CN102478551A - 一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1，土荆芥挥发油溶液的配制；步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。

Description

一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法
技术领域
本发明涉及一种中药中有效成分含量的方法，特别涉及一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法。
背景技术
土荆芥为藜科植物土荆芥Chenopodium ambrosioides L.带有果穗的全草，具有祛风、杀虫、通经止痛的功效，用于皮肤风湿痹痛、痛经、闭经、皮肤湿疹和蛇虫咬伤。据文献报道，驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯是土荆芥挥发油的主要成分，且具有一定的代表性，但是对这三种成分同时进行含量测定的方法一直未见报道。挥发油类成份一般选用气相色谱法进行分析，但气相色谱采用毛细管柱由于分流等因素影响其测定的稳定性，本发明提供了一种用HPLC法同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯的HPLC含量测定方法。大大提高了准确性，同时本方法简单、快速、灵敏、准确、重现性好，特别适用于同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯的含量。
发明内容
本发明提供一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1，土荆芥挥发油溶液的配制；
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
优选的方法，步骤如下：
步骤1，土荆芥挥发油用无水乙醇配制成溶液；
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
最优选的方法，步骤如下：
步骤1，取土荆芥挥发油200mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量过0.45μm滤膜，即得。
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
本发明的色谱条件如下：
色谱柱Agilent SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水(40-80∶30-50)；流速0.5-2ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为20-40℃。
优选的色谱条件如下
色谱柱Agilent SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水(60∶40)；流速1.0ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为30℃。
在计算土荆芥挥发油中有效成分含量时需要用到标准对照品的色谱图，为此可以通过以下方法配制对照品溶液。
对照品溶液的制备
精密称取驱蛔素对照品、对伞花烃对照品、α-萜品烯对照品适量，用无水乙醇溶解，制成每1ml含驱蛔素40mg、对伞花烃10mg、α-萜品烯7mg的溶液，即得。
将对照品溶液注入高效液相色谱仪得到色谱图，通过该色谱图用归一法计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
本发明的测定方法，可以一次测定土荆芥挥发油中最主要的有效成分含量，比现有测定方法更便捷。
本发明的测定方法，通过以下实验证明具有良好的重现性和准确性。
线性关系考察
精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、1、1.6、2ml于2ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，注入高效液相色谱仪测定峰面积。以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横坐标，进行线性回归，得到驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯的回归方程，见表1。结果表明其线性关系良好。
表1.驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯标准曲线测定结果
Table 1 Regression equations，correlation coefficients and linearity ranges ofascaridole，p-cymene and α-terpinene
Figure BSA00000357392800031
2.4精密度试验
取同一份对照品溶液进行高效液相色谱分析，测定峰面积，连续重复测定6次，考察精密度。驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯峰面积分别为21219.75±329.45、82882.77±1587.92、37116.17±665.03，RSD分别为1.55％、1.92％、1.79％。
2.5稳定性试验
取同一份对照品溶液，分别于0、1、2、4、6、8h进行高效液相色谱分析，测定峰面积，考察稳定性。驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯峰面积分别20195.73±592.71、77770.68±2149.01、34820.52±993.21，RSD分别为2.93％、2.76％、2.85％，表明溶液中各个待测定成分在8小时内。
2.6重复性试验
精密称取同一批号的土荆芥挥发油约200mg，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备的方法制备6份样品，依上述色谱条件进行测定，结果驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯的平均含量分别为67.07％、18.56％、25.99％，RSD(n＝6)分别为1.23％、2.24％、2.30％。
2.7加样回收率试验
精密称取已测知含量的土荆芥挥发油6份，每份约100mg，精密加入对照品溶液1.7ml，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备的方法制备6份样品，依上述色谱条件进行测定，结果驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯的平均回收率分别为98.60％、102.51％、96.92％，RSD(n＝6)分别为2.06％、2.70％、2.32％。
2.8样品测定
精密称取不同批号的土荆芥挥发油约200mg，分别按照“2.2.2”项下供试品溶液制备的方法制备供试品溶液，依上述色谱条件进行测定，以外标法计算土荆芥挥发油中各成分的含量，结果见表2。
表2 不同批号土荆芥挥发油样品的测定结果(mg·ml-1，n＝3)
Table 2 Determination of different samples of
volatile oil from Chenopodium ambrosioides
Figure BSA00000357392800032
Figure BSA00000357392800041
驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯是土荆芥挥发油中的主要成分，以往的分析检测方法都是以对伞花烃和α-萜品烯为指标，不能够全面反映土荆芥挥发油的质量。经初步药理实验证明，驱蛔素一方面具有抗溃疡、抗幽门螺旋杆菌的作用，但同时具有一定的毒副作用。本实验建立的同时测定土荆芥挥发油中驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯的高效液相色谱分析检测方法既避免了气相色谱法测定结果不稳定的缺陷，又较以往的方法能够在功能性及安全性方面更加客观的评价土荆芥挥发油的品质，不仅为土荆芥挥发油的质量标准研究奠定了基础，同时为进一步研究土荆芥的药理活性、寻找抗溃疡、抗幽门螺旋杆菌等活性的药用物质基础及土荆芥挥发油的体内代谢提供检测手段。
本实验建立的高效液相色谱分析检测方法曾采用了不同比例的甲醇—水、乙腈—水系统作为流动相，通过对比结果表明，以乙腈—水(60∶40)系统作为流动相洗脱时，驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯峰分离效果良好。
从不同批号土荆芥挥发油样品的测定结果看，陕西天土力植物药业有限责任公司提供的土荆芥挥发油批次间差异不大，能够保证土荆芥挥发油的质量及相关上市产品的稳定性。
附图说明
图1驱蛔素、对伞花烃、α-萜品烯对照品(Ⅰ)
图2上荆芥挥发油供试品(Ⅱ)的HPLC色谱图
其中1-驱蛔素    2-对伞花烃    3-α-萜品烯
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
1.仪器与材料
美国Agilent 1100高效液相色谱仪(紫外检测器、二元泵、自动进样器、柱温箱)。
驱蛔素对照品(自制，经结构确证为驱蛔素，经HPLC分析纯度为90.0％)，对伞花烃对照品(St.Louis，USA，纯度为99.0％)，α-萜品烯对照品(自制，经结构确证为α-萜品烯，经HPLC分析纯度为92.37％)，二纯水(自制)，乙腈(Merck公司)为色谱纯，其他试剂为分析纯。
土荆芥(经黑龙江中医药大学药学院中药资源与开发教研室王振月教授鉴定为Chenopodium ambrosioides L.)挥发油由陕西天士力植物药业有限责任公司提供。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱Agilent SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水(60∶40)；流速1.0ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为30℃。色谱图如图1图2。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取驱蛔素对照品、对伞花烃对照品、α-萜品烯对照品适量，用无水乙醇溶解，制成每1ml含驱蛔素40mg、对伞花烃10mg、α-萜品烯7mg的溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备
取土荆芥挥发油200mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量过0.45μm滤膜，即得。
步骤2，将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定供试品溶液峰面积；
步骤3，计算供试品土荆芥挥发油中有效成分含量。

