CN102432618A - 一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺 - Google Patents
一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，是以马钱子总碱为原料，采用柱层析及有机溶剂萃取的纯化分离方法，制备得到含量超过94％的马钱子碱纯品，该马钱子碱纯品可作为马钱子或其提取物的化学标准品、对照品，或作为制剂原料使用，该制备方法不仅成本低廉，工艺简便，而且适用于制备较大量的马钱子碱纯品，具有广泛的社会和经济效果。
Description
技术领域
本发明涉及中药成分制备领域，具体涉及一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺。
背景技术
传统中药马钱子，为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica L.)的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿的功效。现代研究表明其主要有效成分为生物碱类，含量约为生药的1.5％～5％，主要是士的宁(strychnine)、马钱子碱(brucine)及其氮氧化物等，其中又以士的宁含量居首，占1.2％～2.2％；马钱子碱占0.8％左右，是一种弱碱性的吲哚类生物碱，分子式为C23H26N2O4，相对分子质量394，为白色结晶性粉末，味极苦；微溶于水，可溶于乙醚、氯仿、乙醇、甲醇等有机溶剂，其含量大约占马钱子总生物碱的30％～40％，国内外学者研究证明其具有显著的镇痛、抗炎、抗肿瘤、中枢神经系统兴奋等作用。
马钱子总碱主要成分为士的宁和马钱子碱，士的宁和马钱子碱在结构上影响极性差异为苯环上2，3号位，士的宁比马钱子碱多两个甲氧基。结构如下图：
由于分离难度大，相关文献研究也较少，其中仅有文献(李 
等，pH区带逆流色谱法分离纯化马钱子中马钱子碱和士的宁，分析化学，2010，38(12)：17033-1707)报道从308mg马钱子总生物碱中分离得到50mg马钱子碱和120mg士的宁，得率分别为72.8％和85.1％；纯度分别为96.8％和98.3％，此方法存在产量小的不足，市场急需一种马钱子碱规模化生产的制备工艺。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的工艺，分离得到高纯度的马钱子碱，并实现克级规模化生产。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，具体步骤包括：
(1)将马钱子总碱用二氯甲烷或三氯甲烷溶解后，与硅胶混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品；
(2)取重量为步骤(1)所得上样样品10～50倍的硅胶干法或湿法装柱，敲实，得分离用硅胶柱；
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)用乙醇洗脱，分段收集洗脱液，每段洗脱液为2倍柱体积，以薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并单一马钱子碱成分各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品；或先用乙醇洗脱，收集1～2倍柱体积的洗脱液，后用含醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷或三氯甲烷萃取，有机层减压干燥，纯化得马钱子碱。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，步骤(1)中与马钱子总碱混合所用的硅胶为80～100目或200～300目，硅胶与马钱子总碱的重量比为4∶5～2∶1；步骤(2)中制备硅胶柱所用硅胶为200～300目。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，步骤(2)中湿法装柱所用的溶剂为浓度为95％以上的乙醇溶液，所制备的硅胶柱的柱高与柱径比为3∶1～6∶1。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，步骤(4)中所用的洗脱溶剂乙醇浓度为95％以上。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，所用的洗脱溶剂含醋酸铵的乙醇溶液中所含的醋酸铵浓度范围按质量体积比计为：1％～2％。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，步骤(1)中溶解马钱子总碱和步骤(5)中萃取所用的有机溶剂为二氯甲烷。
上述从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，步骤(5)中二氯甲烷或三氯甲烷萃取的次数为3-6次，每次体积为马钱子碱粗品体积的5倍。
以上所述原料马钱子总碱，是从马钱子中提取的生物碱，本工艺研究方法所用马钱子总碱是依照文献(李 
等，pH区带逆流色谱法分离纯化马钱子中马钱子碱和士的宁，分析化学，2010，38(12)：1703-1707)所用方法制备所得，主要成分为士的宁和马钱子碱，其HPLC图谱见附图4。
即取马钱子药材粉碎，过50目筛。取200g马钱子粉末用80％乙醇回流提取，提取3次，每次2h，抽滤，合并滤液，减压蒸馏得浸膏，加入pH＝3的HCl溶液300mL，使游离生物碱酸化生成盐，再加入1mol/LNaOH溶液，调节至pH＝11，用 氯仿反复萃取5次，减压蒸馏除去氯仿，得马钱子总碱3.15g，放置4℃冰箱内备用。
以上所述的马钱子碱分离纯化的工艺中马钱子碱的鉴别采用中国药典中马钱子的薄层色谱法；含量测定采用采用中国药典中马钱子的HPLC法。
有益效果：本发明工艺可将马钱子碱制备规模扩大克级，而且目前多数中药单体纯化工艺需要在开放环境中大量使用有机溶剂，存在安全性、劳动保障及环境保护等问题。本发明在研究马钱子碱纯化分离工艺中，柱层析流动相选择低毒的乙醇，用于萃取的二氯甲烷可回收后循环利用，制备成本经济，并能达到较好的环境保护作用。
附图说明
图1是实例1部分分段洗脱液的TLC图
图2是实例2部分分段洗脱液的TLC图
图3是实例3部分分段洗脱液的TLC图
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量三氯甲烷溶解后，与8g硅胶(200-300目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)180g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用95％乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为15cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)用95％乙醇洗脱，分段收集洗脱液，每段洗脱液为2倍柱体积，采用中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并单一马钱子碱成分各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品溶液10ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取3次，每次50ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱113g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为95.38％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为43.21％。
实施例2：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量三氯甲烷溶解后，与10g硅胶(200-300目)混合 均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)400g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用95％乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为25cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用95％乙醇洗脱，收集1倍柱体积的洗脱液，再用含1％醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品溶液10ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取4次，每次50ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.27g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为94.74％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为48.39％。
实施例3：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量三氯甲烷溶解后，与20g硅胶(80～100目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)900g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用无水乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为30cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用95％乙醇洗脱，收集1倍柱体积的洗脱液，再用含2％醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品溶液11ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取5次，每次55ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.20g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为95.63％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为46.11％。
