺旋-环-螺旋39H1-pBI500，短柄草生物素合成酶-短柄草碱性螺旋-环-螺旋39-BI500以及短柄草花青苷-短柄草碱性螺旋-环-螺旋39H1-pBI500。
引物
表格1：克隆引物
实施例5：植物的转化
上文中描述的构建体已经被转化到阿拉伯芥(Arabidopsis)以及短柄草(Brachypodium)之中，或者在适宜的时候将上文中描述的构建体转化至阿拉伯芥(Arabidopsis)以及短柄草(Brachypodium)之中。利用一种适宜的载体对其他的品种进行转化并且因此制备得到经过转化的植物。
表格2：构建体的转化
实施例6：转化的方法
通过将开花植物浸泡在农杆菌(Agrobacterium)培养液中的方法来制备阿拉伯芥(Arabidopsis)的转基因植物，这是基于Andrew Bent在Clough SJ与Bent AF于1998年发表的文章“Floral dipping：a simplified method for Agrobacterium-mediatedtransformation of Arabidopsis thaliana《花苞浸泡法：一种用以对阿拉伯芥进行农杆菌介导的转化的简易方法》”中所描述的方法来进行的。在标准条件下使野生型的植物进行生长，利用16小时、8小时的光照至黑暗的日循环，直至所述的植物同时具有待放的花朵以及开放的花朵。使所述的植物在一种农杆菌(Agrobacterium)培养液中进行2分钟的倒置，其中在该培养液中带有适宜的基因构建体。在此之后在一个盘子中将植物进行水平放置并且对其进行两天的覆盖用以保持湿度并且在此之后将其扶正并且装袋使其继续生长并且进行种子的发育。大量的收集成熟的种子。
通过在MS培养板或者在一种适宜的选择培养基上进行萌芽并且生长的方式对经过转化的T1植物进行选择，其中在所述的MS培养板中含有50微克/毫升的卡那霉素。经过2周的生长之后对未成熟的、具有卡那霉素抗性(KanR)的秧苗进行识别并且将其移植至土壤中。对植物进行装袋处理从而确保其进行自花授粉并且单独收集每一个植物的T2种子。在T1植物生长的过程中，收集叶片样本，进行DNA的提取以及Southern印迹分析和聚合酶链式反应(PCR)分析。
对T2种子进行分析用以进行卡那霉素抗性(KanR)的种族隔离。从那些品系中表现出3∶1的抗性表型，存活的T2植物继续生长，在播种的过程中对其进行装袋处理，并且从每一个品系中收集T3种子。T3种子再一次被用来进行卡那霉素抗性(KanR)的种族隔离分析并且那些能够表现出100％的卡那霉素抗性(KanR)的表型被筛选为纯合型品系。使用T3秧苗进行进一步的分子学分析以及生理学分析。
通过使用由农杆菌(Agrobacterium)介导的子叶柄组织的转化作用能够制备得到转基因的甘蓝型油菜(Brassica napus)，橹豆(Glycine max)以及玉米(Zea maize)。按照下述的方式对种子进行灭菌。利用95％的乙醇对种子进行短时间的润湿，其中所述的短时间例如是15秒。向其中加入大约30毫升的灭菌溶液I(70％的Javex，100微升的吐温20)并且保持大约15分钟。去除溶液I并且利用30毫升的溶液II(0.25％的氯化汞，100微升的吐温20)取而代之并且进行大约10分钟的培养。利用至少500毫升经过双重蒸馏的无菌水对种子进行漂洗并且将其储存在无菌培养皿中。种子在培养板中进行萌芽，其中在所述的培养板内具有1/2的MS培养基，pH为5.8，其中补充有1％的蔗糖以及0.7％的琼脂。对经过完全膨胀的子叶进行收集并且将其放置在培养基I(Murashige minimal organics(MMO)，3％的蔗糖，4.5毫克/升的苯甲基腺嘌呤(BA)，0.7％的phytoagar，pH为5.8)上。使一种农杆菌(Agrobacterium)培养物在AB基础培养基上进行2天的生长，其中在所述的培养物中含有所述的目标核酸构建体。对所述的子叶外植体进行浸泡，这样一来只有所述叶柄的切割部分与所述的农杆菌(Agrobacterium)溶液进行了接触。在此之后将所述的外植体包埋在培养基I中并且在24℃下保持5天，伴随着16小时、8小时的光照黑暗循环。外植体被转移到培养基II(培养基I，300毫克/升的替漫汀)中又保持了7天并且在此之后将其转移至培养基III(培养基II，20毫克/升的卡那霉素)中。在这个时期形成的任何的根部组织或者嫩芽组织都要被切离除去。在14-21天之后将外植体转移到新鲜的培养基III培养板中。当新生的嫩芽组织形成的时候，将所述的新生组织转移到培养基IV(MMO，3％的蔗糖，1.0％的phytoagar，300毫克/升的替漫汀，20毫克/L的卡那霉素)之中。一旦健康的嫩芽组织形成，将那些从任意的愈合组织中切离下来的嫩芽组织浸泡在10倍的吲哚丁酸(IBA)之中并且将其转移至培养基V(Murashige以及Skooge(MS)，3％的蔗糖，0.2毫克/升的吲哚丁酸(IBA)，0.7％的琼脂，300毫克/升的替漫汀，20毫克/升的卡那霉素)之中用以进行生根。将健康的苗移植到土壤中。上述的方法，经过修饰或者不经过修饰，适合被用来进行许多植物品种的转化，其中所述的植物品种包括橹豆(Glycine max)，玉米(Zea maize)以及棉花。
可以使用基于农杆菌(Agrobacterium)的方法对转基因的橹豆(Glycine max)，玉米(Zea maize)以及棉花进行制备，其中所述的方法是本领域技术人员已知的。或者可供选择的我们可以使用一种粒子或者非粒子的基因枪轰击转化方法。在美国专利申请20010026941中给出了非粒子的基因枪轰击转化的一个例子。这个方法已经被用来制造转基因的橹豆(Glycine max)以及玉米(Zea maize)植物了。存活的植物能够进行繁殖并且建立了纯合型的品系。按照其他部分所进行的描述，对植物进行测试，测试其是否存在干旱耐受性，生理学以及生物化学表型。
可以通过例如对愈合组织的培养物进行超声波降解的方式来进行植物组织的转化，其中所述的植物例如是玉米(Zea maize)。按照下述的方式来制备愈合组织。在经过抽丝(silking)的18天之后对玉米的穗进行收集，并且在50％体积/体积的漂白水中对其进行20分钟的表面灭菌，在此之后利用无菌的蒸馏水对其进行三次洗涤。从所述的谷粒中收集那些具有在2毫米至4毫米的范围之内的大小的未发育完全的晶胚。将晶胚放置在MSD1.5培养基(2％的蔗糖，1倍的MS常量营养元素与微量营养元素盐，1倍的MS维生素，1.5毫克/升的2，4-D，0.8％的琼脂，pH为5.8)中，将胚盘面朝上放置。在黑暗中于26-28℃下对晶胚进行培养。将来自于2周大的培养物中的易碎的愈合组织移植到新鲜的MSD1.5培养基中并且在黑暗中于26-28℃下对其进行进一步的培养。每21天利用新鲜的MSD1.5培养基对易碎的愈合组织进行次培养。
按照下文中描述的方法来进行愈合组织的转化。将所述的构建体导入到GV3101农杆菌(Agrobacterium)之中，所述的导入是通过将单个的GV3101农杆菌(Agrobacterium)菌落接种到10毫升的LB之中的方式来实现的，其中在所述的农杆菌(Agrobacterium)菌落中含有所述的辣根过氧化物酶(HRP)-GUS质粒，在所述的LB中补充有150微克/毫升的利福平，100微克/毫升的庆大霉素硫酸盐，以及50微克/毫升的卡那霉素。允许所述的培养液在28℃下进行过夜的生长并伴随着200rpm的振荡。将玉米的愈合组织切割成为具有大约3-5毫米的大小的片。在1500 x g的条件下对所述的农杆菌(Agrobacterium)培养液进行10分钟的离心并且利用10毫升的液体MSD 1.5液体(2％的蔗糖，1倍的MS常量元素和微量元素盐，1倍的MS维生素，1.5毫克/升的2，4-D，pH为5.8)对其进行两次的洗涤。将所述的细菌重新悬浮在液体的MSD1.5之中从而达到0.25的OD600纳米并且将1毫升经过稀释的农杆菌(Agrobacterium)或者液体的MSD1.5作为阴性对照，放置在1.5毫升的微离心管内，其中在每一个管内添加有四片的愈合组织。利用一个Branson 200超声波清洁器对愈合组织以及农杆菌(Agrobacterium)的培养物进行超声波降解，其中在存在细菌的条件下进行0秒、3秒、10秒、30秒、100秒、或者300秒的降解，或者在不存在细菌的条件下进行0或者300秒的降解(单独存在于MSD1.5液体之中)。经过超声波降解之后，将所述的愈合组织在无菌的滤纸上沥干并且将其放置在MSD1.5A培养基(MSD1.5固体培养基，其中补充有100微摩的乙酰基丁香酮)中。所述的辅助培养的周期是4天，在黑暗中于28℃下进行培养。在液体MSD1.5中对愈合组织进行漂洗，在无菌的滤纸上对其进行沥干，并且在黑暗条件下于28℃下将其在MSD1.5T培养基(MSD1.5培养基，其中补充有400微克/毫升的替漫汀)上放置3天。经过超声波降解处理的七天之后，将愈合组织添加到1毫升的GUS染色溶液(50毫摩的磷酸三钠，pH为7.0，0.1％的Triton X-100，1毫摩的乙二胺四乙酸(EDTA)，2毫摩的二硫苏糖醇(DTT)，0.5毫克/毫升的X-GlcA)中并且使其在37℃下进行过夜的培养。利用1毫升的固定化缓冲液(10％的甲醛，50％的乙醇)对所述的染色溶液进行替换并且在室温下进行30分钟的培养。利用80％的乙醇对所述的固定化缓冲液进行替换并且在室温下进行1小时的培养。利用100％的乙醇对所述的80％的乙醇进行替换并且在室温下进行1小时的培养。对所述的愈合组织的蓝色染色情况进行评价，其中所述的染色情况标志着GUS的活性。
在适宜的情况下可以使用其他的植物转化方法，并且这些方法都是本领域普遍被描述并已知的。
实施例7：表达分析
从22个转基因35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39品系以及野生型阿拉伯芥(Arabidopsis)品系中分离得到总RNA。将大约10微克的总RNA装载于每一条泳道里。利用经过放射性标记的辣根过氧化物酶(HPR)cDNA在ExpressHyb杂交溶液(Clontech)中进行所述的Northern探针处理并且通过使用一种电子磷显象屏幕对其进行显现。为了进行量化，利用微管蛋白对斑点进行再一次的探针处理，用来作为一种比较的标准，其中所述的微管蛋白是一种发生了组成性表达的基因。
与所述的野生型(WT)的哥伦比亚(Columbia)对照相比，所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所具有的表达水平被提升了4倍至126倍。根据热耐受性以及干旱耐受性，所述的最佳表现的品系(品系-34以及品系-97)在阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所具有的表达水平方面分别具有50倍以及40倍的增强。
实施例8：微阵列以及表达分析
碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b包括阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101。当阿拉伯芥MYB68被进行了37倍的过表达时，利用一种过表达构建体进行转化了的品系所具有的微阵列数据表明：所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101所具有的RNA表达分别被增加了32倍以及15倍，其中所述的过表达构建体的转化能够增加MYB68的表达或者活性(35S-阿拉伯芥MYB68)。所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100基因并不呈递在所述的微阵列芯片之上，因而这些紧密相关的基因所具有的表达仍然需要被确定。在组1b中，所述的四个成员阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101之间存在高度的序列同一性，并且可以至少在一定程度上在功能上存在冗余。
阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的表达与阿拉伯芥MYB68共同主要存在于所述的根部的中柱鞘内，Myb68的表达也是同样(参见Birnbaum等人于2003年发表的文章；Schmid等人于2005年发表的文章)。对所述的内生型的MYB68启动子以及所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39启动子所进行的分析证明了这些启动子主要是在根部组织内进行表达的。
经过进一步的微阵列分析，在所述的过表达阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的转基因植物中(35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39构建体)，所述的IRT1所具有的基因表达没有受到显著性的影响，这表明热耐受性表型并不能够对IRT1基因的表达进行调节，其中所述的热耐受性表型是由阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的过表达所赋予的，并且在铁剥夺应答中所述的报道的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的参与是经由一种单独的途径来发生的。
对所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b转录因子基因家族的成员阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39、阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38、阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100、以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101所具有的转录特征进行了分析。所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的表达主要发生在所述的根部内，而阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38、阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100、以及阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101在叶片、蓓蕾、花朵以及根部组织内具有低的表达水平。所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)38的转录在根部以及叶片中几乎检测不到，阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)100的表达在所述的蓓蕾以及花朵中具有非常低的水平并且阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101同样能够在根部以及叶片中进行非常低水平的表达。
实施例9：MYB68与所述的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39启动子所进行的结合
进行电泳迁移率变化分析(EMSA)，从而确定MYB68蛋白质是否能够与所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39所具有的启动子序列进行结合。对所述启动子的四个不同的片段进行标记以及测试：P1(所述的ATG起始密码子的-1至-224)，P2(-204至-419)，P3(-401至-623)以及P4(-601至-788)。利用经过纯化的MYB68融合蛋白对所述的经过标记的探针DNA进行培养。利用探针P1对一种DNA-蛋白质复合物进行检测，而所述启动子所具有的其他区域表现出不能够与MYB68进行结合。通过进行冰冷的竞争者DNA的添加的方式对所述的复合物P1/Myb68的形成进行去除，其中所述的竞争者DNA具有与所述的探针相同的序列，但所述的复合物并不能够受到冰冷的竞争者P3的影响。此外，当利用一种截短型的MYB68蛋白质(MYB68CD)对探针P1进行培养时不能够形成DNA-蛋白质的复合物，其中在所述的截短型的MYB68蛋白质中R2R3DNA-结合结构域被删除。该数据证明了在所述区域-1至-224之中，MYB68蛋白质能够与所述的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39的启动子发生特异性的结合。
为了对所述的MYB68结合位点进行进一步的定位，作为在结合检测中的竞争者，对四个双链寡核苷酸进行了测试，其中所述的双链寡核苷酸能够对所述的启动子区域-1至-232进行覆盖：P11(-1至-61)，P12(-52至-118)，P13(-109至-178)以及P14(-169至-232)。MYB68与所述的探针P1所进行的结合被所述的竞争者P12进行了废止，但是并没有受到其他片段所产生的影响，这表明所述的MYB68结合位点是存在于所述的序列-52至-118之中的。
实施例10：阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所 发生的组成性的表达能够导致经过热胁迫之后降低的花朵败育
利用14个转基因的35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39品系以及一种野生型(WT)的对照来组建一项试验。在生长室内，在最佳的条件下(22℃，18小时的220uE的光照，60％的相对湿度(RH))使植物在2.25英寸的罐内进行生长，直至所述的第一朵花朵出现后的三天。通过将植物在42℃下放置2小时的方式来施加一种热胁迫处理。经过所述的胁迫阶段之后的一周，对所述的植物所具有的败育花朵的数量进行评价。所述的结果在表格3中被示出。相对于野生型(WT)的对照而言，有十种所述的转基因品系表现出了降低的花朵败育。一种所述的品系(34-1)表现出了相对于所述的野生型(WT)而言具有统计学显著性的减少的败育的花朵。
