CN102428085A - 作为激酶抑制剂的嘧啶取代的嘌呤化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及可用作激酶抑制剂的嘌呤化合物。该化合物具有结构：

Description

作为激酶抑制剂的嘧啶取代的嘌呤化合物

技术领域

本发明涉及5-(9-异丙基-8-甲基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺，其制备方法，包含该化合物的药物组合物以及该化合物在治疗某些激酶相关疾病/病症中的应用。

背景技术

对激酶抑制剂的研究已经证实是研制有用的药学活性物质富有成效的领域。激酶或者称为磷酸转移酶，是能够在称作磷酸化过程中将磷酸基团从高能供体分子(例如ATP)转移到特定靶分子(通常称作底物)的酶。激酶中最大的一类是蛋白激酶，它们作用于特定蛋白质并调节其活性。

由于激酶抑制剂能够用作药物活性化合物，进行了大量研究以开发对这些靶点具有合适活性的化合物。在癌症领域，引起注意的能用作治疗化合物的潜在靶点的两种激酶包括mTOR和PI3。该领域中的一个研究例见PCT/SG2008/000379，该申请揭示了许多对mTOR和PI3都具有激酶活性的化合物。

预期同时抑制mTOR和PI3K的化合物可提供强效的抗增殖、抗血管生成和抗肿瘤活性，因为这些化合物能够作用于PI3K/Akt/mTOR路径中的多个点。目前，许多此类抑制剂正进行首次临床研究(如，BEZ235，XL765，GDC0941，PX866，SF1126)。

在寻找合适的候选药物的过程中，最终决定一种化合物是否是合适的候选药物需要考虑许多因素。因此，在评价用于进一步开发的潜在化合物的过程中，除了化合物本身的主要抑制活性之外，还需要考虑许多其它因素。在评价过程中，本领域技术人员着眼于分子的“药物样性质”，包括评价诸如其对感兴趣靶点的活性、感兴趣化合物的溶解度(如果它们是不溶性的，它们通常不太适合作为后续药物)、化合物在体内和体外的代谢稳定性、化合物对人体可能产生的副作用等因素。本申请鉴定了与该领域的其它化合物相比，药物样性质显著改善的化合物。

发明概述

本发明提供了式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

除了式I的化合物，所揭示的实施方式还涉及该化合物药学上可接受的盐，药学上可接受的N-氧化物，药学上可接受的前药和药物活性代谢物，以及该代谢物的药学上可接受的盐。

本发明还涉及药物组合物，包含本发明化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的另一个方面提供一种抑制蛋白激酶的方法，所述蛋白激酶选自下组：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物、以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物，该方法包括使蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物和/或其辅因子与有效量的本发明化合物接触。

在此揭示的化合物可直接和单独作用于激酶分子或其复合物或片段，以抑制生物活性。但是，应理解，所述化合物还可以至少部分作用于参与在磷酸化过程中的辅因子。已知的激酶辅因子包括离子物质(如锌和钙)、脂质(如磷脂酰基丝氨酸)和二酰基甘油。

在一些实施方式中，蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC1或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC2或者其片段或复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

在使一种或多种蛋白激酶与所述化合物接触的方法的一种实施方式中，包括将所述化合物给予含一种或多种蛋白激酶的哺乳动物。

在本发明的另一个方面，提供本发明化合物抑制一种或多种蛋白激酶的应用，所述蛋白激酶选自下组：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物、以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC1或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC2或者其片段或复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

在本发明的另一个方面，提供一种治疗或预防哺乳动物疾病的方法，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶能防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状，所述方法包括给予治疗有效量的本发明的化合物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC1或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC2或者其片段或复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，所述病症是癌症。在一些实施方式中，癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性、真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤和高度增殖病症如牛皮癣和再狭窄；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤(ependynoma)、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤(menigiomas)、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼疾病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。在其他实施方式中，本发明的化合物可用于治疗癌前病症(pre-cancer condition)或增生，包括：家族性腺瘤性息肉病、结肠腺瘤性息肉病、脊髓发育不良、子宫内膜发育异常、子宫内膜非典型增生、宫颈非典型增生、阴道上皮内瘤形成、良性前列腺增生、喉头绒毛状瘤、光化和日光性角化病、脂溢性角化病和角化棘皮瘤。

在一些实施方式中，所述病症是自身免疫或炎性疾病或由过度新血管化导致的疾病。在一定程度上归因于自身免疫病因学或者涉及病理学炎性和新生血管形成反应的疾病包括以下疾病：急性播散性脑脊髓炎、艾迪生氏病、无丙球蛋白血症(agammaglobulinermia)、粒细胞缺乏症、过敏性哮喘、变应性脑脊髓炎、变应性鼻炎、斑秃、老年性脱发、红细胞发生不能、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、主动脉炎综合征、再生障碍性贫血、特应性皮炎、自身免疫溶血性贫血症、自身免疫性肝炎、自身免疫卵巢炎、巴洛病、巴泽多病(Basedow′s disease)、眼—口—生殖器三联综合征、支气管哮喘、卡斯曼综合征(Castleman’s syndrome)、乳糜泻、查加斯病、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、丘-施二氏综合征(Chrug-Strauss syndrome)、柯根综合征(Coganssyndrome)、圆锥形角膜(cornical cornea)、圆锥形角膜白斑(cornical leukoma)、柯萨奇病毒性心肌炎、CREST病、克罗恩病、表皮嗜酸粒细胞增多、表皮T细胞淋巴瘤、多样性皮炎骨髓病性红细胞增多症、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、心肌梗死后综合征、角膜上皮营养不良、湿疹性皮炎、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃肠炎、大疱性表皮松解、伊文思综合征(Evans syndrome)、纤维化肺泡炎、妊娠类天疱疮、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本病、溶血性尿毒综合征、疱疹性角膜炎、普通鳞癣、特发性间质性肺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、川畸病、角膜炎、角结膜炎、兰伯特-伊顿综合征、普通白斑病、扁平苔癣、硬化性苔癣、莱姆病、线性IgA大疱病(linearIgA disease)、黄斑变性、巨幼红细胞性贫血、美尼尔斯病(Meniere’sdisease)、莫伦氏溃疡(Mooren’s ulcer)、穆哈-哈伯曼二氏病、多发性肌炎、多发性硬化症、重症肌无力、坏死性小肠结肠炎、眼脑脊髓病、眼天疱疮、眼肌阵挛综合征、奥德氏甲状腺炎(Ord’s thyroiditis)、阵发性夜间血红蛋白尿、巴-特二氏综合征(Parsonnage-Turner syndrome)、天疱疮、牙周炎、恶性贫血、花粉变态反应、多腺自身免疫综合征、后色素层炎、单小叶性肝硬变、直肠炎、假膜性结肠炎、牛皮癣、肺气肿、脓皮病、赖特综合征、可逆阻塞性气道疾病、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、塞扎里综合征、舍格伦综合征、亚急性细菌心内膜炎、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎、托-亨二氏综合征、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、春季结膜炎、白斑病、沃吉-小柳-原田综合征(Vogy-Koyanagi-Harada syndrome)和韦氏肉芽肿病。在一些实施方式中，所述病症是子宫内膜异位。

