CN109507305B - 一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法 - Google Patents
一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种基于HPLC、UV‑Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法，涉及中药材的检测与鉴别技术领域，该方法是运用层次分析法将HPLC指纹图谱和UV‑Vis含量测定等技术进行综合分析，进行综合分数评价，获得更加可靠的实验数据，为荆芥综合开发利用提供理论参考。
Description
技术领域
本发明涉及中药材的指纹图谱技术领域，尤其是荆芥药材指纹图谱的建立方法及其指纹 图谱。
背景技术
荆芥是唇形科荆芥属草本植物，又名假苏、姜芥、四棱杆蒿。据相关文献报道，荆芥的 化学成分主要包括挥发油类化合物、黄酮及其苷类、绿原酸、亚麻酸等化学成分，具有镇静、 镇痛、解热、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、止血、抗氧化、抗微生物等作用，具有较高的药用价值。荆芥药性味辛，微温。归肺、肝经。用于感冒，头痛，麻疹，风疹，疮疡初起 等，《中国药典》2015年版有记载荆芥饮片具有解表散风，透疹，消疮。等功效。据研究， 荆芥中有效成分具有多方面活性。
荆芥全草可入药，但是不同部位的荆芥其有效药用成分含量不一样。但目前《中国药典》 2015年版只检测胡薄荷酮一种成分的含量，对荆芥药材质量的控制就显得非常薄弱，缺乏 完善的质量评价体系，难以达到对荆芥质量的有效控制。其中，指纹图谱质控技术在中药领 域被提出并得到广泛认可，其在中药材质控中的应用也越来越多；中药材指纹图谱是指中药 材经过适当处理后，采用一定的分析手段和检测仪器得到的，能够标示该中药材特性的图谱， 它是现阶段可以较全面地反映中药材内在质量的最有效的手段之一，也得到了国际社会的认 可。
现代药理研究表明荆芥的有效成分主要包括皂苷类、黄酮类和脂肪油类等，为了全面客 观地反映不同产地荆芥的质量，本实验以咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、 芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、黄酮、多糖为指标成分，采用层次分析法及多指标综合评价 不同产地荆芥品质情况。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供一种基于HPLC、UV技术的荆芥药材质量综合检测方法， 利用该方法可监控荆芥药材不同年限不同药用部位的主要成分的相对含量，并用以鉴别其质 量及真伪。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
1.1荆芥药材指纹图谱的建立方法包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
精密称取荆芥粉末(过65目筛)2.0g，置于50ml锥形瓶，精密加入75％甲醇溶液25mL， 称定重量，超声提取20min，取出，冷却至室温，再称定重量，用75％甲醇补足减失重量， 摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
(2)高效液相色谱检测：
吸取上述步骤(1)所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测， 记录65min内的指纹图谱：
其中，指纹色谱条件为：
采用Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸溶液(B)， 梯度洗脱(0～15min，10％～14％A；15～40min，14％～26％A；40～55min，26％～60％A； 55～60min，60％～85％A；60～65min，85％A)；检测波长：235nm；流速：1.0mL/min； 柱温：30℃。
本荆芥药材指纹图谱，由16个共有指纹峰构成，所述指纹图谱的16个共有指纹峰的相 对保留时间范围及相对标准偏差如下：
表1中药材荆芥中16个共有指纹峰信息
其中，从16个主要峰中探明了8个成分，分别为咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮，其中咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、 木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮分别对应指纹峰的编号1、2、3、4、8、10、11、 14。并分别进行咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡 薄荷酮峰面积和量的标准曲线测定，例如可见下表2，然后分别测得荆芥药材中的咖啡酸、 木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的含量，mg/g；
表2其中确定的8种化学成分的线性关系及线性范围
1.2总黄酮及总多糖检测方法的建立，包括如下步骤：
(1)总黄酮的含量测定
供试品溶液的制备：
精确称取不同产地脱脂荆芥药材粉末2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1∶40，单位g： ml，加入质量百分比浓度60％乙醇25ml，60℃下提取45min，冷却并过滤(滤渣备用)， 再将提取液定容于100ml容量瓶中，即得供试品溶液。
紫外分光光度计检测：