表格3：在42℃下经过2小时之后所述的平均花朵败育值(n＝6至1)±标准误差(SE)
实施例11：阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所 进行的组成性的表达能够导致所述植物的干旱耐受性
在六种转基因的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39品系中对干旱的耐受性进行评价，其中所述的六个品系在经历过热胁迫之后同样能够表现出降低的花朵败育。在生长室内，在最佳的条件下(22℃，18小时的220uE的光照，60％的相对湿度(RH))使植物进行生长(每个3寸的罐内5个植物，n＝8)，直至所述的第一个植物开花。在此之后通过对所有的植物进行浇灌使之达到相同的饱和水平的方式来施加一种干旱处理。不进行进一步的水供应。每天对植物进行称重，用以确定所述的每日水分损失量并且在进行处理的第四天时对所有的植物进行收集，在这个时候所有的植物都明显的发生了萎蔫。对相对于最终的芽的生物量而言所述的水分损失量进行计算并且所述的水分损失量能够作为干旱耐受性的一个代表性的标志。利用野生型(WT)对数据进行正态化处理，其中将所述的野生型(WT)设定为100％(表格4)。相对于芽的生物量而言，全部的所述六个品系都表现出了减少的水分损失量，其中有3个品系存在统计学意义上的显著性。这属于干旱耐受性表型的标志。所述的两种表现最佳的干旱耐受性品系也同样是表现最佳的热耐受性品系，从而表明了在所述的两种特性之间存在着一种紧密的联系，其中所述的两种特性指的是干旱耐受性以及热耐受性，上述的两种耐受性是阿拉伯芥螺旋-环-螺旋(bHLH)39在阿拉伯芥(Arabidopsis)中发生了组成性的表达所产生的结果。
表格4：在35S-螺旋-环-螺旋(bHLH)39转基因品系中相对于芽的干重而言的水分损失量以及干旱耐受性
实施例12：阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所 发生的组成性的表达能够导致经过热胁迫之后降低的花朵败育
利用17个转基因的35S-阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101品系以及一种野生型(WT)的对照来组建一项试验。在生长室内，在最佳的条件下(22℃，18小时的220uE的光照，60％的相对湿度(RH))使植物在2.25英寸的罐内进行生长，直至所述的第一朵花朵出现后的三天。通过将植物在42℃下放置1.75小时的方式来施加一种热胁迫处理。经过所述的胁迫阶段之后的一周，对所述的植物所具有的败育花朵的数量进行评价。所述的结果在表格5中被示出，并且从表格5中可以看出，相对于野生型(WT)的对照而言，有十种所述的转基因品系表现出了至少10％程度的降低的花朵败育，并且有两种所述的品系表现出了相对于所述的野生型(WT)而言具有超过50％的降低的花朵败育。
表格5：经过热胁迫之后的花朵败育(n＝12)
实施例13：阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所 进行的组成性的表达能够导致所述植物的干旱耐受性
在十种转基因的阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)101品系中对干旱的耐受性进行评价，其中所述的十个品系在经历过热胁迫之后同样能够表现出降低的花朵败育。在生长室内，在最佳的条件下(22℃，18小时的220uE的光照，60％的相对湿度(RH))使植物进行生长(每个3寸的罐内5个植物)，直至所述的第一个植物开花。在此之后通过对所有的植物进行浇灌使之达到相同的饱和水平的方式来施加一种干旱处理。不进行进一步的水供应。每天对植物进行称重，用以确定所述的每日水分损失量并且在进行处理的第四天时对所有的植物进行收集，在这个时候所有的植物都明显的发生了萎蔫。对相对于最终的芽的生物量而言所述的水分损失量进行计算并且所述的水分损失量能够作为干旱耐受性的一个代表性的标志。利用野生型(WT)对数据进行正态化处理，其中将所述的野生型(WT)设定为100％(表格6)。在所检查的十个品系中有六个都表现出了某种程度的干旱耐受性并且相对于野生型(WT)而言有一个品系表现出了统计学意义上显著增强的干旱耐受性，其中所述的增强程度为27％。这个品系同样是所述的四个表现最佳的热耐受性品系的其中之一，其中所述的热耐受性是通过减少的花朵败育来看出的。
表格6：在35S-螺旋-环-螺旋(bHLH)101转基因品系中相对于芽的干重而言的水分损失量以及干旱耐受性
实施例14：阿拉伯芥碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)39在阿拉伯芥(Arabidopsis)中所 发生的组成性的表达能够导致经过热胁迫之后相对于一种野生型的对照而言增加的种子 产量
在生长室内，在最佳的条件下(22℃，18小时的220uE的光照，60％的相对湿度(RH))使植物进行生长(每个3寸的罐内3个植物)直至开花。将开花的植物划分成两个组，其中将所述的第一组暴露在热胁迫之下(所有的植物在几天的时间内开了花)并且将所述的第二组保持在最佳的条件下直至其成熟。所述的热胁迫处理是由每天被暴露在45℃之下而构成的。在一个小时的时间段内温度从22℃向45℃进行梯度上升并且在一段2小时至3小时的时间段内将温度保持在45℃。在10天的时间段内施加每日的热胁迫处理。经过所述的热胁迫处理之后使所述的植物返回到最佳的条件下并且使其生长至成熟。在成熟期对所有的植物进行收集并且对每个罐内最终的种子产量进行确定。通过将所述的转基因植物所具有的产量(表示为最理想程度的百分比％)与野生型(WT)所具有的产量进行比较的方式，可以计算出所述的产量保护所达到的程度。
表格7：序列以及参照图表
序列
＞序列识别号：1
ATGTGTGCATTAGTACCTCCATTGTTTCCAAACTTTGGGTGGCCATCAACGGGAGAGT
ACGACAGCTACTACCTCGCCGGAGATATCCTCAACAACGGCGGGTTTCTTGATTTTCC
GGTACCGGAGGAGACTTATGGAGCTGTTACAGCGGTGACTCAACATCAGAATAGCTT
TGGTGTTTCTGTTTCGTCGGAGGGAAATGAAATAGACAACAATCCGGTGGTCGTCAA
GAAGCTTAATCACAATGCTAGTGAGCGTGACCGTCGCAGGAAAATTAACTCTTTGTTC
TCATCTCTCCGTTCATGTCTTCCTGCCTCTGGCCAATCGAAGAAGCTAAGCATTCCTG
CGACGGTTTCTCGAAGCTTGAAGTACATACCAGAGCTGCAAGAGCAAGTGAAGAAG
CTAATAAAAAAGAAGGAAGAGCTCTTGGTGCAAATTTCAGGTCAAAGAAACACTGA
ATGTTACGTTAAGCAGCCACCAAAGGCCGTCGCGAATTATATCTCGACCGTTTCTGCG
ACTAGGCTTGGTGACAACGAAGTGATGGTCCAAATCTCATCGTCCAAGATTCATAACT
TTTCGATATCTAATGTTTTAAGTGGGTTAGAAGAAGATAGGTTTGTTCTTGTGGACATG
TCATCTTCAAGGTCTCAAGGAGAAAGGCTTTTCTACACTTTGCATTTACAAGTGGAG
AAGATTGAAAATTACAAGCTGAATTGCGAAGAGTTAAGTCAGAGGATGTTGTACTTG
TATGAGGAATGTGGAAACTCATATATATGA
＞序列识别号：2
GCACGAGGCCTCCCTCCGCTCCCTCCTCCCCGACACCGATCACAGCAAGAAGCTGAG
CATCCCCATCACTGTGACGCGGGTGCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGT
GGACACGCTGGAGAAGAAGAAGGAAGAGCTGACCCAGGCGAACTGCAAACCAGGA
GTTGTGGCCATGAAGGAGAACACGGCTCCGATCGTGTCCGCCACCTGCCTCGA
＞序列识别号：3
ATGGGGCACAAGCAGCTGTTCGTGGACGACCCGTTCGCGAGCAGCATCTCGTCTCTG
GAGGCGGAGGCCATCTTCTCCGGCGCCGGCGGGCAGTGGCGCGCCGGCGGCGGCCT
CGACGACCGTGACCTCTCCGCCATGCCGGCGGCGGCCAACACCTCGTCGGGCGGCTC
CGGCTCTCCCGGCGGCGGCGGCAGGAAGATGAGCCACAACGCGTACGAGCGCGACC
GCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCTCCCTCCTCCCCGACGCCG
ACCACACCGTATGCAAATCAAATTGAAGCCATAGATCATAATTTGATCCTGAATCCTGA
TGGATCTGGTGATGATTTGACTAATTGCAGAAGAAGCTGAGCATCCCGATCACAGTGT
CGCGGGTGCTAAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGGAAGTGGACGGGCTGGAGAGG
AAGAAGGAGGAGCTGACGCGCGCCAACTGCAAGCCCGGGGTGATCGCCATGAAGGA
CCAGAACGTTGCTCCCGTCGTCTCCGCGACCTGCCTCGACGACAAGGACATCATGGT
TCAGGTCAGCTTGCTCAGCGGCATGGCGGCGGCGGCTCTGCCGATGTCCACGTGCAT
AAAGATTCTGGAGAACGAAGGTCTTCGCCTCGTCAGCTCGTCCACTTCTGCCTTTGG
GAACAGGACGTTCTATAACCTCCATCTTCAGGTAATTGGTACATCTGTCTGCATGAAG
CCTTAATTTCCTATTGGTAATTATCAATGTCATCGATCCATGCTTGCTCGATTCATTTTG
GCAAATTTGCCTCATACTTACTCGACATCGTAGTAGAAGAGAAGGAAAAAAAAAAGC
CCAGCATTTTTCTTTGAGAAACAAAGCACAACATTTTCTGCTCCCAAGATCCATTCCG
AAAGCCGGGTGCACAACACTACGAGTAAAAATCGTTTCCTCTTAGTTATATAACGTGT
GGTACCTTCAACTTAAATGAGCATCAGTTGATGCAGAGTGGTACCCCTGTTCGGAAA
AGACTTCAACATGGCACCATCTTCACTAGAGGTCCCCCAGCCCCTAATTCAGACGAA
GGCATCATTTTAGTCCATTAACCCCGGTAGGTTGAGATTACAAAGGCTAGATTTATATA
ACGGTTTTGCTATTTCTAAGGCGACTGAGAAATAAGTATTTCTAACAACCATTTGATCC
AATCACTGAGATTCGTGCAAGATCCATACATATACAAAGTATTAGAAAACCTTAATCG
GATGGATATGATCGTTGACTGAGAAATAGACACTTCTTTTATGTAAAGGGTGTTTACTA
TATATATGTGGGTTTTGATATACTCATATTGAATAGATTTGAAGATCATGTCAGGCCCTA
CTTAGGGTAATCTGTTGTGAAATTAAACTGTGTTCATAGGGCAAAAACATTGTCTTATA
AATCAGCACAAAATCAACGAATTGGGAGTTTTTACGTAACAAATATAAATTGTAGCAA
CACAAATTAATTGGCTACAATACAATCCAAGAACAACAAGACGAGTATACACGGCAA
ACGATCATGCATATGGTGAGTTGGTGACCAGATCACCCGCTCTACTAGATGCTCCTAG
ATGCATATGGTGCCATAATTTTAGGAAAACCGAACTGGAAGAAGCACCTAAAAAACG
AGTATGAAATCATCAATCGACCAAGATTAGAGGTCGGTCTCATCATCGACAACATGAA
CAATTAAGATGCATGCTGGAGAACAGATAATCTAACACAGCCACAGGTTTATTACAAA
AAGCTTAACAGAAACTTCGCTAAAGCAACCAAAGAATGAGAACAAAAAAATATATCT
TCTAATAACATGTGTGTGCTGTTGTATAGCATCTGAAGGCGTAATGCGAAACTCTAATT
TATCTGAAGTATGTAGTGCTTATATGCTTATATAACATGTAAATAAGCAATATATATTCAT
TAATTTCATTTAATTTGTATACTGAAACAGAGAAACCAGCGAACGATGAGCAAGGAG
TGCCCAGCGTTCTGTGACGAGCTGGAGAAAGCCATCAAGAAAAAGGCAGGACTGCA
TATGCATCAGTGA
＞序列识别号：4
ATGGGGCACAAGCAGCTGTTCGTGGACGACCCGTTCGCGAGCAGCATCTCGTCTCTG
GAGGCGGAGGCCATCTTCTCCGGCGCCGG CGGGCAGTGGCGCGCCGGCGGCGGCCT
CGACGACCGTGACCTCTCCGCCATGCCGGCGGCGGCCAACACCTCGTCGGGCGGCTC
CGGCTCTCCCGGCGGCGGCGGCAGGAAGATGAGCCACAACGCGTACGAGCGCGACC
GCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCTCCCTCCTCCCCGACGCCG
ACCACACCAAGAAGCTGAGCATCCCGATCACAGTGTCGCGGGTGCTAAAGTACATCC
CGGAGCTGCAGAAGGAAGTGGACGGGCTGGAGAGGAAGAAGGAGGAGCTGACGCG
CGCCAACTGCAAGCCCGGGGTGATCGCCATGAAGGACCAGAACGTTGCTCCCGTCGT
CTCCGCGACCTGCCTCGACGACAAGGACATCATGGTTCAGGTCAGCTTGCTCAGCGG
CATGGCGGCGGCGGCTCTGCCGATGTCCACGTGCATAAAGATTCTGGAGAACGAAGG
TCTTCGCCTCGTCAGCTCGTCCACTTCTGCCTTTGGGAACAGGACGTTCTATAACCTC
CATCTTCAGAGAAACCAGCGAACGATGAGCAAGGAGTGCCCAGCGTTCTGTGACGA
GCTGGAGAAAGCCATCAAGAAAAAGGCAGGACTGCATATGCATCAGTGA
＞序列识别号：5
AAAAAAAAATTAGAAAAGAAGAAAAGAGTTTATCGGGTCTCTCTCACGAGTCACGG
CGTCGACGAAACTGGAGGTGAAGCCATCTCCGATCGAGAGTCGCCGTCATCCCTATC
CCACTCCTGCAATATCTACTCCGACGCTGTCGTCGTTAATTTCGGCACCTCCTCGCCA
AGTCGCCATCGTCCCTGTCGTGTGCGAGCTGTCACTGTCCATGCAACGAATAAATACT
CTGTGTCTGCATCG CTTTGACAGTGCTTGGTGCTTCTATGATATGTCCTCCGGTTTATG
CTTTGCCCAGATTCGGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGTTGATGTTTCATCTTCTAGGT
CTCATGGAGAAAGGCTCGTCTACAGTTTGCATCTTCAAATGGGAAACATAAATAATCA
CGAGCTGACGTGCGAAGAGCTAAGCCAGAGAATGTATACTTGTATGAGGAATGCGGA
AACTCGTTTAGATGATAATCTGTTCTTGTTTCTTTTAGTTATGTCATCTGTTTCTCAACA
TGTAACATTCATGTAGCCG AGTTGTTTCGTTTATTTTTCTTGTCGAAATCAATGATCGA
TTATCGC
＞序列识别号：6
GACGGCGTCGACGAAACTGGAGGTGAAGCCATCTCCGATCGAGAGTCGCCGTCATCC
CTATCCCACTCCTGCAATATCTACTCCGACGCTGTCGTCGTTAATTTCGGCACCTCCTC
GCCAAGTCGCCATCGTCCCTGTCGTGTAAGCCCTAGGTCTGATTTGTCTTTCCTTTTA
AATCGACGAAATTGAAATTGTGCGAGCTGTCACTGTCCATGCAACGAATAAATACTCT
GTGTCTGCATCGCTTTGACAGTGCTTGGTGCTTCTATGATATGTCCTCCGGTTTATGCT
TTGCCCAGATTCGGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGTTGATGTTTCATCTTCTAGGTCT
CATGGAGAAAGGCTCGTCTACAGTTTGCATCTTCAAATGGGAAACATAAATAATCACG