在本发明的另一个方面，提供本发明化合物在制备用于治疗动物疾病的药物的应用，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶能防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。

在本发明的另一个方面，提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物或其前药在治疗疾病中的应用，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶能防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。

在一些实施方式中，蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC1或者其片段或复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是mTORC2或者其片段或复合物或者其功能等效物。

在一些实施方式中，蛋白激酶是PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物。在一些实施方式中，所述PI3激酶或者其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

在本发明的另一个方面，提供一种预防或治疗对象的增殖性疾病的方法，该方法包括给予治疗有效量的本发明的化合物。

在本发明的另一个方面，提供本发明化合物在制备用于治疗对象增殖性疾病的药物的应用。

在一些实施方式中，所述病症是癌症。在一些实施方式中，癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性，真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。在一些实施方式中，所述病症是子宫内膜异位。

此外，如果适用的话，式(I)应覆盖化合物的溶剂化和非溶剂化形式。因此，各式包括具有指定结构的化合物，包括水合以及非水合形式。

本发明的这些特征和其他特征如下。

发明详述

在此说明书中使用多个技术人员熟知的术语。然而为清晰起见将定义多个术语。

术语“药学上可接受的盐”指保留以上鉴定的化合物的所需生物活性的盐，包括药学上可接受的酸加成盐和碱加成盐。式(I)所示化合物的合适药学上可接受的酸加成盐可从无机酸或有机酸制备。这些无机酸的实例包括盐酸、硫酸和磷酸。适当有机酸可选自有机酸之脂族、环脂族、芳族、杂环羧酸和磺酸类，其实例为甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、烷基磺酸、芳基磺酸。关于药学上可接受的盐的其它信息见《雷明顿药物科学》(Remington′sPharmaceutical Sciences)，第19版，马克出版公司(Mack Publishing Co.)，伊斯顿，宾夕法尼亚州，1995。在药物为固体的情况中，技术人员应知道本发明化合物、药剂和盐可以存在不同结晶或多晶型形式，所有这些物质均应属于本发明和所示结构式的范围内。

术语“治疗有效量”或“有效量”为足以实现有益或所需临床结果的用量。有效量可以一次或分多次给予。有效量通常足以使疾病状态的进程减轻、改善、稳定、逆转、减缓或延迟。

术语“功能等价物”应包括本文所述具体蛋白激酶种类的变体。应知道激酶可具有各种同种型，使得虽然给定激酶同种型的一级、二级、三级或四级结构不同于原型激酶，但该分子保留了蛋白激酶的生物活性。同种型可从人群内正常等位基因突变产生，包括诸如氨基酸取代、删除、插入、截短或重复等突变。术语“功能等价物”还包括转录水平产生的变体。其它功能等价物包括翻译后修饰(例如糖基化)得到改变的激酶。

与本领域结构类似的化合物相比，本发明化合物具有优异的药物样性质，下面将更详细地描述。这些优异的性质提示，本发明化合物可能适合用作本领域药物开发的候选物。作为第一次观察，本发明化合物在抑制两种感兴趣激酶即mTOR和PI3方面显示相当(即使不是更优)的活性。本发明化合物的活性比测试的所有比较化合物更强，其对抗mTOR的活性与比较化合物相当并且在治疗应用可接受的水平。

尽管酶活性测试表明，几乎所有的比较化合物具有可接受的活性水平，化合物的进一步测试提示许多化合物基于其它原因不能用作药物开发。例如，本发明化合物具有合适的水溶性水平(178μM)，因而能够配制成口服吸收的药物制剂，而许多比较化合物不具有可接受的溶解度。因此，本发明化合物同时具有优异的活性和可接受的溶解度特征。

在同时具有活性和溶解度的化合物中，本发明化合物的代谢稳定性更优异。本发明化合物在人体肝脏微粒体研究中具有优异的稳定性，表明其在生理环境中稳健并且相对耐受降解。相反，具有活性和溶解度的其它化合物在这些研究中根本不稳定。因此，本发明的化合物具有活性、溶解度和稳定性的独特组合，使其相比于本领域的相关化合物是优异的候选药物，尽管这些化合物中的一些具有非常明显的结构相似性。

本发明的化合物能够抑制某些蛋白激酶的活性。抑制激酶活性的能力是本发明化合物直接单独作用于激酶分子以抑制生物活性的结果。但是，应理解，所述化合物还可以至少部分作用于参与磷酸化过程中的所述激酶的辅因子。化合物对PI3蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物具有活性。化合物可以对某些丝氨酸/苏氨酸激酶如mTOR或者其片段或复合物或者其功能等效物具有活性。

可以本领域已知许多方式进行蛋白激酶抑制。例如，如果需要蛋白激酶体外抑制，可在含纯化激酶的溶液中加入适当量的本发明化合物。在要求抑制哺乳动物中激酶活性的情况中，抑制激酶通常涉及将该化合物给予含该激酶的哺乳动物。

因此，本发明化合物可具有各种应用，利用其抑制上述类型蛋白激酶的能力。例如，所述化合物可用于抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。还可用于治疗或预防哺乳动物的病症，其中抑制其蛋白激酶和/或辅因子能够防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。