分别定量精密移取供试品溶液，置25mL量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min后，精确加入质量百分比浓度10％硝酸铝溶液0.75ml摇匀，放置5min。再精确 加入1mol/L氢氧化钠溶液10ml，用质量百分比浓度60％乙醇稀释至刻度。于510nm波长 下测定吸光度A，从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度，计算出总黄酮含量mg/g；采用 芦丁制备吸光度A和浓度的标准曲线；
(2)总多糖含量测定
供试品溶液的制备：
精确称取上述脱黄酮后的滤渣2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1∶20，单位g：m1，加入蒸馏水25ml，60℃下提取50min，冷却并过滤，定容于25ml容量瓶，再取适量定容 于25m1容量瓶中，即得供试品溶液。
紫外分光光度计检测：
精密移取供试品溶液适量，置25mL容量瓶中，分别加入质量百分比浓度5％苯酚溶液 1mL，迅速摇匀，加入浓硫酸50mL，放10mn，置90℃水浴中保温15min，于490nm波 长下测定吸光度A，从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度，计算出总多糖含量mg/g；采 用葡萄糖制备吸光度A和浓度的标准曲线；
(3)基于层次分析法的中药材荆芥的综合分析
层次分析法(Analytic Hierarchy Process，简称AHP法)是美国运筹学专家T.L.Saaty教 授提出的一种将定性与定量分析相结合，多指标决策的分析方法。其基本思路是分析复杂问 题所包含的因素及其相互关系，将问题分解为多个层次和多个要素，并在每一层次按照一定 准则对该层元素进行比较，再按标度定量化形成判断矩阵。通过计算判断矩阵的最大特征值 以及相对应的正交化特征向量，得出该元素对该准则的权重。
按照层次分析法原理，计算公式为
初始权重系数(wl)＝(ai1ai2…aim)1/m
归一化权重系数
CI＝(λmax-m)/(m-1)
最大特征根
CR＝CI/RI
i为判断优先矩阵中的列，j为判断优先矩阵中的行，m为指标的个数，RI为判断
矩阵的平均随机一致性指标，查相关表可知RI＝0.90。其中aij为表2中优先矩阵的数据。
采用1～9标度法对10项指标(咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、 芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮、总多糖)进行两两比较评判重要性，见表1， 各指标的判断优先矩阵见表2。
表1目标树各层次评分标准
表2指标成对比较的判断优先矩阵
计算咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、 总黄酮和多糖的权重系数，分别为0.0496、0.0495、0.0495、0.0495、0.0701、0.0805、0.0925、 0.1470、0.1831和0.2281。对求得的各个权重系数进行一致性检验，得一致性指标(CI)＝0.0624 ≠0，计算随机一致性比率(CR)
进一步采用加权评分法，对不同产地或/和来源的荆芥进行比较、鉴别和检测，获取品 质最佳的荆芥，根据AHP法计算的结果，分别给予咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、 木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的加权系数，求出综合评分(Fb)， 根据综合评分，得到效果优劣。
b＝1，2，3，……，n，代表的是待比较、鉴别和检测的不同的荆芥；上述的mb代表所对应的 物质在荆芥中的含量，单位为单位均为mg·g-1。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：本发明确立了荆芥药材指纹图谱的建立方 法，通过该方法可获得荆芥药材的标准指纹图谱，比较指纹图谱中共有峰的有无，能有效地 鉴别荆芥药材的真伪及产地，用于反映荆芥质量的优劣，并且通过指纹图谱主要特征峰的相 对稳定能够有效控制中药的质量，确保产品的相对稳定。同时，采用紫外-可见分光光度法 检测了荆芥中总黄酮和多糖的含量。为了综合考察中药材荆芥的质量，引入层次分析法，对 荆芥中10个主要药效成分咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香 叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖，进行综合分析，确定影响荆芥质量的关键因素，进一步 完善荆芥药材的质量评价体系，为荆芥药材质量的全面、有效控制提供了理论和实践基础。
附图说明
图1为荆芥药材在检测波长235nm下的谱图。
图2为荆芥药材在检测波长360nm下的谱图。
图3为荆芥混合标准品在检测波长235nm下的谱图。
图4为荆芥混合标准品在检测波长360nm下的谱图。
图5为混合标准品色谱柱为Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)的谱图。
图6为混合标准品色谱柱为Inertsustain-C18(250mm×4.6mm，5μm)的谱图。
图7为应用Alliance e2695高效液相色谱仪检测出的图谱。
图8岛津LC-20A型高效液相色谱仪检测出的图谱。
图9为为荆芥药材HPLC指纹图谱。
图10为13批次荆芥药材原始指纹图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
实施例1中药材荆芥指纹图谱的建立