AGCTGACGTGCGAAGAGCTAAGCCAGAGAATGTATACTTGTATGAGGAATGCGGAAA
CTCGTTTAGATGATAATCTGTTCTTGTTTCTTTTAGGTTATGTCATCTGTTTCTCAACAT
GTAACATTCATGTAGCCGAGTTGTTTCGTTTATTTTCTTGTCGAAATTCAATGATCGAT
TATCACATTTAC
＞序列识别号：7
GACGACAAAAAAAAAAATTAGAAAAGAAGAAAAGAGTTTATCGGGTCTCTCTCACG
AGTCACGGCGTCGACGAAACTGGAGGTGAAGCCATCTCCGATCGAGAGTCGCCGTC
ATCCCTATCCCACTCCTGCAATATCTACTCCGACGCTGTCGTCGTTAATTTCGGCACCT
CCTCGCCAAGTCGCCATCGTCCCTGTCGTGTAAGCCCTAGGTGCGAGCTGTCACTGT
CCATGCAACGAATAAATACTCTGTGTCTGCATCGCTTTGACAGTGCTTGGTGCTTCTAT
GATATGTCCTCCGGTTTATGCTTTGCCCAGATTCGGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGTT
GATGTTTCATCTTCTAGGTCTCATGGAGAAAGGCTCGTCTACAGTTTGCATCTTCAAA
TGGGAAACATAAATAATCACGAGCTGACGTGCGAAGAGCTAAGCCAGAGAATGTATA
CTTGTATGAGGAATGCGGAAACTCGTTTAGATGATAATCTGTTCTTGTTTCTTTTAGTT
ATGTCATCTGTTTCTCAACATGTAACATTCATGTAGCCGAGTTGTTTCGTTTATTTTCTT
GTCGAAATCAATGATCGATTATCACATTTACATGCTACTGAATATTGACTG
＞序列识别号：8
ACGACAAAAAAAAATTAGAAAAGAAGAAAAGAGTTTATCGGGTCTCTCTCACGAGT
CACGGCGTCGACGAAACTGGAGGTGAAGCCATCTCCGATCGAGAGTCGCCGTCATCC
CTATCCCACTCCTGCAATATCTACTCTGACGCTGTCGTCGTTAATTTCGGCACCTCCTC
GCCAAGTCGCCATCGTCCCTGTCGTGTAAGCCCTAGGTCTGATTTGTCTTTCCTTTTA
AATCGACGAAATTGAAATTGTGCGAGCTGTCACTGTCCATGCAACGAATAAATACTCT
GTGTCTGCATCGCTTTGACAGTGCGTGGTGCTTCTATGATATGTCCTCTGGTTTATGCT
TTGCCCAGATTCGGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTTGTTGATGTTTCATCTTCTAGGTCT
CATGGAGAAAGGCTCGTCTACAGTTTGCATCTTCAAATGGGAAACATAAATAATCACG
AGCTGACGTGCGAAGAGCTAAGCCAGAGAATGTATACCTGTATGAGGAATGCGGAAA
CTCGTTTAGATGATAATCTGTTCTTGTTTCTTTTTGTTATGTCGTCTGTTTCTCAACATG
TAACATTCATGTAGCCGAGTTGTTTCGTTTATTTTCTTGTCGAAATCAATGATCGATTAT
CACATTTACATGCTACTGAATATTGACTGATTACTATGAAATTCACTAATAT
＞序列识别号：9
ATGGTTGCTTTGTTTTCCCCTCCGGTGTTCTCAACCAAGGGATGGTTCTTAGAAGAAG
AGCCATTAAGCTATGATGTGTCTTCAGATTACTCATTTCCCTATCAATTTTTTGCACCA
CAGACACAGATTGAACTTGAAATAGAAAGGTCCTCTGCACCATCCCCTGAAGACCCT
GCCATGGTCAAAAAGCTTAGCCACAACGCTAGTGAACGTGATCGCCGCAAGAAGGTT
AATGACTTGGTTTCTTCACTTCGTTCACTTCTTCCTGGGCCAGATCAAACGAAAAAAA
TGAGCATTCCAGCTACAGTTTCGCGAGTTTTAAAATACATACCTGAGTTACAACATCA
AGTGCAAGCACTAACTAAGAAAAAAGAGGAGCTTCTGTGCAGAATTTCAAAAAATC
TCAAAGGAGATTCGGTGAACAAAGAATCTCAAAGGAGAATTTCCCATCACAATTCTG
ATTTTGCTGTTTCAACTAGTAGGCTCAACGATTGTGAAGCTGTTGTTCACATTTCCTCT
TATGAGGCTCACAAGGCTCCACTATCCGACATCTTGCAATGTTTAGAAAATAATGGCC
TTTATTTGCTAAATGCTTCTTCCTCTGAAACTTTTGGAGGAAGGGTCTTCTACAACTT
GCATTTCCAGGTGGAAAAAACTCATAGATTAGAGTCCGAAATTCTAACTGAGAAGCT
TTTGTCAATATATGAGAAGCAAAGGATTTTC
＞序列识别号：10
ATGGGGCACCAGACCCAGATGTTCGACGACCCGTTCGCGAGCAGTATGTCGTCCCTG
GACGCAGACATCTTCTCCGTCGCCGGCGGCCTCCACCCATCGCAGTGGCCGGGACTC
GACCACGACGTCTCGCTGGCGCCGGCTGCCAACAACGG CACCTCCTCCGGCGGCTA
CGGCTCCCCCGGGGGCGGCGATGGCTCGGGCTCCCACCGCAAGATCAGCCACAACG
CGTACGAGCGCGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCGACCTCCGCTCCC
TCCTCCCCGACTCCGATCACACCAAGAAGCTGAGCATTCCGATCACGGTGTCGCGGG
TGCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACGGACTGGAGAAGAAGAAG
GAGGAGCTTACGAGGGCCAGCTGCAAGCCAGGCGTATTGACCATGAAGGAGAACAC
GGTCCCGATCGTGTCCGCCACCTGCCTCGACGAAAGGGAGATCATGGTCCAGGTTAG
CTTGGTGAGCACCATGGCCGGAGCTCTGCCCATGTCCAAGTGCATCAAAGTGCTGGA
GAACGAAGGCCTCCGCCTCATCAGCTCGTCCACTTCTGCTTTCCAGAACAGGACGTT
CTATAGCCTCCATCTTCAGAGAACCCAACGGACGATGAGCAAAGAGTGTCCGGCATT
TTGTGAAGAACTGGAGAATGCCCTGACGCAGAAGGCGGGACTACGTCTACATCACCA
G
＞序列识别号：11
ATGACCCCTTCTCGAGCAGCATCTCGTCGCTGGAGGCGGACATCTTCTCCGCCGGCG
GCCAGCGGCGCGTCGCCGCCGTGGCCGGACCTCGAACTCGACCTCGACCTCGACGA
CGACGACATCCACGACCTCTCCGCGCCGGCGGCCAACGCCACCTCCTCAGGAGGCTA
TGGCTCGGGCGGAGGCTCCGGCGGCTCCCACAGGAAGCTCAGCCACAACGCGTACG
AGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCGCTCCGCTCCCTCCTCC
CCGACGCTGACCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACGGTCTCCCGAGTTCTCA
AGTACATCCCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACAACCTGGAGAGGAGGAAGAAGGA
GCTGACGAACGCCAACTGCAAACCAGGAGTTCTGAAGACGAGCCAGATTGTAACTC
CCATTGTTTCTGCTACCTGCCTCAACGATACGGAGATCATGGTTCAGGTCAGCCTGCA
GAGCAATGTGGCTGCCACAAGTCTTCCTCTGTCCAAGTGCATAAAAGTGCTGGAGAA
CGAAGGCCTTCACCTGATTAGTTCATCAACTTACTCCACCTTCGACAACAGGACATTC
TATAGCCTCCATCTTCAGAGAAGTCAAAGAACGATGAAGGAGGAGTGCCCAGCATTC
TGCGATGAACTGGAGAGGATTATCAAGAAGAAAGCAGGGGCG
＞序列识别号：12
ATGTTAGCCATTTCTTCTTCTTCTCCTCCTTTATTTTCTACTACTACTAATAATTTTGGTT
GGCTTTTGGAAGATCTTATAAGCCATGAATTAACAAATAGTGGAGAAACTTCAAATTC
ATCTCAAAAAAGCCTTCAACATTGTGATTCAAATAAATTTGATCAAATTATTATCAACA
GTGGTGATCAGTATCAACCTGATCAGACGGTTAAGAAGCTTAATCATAACGCAAGTG
AACGTGACCGTAGAAAGAAAATCAACAGCTTATATTCTTCTCTTCGTTCTTTACTACC
TCCTTCTGATCATACGAAAAAGCTAAGCATTCCATCAACAGTATCAAGAATTCTAAAG
＞序列识别号：13
ATGGGGCACCAGCACCAGATGTTCAACGACCCCTTCGCGAGCAGCATGTCGTCACTG
GAGGAAGACATGTTCTCCGGTGCCGGAGGCTACCACCACCTCACGCCGTCCATGCAG
TGGCCGGGCTTGGATAACGACATACCGTCGGCGCCGGCTGCCAACAACGCCACCTCC
TCCGGTGGCTCTGGATCACACCGCAAGATGAGTCACAACGCGTACGAACGTGACCGC
CGCAAGCAGCTCAACGAGCAATATTCCTCCCTCCGCTCCCTCCTCCCCGACGATGATC
ACACCAAGAAGATGAGCATTCCGACCACGGTGTCGCGGGTGATCAACTACATCCCGG
AGCTGCAGAAGGAGGTAGACCGCCTGGAGAAGAAGAAGGAGGAGCTGAGGCGGGG
CAGCTGCGAGCAAGGCGCCATGAGGCAGAACACGGCCCCGATCGTGTCCGCCACCT
GCCTCGACGACAGGGAGATCATGGTCCAGGTCAGCCTGGTGAGCACCATGGCGGGA
GCTCTGCCCATGTCCAAGTGCATCAAGGTGCTGGAGAACCAAGGCCTTCGCCTCATA
AATTCCTCGACTTCCGCGTTTCAGAACAGGACGTTCTACAGCCTCCATCTTCAGAGA
ACCCAACGGACAATGAGCAAGGAGGGCCAAACATTTTGTAACGAATTGGAGAACGC
TGTGAAGCAAAAGGCGGGACTACATCTACATCAT
＞序列识别号：14
ATGGGGCACCAGCACCAGATGTTCGAAGACCCGTTCGCGAGCAGCATATCGTCGCTG
GAGGCCGAGATATTCTCCGTCGCCGGCGGCCACCACCATACGCAGTGGCCGGGCCTC
GACCACGACATCCCGCTGGCCCCGGCTGCCAATAACGGCACCTCCTCCGGCGGCTAC
GGCTCCCCCGGGGGCGGCGATGGCTCGGGCTCCCATCGCAAGATCAGCCACAACGCC
TACGAGCGCGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCGACCTCCGCTCCCTC
CTCCCCGACACCGATCACACGAAGAAGCTTAGCATTCCGATCACGGTGTCGCGGGTG
CTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACGGCCTGGAGAAGAAGAAGGA
GGAGCTGACGCGCGCCAGCTGCAAGCCCGGCGTGCTGACCATGAAGGGGGACACGG
CTCCGATCGTGTCCNGCCACTGCCTCGACGACAGGGAGATCATGGTCCANNGTCAGC
TGGTGAGCACCATGGGCGGAGTCTGCCATGTCAAGTGCTCAGGTGCTGAGACGAAG
GCTCGGCTCATAGTCGTCACTCCGGTTCAGACAGACTCTATATTCATCTC
＞序列识别号：15
ATGGGGCACCAGCACCAGATGTTCGAAGACCCGTTCGCGAGCAGCATATCGTCGCTG
GAGGCGGACATCTTCTCCGTCGCCGCCGGCCACCACCATCCGCAGTGGCCGGGCCTC
GACCACGACGTCCCGTTGGCGCCGGCTGCCAACAACGGCACATCCTCCGGCGGCTAC
GGCTCCCCCGGTGGCGGCGACGGCTCGGGCTCCCACCGCAAGATCAGCCACAACGC
GTACGAGCGCGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCGACCTCCGCTCCCT
CCTCCCCGACACCGATCACACGAAGAAACTGAGCATTCCGATCACGGTGTCGCGGGT
GCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACGGACTGGAGAAGAAGAAG
GAGGAGCTGACGCGCGCCAACTGCAGCCCGGCGTGCTG
＞序列识别号：16
AACAACGCCACCTCCTCCGGCGGCTCTGGATCACACCGAAAGATGAGTCACAACGC
GTACGAGCGTGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCAATATTCCTCCCTCCGCTCCCT
CCTCCCCGATGACGACCACAATAAGAAGATGAGCATTCCGACCACGGTGTCGCGGGT
GATCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGGAGGTAGACGGCCTGGAGAAGAAGAAGG
AGGAGCTGAGGCGGGCCAGCTACGAGCAAGCGCCA
＞序列识别号：17
CGTGTCCCGAGTTCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACAACCTGG
AGAGGAGGAAGAAGGAGCTGACCAACGCCAACTGCAAGCCGGGAGTTCTGAAAAC
CACCAAGGCCGTAACTCCCATTGTTTCTGCTACCTGCCTCAACGACACGGAGATCATG
GTTCAGGTCAGCCTGCACAGCGATGTGGCCGCCACAGCTCTCCCTCTCTCCAAGTGC
AT
＞序列识别号：18
MCALVPPLFPNFGWPSTGEYDSYYLAGDILNNGGFLDFPVPEETYGAVTAVTQHQNSFG
VSVSSEGNEIDNNPVVVKKLNHNASERDRRRKINSLFSSLRSCLPASGQSKKLSIPATVSR
SLKYIPELQEQVKKLIKKKEELLVQISGQRNTECYVKQPPKAVANYISTVSATRLGDNEV
MVQISSSKIHNFSISNVLSGLEEDRFVLVDMSSSRSQGERLFYTLHLQVEKIENYKLNCEE
LSQRMLYLYEECGNSYI
＞序列识别号：19
RHEASLRSLLPDTDHSKKLSIPITVTRVLKYIPELQKQVDTLEKKKEELTQANCKPGVVA
MKENTAPIVSATCLDDRDIMVQVSLLSNMAGALPVSKCIKVLENEGLRLVSSSTSAFQN
KTFYSLHVQRTQRTISKVCPAFCDELENAIKRAGMRLQQ
＞序列识别号：20
MGHKQLFVDDPFASSISSLEAEAIFSGAGGQWRAGGGLDDRDLSAMPAAANTSSGGSGS
PGGGGRKMSHNAYERDRRKQLNELYSSLRSLLPDADHTKKLSIPITVSRVLKYIPELQKE
VDGLERKKEELTRANCKPGVIAMKDQNVAPVVSATCLDDKDIMVQVSLLSGMAAAALP
MSTCIKILENEGLRLVSSSTSAFGNRTFYNLHLQRNQRTMSKECPAFCDELEKAIKKKAG
LHMHQ
＞序列识别号：21
MVALFSPPVFSTKGWFLEEEPLSYDVSSDYSFPYQFFAPQTQIELEIERSSAPSPEDPAMV
KKLSHNASERDRRKKVNDLVSSLRSLLPGPDQTKKMSIPATVSRVLKYIPELQHQVQALT