实施例4：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量三氯甲烷溶解后，与10g硅胶(200-300目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)1000g，以直径为9.5cm的底部具塞玻璃柱，用无水乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为57cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用无水乙醇洗脱，收集2倍柱体积的洗脱液，再用含2％醋酸铵的乙醇溶液洗 脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品溶液11ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取6次，每次55ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.20g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为94.37％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为44.28％。
实施例5：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量二氯甲烷溶解后，与8g硅胶(80-100目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)180g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用95％乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为15cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)用95％乙醇洗脱，分段收集洗脱液，每段洗脱液为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并单一马钱子碱成分各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品10ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取3次，每次50ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.21g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为95.65％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为43.42％。
实施例6：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量二氯甲烷溶解后，与10g硅胶(200-300目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)400g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用95％乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为25cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用95％乙醇洗脱，收集1倍柱体积的洗脱液，再用含1％醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品10ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取4次，每次50ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.27g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为94.98％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的 回收率为48.47％。
实施例7：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量二氯甲烷溶解后，与20g硅胶(80～100目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)900g，以直径为5cm的底部具塞玻璃柱，用无水乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为30cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用95％乙醇洗脱，收集1倍柱体积的洗脱液，再用含2％醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品11ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取5次，每次55ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.20g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为95.31％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为46.22％。
实施例8：
(1)称取马钱子总碱10g，用适量二氯甲烷溶解后，与10g硅胶(200-300目)混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品。
(2)称取硅胶(200-300目)1000g，以直径为9.5cm的底部具塞玻璃柱，用无水乙醇湿法装柱，敲实，柱床高约为57cm，为分离用硅胶柱。
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)先用无水乙醇洗脱，收集2倍柱体积的洗脱液，再用含2％醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以中国药典中马钱子的薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品11ml；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷萃取6次，每次55ml，60℃减压干燥除去溶剂，称重，得马钱子碱1.20g，经HPLC法检测，以面积归一法计算马钱子碱纯度为94.83％，并通过计算马钱子总碱中马钱子碱的含量，得马钱子碱的回收率为44.18％。
上述实施例1-8中由于只有部分洗脱液中马钱子碱为呈单一组份，其中一部分柱色谱上与士的宁有交叉，这一部分并不能合并于马钱子碱中，但可以用二氯甲烷萃取后回收再利用。
Claims (7)
1.一种从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于具体步骤包括：
(1)将马钱子总碱用二氯甲烷或三氯甲烷溶解后，与硅胶混合均匀，挥去有机溶剂至干，作为硅胶柱层析上样分离的样品；
(2)取重量为步骤(1)所得上样样品10～50倍的硅胶干法或湿法装柱，敲实，得分离用硅胶柱；
(3)取步骤(1)所得样品上样于步骤(2)制备的硅胶柱上；
(4)用乙醇洗脱，分段收集洗脱液，每段洗脱液为2倍柱体积，以薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并单一马钱子碱成分各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品；或先用乙醇洗脱，收集1～2倍柱体积的洗脱液，后用含醋酸铵的乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，每段为2倍柱体积，以薄层色谱法鉴别为含单一马钱子碱成分，合并乙醇洗脱液和含单一马钱子碱成分含醋酸铵的乙醇溶液各段洗脱液，浓缩得马钱子碱粗品；
(5)将步骤(4)所得马钱子碱粗品加适量水混悬，用二氯甲烷或三氯甲烷萃取，有机层减压干燥，纯化得马钱子碱。
2.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于步骤(1)中与马钱子总碱混合所用的硅胶为80～100目或200～300目，硅胶与马钱子总碱的重量比为4∶5～2∶1；步骤(2)中制备硅胶柱所用硅胶为200～300目。
3.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于步骤(2)中湿法装柱所用的溶剂为浓度为95％以上的乙醇溶液，所制备的硅胶柱的柱高与柱径比为3∶1～6∶1。
4.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于步骤(4)中所用的洗脱溶剂乙醇浓度为95％以上。
5.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于所用的洗脱溶剂含醋酸铵的乙醇溶液中所含的醋酸铵浓度范围按质量体积比计为：1％～2％。
6.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于步骤(1)中溶解马钱子总碱和步骤(5)中萃取所用的有机溶剂为二氯甲烷。
7.根据权利要求1所述的从马钱子总碱中分离纯化马钱子碱的制备工艺，其特征在于步骤(5)中二氯甲烷或三氯甲烷萃取的次数为3-6次，每次体积为马钱子碱粗品体积的5倍。
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