以下实施例为对采用来自不同产区、不同年份、不同部位的13批次荆芥药材的指纹图 谱建立方法及据此得到的指纹图谱：
1试验材料
1.1实验原料
13批次于不同时间采自不同产区的不同部位的荆芥药材中包括安徽、河北、江苏等地； 各荆芥药材供试样品来源等基本信息如表5：
表5不同批次荆芥的具体信息：
1.2实验器材
Alliance e2695高效液相色谱仪(美国沃特斯公司)；色谱柱：Amethyst HC-C18(250 mm×4.6mm，5μm)；Inertsustain-C18(250mm×4.6mm，5μm)；UV-2600紫外分光光度 计(日本SHIMADZM公司)；SQP型万分之一电子天平、ME204E型十万分之一电子天平 (德国SARTORIMS公司)；Milli-Q超纯水机(美国THERMO公司)；KQ-250DE型数控超 声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；高速多功能粉碎机(浙江永集市荣浩工贸有限公 司)。
1.3实验试剂
对照品咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮(以上对照品的含量均≥98％)均购自上海源叶科技有限公司。乙腈为色谱纯(赛默飞世尔科技有限公司)，水为自制超纯水，亚硝酸钠、氢氧化钠、乙醇、硫酸、苯酚、磷酸等试 剂均为分析纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)。
荆芥药材采收于或购自河北、湖北、四川、安徽、黑龙江等地，经河北中医学院药学院 严玉平教授鉴定为唇形科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分，具体信息见 表1。
2建立荆芥药材指纹图谱实验方法
2.1供试品的制备条件的选择
精密称取3份2号荆芥药材粉末(过65目筛)2.0g，置于50ml锥形瓶，精密加入75％甲醇溶液25mL，称定重量，超声提取20min，取出，冷却至室温，再称定重量，用75％ 甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。通过比较 确定最佳的提取剂，选择75％的甲醇溶液作为制备荆芥供试品的提取剂。
2.2色谱条件的选择
2.2.1检测波长的选择
取在相同条件下用2号荆芥制备的供试品溶液，在其他检测条件一致的情况下，分别在 235、360nm下注入岛津LC-20A型高效液相色谱仪，记录色谱图，如图1、图2所示，在 其他检测条件相同的条件下，235nm下分离的效果较好且尖峰较高。所以选择235nm为分 析荆芥的检测波长。
取在相同条件下混合标准品溶液，在其他检测条件一致的情况下，分别在235、360nm 下注入岛津LC-20A型高效液相色谱仪，记录色谱图，如图3、图4所示，在其他检测条件 相同的条件下，235nm下分离的效果较好且尖峰较高。所以选择235nm为分析荆芥的检测波长。
2.2.2色谱柱的选择
取同一混合标准品溶液，在其他检测条件一致的条件下，分别使用Amethyst HC-C18 (250mm×4.6mm，5μm)和Inertsustain-C18(250mm×4.6mm，5μm)；比较标准品溶液 的谱图；比较两个公司的色谱柱可以发现Amethyst的色谱柱效果较好，如图5、图6所示。 可知：对荆芥而言，在其他条件相同的情况下，安捷伦色谱柱分析的谱图尖峰较高，且所需 的分析时间较短，各个峰分离效果较好。所以选择Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm) 作为分析荆芥的色谱柱。
2.2.3液相型号的选择
在其他条件一致的情况下，分别使用Alliance e2695高效液相色谱仪(美国沃特斯公司)、 岛津LC-20A型高效液相色谱仪(日本SHIMADZM公司)、岛津LC-2030A型高效液相色 谱仪(日本SHIMADZM公司)进行考察，记录色谱图，如图7、图8所示，可知LC-20A型 高效液相色谱仪(日本SHIMADZM公司)分析出的色谱图较好。
2.2.4指纹色谱条件：
采用Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸溶液(B)； 梯度洗脱(0～15min，10％～14％A；15～40min，14％～26％A；40～55min，26％～60％A； 55～60min，60％～85％A；60～65min，85％A)；检测波长：235nm；流速：1.0mL/min； 柱温：30℃。
将混合对照品溶液分别以5、10、15、20、25、30μl的进样量。按“2.2.4”项色谱条件进高效液相。根据色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)绘制标准曲线， 得峰面积与进样量的回归方程及线性范围，结果见表2。
2.2.5稳定性试验
取同一份样品，精密称定2.0g，按照“2.1”项方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、 12、24h进样，进样体积为10μL，测得咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、 芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的峰面积的RSD值分别为1.52％、1.80％、1.66％、2.13％、1.79％、 1.53％、2.33％、1.56％。结果表明供试品溶液在24h内稳定。
2.2.6精密度试验