KKKEELLCRISKNLKGDSVNKESQRRISHHNSDFAVSTSRLNDCEAVVHISSYEAHKAPL
SDILQCLENNGLYLLNASSSETFGGRVFYNLHFQVEKTHRLESEILTEKLLSIYEKQRIF
＞序列识别号：22
MGHQTQMFDDPFASSMSSLDADIFSVAGGLHPSQWPGLDHDVSLAPAANNGTSSGGYG
SPGGGDGSGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSDLRSLLPDSDHTKKLSIPITVSRVLKYIP
ELQKQVDGLEKKKEELTRASCKPGVLTMKENTVPIVSATCLDEREIMVQVSLVSTMAGA
LPMSKCIKVLENEGLRLISSSTSAFQNRTFYSLHLQRTQRTMSKECPAFCEELENALTQKA
GLRLHHQ
＞序列识别号：23
MTPSRAASRRWRRTSSPPAASGASPPWPDLELDLDLDDDDIHDLSAPAANATSSGGYGS
GGGSGGSHRKLSHNAYERDRRKQLNELYSSLRSLLPDADHTKKLSIPTTVSRVLKYIPEL
QKQVDNLERRKKELTNANCKPGVLKTSQIVTPIVSATCLNDTEIMVQVSLQSNVAATSLP
LSKCIKVLENEGLHLISSSTYSTFDNRTFYSLHLQRSQRTMKEECPAFCDELERIIKKKAG
A
＞序列识别号：24
MLAISSSSPPLFSTTTNNFGWLLEDLISHELTNSGETSNSSQKSLQHCDSNKFDQIIINSGD
QYQPDQTVKKLNHNASERDRRKKINSLYSSLRSLLPPSDHTKKLSIPSTVSRILK
＞序列识别号：25
MGHQHQMFNDPFASSMSSLEEDMFSGAGGYHHLTPSMQWPGLDNDIPSAPAANNATSS
GGSGSHRKMSHNAYERDRRKQLNEQYSSLRSLLPDDDHTKKMSIPTTVSRVINYIPELQ
KEVDRLEKKKEELRRGSCEQGAMRQNTAPIVSATCLDDREIMVQVSLVSTMAGALPMS
KCIKVLENQGLRLINSSTSAFQNRTFYSLHLQRTQRTMSKEGQTFCNELENAVKQKAGL
HLHH
＞序列识别号：26
MGHQHQMFEDPFASSISSLEAEIFSVAGGHHHTQWPGLDHDIPLAPAANNGTSSGGYGS
PGGGDGSGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSDLRSLLPDTDHTKKLSIPITVSRVLKYIPE
LQKQVDGLEKKKEELTRASCKPGVLTMKGDTAPIVSXHCLDDREIMVXXQLVSTMGGV
CHVKCSGAETKARLIVVTPVQTDSIFIS
＞序列识别号：27
MGHQHQMFEDPFASSISSLEADIFSVAAGHHHPQWPGLDHDVPLAPAANNGTSSGGYGS
PGGGDGSGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSDLRSLLPDTDHTKKLSIPITVSRVLKYIPE
LQKQVDGLEKKKEELTRANCSPAC
＞序列识别号：28
NNATSSGGSGSHRKMSHNAYERDRRKQLNEQYSSLRSLLPDDDHNKKMSIPTTVSRVIK
YIPELQKEVDGLEKKKEELRRASYEQAP
＞序列识别号：29
ATGTGTGCATTAGTCCCTTCATTTTTCACAAACTTCGGTTGGCCGTCAACGAATCAAT
ACGAAAGCTATTACGGTGCCGGAGATAACCTAAATAACGGCACATTTCTTGAATTGAC
GGTACCACAGACTTATGAAGTGACTCATCATCAGAATAGCTTGGGAGTATCTGTTTCG
TCAGAAGGAAATGAGATAGACAACAATCCGGTTGTGGTCAAGAAGCTTAATCACAAT
GCTAGTGAACGTGACCGACGCAAGAAGATCAACACTTTGTTCTCATCTCTCCGTTCAT
GTCTTCCAGCTTCTGATCAATCGAAGAAGCTAAGTATTCCTGAAACGGTTTCAAAGA
GCTTAAAGTACATACCAGAGCTGCAACAGCAAGTGAAGAGGCTAATACAAAAGAAG
GAAGAAATTTTGGTACGAGTATCGGGTCAAAGAGACTTTGAGCTTTACGATAAGCAG
CAACCAAAGGCGGTCGCGAGTTATCTCTCAACGGTTTCTGCCACTAGGCTTGGTGAC
AACGAAGTGATGGTCCAAGTCTCATCGTCCAAGATTCATAACTTTTCGATATCAAATG
TGTTGGGTGGGATAGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGTGGATGTTTCATCATCAAGATC
TCAAGGAGAGAGGCTCTTCTACACTTTGCATCTTCAAGTGGAGAATATGGATGATTAC
AAGATTAATTGCGAAGAATTAAGTGAAAGGATGTTGTACTTGTACGAGAAATGTGAA
AACTCGTTTAACTAG
＞序列识别号：30
ATGTGTGCATTAGTCCCTCCATTGTTCCCAAACTTTGGGTGGCCGTCGACAGGAGAGT
ACGAGAGTAACTACCTGGCCGGAGTGAACCTCGAGGACTTTACGTTTCTTGATTTTCC
GGCACCAGAGACATATGGAGTGGAACATCATCAGGAGATTCAGGAAATGTTGGGGGT
CTCTGTTCCGTCCGAGGGGAATGGAGTTGTAACCAAGAAGCTTAATCACAATGCTAG
TGAGCGTGACCGTCGCAAGAAGATCAACTCTTTGTTCTCGTCTCTCCGTTCATGTCTC
CCAGCTTCTGATCAAACGAAGAAGCTAAGTATTCCTCAGACGGTTTCTCGGAGCTTG
AAGTACATTCCAGAGCTGCAAGAGCAAGTGAAGAAGCTAATACAAAAGAAGGAAGA
ACTCTTGGTGCGAGTATCAGGTCAAAGAGCCATTGAACATTATGTTGAGCCGCAGCC
AAAGGCCGTTGCACGTTACGTCTCGACCATTTCTGCGACTAAGCTTGGAGACAACGA
AGTGCTGGTCCAAATCTCATCGTCCAAGAATCATAACTTTTCGATATCTAATGTGTTGA
GTGGGTTAGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGTTGATGTTTCATCTTCCAGGTATCATGG
AAAATGGCTCTTCTACTCTTTGCATCTTCAAATGGGAAATAAAGATAATCACAAACTG
AAGTGCGAAGAGCTAAGCCAGAGAATTTTGTACTTGTATGAGGAATGTGAAAACTCA
TTTAGA
＞序列识别号：31
ATGTGTGCATTAGTCCCTCCACTGTTCCCCGACTTTGGGTGGCCGTCGACGGCAGGTT
ACGAGAGCTACTACCTCGGCGGAGAAAACCTCAACAACGACATGTTTCTTGATTTTC
CGGTTGTGGAAACTTATGGAGTATTGGCTCATCATCAGAACAGCTTAGGAGTTTCTGT
TTCGTCGGAGGGAAATGGAATAGACAACAACCCGGTTGTTAAAAAGAAGCTTAATCA
CAATGCTAGTGAGCGTGACCGTCGCAAGAAGATCAACTCTTTGTTTGCATCTCTCCGC
TCATGTCTTCCAACCTCAGATCAATCGAAAAAGCTAAGCATTTCAGCCACCGTTTCAC
GAAGCTTGAAGTACATACCAGAGTTGCAAGAGCAAGTGAAGAAGTTATTACAAAAG
AAGGAAGAACTCTTGGTTCGAGTATCAGGTCAACGAGACATTGAACTTTACGTTAAG
CCACAACCAAAGGCAATTGCAAGTTATGTCTCCACTGTTTCCGCGACTAGGCTTGGA
GACAACGAAGTGATGGTCCAAATCTCATCATCCAAGATTCATAACTTCTCGATATCTA
AAGTGTTAACTGGGTTAGAAGAAGATGGTTTTGTTCTTGTGGATGTTTCATCTTCAAG
GTTTCAAGGGGAAAGGCTTTTCTACACTTTGCATCTTCAAGTAGAAAATATGGATGAT
CATTACAAAATGAATTGCGAAGAGTTAAGTGAAAGGATGTTGTACTTGTACGAGGAA
TGTGAAAATTNNNTTAGG
＞序列识别号：32
ATTCCTCAGACGGTTTCTCGGAGCTTGAAGTACATACCAGAGCTACAAGAGCAAGTG
AAGAAGCTAATACAAAAGAAGGAAGAACTCTTGGTGCGAGTATCAGGTCAAAGAGA
CATTGAACATTACGTTGAGCCGCACCCAAAGGCCGTTGCACGTTACGTCTCGACCATT
TCTGCGACTAAGCTTGGAGACAACGAAGTGATGGTCCAAATCTCATCGTCCAAGAAT
CATAACTTTTCGATATCTAATGTGTTGAGTGGGTTAGAAGAAGATGGGTTTGTTCTTGT
TGATGTTTCATCTTCAAGGTCTCATGGAGAAAGGCTCTTCTACACTTTGCATCTTCAA
ATGGGAAATAAAGATGATTACAAACTGACATGCGAAGAGCTACGCCAGAGAATGTTA
TACTTGTATGAGGAATGTGGAAACTCGTTTAGA
＞序列识别号：33
ATTCCAACTCCCTCACAAGCCACAAGCAGCGACCTTAGCATGGTCAAGAAACTTATC
CGCAATGCTAGTGAACGAGATCGCCGCAAGAAAATCAATACTTTGTATTCTTCACTTC
GTTCACTTCTTCCTGTGGCAGAACAGATGAAGAAGTTGAGCAATCCGGCAACAATTT
CACGAGTCCTAAAGTACATACGTGAGTTACAGAAGCAGGTAGAAGGACTACTTACGA
GAAAGGAGGCGATTTTATTGAAACTATCTCCAGAAGTAGATGAGGTGAAGAGTAAAG
AATCTGAGAGGAAG
＞序列识别号：34
AGCGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCAATATTCCTCCCTCCGCTCCCTCCTCCCC
GATGACGATCACAATAAGAAGATGAGCATTCCGACCACGGTGTCGCGGGTGATCAAG
TACATCCCGGAGCTACAGAAGGAGGTCGACGGTCTGGAGAAGAAGAAGGAGGAGCT
CAGGCGAGCTAGCAGCGAGCAAGGCGTGCTGACTATGAGGCAGAACACGGCTCCTG
TCGTCTCCGCCACCTGCCTCGACGACAGGGAAATCATGGTCCAGGTCAGTCTGGTGA
GCACCATGGCCGCAGCTCTGCCCATGTCCAAGTGCATCAAGGTGCTGGAGAACGAAG
GCCTTCGCCTCATAAATTCCTCGACTTCCGCGTTCCAGAACAGGACCTTCTATAGCCT
CCATCTTCAGAGAACCCAACGAACAATGAGCAAGGAGGGCCAAACATTTTGTAACG
AACTGGAGAACGCCGTGAAGCAAAAGGCAGGACTGCATCTGCATCAT
＞序列识别号：35
ATGGGGCACCAGACCCAGATGTTCGACGACCCGTTCGCGAGCAGTATGTCGTCCCTG
GACGCAGACATCTTCTCCGTCGCCGGCGGCCTCCACCCATCGCAGTGGCCGGGACTC
GACCACGACGTCTCGCTGGCGCCGGCTGCCAACAACGGCACCTCCTCCGGCGGCTA
CGGCTCCCCCGGGGGCGGCGATGGCTCGGGCTCCCACCGCAAGATCAGCCACAACG
CGTACGAGCGCGACCGCCGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCGACCTCCGCTCCC
TCCTCCCCGACTCCGATCACACCAAGAAGCTGAGCATTCCGATCACGGTGTCGCGCG
TGCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACGGACTGGAGAAGAAGAAG
GAGGAGCTTACGCGGGCCAGCTGCAAGCCAGGCGTATTGACCATGAAGGAGAACAC
GGTCCCGATCGTGTCCGCCACCTGCCTCGACGAAAGGGAGATCATGGTCCAGGTTAG
CTTGGTGAGCACCATGGCCGGAGCTCTGCCCATGTCCAAGCGCATCAAAGTGCTGGA
GAACGAAGGCCTCCGCCTCATCAGCTCGTCCACTTCTGCTTTCCAGAACAGGACGTT
CTATAGCCTCCATCTTCAGAGAACCCAACGGACGATGAGCAAAGAGTGTCCGGCATT
TTGTGAAGAACTGGAGAATGCCCTGACGCAGAAGGCGGGGTACGTCTACATCACCA
GTAGATTATATGTAGCAGAATAA
＞序列识别号：36
ATGTTAGCGATATCTCCTCCTATGTTTTCAACAATTGGATGGCCCTTTGAGGAGCCTTT
AAGCCATAACCAGCATCAGAATTCATTCTACAAAGACACTGTTGATCAATTATTTAATT
TTCATGATCAAGTTGAGGCAGAAATTAATTCAACAGATCCCTCACAATCCACAAGCA
GTGACCTTAGCATGGTCAAGAAGCTTGTTCATAATGCCAGTGAACGCGATCGCCGCA
AGAAGATCAATAATTTGTATTCATCACTTCGATCACTCCTTCCTGTTTCTGATCAAATG
AAATTAAGCATTCCGGGAACAATTTCTAGAGTCCTGAAATACATACCTGAATTACAGA
ATCAAGTAGAGGGACTAATTAAGAGAAAGGATGAGATCTTATTGGGACTTTCTCCAC
AAGTAGAAGAGTTTATTCTAAGCAAAGAATCTCAAAGGAAGAAGCATAGTTACAACT
CTGGTTTTGTAGTTTCAAGTAGTAGGCTCAATGATAGTGAAATTACCATTCAGATTTCA
TGTTACACTGTCCAAAAGATTCCACTTTCTGAGATCTTGATTTGTTTGGAAAATGATG
GCCTTTTGCTGCTTAATGTTTCTTCATCAAAGACCTTTGGAGGGAGGGTCTTCTATAAT
TTGCATTTCCAGGTGGATAAAACACAGATATTAGAATCTCATATTCTAAATGAGAAGCT
CTTAT℃AATAATGGAGAAGGAAGGAGAGTTTTTAAAACAATAATTAAAGTTTAGGATT
TGGCTCTTTAA
＞序列识别号：37
ATGGTTGCATTCTGCCCACCTCAGTTCTCATACTCAAACATGGGATGGCTCTTAGAGG
AGTTAGAGCCAGAGTCCTTAATTAGTCATAAAGAGAAGAACTATGCATCTTTAGAGTA
CTCGTTACCGTATCATCAATTCTCTTCACCAAAGGAACATGTTGAAATTGAAAGGCCA
CCATCCCCTAAACTTATGGCCAAGAAACTTAACCACAATGCTAGTGAACGTGATCGCC
GCAAGAAGATTAATAGCTTGATTTCTTCACTTCGTTCACTTCTTCCCGGTGAAGATCA
AACGAAAAAAATGAGCATTCCGGTAACAATTTCACGTGTCTTAAAATACATCCCTGAT
TTACAAAAGCAGGTGCAAGGACTTACCAAGAAAAAAGAAGAGCTTCTATCAAGAAT
TTCTCATCGACAAGAATATGCAGTTAACAAAGAATCACAAAGGAAGAAAATTCCAAA
TTACAATTCTGCTTTTGTAGTTTCAACAAGTAGGCTTAATGATACTGAGCTTGTTATTC
ATATTTCGTCTTATGAGGCCAACAAGATTCCTCTATCTGAGATCTTGATGTGTTTAGAA
AATAATGGTCTTCTTCTACTTAACTCTTCTTCTTCTAAAACCTTTGGAGGGAGGCTCTT
CTATAACTTGCATTTTCAGGTGGATAAAACTCAAAGATATGAGTGTG ATGATCTGATTC
AAAAGCTTTCTTCAATATATGAGAAGCAGCAAAATAATCATTTGGGCACTATGGATCA
AACGATCAATAGTGGTCTGATATAT
