CN102424681A - 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法 - Google Patents

酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102424681A
CN102424681A CN2011103264101A CN201110326410A CN102424681A CN 102424681 A CN102424681 A CN 102424681A CN 2011103264101 A CN2011103264101 A CN 2011103264101A CN 201110326410 A CN201110326410 A CN 201110326410A CN 102424681 A CN102424681 A CN 102424681A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lin
tetrahydrochysene
group
base
aromatic base
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011103264101A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102424681B (zh
Inventor
刘明耀
陈益华
房元章
郑聪
罗剑
易正芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bioray Laboratories Inc
Original Assignee
East China Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by East China Normal University filed Critical East China Normal University
Priority to CN201110326410.1A priority Critical patent/CN102424681B/zh
Publication of CN102424681A publication Critical patent/CN102424681A/zh
Priority to PCT/CN2012/079841 priority patent/WO2013060179A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102424681B publication Critical patent/CN102424681B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明公开了一种由结构式(I)表示的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，含有本发明化合物或其药物组合物在制备治疗各种恶性肿瘤以及肿瘤转移等疾病药物的用途，以及本发明酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物的制备方法。

Description

酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物及衍生物，以及该类化合物或含有此类化合物的药物组合物用作治疗各种恶性肿瘤以及肿瘤转移等相关疾病的用途。本发明还涉及该酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物的制备方法。
背景技术
恶性肿瘤(malignant neoplasm)，即癌症(cancer)，是一种由于细胞异常快速增殖，且可发生扩散转移，破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，使患者最终由于器官功能衰竭而死亡的一类临床疾病。近20年来，中国癌症死亡率上升了29.4％，癌症死亡占城乡居民总死亡构成的24％。中国每4～5个死亡者就有1个癌症患者，中国每年死于癌症的总人口接近200万，恶性肿瘤已成为我国城乡居民的首要死因。癌症每年给中国造成的经济损失逾千亿元。药物治疗是目前癌症治疗的主要手段之一，通过遏制肿瘤过快生长，破坏其转移途径，是临床上提高肿瘤患者生存率，缓解病人痛苦较为有效的方法。
恶性肿瘤的发生和发展过程非常复杂，是一个渐进式的过程，涉及细胞多级反应和突变的积累。在此过程中，癌变的细胞越来越不受体内调节机制的控制，迅速增殖，并逐渐向正常组织侵蚀。科学研究结果表明，体内一些信号传导通路的过度激活在这一过程中起到了极为重要的促进作用。例如，研究人员在许多恶性肿瘤(如肺癌，皮肤癌、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌等)细胞内发现了高表达的表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)，会导致其受体EGFR(epidermal growth factor receptor)磷酸化水平上升，从而直接激活该受体相关的多条促进肿瘤发生发展的信号传导通路，包括：Ras-Raf-MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)，PI3K-Akt-GSK(糖原合成酶激酶)和STAT3(信号转导和转录激活因子3)，这些信号传导通路除了能使肿瘤细胞保持旺盛的增殖和分裂能力，还能增强肿瘤细胞的转移能力(FEBS J.2010 277：316-26)。因此，靶向上述信号传导通路的药物是治疗恶性肿瘤的有效途径。目前，临床上部分针对上述信号通路的小分子药物已开发出来，比如小分子酪氨酸激酶抑制剂如厄洛替尼(Erlotinib，Tarceva)、吉非替尼(Gifitinib，Iressa)、拉帕替尼(kapatinib，Tyverb)能通过抑制EGFR的活化抑制肿瘤的过快生长。但是由于其显著的获得性耐药问题限制了其在临床上的应用(Cell.2011 144：646-74)。除上述EGFR相关的信号传导通路之外，Notch、Hedgehog、p53、WNT、NF-kB等信号传导通路都被报道参与肿瘤的发生发展过程(Cell.2011 144：646-74；J.Natl.Cancer Inst.2008，100，692-7)。