将混合对照品溶液以10μL的进样量重复进样6次，依据色谱图，计算得咖啡酸、木犀草 苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的平均峰面积的RSD值分 别为1.19％，0.45％，0.13％，0.33％，0.15％，1.04％，0.77％，1.18％。结果表明仪器的精密 度良好。
2.2.7加样回收率试验
取同一批次样品6份，精密称定，每份2.0g，按照“2.1”项方法制备供试品溶液，分别按各成分质量浓度的80％、100％、120％精密加入咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的对照品溶液，在“2.2.4”项色谱条件下进行HPLC试验。结果咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷 酮的平均回收率依次为99.40％、112.53％、109.93％、107.11％、99.07％、112.80％、113.29％、111.62％，RSD依次为2.47％、0.76％、1.94％、1.57％、2.39％、2.01％、2.13％、1.92％。结果表明，回收率良好。
2.2.8样品测定
精密称定供试品2.0g，按照“2.1”项方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项色谱条件进行测 定，进样体积为10μL，计算其中咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜 素、香叶木素、胡薄荷酮在原药材中的质量分数，结果见表6。
表6荆芥样品测得有效成分量
注：单位均为(mg·g-1)
吸取上述步骤2.1项所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测， 记录65min内的指纹图谱：
实施例2中药材荆芥中总黄酮及总多糖含量的测定
1总黄酮的含量测定
实施例2中药材荆芥中总黄酮及总多糖含量的测定
1总黄酮的含量测定
1.1对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品5.0mg，用60％乙醇溶解，完全转25ml容量瓶中，用60％乙醇定 容，摇匀，即得芦丁对照品溶液0.2mg/ml，冷藏保存。
1.2供试品溶液的制备
精确称取不同产地脱脂荆芥药材粉末2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1∶40，加入60％乙醇25ml，60℃下提取45min，冷却并过滤，再将提取液定容于100ml容量瓶中，即 得供试品溶液。
1.3标准曲线的绘制
精密称取标准溶液0、1.5、3、4.5、6、7.5ml，分别置于25ml容量瓶中，加60％乙醇补足7.5m1。加5％亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min后，精确加入10％硝酸铝溶液0.75ml摇匀，放置5min。再精确加入1mol/L氢氧化钠溶液10ml，用30％乙醇稀释至刻 度。于510nm波长下测定吸光度A，以浓度(mg/ml)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘 制标准曲线，得回归方程Y＝11.286X+0.0104(R2＝0.9992)
1.4稳定性试验
精密称取2号荆芥样品粉末2.0g，按3.1.2项下制备供试品溶液。分别在0、30、60、120、240、360min测定吸光度，相对标准偏差RSD＝2.14％，表明在360min内总黄酮稳定 性良好。
1.5精密度试验
精密称取2号荆芥样品粉末2.0g，按3.1.2项下制备供试品溶液，于510nm处重复测定6次供试品溶液吸光度，相对标准偏差RSD＝0.13％，表明仪器精密度良好。
1.6加样回收率试验
精密称取2号已知含量的荆芥粉末2g，按3.1.2项下的方法制备供试品溶液，取样品 溶液0.4ml，按对照品加入量与所取供试品含量的80％、100％、120％的比例加入芦丁对照 品溶液II，每个比例重复试验三次，分别测定吸光值，计算回收率。结果表明，芦丁的平均 回收率为106.3％、109.6％、112.1％，相对标准偏差RSD＝1.85％。
1.7测定方法
分别定量精密移取供试品溶液，置25mL量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min后，精确加入10％硝酸铝溶液0.75ml摇匀，放置5min。再精确加入1mol/L氢 氧化钠溶液10ml，用60％乙醇稀释至刻度。于510nm波长下测定吸光度A，即可。带入 上述公式计算黄酮含量，见表7。
表7不同产地荆芥中总黄酮含量
2总多糖含量测定
2.1对照品溶液的制备
精密称取葡萄糖10.0mg，加蒸馏水溶解，到入50ml容量瓶，加纯水至刻度线，摇匀，得到浓度0.2mg/ml的对照品溶液，低温保存。
2.2供试品溶液的制备
精确称取不同产地脱黄酮荆芥药材2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1∶20，加入蒸馏 水25ml，60℃下提取50min，冷却并过滤，定容于25ml容量瓶，再取适量定容于25ml 容量瓶中，即得供试品溶液。
2.3标准曲线的绘制
精密吸取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，加蒸馏水至20mL，分别加入5％苯酚溶液1mL，迅速摇匀，加入浓硫酸50mL，放10mn，置90℃水浴中保温15min，于490nm波长下测定吸光度A，以浓度(mg/mL)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线， 得回归方程Y＝64.626X+0.0136(R2＝0.9992).