＞序列识别号：38
ATGTTAGCGATATCTCCTCCTATGTTTTCAACAATTGGATGGCCCTTTGAGGAGCCTTT
AAGCCATAACCAGCATCAGAATTCATTCTACAAAGACACTGTTGATCAATTATTTAATT
TTCATGATCAAGTTGAGGCAGAAATTAATTCAACAGATCCCTCACAATCCACAAGCA
GTGACCTTAGCATGGTCAAGAAGCTTGTTCATTATGCCAGTGAACGCGATCGCCGCA
AGAAGATCAATAATTTGTATTCATCACTTCGATCACTCCTTCCTGTTTCTGATCAAATG
GTACTTAAT
＞序列识别号：39
ATGGAGCACCAGCTGTTCGATGACCCCTTCTCTAGCAGCATCTCGTCGCTGGAGGCG
GACATCTTCTCCGCCGGCGGCCAGCTGCCGTCGCCGCCGTGGCCGGACCTCGACCTC
GACCTCGACGACGACGACATCCACGACCTCTCCGCGCCGACCGGCAACCCCACCTCC
TCAGGAGGCTATGGCTCGGGCGGAGGCTCCGGAGGCTCCCACAGGAAGCACAGCCA
CAACGCGTACGAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCGCTCC
GCTCCCTCCTCCCCGACGCTGACCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACGGTCT
CCCGAGTTCTCAAGTACATCCCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACAACCTGGAGAGG
AGGAAGAAAGAGCTGACGAACGCCAACTGCAAACCAGGAGTTCTGAACACGAGCC
AGATTGTAACTCCCATTGTTTCTGCTACTTGCCTCAACGATACGGAGATCATGGTTCA
GGTCAGCCTGCACAGCAACGTGGCTGCCACAAGTCTTCCTCTGTCCAAGTGCATAAA
AGTGATGGAGAATGAAGGCCTTCACCTAATTAGTTCATCAACTTACTCCACCTTCGAC
AACAGGACATTCTATAGCCTCCATGTTCAGAGAAGTCAAAGAACGATGAAAGAGGAG
TGCCCAGCA
＞序列识别号：40
ATGGTCAAGAAACTTAGCCACAACGCTAATGAACGTGACCGTCGCAAGAAGATTAAA
AGTTTGTATTCTTCACTTCGTTCACTTCTCCCAGCAGCAGATCAAATGAAGAAATTAA
GCGTGCCGGCCACTGTTTCACGTGCGCTTAAGTACCTACCAGAGCTTCAACAGCAAG
TGGAGAGACTGGTTCAAAGAAAGGAGGAGCTTTTATCAAAGTTATCAAAGCAAGGT
GGTATAATTCATCAAGAAAATCAAAGAAATGACACCGTGTATAGCTCTTTATCATCGGT
ATCGGCAAGCCAGCTTAGTGATAGAGAAGTTGTCGTTCATATTTCCACTTACAAGAAC
CATAAAAGTCCATTATCAGAAATCTTGCTCACCTTAGAGGAAGATGGACTTGTTCTAA
AAAACTCTTCTTCCTTTGAGTCATTTGGGGACAGGGTCTTCTATAATTTACATCTTCAG
GTCATGGAAGGAACTTACACATTGGATAGTGAGGCCATGAGGGCGAAGCTTGTGTCT
TTATCTGTAAAGAGGGAATCATCGTCTCTA
＞序列识别号：41
ATGTTAGAAGAATTATCTCCCATCAGTTTGTTCTCAACATTTGGATGGCCCTTGGAGG
AAGCCATAAGCCATGAACAGCACTACAGCTTTAGAGATGGTGAAACTCCAGAGTCAT
TTACTCACTTCCCTCCATCTCAGCCAGATGTAAGACAGCTTGATCGCTCCACATCATTC
ACGGCCCACAGTGGAAGCGGTGACCCTAGCATGGCTAAGAAGCTTAACCACAACGCT
AGCGAACGTGACCGTCGCAAAAAGATCAACAGTTTGTATTCTTCACTCCGTTCACTA
CTTCCTGCAGCCGATCAAAGGAAGAAATTAAGCATACCGTATACAGTTTCACGTGTGC
TTGTATACATACCAAAACTTCAACAACAAGTGGAGAGACTGATTCAAAGGAAGGAGG
AGCTTCTATCGAAGTTATCTAGGCAAGCTGACGATTTAACTCATCAAGAAAATCAAAG
AAAAGGCACCATGTATAGCTCTTTATCATCGGTATCGGCGAGCCGGCTCAGTGACAGG
GAAGTTGTCATTCATATCTCAACTAACAAGCTCCATAGAAGTTCATTATCAGAAATCTT
GGTTAATTTAGAGGAGGCTGGACTTCTTCTACTAAATTCTTCTTCCTTCGAGTCCTTTG
GAGGCAGAGTCTTCTATAATTTACACCTTCAGGCCATGGAAGGAACTTACACAGTAG
AGTGCGAGGCCTTGAATGAGAGGCTTGTGTCCTTGTGCGAGAAGAGGGAGTCATTGT
TTCCATTAAATTCAAGTTCTCCATATTCTAACTGTGTATTCTAG
＞序列识别号：42
GATCCTAACATGGTTAAGAAGCTTAACCACAACGCTAGCGAACGTGATCGTCGCAAG
AAGATCAACAGTTTGTATTCTTCACTCCGTTCACTTCTTCCAGCTTCCGATGGAATGA
AGAAATTAAGCATACCGTCCACAATTTCACGTGTGCTTAAGTACATACCAGAACTTCA
ACAGCAAGTGGAGAGACAGATCCAAAGGAAGGAGGAGCTTCTATCAAATCTATCTCG
GCAAGATGATTTAATTCATCAAGAAAATCAAAGAAAAGACACCATGTATAGCTCTTTA
TCATCGGTATCGGCAAGCCGGCTTGGTGATAGAGAAGTTGTCGTTCAAATTTCCACTT
GCAAGGTCCTTAAAAGCCCAATATCAGAAATCTTGCTTAATTTAGAGGAAAATGGACT
TGTTCTAATAAATTCTTCTTCCTTTGAGTCCTTTGGAGGCAACGTCTTCTACCATTTAC
ATCTTCAGGTA
＞序列识别号：43
ATGTTAGCATTATCTCCTCCTGTATTTCCAACACCTGAATGGCCCTTAGAGGACCCCTT
AGGCATTGACCAAATCTCCTACTTCTGTAGAGAAACTCAGCCTGCTACTGCTGCTTTT
CTTCCATCTTATCAGCAAGAGTTATTATTATTAGAGCTTGATCATCAACAATCCACATCT
TTCACAGCCTATAATAGCAGTGGTGGTGACGCTAACGATATGGTGAAGAAGCTTAATC
ATAATGCAAGCGAACGTGATCGTCGCAAGAAGATGAACACCCTCTATTCTTCCCTCCG
ATCACTATTTCCGGCCGCCGATGAAATGAAGAAGCTGAGTATACCTGCCACAATTTCG
AGGGTGTTGAAGTACATACCAGAACTACAAGAACAGTTAGAGAGATTGGTCCAAAG
GAAGGAAGAGATTTTGCTAAGAATATCTAAGCAAAATCATATTGTTAATCCCCAAATA
AACCAAAGAAAAGGCACTTCTCACAGCAGTTTATCAGTAGTATCAGCTAATCAAATTA
GTGACAAAGAAGCCATTATTCAAATTTCTACGTACAGTAATACTATCCATACAAGTCC
ACTATCAGAAATCTTGCTTCTTTTGGAGGAGGAAGGCCTTCTTTTGATTAATTCTTCTT
CCGCTGAATCCTTTGGTGGCAGGGTCTTCAACAATTTACATGTTCAGGTTGATGATAC
TTATACATTGGAATGTGATGCTTTAAGTGAGAAGCTTGCATCTCTGTATGCCAAGAGG
GACGGGCTGTTCCCATGA
＞序列识别号：44
ATGGTCAAGAAGCTTAATCATAATGCAAGCGAAAGGGATCGCCGCAAGAAGATGAAC
ACTCTCTATTCTTCCCTCCGATCACTTCTTCCGGCCTCCGATCAAATGAAGAAGCTGA
GCATACCTGCCACAATTTCCAGGGTGTTGAAGTACATACCAGAACTACAACAACAATT
GGAGAGATTCGTCCAAAGGAAAGAAGAACTATTACTGAGAATATCTAAGCAGAATCA
TATTATTAATCCCCAAATAAACCAAAGAAAAGGCACTACTCACAGCACCTTATCAGTA
GTATCAGCTAATCAAATTAGTGACAAAGAAGTTGTTATTCAAGTTTCTACTTACAATAA
TACTATCCATACAAGTCCATTATCAGAAATCTTGCTTCTTCTGGAGGAGGAAGGCCTT
CTTCTGATTAATTCTTCCTCCTTTGAGTCCTTTGGAGGCAGGGTCTTCTACAATTTACA
TCTTCAGGTTGATGGAACTTATATATTGGAGTGTGATGCTTTAAGCGAGAAGCTTGCA
GCTTTATATGAGAGAGACGGGTTATTTCCATGA
＞序列识别号：45
ACAACGATAATAACTACGCCTCAATTTCAAACTGATCAGAATAACAAGTTGTTTGAAG
GTTTACGTGCCGATAATACTATTGATTTACCTTCATCTCATCATTATCAACAACAATGTT
TGAAAGGAAGTGAGTTTGATGTTGATGAGTTAGGGGTAGAAAGGTCATTAATGGAGA
AGAAGCTAAATCATAATGCAAGTGAACGTAATAGAAGGAAGAAGATGAATTTTCTTTA
TTCAACTCTTCGTTCTTTGCTTCCTCCTCCTACTAATAAACATCAAAAGAAAAAATTA
AGCTTTCCAGCAACAGTATCATATGTACAAGAATACATCCCAGAGTTGAAGAAAGAA
ATAGAGAGGCTAAGCAAAACAAAAGATTTGCTTTTATCAAAGAAATCAAATTATTCAT
TACTCAAAATTGATGATAATAATAAGAGAAAATTAATTATTGGTGGAACTTCTTGTAAT
TCTTCAACAACATCAATTTGTGCAAGTCAACTAAGTAATTCACAAGTTTTGGTACAAA
TTTCAACAACTCAAGAAAATAATTTTCCAATTTCACAAGTATTTGCAAGTGTAGAGGA
AGATGGATTAATTTTGCTAAATGCATCATCCTTTAAATCTTTTGGAGACAAGATTTTTC
ACAGCTTGCATTTTCAGATGCAAGGACCAATTGAAATGGACATTCAGGTTTTGAAGA
CTAAGCTTTTAGTAATGTGT
＞序列识别号：46
ATGGACCATCAGCTGTTCGACGACCCCTTCGGGAGCAGCATCTCGTCGCTGGAGGCG
GACATCTTCTCCGCCGGCGGCGGCGGACAGCTGCCGTCGCCGCCGTGGCCGGACCTC
GACCTCGACGACGACTACGACATACACGACCTCTCCGCGCCGGCCGCCAACGCCGCC
ACCTCCTCGGGAGGAGGCTATGGCTCCGGCGGCTCCGGCAGGAAGCTCAGCCACAA
CGCATACGAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCGCTCCGATC
CCTCCTCCCGGACGCTGATCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACCGTGTCCCG
AGTTCTCAACACCAAAGAGATCGTAACTCCCATTGTTTCTGCTACTTGCCTTAACGAC
ACGGAGATCATGGTTCAGGTCAGCCTGCACAGCAATGTGGCCGCCACAGCTCTCCCT
CTCTCCAAGTGCATAAAGGTGCTAGAAAACGAAGGCCTTCTCCTCGTCAGCTCATCA
ACCTACTCCACCTTCGAGAACAAGACATTCTATAGCCTCCATCTTCAGAGAAGTCAAA
GAACGATGAAGGAGCAGTGCCCAGGATTCTGCGACGAACTGGAGAAGATCGTCAGG
AAGAAAGCAGGGGCG
＞序列识别号：47
ATGGAGCATCAACTATTCGACGACGCCGTCCCGAGCAGCATGATCTGGCCGTTAGAG
GCAGAAAACGGTTTCACCGACGAGCTGCCGTCTTTGCAGTTACCGGACGTGGACCTT
GACTTCGACATCCACGAGTTCTCCGCACCGGCAACGGCACCGGCGAAAGCGGCCTC
CTCGGGTGGCTCCGGATTGGTTGGTTCCGGTTCAGGATCGCATAAGAAGCTCAACCA
CAACGCGTACGAGCGCGACCGGCGGACGCAGCTCAATCAGCTCTACTCGACTCTCCG
TTCTCTCATCCCCAACGCAGATCACACAAAGAAGCTGAGCATTCCGACGACGGTGTG
TCAGGTCCTCGACTACATACCCAAGCTGCAGAAGCAGGTCGAGGATCTCAAGAAGA
AGAAACAGGAGCTCAGTACAGCCAAATGCAGAGAAAGACTGCAGCGCGTCAAGGA
CAACACATGCCGTATTGTTTCTGCCACTCCTCTCGATGGCAACGAAATCATGGTCCAG
GTTAGCCTGCTGAGCAACATGGCTGCAAGTCTTCCTCTATCCAAGTGCATAAACGTAT
TTGAGAACAAAGGGCTTCACCTCATCAGTTCATCGACTTTCTCCACCGAGGTCAATA
GAACATTTTACAGCTTCCACTTTGAGGTACGTTTTTACATGCGCCCT
＞序列识别号：48
GGCGATGGCTCGGGCTCCCATCGCAAGATCAGCCACAACGCCTACGAGCGCGACCGC
CGCAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCGACCTCCGCTCCCTCCTCCCCGACACCGAT
CACACGAAGAAGCTTAGCATTCCGATCACGGTGTCGCGG GTGCTCAAGTACATCCCG
GAGCTGCAGAAGCAGTGGGCTTGNAGAAANAAAGAAGGAGGAGNTGACGCGCGCC
AACTGCAACCCGGNGTGNTGACCATGAAGGGGAACACGGTCCGATTGTTCCGCCAC
CTGCCTCGACGACAGGGANATTATGGTCCAAGTCAACCTGGTGAGCACATGGCCGGA
NTNTGCCCATTTCAAATGCATCAAAGTGCTGGAAAACAANNGCTCCGGTCA
＞序列识别号：49
ATGGAGCAGCTGTTCGTCGACGACCCAGCCTTCGCGAGCAGCATGTCGTCGCTTGAG
GCGGACATCTTCTCCGGCGCCGGCCAGCTGCCGTCCTCGCCGTGGCTGGACCTAGAC
CTCGACGACGATGTCCAAGACCTCTCCATGGCGCCGACGACGGCGAACGCGGTGTCC
TCCGGCTACGGCTCCGGCGGATCCGGCTCCCACAGGAAGCTCAGCCACAACGCCTAC
GAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCGCTCTCCTC
CCCGACGCCGATCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCGACGACGGTGTCTCGCGTGCTC
AAATACATACCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGAGAATCTGGAGAGGAAGAAGAAGGA
GCTGACGACGACGAGCACCACCAACTGCCAACCAAGAGTGTTGGGGAGCCAGCTGA
TGAGC
＞序列识别号：50
ATGGTCGCATTGTTCTCTCCTCCTCTCTTCTCAACCAAAGGGTGGCTCTTAGAGGAGG
AGCCATTCGGCTATAATAATACCCATAATCTCTCCTACAAAGATGATGCGTCTTCTCAG
TACTCCTTTCCCTATCAATTTTATTCACCACAGACACAGATTGAGGTTGAAATTGAAA
GGTCCACTGCACCATCCTCTGACCCTGCCATGGTCAAGAAACTTAGCCACAATGCTA