揭示的化合物具有能够用于治疗增殖性疾病的能力。所述疾病的例子是癌症。预期所述化合物能够治疗实体瘤和液体肿瘤。在一些实施方式中，可被本发明化合物治疗的癌症的例子包括实体瘤和血液癌。

如本文所用，术语“癌症”是意图包括以不受控制的细胞异常生长为特征的许多病症的通用术语。预期本发明的化合物能用于治疗各种癌症，包括但不限于：骨癌、脑和CNS肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌腺癌包括肾上腺皮质癌、胰腺癌、脑下垂体癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、胃肠癌、肝癌、肝胆管外癌症(extra hepatic bile duct cancer)、胃肠类癌肿瘤、膀胱癌、泌尿生殖器癌、妇科癌、头颈部癌症、白血病、骨髓瘤、血液病症、肺癌、淋巴瘤、眼癌、皮肤癌、软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波西肉瘤、泌尿系统癌。

可藉由本发明化合物治疗的癌症的例子包括：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性、真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤和高度增殖病症，如牛皮癣和再狭窄；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。本发明的化合物还用于治疗癌前病症或增生，包括家族性腺瘤性息肉病、结肠腺瘤性息肉病、脊髓发育不良、子宫内膜发育异常、子宫内膜非典型增生、宫颈非典型增生、阴道上皮内瘤形成、良性前列腺增生、喉头绒毛状瘤、光化和日光性角化病、脂溢性角化病和角化棘皮瘤。

还预期本发明的化合物可用于治疗自身免疫或炎性疾病或由过度新血管化导致的疾病。在一定程度上归因于自身免疫病因的疾病，或者参与病理炎症和新血管形成反应的疾病包括但不限于：急性播散性脑脊髓炎、艾迪生氏病、无丙球蛋白血症、粒细胞缺乏症、过敏性哮喘、变应性脑脊髓炎、变应性鼻炎、斑秃、老年性脱发、红细胞发生不能、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、主动脉炎综合征、再生障碍性贫血、特应性皮炎、自身免疫溶血性贫血症、自身免疫肝炎、自身免疫卵巢炎、巴洛病、巴泽多病、眼—口—生殖器三联综合征、支气管哮喘、卡斯曼综合征、乳糜泻、查加斯病、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、丘-施二氏综合征、柯根综合征、圆锥形角膜、圆锥形角膜白斑、柯萨奇病毒性心肌炎、CREST病、克罗恩病、表皮嗜酸粒细胞增多、表皮T细胞淋巴瘤、多样性皮炎骨髓病性红细胞增多症、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、心肌梗死后综合征、角膜上皮营养不良、湿疹性皮炎、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃肠炎、大疱性表皮松解、伊文思综合征、纤维化肺泡炎、妊娠类天疱疮、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本病、溶血性尿毒综合征、疱疹性角膜炎、普通鳞癣、特发性间质性肺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠疾病、川畸病、角膜炎、角结膜炎、兰伯特-伊顿综合征、普通白斑病、扁平苔癣、硬化性苔癣、莱姆病、线性IgA大疱病、黄斑变性、巨幼红细胞性贫血、美尼尔斯病、莫伦氏溃疡、穆哈-哈伯曼二氏病、多发性肌炎、多发性硬化症、重症肌无力、坏死性小肠结肠炎、眼脑脊髓病、眼天疱疮、眼肌阵挛综合征、奥德甲状腺炎、阵发性夜间血红蛋白尿、巴-特二氏综合征、天疱疮、牙周炎、恶性贫血、花粉变态反应、多腺自身免疫综合征、后色素层炎、单小叶性肝硬变、直肠炎、假膜性结肠炎、牛皮癣、肺气肿、脓皮病、赖特综合征、可逆阻塞性气道疾病、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、塞扎里综合征、舍格伦综合征、亚急性细菌心内膜炎、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎、托-亨二氏综合征、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、春季结膜炎、白斑病、沃吉-小柳-原田综合征和韦氏肉芽肿病。在一些实施方式中，所述病症是子宫内膜异位。

本发明的化合物还可用于制备治疗动物病症的药物，其中，抑制蛋白激酶可以防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。本发明的化合物还可用于制备治疗或预防激酶相关疾病的药物。

给予人类属于式(I)所示的化合物可借助用于经肠给药的任何可接受模式(例如口服或经直肠)，或借助胃肠外给药，例如皮下、肌肉内、静脉内和真皮内途径。注射可为推注或经由持续或间歇输注。该活性化合物通常包含于药学上可接受的载体或稀释剂中，其用量足以向患者递送治疗有效的剂量。在各种实施方式中，与正常细胞相比，该抑制剂化合物对例如癌肿瘤等快速增殖细胞可具有选择毒性或更具毒性。

本发明化合物在使用时，可采用该化合物的任何生物可利用形式或模式给予。制备制剂领域的技术人员可视所选化合物的具体性质、待治疗的病症、待治疗病症的阶段和其它相关状况容易地选择给药的适当形式和模式。我们推荐读者参考《雷明顿药物科学》，第19版，马克出版公司(1995)以获得其它信息。

本发明化合物可单独给予或与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合成药物组合物的形式给予。虽然本发明化合物本身有效，但通常配制成药学上可接受的盐形式并给予，因为这些形式通常更稳定、更容易结晶且具有更高的溶解度。

然而，这些化合物通常以视所需给药模式而配制的药物组合物形式使用。因此，在另一实施方式中，本发明提供包含式(I)所示化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。可采用本领域熟知的技术制备这些组合物。

在其它实施方式中，本发明提供一种药物包或试剂盒，其装有一或多个填充有本发明药物组合物的一种或多种成份的容器。在这种药物包或试剂盒中可装有含单位剂量的药物的容器。这些试剂盒可装有含有效药物的组合物，所述组合物可以是浓缩物(包括冻干组合物)，其可先作进一步稀释再使用或可提供使用浓度的组合物，其中这些小瓶可装有一份或多份剂量。为便利起见，试剂盒中可以无菌小瓶提供单一剂量，从而使得医师可直接利用这些小瓶，其中这些小瓶装有所需用量和浓度的药物。这些容器还可贴有各种书面材料，例如使用说明书或管理药物或生物产品的生产、使用或销售的政府机构规定形式的说明，该说明反映该机构批准用于人体给药的生产、使用或销售。