2.4稳定性试验
精密称取2号荆芥样品粉末2.0g，按2.2项下制备供试品溶液。分别在0、5、10、15、20、25、30min测定吸光度，结果在前20min，RSD＝0.49％，表明在20min内吸光度基本 保持不变，后20min为2.35％，表明在20min之后黄酮稳定性降低。
2.5精密度试验
精密称取2号荆芥样品粉末2.0g，按2.2项下制备供试品溶液，于510nm处重复测定6次供试品溶液吸光度。结果RSD＝0.13％，表明仪器精密度良好。
2.6加样回收率试验
精密称取2号已知含量的荆芥粉末2g，按2.2项下的方法制备供试品溶液，取样品溶 液0.4ml，按对照品加入量与所取供试品含量的80％、100％、120％的比例加入芦丁对照品 溶液II，每个比例重复试验三次，分别测定吸光值，计算回收率。结果表明，芦丁的平均回 收率为106.3％、109.6％、112.1％，RSD＝1.85％。
2.7测定方法
分别精密移取供试品溶液适量，置25mL容量瓶中，按3.2.3项下进行显色，于510nm波长下测定吸光度A，即可。多糖含量见表8。
表8不同产地荆芥中多糖含量
对同一产地、同一年限不同部位的荆芥进行分析，结果表明荆芥与荆芥穗的16个特征 指纹峰相对含量具有明显的差异，且均为荆芥穗的成分含量比荆芥高，主要成分的含量：荆 芥穗＞荆芥，荆芥中主要成分的含量很少。通过分析比较可以确定荆芥的最佳药用部位为荆 芥穗。
实施例3基于层次分析法的中药材荆芥的综合分析
1层次分析法(AHP)确定各指标权重
层次分析法(Analytic Hierarchy Process，简称AHP法)是美国运筹学专家T.L.Saaty教 授提出的一种将定性与定量分析相结合，多指标决策的分析方法。其基本思路是分析复杂问 题所包含的因素及其相互关系，将问题分解为多个层次和多个要素，并在每一层次按照一定 准则对该层元素进行比较，再按标度定量化形成判断矩阵。通过计算判断矩阵的最大特征值 以及相对应的正交化特征向量，得出该元素对该准则的权重。
按照层次分析法原理，计算公式为
初始权重系数(wl)＝(ai1ai2…aim)1/m
归一化权重系数
CI＝(λmax-m)/(m-1)
最大特征根
CR＝CI/RI
i为判断优先矩阵中的列，j为判断优先矩阵中的行，m为指标的个数，RI为判断 矩阵的平均随机一致性指标，查相关表可知RI＝0.90。
采用1～9标度法对10项指标进行两两比较评判重要性，见表1，各指标的判断优先矩阵见表2。
表1目标树各层次评分标准
表2指标成对比较的判断优先矩阵
计算咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、 总黄酮和多糖的权重系数，分别为0.0496、0.0495、0.0495、0.0495、0.0701、0.0805、0.0925、 0.1470、0.1831和0.2281。对求得的各个权重系数进行一致性检验，得一致性指标(CI)＝0.0624 ≠0，计算随机一致性比率(CR)
2加权法综合评价
采用加权评分法，对不同产地和来源的荆芥鉴别和检测，获取品质最佳产地信息，根据 AHP法计算的结果，分别给予咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的加权系数，求出综合评分(Fb)。
b＝1，2，3，……，13。
表8荆芥样品测得有效成分量及评分
从综合评分表8结果可知，不同来源和产地荆芥品质的化学成分在种类和含量上有一定 的差异，本方法能够为不同产地荆芥的鉴别和测定提供一定的参考。
Claims (2)
1.一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1.1荆芥药材指纹图谱的建立方法包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
精密称取过65目筛荆芥粉末2.0g，置于50ml锥形瓶，精密加入75％甲醇溶液25mL，称定重量，超声提取20min，取出，冷却至室温，再称定重量，用75％甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)高效液相色谱检测：
吸取上述步骤(1)所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测，记录65min内的指纹图谱：
其中，指纹色谱条件为：
采用Amethyst HC-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈A-0.2％磷酸溶液B，梯度洗脱：0～15min，10％～14％A；15～40min，14％～26％A；40～55min，26％～60％A；55～60min，60％～85％A；60～65min，85％A；检测波长：235nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；