GCGAACGTGATCGCCGCAAGAAGGTCAACAACTTGGTTTCTTCACTTCGCTCACTTC
TTCCAATGGCAGATCAAACGAAAAAAATGAGCATTCCTGCAACAGTTTCCAGAGTGT
TGAAATACATACCTGAACTACAACAGCAAGTGCAAGCACTAACAAAGAGAAAAGAG
GAGCTTCTGTGCAGAATTTCTCGGCAATTGCAAGGAGAAGCAGTGAACAAAGAATCT
CAGAGAAAAATTTCCCATCACAACTCTTCTTTTGTTGTCTCAACGACTAGGCTTAACG
ATTGTGAAGCTGTAGTTCACATTTCATCTCATGAGACACACAAGGCTCCACTATCAGA
GATTCTGCAGTGCTTAGAAAATGATGGCCTTTTTCTGCTACATGCTTCTTCCTCAGAA
ACCTTTGGAGGAAGGTTCTTCTACAATTTGCATTTTCACGTGGAGAAAACTGATAGAT
TAGAGACCGAGATTTTAACTGAGAAGCTTTTACCAATATAT
＞序列识别号：51
ATGTTAGCATTCTCCCCTCCATTGTTTCCAACCCTTGGATGGCCCTTGGAGGATCCCAT
AAGCCATGCACAGAACTACATATATGGAGAAACAGAAACTTCAGAATCGTTTCTTCA
CTTGCCCTCATCTCAGCCACAAGTGGAACTCAATTGCTCCACCCCATATGCAGCAGTT
AGTGGTAATCCCACGATGGTTAAGAAACTTAACCACAACGTCAGTGTGCGGGATCGT
CGGAAGAAGATCAACAGCTTGTACTCCTCTCTGCGTTCACTACTTCCATCAGCTGATC
AAGTGAAGAAATTAAGCATTCCTTCGACAGTTTCATGTGTGCTAAAATACATACCAGA
GCTGCAACGGCAAGTGGAGAGACTGATCCAAAAGAAAGAAGAGTTTTTATCAAAGA
TTTCTAGGGAAGGAGATCTAATTCACCTAGAAAATCAAAGAAATGGCACACTTGGAA
GCTCTTTATCTGCTGTTTCAGCAAGAAGGCTTAGTGACAGGGAAATTGTGGTTCAGAT
ATCCACATTTAAGGTCCATGAGAGTCCACTTTCTGAGGTTTTGTTAAATTTGGAGGAG
GATGGGCTTCTTGTAATCAATGCATCATCTTTTGAGTCCTTTGGAGGGAGGGTCTTCT
ACAACTTACATCTTCAGGTTGAAGGAACTCAAGGAATGGAGTCGACCGCCCACTTGG
AGATGACAAGAACTCTAAAAAACAAACACATGAATATATTGGTGATTCATATGGACTT
TCCTCCTTTTTTTCTTAAGATGTTCCTGATCTTTACAAGAGTATTTACCAATCATATATC
AACTTCCTACCAATGCTATGTTGGTAAATTAATTATCATTCTACTGCTACATGTAATTAA
GAAAGAAAATTTTGAAACTTCTAAACATCAATTGGCCAGCGCCGAACCAATAATTGT
AGCAGGTCAAGCTGCCAAAAAATTGGATGATGAGCTTCTCTTGGAAACCAAGATGAA
AACTGAAGGGATGGGAGTACTGGAAACACCAATATTGATTAAAGCAAAGAATGGTAC
CAAAGAAATGGTGGAGAGAATCCTTGATCTTTACCCCATGGCAATTCATGACATAGAC
TCCAACAAGAAGAATATAGTGCTATTGGCGGTGGAGAATAGGCACCCCCATGTGTATG
AGCTCTTCCTGAAGAGAAATATTGTGAAAGATAGTGTATTTGGTGCAGTTGATAATAA
AGGCAACAGTGCATTGCATCTGGCTGCCATGTTTGCAGATTATCGGCCTTGGGTCACT
CCTGGTGTTGCATTGCAAATGCAATGGGAAGTCAAATGGTATGAGTATGTGAAGAAG
TCCATGCCACCAAATTTCTTCCGTTTCCACAACAATGAAAACAAGTCTACAAAGCAG
ATTTTCACCCGTGAACACAGAGATCTGGTGCAAAAGGGTGGGCAATGGCTAAATAAC
ACAGCCACCTCATGCTCGTTGGTAGTAACACTCATTGCAACAGTTGCCTTCGCCACAT
CAACTGCTGTACCGGGCGGCACCAAGGAGGGGACTGATTCATGTCCTCTCAATGGTC
CCTAA
＞序列识别号：52
ATGTTAGCATTCTCCCCTCCATTGTTTCCAACCCTTGGATGGCCCTTGGAGGATCCCAT
AAGCCATGCACAGAACTACATATATGGAGAAACAGAAACTTCAGAATCGTTTCTTCA
CTTGTCCTCATCTCAGCCACAAGTGGAACTCAATTGCTCCACCCCATCTGCAGCAGTT
AGTGGTAATCCCACGATGGTTAAGAAACTTAACCACAACGCCAGTGAGCGGGATCGT
CGGAAGAAGATCAACAGCTTGTACTCCTCTATGCGTTCACTACTTCCATCAGCTGATC
AAGNGAAGAAATTAAGCATTCCTTCGACAGTTTCACGTGTGCTAAAATACATACCAG
AACTGCAACGACAAGTGGAGAGATTGATTCAAAAGAAAGAAGAGTTTTTATCAAAG
ATTTGTAGGGAAGGAGATCCAATTCACCTAGAAAATCAAAGAAATGGCACACTTGGA
AGCTCTTTATCTGCTGTTTCAGCAAGAAGGCTTAGTGACAGGGAAATTGTGGTTCAG
ATATCCACATTTAATGTCCATGAGAGTCCTCTTTCTGAGGTTTTGTTAAATTTGGAGGA
GGATGGGCTTCTTGTAATCAATGCATCATCTTTTGAGTCCTTTGGAGGGAGGGTCTTC
TACAACTTACATCTTCAGGTTGAAGGAACTCAAGGAATGGAGTGTGAGTTGTTGAGC
GAGAAGCTACTTTCATTGTGTGAAAGGAGAGAGGCTTTTCCATGA
＞序列识别号：53
MCALVPSFFTNFGWPSTNQYESYYGAGDNLNNGTFLELTVPQTYEVTHHQNSLGVSVS
SEGNEIDNNPVVVKKLNHNASERDRRKKINTLFSSLRSCLPASDQSKKLSIPETVSKSLK
YIPELQQQVKRLIQKKEEILVRVSGQRDFELYDKQQPKAVASYLSTVSATRLGDNEVMV
QVSSSKIHNFSISNVLGGIEEDGFVLVDVSSSRSQGERLFYTLHLQVENMDDYKINCEELS
ERMLYLYEKCENSFN
＞序列识别号：54
MCALVPPLFPNFGWPSTGEYESNYLAGVNLEDFTFLDFPAPETYGVEHHQEIQEMLGVS
VPSEGNGVVTKKLNHNASERDRRKKINSLFSSLRSCLPASDQTKKLSIPQTVSRSLKYIPE
LQEQVKKLIQKKEELLVRVSGQRAIEHYVEPQPKAVARYVSTISATKLGDNEVLVQISSSK
NHNFSISNVLSGLEEDGFVLVDVSSSRYHGKWLFYSLHLQMGNKDNHKLKCEELSQRIL
YLYEECENSFR
＞序列识别号：55
MCALVPPLFPDFGWPSTAGYESYYLGGENLNNDMFLDFPVVETYGVLAHHQNSLGVSV
SSEGNGIDNNPVVKKKLNHNASERDRRKKINSLFASLRSCLPTSDQSKKLSISATVSRSLK
YIPELQEQVKKLLQKKEELLVRVSGQRDIELYVKPQPKAIASYVSTVSATRLGDNEVMV
QISSSKIHNFSISKVLTGLEEDGFVLVDVSSSRFQGERLFYTLHLQVENMDDHYKMNCEE
LSERMLYLYEECENXXR
＞序列识别号：56
IPQTVSRSLKYIPELQEQVKKLIQKKEELLVRVSGQRDIEHYVEPHPKAVARYVSTISATK
LGDNEVMVQISSSKNHNFSISNVLSGLEEDGFVLVDVSSSRSHGERLFYTLHLQMGNKD
DYKLTCEELRQRMLYLYEECGNSFR
＞序列识别号：57
IPTPSQATSSDLSMVKKLIRNASERDRRKKINTLYSSLRSLLPVAEQMKKLSNPATISRVLK
YIRELQKQVEGLLTRKEAILLKLSPEVDEVKSKESERK
＞序列识别号：58
SDRRKQLNEQYSSLRSLLPDDDHNKKMSIPTTVSRVIKYIPELQKEVDGLEKKKEELRRA
SSEQGVLTMRQNTAPVVSATCLDDREIMVQVSLVSTMAAALPMSKCIKVLENEGLRLIN
SSTSAFQNRTFYSLHLQRTQRTMSKEGQTFCNELENAVKQKAGLHLHH
＞序列识别号：59
MGHQTQMFDDPFASSMSSLDADIFSVAGGLHPSQWPGLDHDVSLAPAANNGTSSGGYG
SPGGGDGSGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSDLRSLLPDSDHTKKLSIPITVSRVLKYIP
ELQKQVDGLEKKKEELTRASCKPGVLTMKENTVPIVSATCLDEREIMVQVSLVSTMAGA
LPMSKRIKVLENEGLRLISSSTSAFQNRTFYSLHLQRTQRTMSKECPAFCEELENALTQKA
GYVYITSRLYVAE
＞序列识别号：60
MLAISPPMFSTIGWPFEEPLSHNQHQNSFYKDTVDQLFNFHDQVEAEINSTDPSQSTSSD
LSMVKKLVHNASERDRRKKINNLYSSLRSLLPVSDQMKLSIPGTISRVLKYIPELQNQVE
GLIKRKDEILLGLSPQVEEFILSKESQRKKHSYNSGFVVSSSRLNDSEITIQISCYTVQKIPL
SEILICLENDGLLLLNVSSSKTFGGRVFYNLHFQVDKTQILESHILNEKLLSIMEKEGEFL
KQ
＞序列识别号：61
MVAFCPPQFSYSNMGWLLEELEPESLISHKEKNYASLEYSLPYHQFSSPKEHVEIERPPSP
KLMAKKLNHNASERDRRKKINSLISSLRSLLPGEDQTKKMSIPVTISRVLKYIPDLQKQV
QGLTKKKEELLSRISHRQEYAVNKESQRKKIPNYNSAFVVSTSRLNDTELVIHISSYEANK
IPLSEILMCLENNGLLLLNSSSSKTFGGRLFYNLHFQVDKTQRYECDDLIQKLSSIYEKQQ
NNHLGTMDQTINSGLIY
＞序列识别号：62
MLAISPPMFSTIGWPFEEPLSHNQHQNSFYKDTVDQLFNFHDQVEAEINSTDPSQSTSSD
LSMVKKLVHYASERDRRKKINNLYSSLRSLLPVSDQMVLN
＞序列识别号：63
MEQLFVDDPAFASSMSSLEADIFSGAGQLPSSPWLDLDLDDDVQDLSMAPTTANAVSSG
YGSGGSGSHRKLSHNAYERDRRKQLNELYSSLRALLPDADHTKLSIPTTVSRVLKYIPEL
QKQVENLERKKKELTTTSTTNCKPGVLGSQLMSEGMAPIVSATCINDMEIMVQVSLLSN
VAGSVLPLSKCIKVLENEGLHFISSSTSSGFGNRTFYSIHLQRSEGTINEECPAFCERLEKV
VRNKAKL
＞序列识别号：64
MEHQLFDDPFSSSISSLEADIFSAGGQLPSPPWPDLDLDLDDDDIHDLSAPTGNPTSSGGY
GSGGGSGGSHRKHSHNAYERDRRKQLNELYSSLRSLLPDADHTKKLSIPTTVSRVLKYIP
ELQKQVDNLERRKKELTNANCKPGVLNTSQIVTPIVSATCLNDTEIMVQVSLHSNVAATS
LPLSKCIKVMENEGLHLISSSTYSTFDNRTFYSLHVQRSQRTMKEECPA
＞序列识别号：65
MVKKLSHNANERDRRKKIKSLYSSLRSLLPAADQMKKLSVPATVSRALKYLPELQQQVE
RLVQRKEELLSKLSKQGGIIHQENQRNDTVYSSLSSVSASQLSDREVVVHISTYKNHKSP
LSEILLTLEEDGLVLKNSSSFESFGDRVFYNLHLQVMEGTYTLDSEAMRAKLVSLSVKRE
SSSL
＞序列识别号：66
MLEELSPISLFSTFGWPLEEAISHEQHYSFRDGETPESFTHFPPSQPDVRQLDRSTSFTAHS
GSGDPSMAKKLNHNASERDRRKKINSLYSSLRSLLPAADQRKKLSIPYTVSRVLVYIPKL
QQQVERLIQRKEELLSKLSRQADDLTHQENQRKGTMYSSLSSVSASRLSDREVVIHISTN
KLHRSSLSEILVNLEEAGLLLLNSSSFESFGGRVFYNLHLQAMEGTYTVECEALNERLVS
LCEKRESLFPLNSSSPYSNCVF
＞序列识别号：67
DPNMVKKLNHNASERDRRKKINSLYSSLRSLLPASDGMKKLSIPSTISRVLKYIPELQQQ
VERQIQRKEELLSNLSRQDDLIHQENQRKDTMYSSLSSVSASRLGDREVVVQISTCKVL
KSPISEILLNLEENGLVLINSSSFESFGGNVFYHLHLQV
＞序列识别号：68
MLALSPPVFPTPEWPLEDPLGIDQISYFCRETQPATAAFLPSYQQELLLLELDHQQSTSFTA
YNSSGGDANDMVKKLNHNASERDRRKKMNTLYSSLRSLFPAADEMKKLSIPATISRVLK
YIPELQEQLERLVQRKEEILLRISKQNHIVNPQINQRKGTSHSSLSVVSANQISDKEAIIQIS
TYSNTIHTSPLSEILLLLEEEGLLLINSSSAESFGGRVFNNLHVQVDDTYTLECDALSEKL
ASLYAKRDGLFP
＞序列识别号：69
MVKKLNHNASERDRRKKMNTLYSSLRSLLPASDQMKKLSIPATISRVLKYIPELQQQLER
FVQRKEELLLRISKQNHIINPQINQRKGTTHSTLSVVSANQISDKEVVIQVSTYNNTIHTSP
LSEILLLLEEEGLLLINSSSFESFGGRVFYNLHLQVDGTYILECDALSEKLAALYERDGLFP
＞序列识别号：70
TTIITTPQFQTDQNNKLFEGLRADNTIDLPSSHHYQQQCLKGSEFDVDELGVERSLMEKK
LNHNASERNRRKKMNFLYSTLRSLLPPPTNKHQKKKLSFPATVSYVQEYIPELKKEIERL
SKTKDLLLSKKSNYSLLKIDDNNKRKLIIGGTSCNSSTTSICASQLSNSQVLVQISTTQEN
NFPISQVFASVEEDGLILLNASSFKSFGDKIFHSLHFQMQGPIEMDIQVLKTKLLVMC
＞序列识别号：71
MDHQLFDDPFGSSISSLEADIFSAGGGGQLPSPPWPDLDLDDDYDIHDLSAPAANAATSS
GGGYGSGGSG RKLSHNAYERDRRKQLNELYSSLRSLLPDADHTKKLSIPTTVSRVLNTK
EIVTPIVSATCLNDTEIMVQVSLHSNVAATALPLSKCIKVLENEGLLLVSSSTYSTFENKTF
YSLHLQRSQRTMKEQCPGFCDELEKIVRKKAGA
＞序列识别号：72
MEHQLFDDAVPSSMIWPLEAENGFTDELPSLQLPDVDLDFDIHEFSAPATAPAKAASSGG
SGLVGSGSGSHKKLNHNAYERDRRTQLNQLYSTLRSLIPNADHTKKLSIPTTVCQVLDYI
PKLQKQVEDLKKKKQELSTAKCRERLQRVKDNTCRIVSATPLDGNEIMVQVSLLSNMA
ASLPLSKCINVFENKGLHLISSSTFSTEVNRTFYSFHFEVRFYMRP
＞序列识别号：73
GDGSGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSDLRSLLPDTDHTKKLSIPITVSRVLKYIPELQK
QWAXRXKEGGXDARQLQPGVXTMKGNTVRLFRHLPRRQGXYGPSQPGEHMAGXCPF
QMHQSAGKQXLRS
＞序列识别号：74
MEQLFVDDPAFASSMSSLEADIFSGAGQLPSSPWLDLDLDDDVQDLSMAPTTANAVSSG
YGSGGSGSHRKLSHNAYERDRRKQLNELYSSLRALLPDADHTKKLSIPTTVSRVLKYIPE
LQKQVENLERKKKELTTTSTTNCQPRVLGSQLMS
＞序列识别号：75