本发明化合物可与一种或多种其他药物联用或给药，以治疗所述病症/疾病。可用同一制剂或用不同制剂给予诸组份。若用不同制剂给药，则本发明化合物可与其它药物依次或同时给予。

除能与一种或多种其它药物联合给予外，本发明化合物可用于组合疗法中。此时，通常彼此组合给予这些化合物。因此可同时(作为组合制剂)或依次给予一种或多种本发明化合物以实现所需作用。如果各化合物的治疗特性不同，尤其需要这样以使该两种药物的组合效应能改善治疗结果。

用于胃肠外注射的本发明药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、混悬剂和无菌粉末，从而能先重建成无菌可注射溶液或分散液再使用。适当的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒剂的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适当的混合物、植物油(例如橄榄油)和诸如油酸乙酯等可注射有机酯。可通过使用涂覆材料如卵磷脂、如果是分散体则通过保持所需粒度、以及使用表面活性剂，来维持合适的流动性。

这些组合物还可包含辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等确保防止微生物作用。亦可需要包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。可通过包含诸如单硬脂酸铝和明胶等延迟吸收的物质实现可注射药物形式的延长吸收。

如果需要更有效的分布，可将该化合物掺入缓释或靶向递送系统，如聚合物基质、脂质体和微球体中。

可通过，例如用细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂使可注射制剂无菌，可在将使用之前，将所述组合物溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种诸如柠檬酸钠或磷酸氢二钙等惰性、药学上可接受的赋形剂或载体和/或以下物质混合：a)填充剂或增补剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，例如高岭土和膨润土；及i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型中也可含有缓冲剂。

亦可使用诸如乳糖和高分子量聚乙二醇等聚合物作为赋形剂，将类型相似的固体组合物填充到软和硬填充明胶胶囊中。

可用包衣和衣壳，例如药物配制领域熟知的肠衣或其它包衣来制备片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型。它们可任选含有遮光剂，还可以是只在或优先在肠道的某部分(任选)以延迟方式释放活性成份的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。

若适用，这些活性化合物与一种或多种上述赋形剂还可采用微囊化形式。

口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇脂肪酸酯和它们的混合物。

除惰性稀释剂外，这些口服组合物亦可包含诸如湿润剂、乳化及悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂等辅助试剂。

除活性化合物外，混悬剂可含有诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及它们的混合物等悬浮剂。

用于直肠或阴道给药的组合物优选栓剂，其可通过混合本发明化合物与诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡(它们在室温为固态但在体温下为液态，因此在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物)等适当的无刺激赋形剂或载体而制备。

用于本发明化合物局部给药的剂型包括粉末剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂、缓冲剂或可能需要的推进剂混合。

化合物的给予量优选能治疗和降低或减缓该病症。主治医师采用常规技术并通过观察在类似状况下获得的结果不难确定治疗有效量。在确定治疗有效量时，应考虑数个因素，包括但不限于：动物种类、体积、年龄和总体健康状况、所涉及的具体病症、病症严重度、患者对治疗的反应、所给予的具体化合物、给药模式、所给予制剂的生物可用度、所选剂量疗法、其它药剂的使用和其它相关状况。

优选的剂量是每天每公斤体重约0.01至300mg范围。更优选的剂量是每天每公斤体重0.1至100mg范围，更优选每天每公斤体重0.2至80mg，更优选每天每公斤体重0.2至50mg。每天可分多个亚剂量给予适当剂量。

本发明化合物的合成

采用方案1所示的5步过程，由二氯嘌呤制备5-(9-异丙基-8-甲基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺。

方案1

实施例

在下面所述的实施例中，除非另外指出，以下描述中所有温度按摄氏度，所有份和百分数为重量份和重量百分数。

各种起始材料和其它试剂自诸如阿尔德里奇化学品公司(Aldrich ChemicalCompany)或兰开斯特合成有限公司(Lancaster Synthesis Ltd.)等化学供货商购得，除非另有说明，否则不经进一步纯化即可使用。四氢呋喃(THF)和N，N二甲基甲酰胺(DMF)自阿尔德里奇公司(Aldrich)在SureSeal瓶中购得，收到即可使用。除非另外指出，否则所有溶剂采用本领域的标准方法纯化。

以下反应在氮、氩的正压下或使用干燥管，于室温(除非另外表明)在无水溶剂中进行，且反应烧瓶装有橡胶隔片用于经由注射器引入物质和试剂。玻璃器具经烘箱干燥和/或加热干燥。在硅胶60F 254玻璃板(E Merck(0.25mm))上进行分析薄层层析，以适当溶剂比率(v/v)洗脱。通过TLC分析反应，由起始材料的消耗来判断反应终止。

TLC板经由UV吸收或使用对茴香醛喷雾试剂或磷钼酸试剂(阿尔德里奇化学品公司，乙醇配制20重量％)(热活化)或在碘室中染色来观察。

通常用反应溶剂或萃取溶剂使反应体积加倍，接着使用以体积计25％萃取体积(除非另外说明)的所示水性溶液洗涤进行后处理。产物溶液经无水硫酸钠干燥后过滤，用旋转蒸发仪减压蒸发溶剂，真空除去溶剂时应注意。

除非另外表明，否则快速柱层析(flash column chromatography)[Still等人，J.Org.Chem.，43，2923(1978)]使用E默克(Merck)级快速硅胶(flashsilica)(47-61mm)，硅胶∶粗材料比率为约20∶1至50∶1。在所示压力或于环境压力下进行氢解作用。

于400MHz操作Bruker仪器以记录¹H NMR谱，于100MHz操作记录¹³C-NMR谱。使用氯仿作为参比标准品(7.27ppm和77.00ppm)或使用CD₃OD(3.4和4.8ppm及49.3ppm)作为参比标准品或适当时利用四甲基硅烷内标(0.00ppm)，获得CDCl₃溶液的NMR谱(以ppm为单位报导)。若需要可使用其它NMR溶剂。当报导峰多样性时，使用以下缩写：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝加宽，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰。当给出耦合常数时，以赫兹为单位报导。采用LC/MS以ESI或APCI获得质谱。所有熔点均未经校正。所有终产物的纯度大于90％(经由HPLC，220nm和254nm波长)。