本荆芥药材指纹图谱，由16个共有指纹峰构成，所述指纹图谱的16个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下：
表1中药材荆芥中16个共有指纹峰信息
其中，从16个主要峰中探明了8个成分，分别为咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮，其中咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮分别对应指纹峰的编号1、2、3、4、8、10、11、14，并分别进行咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮峰面积和量的标准曲线测定，然后分别测得荆芥药材中的咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的含量，mg/g；
1.2总黄酮及总多糖检测方法的建立，包括如下步骤：
(1)总黄酮的含量测定
供试品溶液的制备：
精确称取不同产地脱脂荆芥药材粉末2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1:40，单位g：ml，加入质量百分比浓度60％乙醇25ml，60℃下提取45min，冷却并过滤，得到脱黄酮后的滤渣备用，再将提取液定容于100ml容量瓶中，即得供试品溶液；
紫外分光光度计检测：
分别定量精密移取供试品溶液，置25mL量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min后，精确加入质量百分比浓度10％硝酸铝溶液0.75ml摇匀，放置5min；再精确加入1mol/L氢氧化钠溶液10ml，用质量百分比浓度60％乙醇稀释至刻度；于510nm波长下测定吸光度A，从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度，计算出总黄酮含量mg/g；采用芦丁制备吸光度A和浓度的标准曲线；
(2)总多糖含量测定
供试品溶液的制备：
精确称取上述脱黄酮后的滤渣2g，置100ml锥形瓶中，按料液比1:20，单位g：ml，加入蒸馏水25ml，60℃下提取50min，冷却并过滤，定容于25ml容量瓶，再取适量定容于25ml容量瓶中，即得供试品溶液；
紫外分光光度计检测：
精密移取供试品溶液适量，置25mL容量瓶中，分别加入质量百分比浓度5％苯酚溶液1mL，迅速摇匀，加入浓硫酸50mL，放10mn，置90℃水浴中保温15min，于490nm波长下测定吸光度A，从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度，计算出总多糖含量mg/g；采用葡萄糖制备吸光度A和浓度的标准曲线；
(3)基于层次分析法的中药材荆芥的综合分析
分别给予咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的加权系数，求出综合评分Fb，根据综合评分，得到效果优劣；
b＝1,2,3,······,n，代表的是待比较、鉴别和检测的不同的荆芥；上述的mb代表所对应的物质在荆芥中的含量，单位均为mg·g-1；
按照层次分析法原理，计算公式为
初始权重系数wl＝(ai1ai2…aim)1/m
归一化权重系数
CI＝(λmax-m)/(m-1)
最大特征根
CR＝CI/RI
i为判断优先矩阵中的列，j为判断优先矩阵中的行，m为指标的个数，RI为判断矩阵的平均随机一致性指标，查相关表可知RI＝0.90；其中aij为表2中优先矩阵的数据；
采用1～9标度法对10项指标：咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮、总多糖进行两两比较评判重要性，见表1，各指标的判断优先矩阵见表2；
表1目标树各层次评分标准
表2指标成对比较的判断优先矩阵
对求得的各个权重系数进行一致性检验，得一致性指标CI≠0，计算随机一致性比率CR。
2.按照权利要求1所述的一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测方法，其特征在于，
计算咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的权重系数，分别为0.0496、0.0495、0.0495、0.0495、0.0701、0.0805、0.0925、0.1470、0.1831和0.2281；对求得的各个权重系数进行一致性检验，得一致性指标CI＝0.0624≠0。
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