Claims (8)

1.一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法，所述方法步骤如下：
步骤1，土荆芥挥发油溶液的配制；
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤如下：
步骤1，土荆芥挥发油用无水乙醇配制成溶液；
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤如下：
步骤1，取土荆芥挥发油200mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量过0.45μm滤膜，即得。
步骤2，注入高效液相色谱仪测定峰面积；
步骤3，计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
4.根据权利要求1的方法，其特征在于，色谱条件如下：
色谱柱Agilent SB-C18，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈∶水＝40-80∶30-50；流速0.5-2ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为20-40℃。
5.根据权利要求1的方法，其特征在于，色谱条件如下
色谱柱Agilent SB-C18，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈∶水＝60∶40；流速1.0ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为30℃。
6.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述有效成分为驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯。
7.根据权利要求1的方法，其特征在于，在计算土荆芥挥发油中有效成分含量时需要用到标准对照品的色谱图，为此通过以下对照品色谱图，对照品溶液的制备：精密称取驱蛔素对照品、对伞花烃对照品、α-萜品烯对照品适量，用无水乙醇溶解，制成每1ml含驱蛔素40mg、对伞花烃10mg、α-萜品烯7mg的溶液，即得，将对照品溶液注入高效液相色谱仪得到色谱图，通过该色谱图用归一法计算土荆芥挥发油中有效成分含量。
8.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤如下仪器与材料：美国Agilent 1100高效液相色谱仪，色谱条件：色谱柱Agilent SB-C184.6，mm×250mm，5μm；流动相为乙腈∶水＝60∶40；流速1.0ml·min-1；检测波长为224nm；柱温为30℃；
对照品溶液的制备：精密称取驱蛔素对照品、对伞花烃对照品、α-萜品烯对照品适量，用无水乙醇溶解，制成每1ml含驱蛔素40mg、对伞花烃10mg、α-萜品烯7mg的溶液，即得，
供试品溶液的制备：取土荆芥挥发油200mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量过0.45μm滤膜，即得，将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定供试品溶液峰面积；计算供试品土荆芥挥发油中有效成分驱蛔素、对伞花烃和α-萜品烯的含量。
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