以下合成实施例用于说明合成本发明化合物的一种方法，不应理解为仅限于这些实施例。

实施例1：合成本发明化合物

合成2，6-二氯-9-异丙基-9H-嘌呤

室温下，在30分钟内，将2，6-二氯嘌呤(2毫摩尔)、异丙醇(8毫摩尔)和三苯基膦(4毫摩尔)吸收于40毫升无水四氢呋喃，逐滴加入重氮二羧酸二异丙酯(4毫摩尔)。该反应混合物在室温下搅拌24小时。由TLC或LC/MS周期性监测该反应。将反应混合物倒入含冰冷却水的烧杯中。用3x100毫升乙酸乙酯萃取水层，获得粗产物。粗产物在硅胶柱上层析纯化(10-80％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度洗脱)，得到2，6-二氯-9-异丙基-9H-嘌呤，产率77％。

合成5-(2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺

向2，6-二氯-9-异丙基-9H-嘌呤(5.21毫摩尔)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基胺(5.21毫摩尔)和与二氯甲烷络合的1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁氯化钯(II)的不含过氧化物的二

烷(40毫升)溶液中加入2M碳酸钠水溶液(15.6毫摩尔)。将反应混合物脱气并用氮气吹扫。然后在保持80℃的油浴中加热并搅拌该反应混合物3小时。LC/MS监测反应中起始嘌呤的消耗。

将反应混合物冷却至室温，减压下除去溶剂。将残余物吸收在乙酸乙酯和水的混合物中。分离有机相，水层用3x100毫升乙酸乙酯进一步萃取。有机相用硫酸钠干燥，真空下除去溶剂，得到5-(2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺，产率55％。

合成5-(9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺

向5-(2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺(2.84毫摩尔)的二甲基乙酰胺(18毫升)溶液中加入吗啉(2.84毫摩尔)。反应混合物在保持94℃的油浴中加热并搅拌12小时。通过LC-MS监测反应中是否不存在起始材料。将粗产物直接加载到制备型HPLC柱上，色谱纯化后得到5-(9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺，产率58％。¹H NMR，DMSO-d6：9.53(s，2H)，8.32(s，1H)，7.30(bs，2H)，4.72(m，1H)，3.78(m，4H)，3.73(m，4H)，1.55(d，6H)。m/z：341.17[MH]⁺.

合成5-(8-溴-9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺

在5℃，向5-(9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺(1.03克，3.03毫摩尔)的15毫升氯仿溶液中，缓慢加入NBS(594毫克，3.34毫摩尔)。在此温度下继续反应2小时。简单后处理后，产物5-(8-溴-9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺通过快速柱纯化(溶剂体系：50％乙酸乙酯的己烷溶液)，获得5-(8-溴-9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺，产率52％(660毫克)。¹H NMR，MeOD：9.67(s，2H)，4.90(m，1H)，3.89(m，4H)，3.82(s，4H)，1.72(d，6H)。m/z：419.31，421.07[MH]⁺。

合成5-(9-异丙基-8-甲基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺

在密闭管中，向5-(8-溴-9-异丙基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺(30毫克，0.072毫摩尔)和Pd(dppf)Cl₂(3毫克，5％毫摩尔)的3毫升无水二

烷溶液中，缓慢加入二甲基锌(210微升，1.0M庚烷溶液)。将该混合物加热至约65℃。滴加MeOH，真空下除去溶剂。在残余物中加入EtOAc，产生的溶液用1M HCl、水和盐水洗涤，然后用Na₂SO₄干燥。除去溶剂，粗混合物在硅胶上进行快速色谱，获得5-(9-异丙基-8-甲基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺8毫克，产率47％。¹H NMR，MeOD：9.40(s，2H)，4.81(m，1H)，3.89(m，4H)，3.82(s，4H)，3.71(s，3H)，1.73(d，6H)。m/z：355.16[MH]⁺。

实施例2：比较生物测试

将本发明化合物与PCT/SG2008/000379中合成和揭示的许多化合物比较各种生物学参数。

测试的参数是：

TOR试验的活性；

PI3K试验的活性；

溶解度试验

人微粒体稳定性试验

下面将具体描述每一种测试的方法：

mTOR试验

截短的mTOR激酶和His-标签的4eBP1内部制备。[γ³³P]-ATP从安玛西亚(Amersham)(GE Healthcare)购得。除非另外指出，所有化学品都得自西格玛-阿尔德里公司(Sigma-Aldrich)。

磷酸化测试最初在最终体积为20微升的384孔聚丙烯板(Greiner)上进行。化合物的测试范围通常为100μM至0.006μM，分8步稀释，一式两份。首先，在纯的DMSO中，在含1微升/孔测试化合物的样品板上加入10微升/孔2X酶-底物溶液(1.5微克/毫升mTOR，40微克/毫升4eBP1在1X测试缓冲液中：10mM Hepes pH 7.5，50mM NaCl和10mM MnCl₂)。通过加入10微升/孔的20μM ATP溶液(最终测试浓度为10μM ATP和0.4μCi/孔[γ³³P]-ATP)启动反应。在室温培养1小时后，用40微升/孔的20mM EDTA/1mMATP溶液终止反应。

然后，将50微升/孔终止反应的混合物转移到384-孔MultiScreenHTS-PH过滤板(Millipore)上，该过滤板上预先加入50微升/孔的1％磷酸。通过真空过滤，所述板用120微升/孔的0.5％磷酸洗涤四次。最后，加入10微升/孔的Optiphase^TM SuperMix液体闪烁调合物(cocktail)(Perkin Elmer)。最少1小时培养之后，采用串扰校正的符合计数模式，在Wallac MicroBeta TriLux闪烁计数仪中进行计数。IC₅₀定义为50％最大可能激酶活性抑制所需的化合物浓度。