MVALFSPPLFSTKGWLLEEEPFGYNNTHNLSYKDDASSQYSFPYQFYSPQTQIEVEIERST
APSSDPAMVKKLSHNASERDRRKKVNNLVSSLRSLLPMADQTKKMSIPATVSRVLKYIP
ELQQQVQALTKRKEELLCRISRQLQGEAVNKESQRKISHHNSSFVVSTTRLNDCEAVVHI
SSHETHKAPLSEILQCLENDGLFLLHASSSETFGGRFFYNLHFHVEKTDRLETEILTEKLL
PIY
＞序列识别号：76
MLAFSPPLFSTFGWPWEDPXSHEQNYIYQETEASESFLHLPSSEPQAELNYSTPSAAVSG
NPTMVKKLNHNASERDRRKKINSLYSSLRSLLPAADQAKKLSIPSTVSRVLKYIPELQKQ
VERLIQKKEELLSKISRQGDIIHQEKQRKATLASSLSAVSANRLSDREIVVQISTFKVHESP
LSEVLLNLEEDGLLVINASSFESFGGRVFYNLHLQVEGTHRMECEVLSEKLLSLCEKRRD
AFP
＞序列识别号：77
MLAFSPPLFPTLGWPLEDPISHAQNYIYGETETSESFLHLPSSQPQVELNCSTPYAAVSGN
PTMVKKLNHNVSVRDRRKKINSLYSSLRSLLPSADQVKKLSIPSTVSCVLKYIPELQRQV
ERLIQKKEEFLSKISREGDLIHLENQRNGTLGSSLSAVSARRLSDREIVVQISTFKVHESPL
SEVLLNLEEDGLLVINASSFESFGGRVFYNLHLQVEGTQGMESTAHLEMTRTLKNKHMN
ILVIHMDFPPFFLKMFLIFTRVFTNHISTSYQCYVGKLIIILLLHVIKKENFETSKHQLASAE
PIIVAGQAAKKLDDELLLETKMKTEGMGVLETPILIKAKNGTKEMVERILDLYPMAIHDI
DSNKKNIVLLAVENRHPHVYELFLKRNIVKDSVFGAVDNKGNSALHLAAMFADYRPWV
TPGVALQMQWEVKWYEYVKKSMPPNFFRFHNNENKSTKQIFTREHRDLVQKGGQWLN
NTATSCSLVVTLIATVAFATSTAVPGGTKEGTDSCPLNGP
＞序列识别号：78
MLAFSPPLFPTLGWPLEDPISHAQNYIYGETETSESFLHLSSSQPQVELNCSTPSAAVSGN
PTMVKKLNHNASERDRRKKINSLYSSMRSLLPSADQXKKLSIPSTVSRVLKYIPELQRQV
ERLIQKKEEFLSKICREGDPIHLENQRNGTLGSSLSAVSARRLSDREIVVQISTFNVHESPL
SEVLLNLEEDGLLVINASSFESFGGRVFYNLHLQVEGTQGMECELLSEKLLSLCERREAF
P
＞序列识别号：79
ATGGAGTATCCATGGCTGCAGTCTCAAGTTCATTCCTTTTCACCTACTCTCCATTTTCC
TTCCTTCCTTCATCCTTTAGATGATTCCAAGAGCCATAACATCAATCTTCATCATATGA
GTCTTAGTCACAGCAATAATACTAACAGTAACAATAACAATTATCAAGAAGAAGATCG
AGGAGCGGTGGTTTTGGAGAAGAAACTGAATCACAACGCAAGCGAACGAGACCGCC
GTAGAAAACTTAACGCCTTGTACTCTTCACTTCGTGCTCTCTTGCCTCTTTCTGATCA
AAAGAGGAAGCTGAGCATTCCTATGACGGTAGCGAGAGTAGTGAAATACATACCAGA
GCAGAAGCAAGAACTTCAACGTTTGTCTCGGAGAAAAGAAGAGCTCTTGAAGAGGA
TCTCGAGAAAAACTCACCAAGAGCAGCTGAGAAACAAAGCAATGATGGACTCAATA
GATTCTTCTTCCTCTCAACGGATCGCAGCAAATTGGCTCACTGACACAGAGATTGCTG
TCCAGATTGCTACGTCGAAATGGACATCTGTTTCAGACATGTTGCTTAGGTTAGAAGA
AAACGGGCTTAATGTCATAAGCGTCTCTTCTTCCGTTTCTTCCACCGCAAGGATCTTC
TACACTCTACATCTTCAGATGAGAGGAGATTGCAAAGTGAGACTGGAGGAACTCATC
AATGGTATGCTCTTGGGATTACGCCAATCATAA
＞序列识别号：80
ATGTGTGCCTTAACACCAATGTTTCCAAGTAACCAACAAGAATGGTACTCTACTTCAA
CAATGGAGTATCCATGGCTTGATTCCTTCTCTCCTACTCTCCCTTCTTCTCTTTATCCTT
CTTTCGACCAACTAGATGAATTCAAGAGCTATAACATCAATCTTCTTCCTCATCATATG
AATCTTGCTGACATAAATGGTACTAACAATGATCAAGAAGAACATCAAGGATCGGTTT
TGGAAAAGAAACTGAATCACAACGCAAGTGAACGCGACCGCCGTAGAAAGCTAAAC
GCCTTATACGCTTCACTTCGTGCTCTCTTGCCTCCTTCTGATCAAAAGAGAAAGTTGA
GCATTCCAAAGACCATAGCGGGAGTGGTGAAGTATATACCAGAGCAGAAGCAAGAAC
TTCAACGTTTGTCTAGGAGGAAAGAAGAGCTTATGAAGAGAATCTCCAATAAGACAG
AGACTTTGAATCATCAACAAGAACAGCTGAGAAATAGAGCATTAATGATGGAGTCAA
TAGATTCTTCTTCACAAAAGATCGCT
＞序列识别号：81
ATGGAGTATCCATGGCTTGATTCCTTCTCTCCTACTCTCCCTTCTTCTCTTTATCCTTCT
TTCGACCAACTAGATGAATTCAAGAACTATAACATCAATCTTCTTCCTCATCATATGAA
TCTTGCCGACATAAATGGTACTAACAATACCAGTAACAATGATCAAGAAGAACATCAA
GGATCGGTTTTGGAAAAGAAACTGAATCACAACGCAAGTGAACGCGACCGCCGTAG
AAAGCTAAACGCCTTATACGCTTCACTTCGTGCTCTCTTGCCTCCTTCTGATCAAAAG
TCGGCGAATCAGAGAAAGTTGAGCATTCCAAAGACCGTAGCGGGAGTGGTGAAGTAT
ATACCAGAGCAGAAGCAAGAACTTCAACGTTTGTATAGGAGGAAAGAAGAGCTTATG
AAGAGGATCTCCAATAAGATAGAGACTTTGAATCATCAACAAGAACAGCTGAGAAAT
AGAGCATTAATGATGGAGTCAATAGATTCTTCTTCACAAAAGATCGCTGCAAATTGGA
TCACCAACACAGAAATAGCTGTCCAGATTGCTACATGGAAATGGACATCTATCTCAGA
CATGTTGCTTAGGTTAGAAGAAAACGGGCTTAATGTCATAAGCGTCTCTTCTTCGGTT
TCTTCCACCGCAAGGATCTTCTACACACTGCATCTTCAGATG
＞序列识别号：82
GCTTTCTCTTTCAGCTCGATCGATCCACAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCG
CTCTCCTCCCCGACGCCGATCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCGACGACGGTGTCTC
GCGTGCTCAAGTACATACCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGAGAATCTGGAGAGGAAG
AAGAAGGAGCTGACGACGACGAGCACCACCAACTGCAAACCAGGAGTGTTGGGGA
GCCAGCTGATGAGCGAGGGCATGGCTCCCATCGTT
＞序列识别号：83
ATGGAGCAGCTGTTCGTCGACGACCCAGCCTTCGCGAGCAGCATGTCGTCGCTTGAG
GCGGACATCTTCTCCGGCGCCGGCCAGCTGCCGTCCTCGCCGTGGCTGGACCTAGAC
CTCGACGACGATGTCCAAGACCTCTCCATGGCGCCGACGACGGCGAACGCGGTGTCC
TCCGGCTACGGCTTCGGCGGATCCGGCTCCCACAGGAAGCTCAGCCACAACGCCTAC
GAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCGCTCTCCTC
CCCGACGCCGATCACACTAAGAAACTGAGCATTTCGACGAACGTGTCCTGCGTGGTT
CAGTACATAACCGAACCTGCAGAAACAAGTGGAGAATATGGAGAAGAAAAAAAAGA
GCTGACGACGACGAGCACCACCAACTGTCAACCCCAAGATGTGGGTAGAAGC
＞序列识别号：84
MEYPWLQSQVHSFSPTLHFPSFLHPLDDSKSHNINLHHMSLSHSNNTNSNNNNYQEEDR
GAVVLEKKLNHNASERDRRRKLNALYSSLRALLPLSDQKRKLSIPMTVARVVKYIPEQK
QELQRLSRRKEELLKRISRKTHQEQLRNKAMMDSIDSSSSQRIAANWLTDTEIAVQIATS
KWTSVSDMLLRLEENGLNVISVSSSVSSTARIFYTLHLQMRGDCKVRLEELINGMLLGL
RQS
＞序列识别号：85
MCALTPMFPSNQQEWYSTSTMEYPWLDSFSPTLPSSLYPSFDQLDEFKSYNINLLPHHM
NLADINGTNNDQEEHQGSVLEKKLNHNASERDRRRKLNALYASLRALLPPSDQKRKLSI
PKTIAGVVKYIPEQKQELQRLSRRKEELMKRISNKTETLNHQQEQLRNRALMMESIDSS
SQKIA
＞序列识别号：86
MEYPWLDSFSPTLPSSLYPSFDQLDEFKNYNINLLPHHMNLADINGTNNTSNNDQEEHQ
GSVLEKKLNHNASERDRRRKLNALYASLRALLPPSDQKSANQRKLSIPKTVAGVVKYIP
EQKQELQRLYRRKEELMKRISNKIETLNHQQEQLRNRALMMESIDSSSQKIAANWITNT
EIAVQIATWKWTSISDMLLRLEENGLNVISVSSSVSSTARIFYTLHLQM
＞序列识别号：87
AFSFSSIDPQLNELYSSLRALLPDADHTKKLSIPTTVSRVLKYIPELQKQVENLERKKKEL
TTTSTTNCKPGVLGSQLMSEGMAPIV
＞序列识别号：88
MEQLFVDDPAFASSMSSLEADIFSGAGQLPSSPWLDLDLDDDVQDLSMAPTTANAVSSG
YGFGGSGSHRKLSHNAYERDRRKQLNELYSSLRALLPDADHTKKLSISTNVSCVVQYIT
EPAETSGEYGEEKKELTTTSTTNCQPQDVGRS
＞序列识别号：89
ATGTGTGCACTTGTCCCTCCATTATATCCCAATTTCGGCTGGCCTTGCGGAGATCATAG
CTTCTATGAAACCGACGACGTATCCAACACGTTTCTTGATTTTCCGTTGCCGGACTTG
ACGGTGACTCATGAGAATGTGTCGTCTGAGAATAACAGAACATTACTAGACAATCCC
GTGGTGATGAAGAAGCTTAATCACAACGCGAGTGAACGTGAGCGTCGCAAGAAGAT
CAACACAATGTTCTCATCTCTTCGTTCTTGTCTTCCTCCCACCAATCAAACGAAGTTA
AGTGTTTCGGCAACAGTTTCACAAGCATTGAAGTACATACCAGAGCTGCAAGAGCAA
GTTAAAAAGCTCATGAAGAAGAAAGAAGAGCTCTCGTTTCAAATTTCGGGTCAAAG
AGATCTCGTTTACACCGACCAAAACAGTAAGTCAGAGGAAGGGGTTACAAGCTATGC
GTCGACAGTTTCTTCGACTAGGCTCAGTGAGACTGAAGTGATGGTCCAAATTTCATC
GTTACAGACTGAAAAATGTTCGTTTGGGAATGTCTTGAGTGGTGTAGAAGAAGATGG
GTTGGTTCTTGTGGGTGCTTCATCTTCAAGGTCTCATGGAGAGCGACTCTTTTACTCT
ATGCATCTTCAGATAAAAAATGGCCAGGTGAATTCCGAAGAATTAGGTGATAGATTGT
TGTACTTGTACGAGAAATGTGGACACTCGTTTACATGA
＞序列识别号：90
ATGTGTGCACTTGTCCCTCCATTATATCCCAATTTCGGCTGGCCTTGCGGAGATCATAG
CTTCTATGAAACCGACGACGTATCCAACACGTTTCTTGATTTTCCGTTGCCGGACTTG
ACGGTGACTCATGAGAATGTGTCGTCTGAGAATAACAGAACATTACTAGACAATCCC
GTGGTGATGAAGAAGCTTAATCACAACGCGAGTGAACGTGAGCGTCGCAAGAAGAT
CAACACAATGTTCTCATCTCTTCGTTCTTGTCTTCCTCCCACCAATCAAACGAAGAAG
TTAAGTGTTTCGGCAACAGTTTCACAAGCATTGAAGTACATACCAGAGCTGCAAGAG
CAAGTTAAAAAGCTCATGAAGAAGAAAGAAGAGCTCTCGTTTCAAATTTCGGGTCAA
AGAGATCTCGTTTACACCGACCAAAACAGTAAGTCAGAGGAAGGGGTTACAAGCTAT
GCGTCGACAGTTTCTTCGACTAGGCTCAGTGAGACTGAAGTGATGGTCCAAATTTCA
TCGTTACAGACTGAAAAATGTTCGTTTGGGAATGTCTTGAGTGGTGTAGAAGAAGAT
GGGTTGGTTCTTGTGGGTGCTTCATCTTCAAGGTCTCATGGAGAGCGACTCTTTTACT
CTATGCATCTTCAGATAAAAAATGGCCAGGTGAATTCCGAAGAATTAGGTGATAGATT
GTTGTACTTGTACGAGAAATGTGGACACTCGTTTACATGA
＞序列识别号：91
CCACGTCGTCTGCGCGGCCGACTCCTTCTACGTCGGCCTCCCGATCCCGGTGGTGTCC
GCCGGCGAGGAGCTGATGGCGGGGCGAACCTCATCCACAACGCCTACGAGCGCGAC
CGCCGGAAGCAGCGCAACGAGCTCTACTCCTCCCTCCGCGCTCTCCTCCCCGACGCC
GATCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCGACGACGGTGTCTCGCGTGCTCAAGTACATA
CCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGAGAATCTGGAGAGGAAGAAGAAGGAGCTGACGA
CGACGAGCACCACCAACTGCAAACCAGGAGTGTTGGGGAGCCAGCTGATGAGCGAG
GGCATGGCTCCCATCGTTTCGGCTACCTGCATCAATGACATGGAGATCATGGTTCAGG
TCAGCTTGTTGAGCAATGTGGCGGGTTCAGTTCTTCCTCTCTCCAAGTGTATCAAAGT
ACTGGAGAACGAAGGTCTTCACTTCATCAGTTCATCGACTTCCTCCGGATTTGGGAA
CAGGACATTCTACAGTATCCATCTTCAGAGAAGTGAAGGAACGATCAACGAGGAGTG
CCCAGCATTTTGTGAAAGGTTGGAGAAAGTCGTCAGGAACAAAGCAAAGCTT
＞序列识别号：92
ATGGAGCACCAGCTGTTCGATGACCCCTTCTCTAGCAGCATCTCGTCGCTGGAGGCG
GACATCTTCTCCGCCGGCGGCCAGCTGCCGTCGCCGCCGTGGCCGGACCTCGACCTC
GACCTCGACGACGACGACGGCATCCACGACCTCTCCGCGCCGGCCGGCAACCCCAC
CTCTTCAGGAGGCTATGGCTCGGGCGGAGGCTCCCACAGGAAGATCAGCCACAACG
CGTACGAGCGTGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCGCTCCGCTCCC
TCCTCCCCGACGCTGACCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACGGTCTCCCGAG
TTCTCAAGTACATCCCCGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACAACCTGGAGAGGAGGAAG
AAGGAGCTGACGAACGCCAACTGCAAACCAGGAGTTCTGAACACGAGCCAGATTGT
AACTCCCATTGTTTCTGCTACTTGCCTCAACGATACGGAGATCATGGTTCAGGTCAGC
CTGCACAGCAACGTGGCTGCCACAAGTCTTCCTCTGTCCAAGTGCATAAAAGTGATG
GAGAACGAAGGCCTTCACCTAATTAGTTCATCAACTTACTCCACCTTCGACAACAGG
ACATTCTATAGCCTCCATGTTCAGAGAAGTCAAAGAACGATGAAGGAGGAGTGCCCA
GCATTCTGCGATGAACTGGAGAGGATTATC
＞序列识别号：93
ATGGACCATCAGCTGTTCGACGACCCCTTCGGGAGCAGCATCTCGTCGCTGGAGGCG
GACATCTTCTCCGCCGGCGGCGGCGGACAGCTGCCGTCGCCGCCGTGGCCGGACCTC
GACCTCGACGACGACTACGACATACACGACCTCTCCGCGCCGGCCGCCAACGCCGCC
ACCTCCTCGGGCGGCGGCTATGGCTCCGGCGGCTCCGGCAGGAAGCTCAGCCACAA
CGCATACGAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTACTCCTCGCTCCGATC
CCTCCTCCCGGACGCTGATCACACTAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACCGTGTCCCG
AGTTCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGATAACCTGGAGAGGAGGA
AGAAGGAGCTGACCAACGCCAACTGCAAGCCGGGAGTTCTCAACACCAAAGAGATC
GTAACTCCCATTGTTTCTGCTACTTGCCTTAACGACACGGAGATCATGGTTCAGGTCA
GCCTGCACAGCAATGTGGCCGCCACAGCTCTCCCTCTCTCCAAGTGCATAAAGGTGC
TAGAAAACGAAGGCCTTCTCCTCGTCAGCTCATCAACCTACTCCACCTTCGAGAACA
AGACATTCTATAGCCTCCATCTTCAGAGAAGTCAAAGAACGATGAAGGAGCAGTGCC
CAGGATTCTGCGACGAACTGGAGAAGATCGTCAGGAAGAAAGCAGGGGCG
＞序列识别号：94
GCCTCGTGCCGGCGGGTGCTCAAGTACATCCCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACGG
ACTGGAGAAGAAGAAGGAGGAGCTGACGCGCGCCAACTGCAAGCCCGGCGTGCTG
ACCATGAAGGAGAACATGGCTCCGATCGTGTCCGCCACCTGCCTCGATGACAGAGAA
ATCATGGTCCAGGTCAGCCTGGTGAGCACCATGGCCGGAGTTCTGCCCATGTCCAAG
TGCATCAAGGTGCTGGAGAACGAAGGCCTACGCCTCATCAGCTCGTCCACTTCCGCG
TTTCACAACAGGACGTTCTATAGCCTCCATCTTCAGAGAACCCAACGGACGATGAGC
AAGGAGTGTCCGGCATTTTGTGAAGAACTGGAGAACGCCCTGACGCAAAAGGCAGG
ACTACGTCTACATCACCACCAG
＞序列识别号：95
ATGGATCACCAGCTGTACGGCGACCCCTCCGCGAGCAGCTTCTCTCCGCTGGAGGCA
CAGATCTTCTCCGGCCAGCTGCCGCCGTCGTCAACGCCATGGCCAAATCTCGACGTT
GACCTCGCCCTGGACCTCGACGTTCTCGAGGATGACATCGTCCGGGAGCTCTCTGCT
GGCACAGTGGCAAACGCGGCATCGTCAGGTTCCGGCTCCGGCGCCCACAAGAAGCT
CAGCCACAACGCGTACGAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTATACCTCT
CGCTCCGTTCTCTCCTCCCGGACGCCGACCACACCAAGAAGCTGAGTATTCCGACGA
CGGTGTGTCGAGCGCTCAAGTACATCCCCGAGCTGCAGAAACAGGTCGAGAATCTG
GAGAAGAAGAAAGAGAAACTGGCTAGTGCCAACTGCAAACCAGGGGTACTGAGCG
TGACCGGCAGCATAGCTCCAACTGTGTCCGCTACTTGCCTCAACCACAAGGAAATCA
TGGTTCAGATTAGCTTGCTGAGAGATACAGATGCTTCTACAGCTCTACCTCTTTCCAA
GTGTATAAATGTACTGGAGAACGAAGGACTTCAGCTCATCAGTTCATCGACTTCCTCC
ACCTTTGGGAACAAAACGTTCTATAACCTCCATCTTCAGAGAAGTCAAGGAGCCACT
AAACATGGAGTGCCCATCGTTTTG
＞序列识别号：96
CGCAGATCTTCTCCAGCCAGCTGCCGCCGTCACCGCCGTGGCCGAATCTCGATGTTG
ACGTTGACCTGGACCTCGACGTTCTTGAGGACGACGTCGTCCGCGAACTCTCAGGGA
GGCCGGCAAACGCGGCATCGTCAGGCTCCGGCTCCGGCGGCCCCGGCTCCCACAAG
AAGCTCAGTCACAACGCGTACGAGCGCGACCGCCGGAAGCAGCTCAACGAGCTCTA
CCTCTCACTCCGTTCTCTCCTGCCGGACGCCGACCACACTAAGAAGCTGAGTATTCC
GACGATGGTGTGTCGAGCGCTCAAGTACATCCCGAGCTGCAGAAACAGGTCGAGAA
TCTGGAGAAGAAGAAAGAGAAACTTGCTAGTTCCAACTGCAAACCAGAGGTACTGA
GCGCAAGCGGCAGCATAGCTCTAACTGTGTCCGCTACTTGCCTCAACGACAAGGAAA
TCATGGTTCAGATTAGCTTGCTGAGACATACGGATGCTGCTACAGCTCTACCTCTTTCC
AAGTGTATAAATGTACTGGAGAACGAAGGACTTGAGCTCGTCAGTTCATCGACTTCC
TGCACCTTTGGGAACAAAATGTTCTATAACCTCCATCTTCAGAGAAGTCAAGGAGCG
CTAACATGGGAGTGTCCATCCTTCTGTGACAAATTGGAACAAGCAATCAGGAAAACA
GCAGGATTA
＞序列识别号：97
CGACGGAAGCAGCTCAACGACCTTTACTCCTCGCTCCGCTCCCTCCTCCCGGACGCT
GACCACACCAAGAAGCTGAGCATCCCCACCACCGTGTCCCGAGTCCTCAAGTACATC
CCGGAGCTGCAGAAGCAGGTGGACAACCTGGAGAGGAGGAAGCGGGAGCTGACCA
ACGCCAACTGCAAGCCGGGAGTTCTCAACACCAGCGAGATCGTAACTACTCCCATTG
TTTCTGCTACTTGCCTCAACGACACGGAGATCATGGTTCAGGTCAGCCTGCACAGCA
ATGTGGCAGCCACGGCTCTCCCTCTCTCCAAGTGCATAAAGGTGCTGGAGGACGCAG
GCCTTCACCTCATCAGCTCATCAACCTACTCCACCTTTGGGAACAAGACATTCTATAG
CCTCCATCTTCAGGTGTGCATGCATGTTCATTCAATGGTTCCTGCCGTTTCCTTCAATT
TTTTTATC
＞序列识别号：98
MCALVPPLYPNFGWPCGDHSFYETDDVSNTFLDFPLPDLTVTHENVSSENNRTLLDNPV
VMKKLNHNASERERRKKINTMFSSLRSCLPPTNQTKLSVSATVSQALKYIPELQEQVKK
LMKKKEELSFQISGQRDLVYTDQNSKSEEGVTSYASTVSSTRLSETEVMVQISSLQTEKC
SFGNVLSGVEEDGLVLVGASSSRSHGERLFYSMHLQIKNGQVNSEELGDRLLYLYEKCG
HSFT
＞序列识别号：99
MCALVPPLYPNFGWPCGDHSFYETDDVSNTFLDFPLPDLTVTHENVSSENNRTLLDNPV
VMKKLNHNASERERRKKINTMFSSLRSCLPPTNQTKKLSVSATVSQALKYIPELQEQVK
KLMKKKEELSFQISGQRDLVYTDQNSKSEEGVTSYASTVSSTRLSETEVMVQISSLQTEK
CSFGNVLSGVEEDGLVLVGASSSRSHGERLFYSMHLQIKNGQVNSEELGDRLLYLYEKC
GHSFT
＞序列识别号：100
PRRLRGRLLLRRPPDPGGVRRRGADGGANLIHNAYERDRRKQRNELYSSLRALLPDAD
HTKKLSIPTTVSRVLKYIPELQKQVENLERKKKELTTTSTTNCKPGVLGSQLMSEGMAPI
VSATCINDMEIMVQVSLLSNVAGSVLPLSKCIKVLENEGLHFISSSTSSGFGNRTFYSIHLQ
RSEGTINEECPAFCERLEKVVRNKAKL
＞序列识别号：101
MEHQLFDDPFSSSISSLEADIFSAGGQLPSPPWPDLDLDLDDDDGIHDLSAPAGNPTSSGG
YGSGGGSHRKISHNAYERDRRKQLNELYSSLRSLLPDADHTKKLSIPTTVSRVLKYIPEL
QKQVDNLERRKKELTNANCKPGVLNTSQIVTPIVSATCLNDTEIMVQVSLHSNVAATSLP
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Claims (16)

1.一种生产转基因植物的方法，该方法包括：利用载体使植物进行转化，其中所述的载体包括编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)亚组1b多肽的核酸序列，该核酸序列能够增强所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性，从而得到具有增强的所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性的转基因植物，并且使所述转基因植物进行生长，在这个的方法中制成一种转基因植物，所述的转基因植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性。
2.一种生产转基因植物的方法，该方法包括：利用载体使植物进行转化，所述植物选自阿拉伯芥属(Arabidopsis)、芸苔属(Brassica)、稻属(Oryza)、玉蜀黍属(Zea)、高粱属(Sorghum)、短柄草属(Brachypodium)、芒属(Miscanthus)、棉属(Gossypium)、小麦属(Triticum)、大豆属(Glycine)、豌豆属(Pisum)、菜豆属(Phaseolus)、番茄属(Lycopersicon)、三叶草属(Trifolium)、大麻属(Cannabis)、南瓜属(Cucurbita)、蔷薇属(Rosa)、葡萄属(Vitis)、胡桃属(Juglans)、草莓属(Fragaria)、莲属(Lotus)、苜蓿属(Medicago)、红豆草属(Onobrychis)、胡芦巴属(Trigonella)、豇豆属(Vigna)、柑橘属(Citrus)、亚麻属(Linum)、老鹳草属(Geranium)、木薯属(Manihot)、胡萝卜属(Daucus)、萝卜属(Raphanus)、芥属(Sinapis)、颠茄属(Atropa)、辣椒属(Capsicum)、曼陀罗属(Datura)、天仙子属(Hyoscyamus)、烟草属(Nicotiana)、茄属(Solanum)、碧冬茄属(Petunia)、毛地黄属(Digitalis)、牛至属(Majorana)、Ciahorium、向日葵属(Helianthus)、莴苣属(Lactuca)、雀麦属(Bromus)、天门冬属(Asparagus)、金鱼草属(Antirrhinum)、萱草属(Hemerocallis)、Nemesis、天竺葵属(Pelargonium)、稷属(Panieum)、狼尾草属(Pennisetum)、毛茛属(Ranunculus)、千里光属(Senecio)、蛾蝶花属(Salpiglossis)、黄瓜属(Cucumis)、Browaalia、毒麦属(Lolium)、燕麦属(Avena)、大麦属(Hordeum)、黑麦属(Secale)、云杉属(Picea)、Caco、鹰嘴豆属(Cicer)以及杨属(Populus)，其中所述的载体包括编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)bHLH亚组1b多肽的核酸序列，该核酸序列能够增强所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性，从而得到具有增强的所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性的转基因植物，并且使所述转基因植物进行生长，在这个的方法中制成一种转基因植物，所述的转基因植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性。
3.一种生产转基因植物的方法，该方法包括：利用载体使植物进行转化，所述植物选自阿拉伯芥属(Arabidopsis)、芸苔属(Brassica)、稻属(Oryza)、玉蜀黍属(Zea)、高粱属(Sorghum)、短柄草属(Brachypodium)、棉属(Gossypium)、小麦属(Triticum)、大豆属(Glycine)、番茄属(Lycopersicon)、葡萄属(Vitis)、苜蓿属(Medicago)、豇豆属(Vigna)、茄属(Solanum)、稷属(Panieum)、燕麦属(Avena)、大麦属(Hordeum)、鹰嘴豆属(Cicer)以及杨属(Populus)，其中所述的载体包括编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)bHLH亚组1b多肽的核酸序列，该核酸序列能够增强所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性，从而得到具有增强的所述bHLH亚组1b多肽的表达或者活性的转基因植物，并且使所述转基因植物进行生长，在这个的方法中制成一种转基因植物，所述的转基因植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述bHLH亚组1b多肽为SEQ ID NO：18的多肽序列。
5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述bHLH亚组1b多肽为SEQ ID NO：53的多肽序列。
6.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述bHLH亚组1b多肽为SEQ ID NO：84的多肽序列。
7.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述bHLH亚组1b多肽为SEQ ID NO：98或99的多肽序列。
8.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述的核酸序列包括组成性启动子，可诱导型的启动子或组织特异性启动子。
9.根据权利要求8中所述的方法，其中所述的组织特异性的启动子是根启动子。
10.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述植物是完整的植物。
11.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述植物是植物的一部分。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述植物的一部分是植物细胞、植物组织或者植物器官。
13.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述转基因植物是完整的植物。
14.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述转基因植物是植物的一部分。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述植物的一部分是转基因植物细胞、转基因植物组织或者转基因植物器官。
16.根据权利要求15所述的方法，其进一步包括从所述转基因植物细胞或者所述转基因植物组织中再生转基因植物。
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