PI3K试验

重组PI3K p110α/p85内部制备。磷脂酰肌醇(PtdIns)、磷脂酰丝氨酸(PtdSer)和所有其他未详细说明的化学品都购自西格玛-阿尔德里公司。[γ³³P]ATP和Optiphase闪烁材料可从帕金埃尔默公司(Perkin Elmer)获得。

以25微升最终测试体积在384-孔Maxisorp孔板(Nunc)上进行测试。化合物按照3倍连续稀释，以8种浓度进行测试，通常从10μM开始。Maxisorp孔板上包被20微升/孔的PtdIns和PtdSer的1∶1混合物[各自以0.1毫克/毫升溶解于氯仿∶乙醇(3∶7)中]，室温(RT)下在通风橱中过夜干燥。

通过移液管将5微升/孔化合物(2.5％DMSO溶液)、10微升/孔酶(0.5微克/毫升p110α+1微克/毫升p85)和10微升/孔5μM ATP与5μCi/毫升[γ³³P]ATP加入测试缓冲液(最终浓度：0.2微克/毫升p110α，2μM ATP，0.05μCi/孔[γ³³P]ATP在1X测试缓冲液：100mM Tris-HCl pH 7.0，200mM NaCl，8mM MgCl₂)，开始酶反应。该反应在室温下培养1小时，用30微升/孔的50mM EDTA溶液终止反应。然后，孔板用TBS洗涤两次，干燥后加入30微升/孔的闪烁材料，然后在MicroBeta Trilux上计数。IC₅₀定义为50％最大可能激酶活性抑制所需的化合物浓度。

微粒体稳定性试验

在96孔板(Whatman)中采用高通量模板体外初步评价化合物的稳定性，包括与人肝脏微粒体(HLM)培养。维拉帕米购自西格玛-阿尔德里公司，在本试验中用作参比标准品。HLM购自泽诺科技公司(Xeno Tech)(20毫克/毫升，在250mM蔗糖溶液中)。通过以下方法预先制备100mM磷酸钾缓冲液的母液：将80毫升1M K₂HPO₄和20毫升1M KH₂PO₄在900毫升水中混合(用稀盐酸将pH调节至7.4)，室温储存。K₂HPO₄.3H₂O和KH₂PO₄购自西格玛-阿尔德里公司，NADPH再生系统溶液A和B购自基因测试公司(Gentest)。用于淬灭反应的终止溶液是预先制备的乙腈和DMSO(80∶20)的混合液并在4℃储存。使用的所有溶剂是HPLC级，母液制备以及LC-MS分析期间使用的水经Milli-Q系统去离子化。

与500微升50mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4，用水稀释100mM储备缓冲液稀释制备)混合，将2.5微升10mM测试化合物的DMSO储备液稀释200倍，得到500微升50μM溶液。然后将8微升化合物混合液加入72微升由水(2250微升)、100mM磷酸钾缓冲液(2900微升)、NADPH再生系统溶液B(58微升)、NADPH再生系统溶液A(290微升)和HLM(250微升)组成的预先制备的培养混合液中。然后将得到的反应混合物(最终化合物浓度为5μM)于37℃在B.Braun Certomat H培养箱中温育，然后将50微升等分试样分散到包含100微升终止溶液的不同培养板的孔中。于4℃以2000rpm离心15分钟，将100μL所得上清液的样品转移至LC-MS板进行分析。每种测试化合物取样多次，温育一系列的时间点(5，15，30，45和60分钟)。通过LC-MS(ABIQtrap 3200)确定剩余化合物的浓度，与已知浓度的参比溶液进行比较。然后，以半衰期(t1/2，分钟)表示稳定性。

高通量溶解度试验

采用96-孔模板，在高通量动态溶解度测定方法中确定化合物的溶解度。用紫外/可见光微量培养板分光光度计(Molecular Devices SpectraMax Plus384)评价化合物的溶解度。购自西格玛公司的伏立诺他(Vorinostat)(SAHA)和尼卡地平用作参比标准品。

用磷酸盐缓冲液(西格玛)稀释在DMSO中的化合物，最终浓度250μM(5微升10mM储备液在195微升磷酸盐缓冲液pH 7中)并充分混合。然后将混合物以600rpm震摇1.5小时，室温静置2小时。然后将板以1500g离心15分钟。将所得上清液(80微升)转移至UV-分析板并用DMSO(20微升)稀释。用在磷酸盐缓冲液/DMSO(80∶20)中制备的相应化合物的校准母液定量样品。

测试的化合物如下：

表1总结了生物学试验的结果。

表1

由此可见，所有化合物均具有一定程度的活性，除了化合物E之外(化合物E对mTOR的活性显著较低)，本发明化合物对两种感兴趣酶的活性与比较化合物的活性相当。因此，所有化合物均是潜在的候选药物，虽然化合物E对mTOR的活性有些低。

但是，并非所有测试的化合物均显示可接受的溶解度特征。例如，化合物A、B和E的低溶解度结果表明这些化合物不是理想的候选药物。它们的低溶解度使其难以在生理学上可接受的载体中有效配制，因而降低了其在人体中具有优良的口服药物动力学的可能性。相反，化合物C、D和本发明化合物的溶解度对于候选药物是可接受的。

然而，在体外代谢稳定性方面，结果显著不同。在这些测试中，化合物A、B、E和本发明的化合物在人肝脏微粒体研究中具有可接受的稳定性。这就提示，如果这些化合物能够成功给予，则它们足够稳定以在患者中实现所需的生理效应。而且，在同时具有优良的mTOR/PI3K抑制活性和优良的溶解度的化合物中(C、D和本发明的化合物)，唯一一种具有可接受的代谢稳定性的化合物是本发明的化合物。

所有化合物A-E以及本发明的化合物在这些试验中均显示优良的活性，但本发明化合物的活性最强，因为其结合了强效靶点抑制活性、优良的水溶性以及优良的代谢稳定性。

总之，上述进行的生物学研究中测试的化合物所实现的生物学结果提示，虽然本发明的化合物与许多比较测试化合物具有明显接近的相似性，但是本发明化合物是唯一一种同时满足活性、充分水溶性和代谢稳定性要求，因而适合用作药物分子的化合物。因此，这些研究表明该化合物用作候选药物的优异性。

实施例3：基于细胞的效能生物标记物试验(pp70-S6KT389，pAktS473)

为了进一步说明本发明化合物的效能，对本发明的化合物进行两种基于细胞的生物标记物试验。方法如下：

AlphaScreen

SureFire p-Akt(Ser 473)384试剂盒(TGR，目录号：TGRAS500)，

AlphaScreen

SureFire phospho-p70 S6激酶(Thr 389)384试剂盒(TGR，目录号：TGR70S500)和Proxiplate-384 Plus(Perkin Elmer，目录号：6008280)购自帕金埃尔默公司(Perkin Elmer)。人前列腺癌细胞系(PC-3)购自ATCC。除非另有说明，所有化合物均购自西格玛-阿尔德里公司。

第一天，将2X 105细胞/毫升的200微升PC3细胞溶液接种到96-孔板的各孔中。接种后24小时加入化合物，测试范围通常为10μM至4.6nM，分8步稀释，一式三份。37℃，4小时温育步骤期间DMSO的最终浓度为0.1％。温育步骤之后，除去上清液，用1X裂解缓冲液(AlphaScreen试剂盒提供)裂解细胞并温和震摇10分钟。将4微升裂解液和5微升含AlphaScreen接受体小珠的反应缓冲液加激活缓冲液混合物加入各个384-孔(反应缓冲液∶激活缓冲液∶接受体小珠为40∶10∶1)，温和震摇2小时(室温，暗处)。将2微升含AlphaScreen

供体小珠的稀释缓冲液(稀释缓冲液∶供体小珠为20∶1)加入384-板的各个孔中，置于板震摇器上震摇1-2分钟，并在室温下温育过夜。

采用标准AlphaScreen配置(测量模式：Alphascreen；读数模式：Endpoint；光学模式：AlphaScreen 680 570；位置延迟：0.10秒；激发时间：0.30秒；积分开始：0.34秒；积分时间：0.30秒；增益：3000)，用BMG Pherostar板读数仪读取384-孔板。

IC₅₀定义为50％最大可能的激酶活性抑制所需的化合物的摩尔浓度。5-(9-异丙基-8-甲基-2-吗啉-4-基-9H-嘌呤-6-基)-嘧啶-2-基胺抑制p70-S6KT389和 pAktS473磷酸化的IC ₅₀ 分别为24nM和9nM。

生物标记物结果表明本发明化合物在抑制激酶活性中的功效。

Claims (46)

1.式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

2.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

3.一种抑制蛋白激酶的方法，所述蛋白激酶选自下组：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物、以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物，该方法包括使所述蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物和/或其辅因子与有效量的如权利要求1所述的化合物相接触。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶选自：mTORC1或其片段、或其复合物或者其功能等效物以及mTORC2或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白激酶是PI3K激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PI3激酶或其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

9.如权利要求1所述的化合物抑制一种或多种蛋白激酶的应用，所述蛋白激酶选自下组：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物、以及PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

12.如权利要求10或11所述的应用，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶选自：mTORC1或其片段、或其复合物或者其功能等效物以及mTORC2或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

13.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述蛋白激酶是PI3K激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

14.如权利要求13所述的应用，其特征在于，所述PI3激酶或其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

15.一种治疗或预防哺乳动物疾病的方法，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物或PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状，所述方法包括给予治疗有效量的如权利要求1所述的化合物。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

18.如权利要求16或17所述的方法，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶选自：mTORC1或其片段、或其复合物或者其功能等效物以及mTORC2或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

19.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述蛋白激酶是PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述PI3激酶或其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

21.如权利要求15-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述病症是癌症。

22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性，真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。

23.如权利要求15-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述病症是癌前病症或增生。

24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述病症选自：家族性腺瘤性息肉病、结肠腺瘤性息肉病、脊髓发育不良、子宫内膜发育异常、子宫内膜非典型增生、宫颈非典型增生、阴道上皮内瘤形成、良性前列腺增生、喉头绒毛状瘤、光化和日光性角化病、脂溢性角化病和角化棘皮瘤。

25.如权利要求15-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述病症是自身免疫或炎性疾病或由过度新血管化导致的疾病。

26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述病症选自：急性播散性脑脊髓炎、艾迪生氏病、无丙球蛋白血症、粒细胞缺乏症、过敏性哮喘、变应性脑脊髓炎、变应性鼻炎、斑秃、老年性脱发、红细胞发生不能、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、主动脉炎综合征、再生障碍性贫血、特应性皮炎、自身免疫溶血性贫血症、自身免疫性肝炎、自身免疫卵巢炎、巴洛病、巴泽多病、眼—口—生殖器三联综合征、支气管哮喘、卡斯曼综合征、乳糜泻、查加斯病、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、丘-施二氏综合征、柯根综合征、圆锥形角膜、圆锥形角膜白斑、柯萨奇病毒性心肌炎、CREST病、克罗恩病、表皮嗜酸粒细胞增多、表皮T细胞淋巴瘤、多样性皮炎骨髓病性红细胞增多症、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、心肌梗死后综合征、角膜上皮营养不良、湿疹性皮炎、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃肠炎、大疱性表皮松解、伊文思综合征、纤维化肺泡炎、妊娠类天疱疮、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本病、溶血性尿毒综合征、疱疹性角膜炎、普通鳞癣、特发性间质性肺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、川畸病、角膜炎、角结膜炎、兰伯特-伊顿综合征、普通白斑病、扁平苔癣、硬化性苔癣、莱姆病、线性IgA大疱病、黄斑变性、巨幼红细胞性贫血、美尼尔斯病、莫伦氏溃疡、穆哈-哈伯曼二氏病、多发性肌炎、多发性硬化症、重症肌无力、坏死性小肠结肠炎、眼脑脊髓病、眼天疱疮、眼肌阵挛综合征、奥德氏甲状腺炎、阵发性夜间血红蛋白尿、巴-特二氏综合征、天疱疮、牙周炎、恶性贫血、花粉变态反应、多腺自身免疫综合征、后色素层炎、单小叶性肝硬变、直肠炎、假膜性结肠炎、牛皮癣、肺气肿、脓皮病、赖特综合征、可逆阻塞性气道疾病、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、塞扎里综合征、舍格伦综合征、亚急性细菌心内膜炎、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎、托-亨二氏综合征、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、春季结膜炎、白斑病、沃吉-小柳-原田综合征和韦氏肉芽肿病。

27.如权利要求1所述的化合物在制备用于治疗动物疾病的药物的应用，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物或PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。

28.如权利要求27所述的应用，其特征在于，所述蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

29.如权利要求28所述的应用，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

30.如权利要求28或29所述的应用，其特征在于，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶选自：mTORC1或其片段、或其复合物或者其功能等效物以及mTORC2或其片段、或其复合物或者其功能等效物。

31.如权利要求28所述的应用，其特征在于，所述蛋白激酶是PI3K激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物。

32.如权利要求31所述的应用，其特征在于，所述PI3激酶或其片段或其复合物或者其功能等效物是I类PI3K或者其片段或其复合物或者其功能等效物。

33.如权利要求28-32中任一项所述的应用，其特征在于，所述病症是癌症。

34.如权利要求33所述的应用，其特征在于，所述癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性、真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性自血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤和高度增殖病症如牛皮癣和再狭窄；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼疾病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。

35.如权利要求27-32中任一项所述的应用，其特征在于，所述病症是癌前病症或增生。

36.如权利要求35所述的应用，其特征在于，所述病症选自：家族性腺瘤性息肉病、结肠腺瘤性息肉病、脊髓发育不良、子宫内膜发育异常、子宫内膜非典型增生、宫颈非典型增生、阴道上皮内瘤形成、良性前列腺增生、喉头绒毛状瘤、光化和日光性角化病、脂溢性角化病和角化棘皮瘤。

37.如权利要求27-32中任一项所述的应用，其特征在于，所述病症是自身免疫或炎性疾病或由过度新血管化导致的疾病。

38.如权利要求37所述的应用，其特征在于，所述病症选自：急性播散性脑脊髓炎、艾迪生氏病、无丙球蛋白血症、粒细胞缺乏症、过敏性哮喘、变应性脑脊髓炎、变应性鼻炎、斑秃、老年性脱发、红细胞发生不能、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、主动脉炎综合征、再生障碍性贫血、特应性皮炎、自身免疫溶血性贫血症、自身免疫性肝炎、自身免疫卵巢炎、巴洛病、巴泽多病、眼—口—生殖器三联综合征、支气管哮喘、卡斯曼综合征、乳糜泻、查加斯病、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、丘-施二氏综合征、柯根综合征、圆锥形角膜、圆锥形角膜白斑、柯萨奇病毒性心肌炎、CREST病、克罗恩病、表皮嗜酸粒细胞增多、表皮T细胞淋巴瘤、多样性皮炎骨髓病性红细胞增多症、皮肌炎、糖尿病性视网膜病、心肌梗死后综合征、角膜上皮营养不良、湿疹性皮炎、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃肠炎、大疱性表皮松解、伊文思综合征、纤维化肺泡炎、妊娠类天疱疮、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本病、溶血性尿毒综合征、疱疹性角膜炎、普通鳞癣、特发性间质性肺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、川畸病、角膜炎、角结膜炎、兰伯特-伊顿综合征、普通白斑病、扁平苔癣、硬化性苔癣、莱姆病、线性IgA大疱病、黄斑变性、巨幼红细胞性贫血、美尼尔斯病、莫伦氏溃疡、穆哈-哈伯曼二氏病、多发性肌炎、多发性硬化症、重症肌无力、坏死性小肠结肠炎、眼脑脊髓病、眼天疱疮、眼肌阵挛综合征、奥德氏甲状腺炎、阵发性夜间血红蛋白尿、巴-特二氏综合征、天疱疮、牙周炎、恶性贫血、花粉变态反应、多腺自身免疫综合征、后色素层炎、单小叶性肝硬变、直肠炎、假膜性结肠炎、牛皮癣、肺气肿、脓皮病、赖特综合征、可逆阻塞性气道疾病、风湿热、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、塞扎里综合征、舍格伦综合征、亚急性细菌心内膜炎、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎、托-亨二氏综合征、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、春季结膜炎、白斑病、沃吉-小柳-原田综合征和韦氏肉芽肿病。

39.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物或其前药在治疗疾病中的应用，其中，抑制一种或多种选自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物或PI3激酶或者其片段或复合物或者其功能等效物的蛋白激酶防止、抑制或改善所述疾病的病状或症状。

40.一种预防或治疗对象的增殖性疾病的方法，该方法包括给予所述对象治疗有效量的如权利要求1所述的化合物。

41.如权利要求40所述的方法，其特征在于，所述病症是癌症。

42.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性，真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。

43.如权利要求1所述的化合物在制备用于治疗对象增殖性疾病的药物中的应用。

44.如权利要求43所述的应用，其特征在于，所述病症是癌症。

45.如权利要求44所述的应用，其特征在于，所述癌症选自下组：血液学癌症，如骨髓增生病(特发性骨髓纤维变性，真性红细胞增多、特发性血小板增多症、慢性髓细胞样白血病)、髓样化生、慢性骨髓单核细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成红细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金病、B细胞淋巴瘤、急性T细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、浆细胞障碍、毛细胞性白血病、卡波西肉瘤、淋巴瘤；妇科癌，如乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、阴道和外阴癌、子宫内膜增生；胃肠道癌，如结肠直肠癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌；泌尿道癌，如前列腺癌、肾和肾脏部癌；膀胱癌、尿道癌、阴茎癌；皮肤癌，如黑素瘤；脑肿瘤，如恶性胶质瘤、成神经细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜细胞瘤、脑干神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、间胶质瘤；头颈部癌症，如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌，如肺癌(NSCLC和SCLC)、间皮瘤；眼病，如视网膜母细胞瘤；肌肉-骨骼病，如骨肉瘤、肌与骨骼肿瘤；鳞状上皮细胞癌和纤维瘤。

46.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物或前药在治疗增殖性疾病中的应用。