肿瘤转移是指肿瘤细胞从原位肿瘤灶迁移至机体其它部位并且无节制生长的过程，它是目前临床肿瘤患者死亡的主要原因。据统计，临床上90％以上的癌症患者致死因素都是肿瘤转移引起的(Eur.J.Cancer 2010，46，1177-1180)。在肿瘤转移过程中，上皮细胞-间充质细胞转化(EMT)是肿瘤细胞转移中最显著的特征。由于体内大部分肿瘤都发生在上皮细胞层，上皮细胞在通常情况下都是不具迁移能力的细胞，但是在肿瘤的发生发展过程中，部分上皮细胞的遗传特性发生改变，即一些上皮肿瘤细胞开始表达一些与细胞迁移功能相关的蛋白，同时抑制那些能够将细胞聚集在一起的蛋白的表达，这样就让这种上皮肿瘤细胞变成了更富迁移和浸润的间充质细胞。这些间充质细胞能够迁移到机体其他合适的部位继续生长，形成新的肿瘤灶，这种上皮细胞转化成间充质细胞的过程称之上皮细胞-间充质细胞转化(EMT)。肿瘤细胞扩散的途径分为两种：局部浸润途径和循环系统转移途径。局部侵润途径是肿瘤细胞沿组织间隙、淋巴管、血管或神经束浸润，破坏邻近正常组织、器官，并继续生长。例如晚期肺癌可蔓延至胸腔甚至脊椎，晚期乳腺癌可以穿过胸肌和胸腔最终到达肺。而循环系统转移是肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管，通过循环系统迁移到他处而继续生长，形成与原发瘤同样类型的肿瘤。研究发现，多种信号传导通路在肿瘤细胞发生EMT和转移中起着至关重要的作用。转化生长因子β(Transforming growth factor beta，TGFβ)相关信号传导通路就是其中重要的一种，TGFβ信号通路能促进EMT，从而使肿瘤细胞迁移、浸润能力显著增强，并借助于新生微血管系统提供的氧气、养分等进一步增殖、生长，侵入淋巴管和血管等循环系统；同时，在TGFβ信号转导通路的调控下，这些肿瘤细胞表达出大量适于新环境生存的蛋白，从而使肿瘤细胞粘附到新的靶器官上继续增殖和生长，然后在这些器官上形成转移灶，导致新的肿瘤产生，即发生了肿瘤转移(Nat.Rev.Cancer 2003，3，453-458)。而很多针对抑制TGFβ信号通路的抗肿瘤药物，如针对TGFβR的抑制剂：
Figure BDA0000101620540000021
LY2157299，SB431542等等尚处于实验研发阶段。如何抑制TGFβ诱导的肿瘤细胞EMT过程以及随之而来的肿瘤转移是目前药物研究的重点领域。除此此外，Ras、PI3K-Akt等信号通路也是肿瘤转移中重要的调控信号传导通路(Cell Res.2009 19：89-102)。
由于恶性肿瘤的形成是多步骤、多分子病理机制的交互作用，单个靶基因的治疗理论上或许不是最适宜的策略，也很难期望有理想疗效。因此，找到一种多靶点的抗肿瘤药物就成了目前肿瘤药物研发的一个迫切需要。Bhabatosh Chaudhuri等研究人员曾报道部分苯酰基四氢-β-咔啉类化合物是细胞周期依赖性激酶-4(CDK4)的抑制剂，具有潜在的抗肿瘤生长效果(Org.Biomol.Chem.2006，4，787-801；WO2009/022104 A1)，该类化合物结构式如下：
Figure BDA0000101620540000031
这类活性化合物存在联苯环结构，且这一结构模块的存在对于此类化合物的酶抑制活性保持或增加都是非常必要的(WO2009/022104 A1)。CDK4抑制剂不涉及作用于与肿瘤生长相关的EGFR信号传导通路或与肿瘤转移相关的TGFβ信号传导通路。
本发明提供的结构新颖的一类酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物，深入研究后发现该类化合物对多种肿瘤细胞(包括肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌等)的增殖和迁移都具有非常强烈的抑制效果，在小鼠体内多种生长模型中也显示出明显的抑制肿瘤生长作用，此外，利用多种小鼠体内肿瘤转移模型，证实该类化合物亦具有非常优异的抗肿瘤转移效果，而对正常细胞增殖的抑制作用很微弱，对CDK4的抑制效果也很差，即非CDK4抑制剂。
发明内容
目前，药物治疗是治疗肿瘤的主要手段之一，遏制肿瘤细胞过快生长，破坏其转移途径，是临床上提高肿瘤患者生存率，缓解病人痛苦的较为有效的方法。目前，世界卫生组织(WHO)公布常用的抗肿瘤药为49种，但是，相对于不断增加的肿瘤种类和患者数量来说，肿瘤药物的开发还远远不够，仍然面临巨大的挑战，目前抗肿瘤药物的不足主要包括：第一，毒副作用较强，影响针对肿瘤疗效的发挥；第二，作用靶点不够有效，造成药物疗效不理想；第三，药物对肿瘤转移的治疗效果不佳等。因此，找到低毒性、作用靶点明确、高效的抗肿瘤生长和转移的药物，是目前抗癌药物研发的重要方向。本发明满足了此要求，并提供了另外的相关优点，创新性主要体现在以下几个方面：
本发明提供了一种结构新颖的酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物，包括其药学上可接受的盐、溶剂化合物(如水合物)以及酯等，可作为抗肿瘤药物先导化合物和临床候选化合物。
本发明化合物在体外和体内都特异性地抑制肿瘤生长，而对正常细胞增殖的抑制作用很弱。在体外肿瘤细胞增殖和克隆形成模型中，本发明化合物对数种肿瘤细胞的增殖均具有显著的抑制作用，同时对相应器官的正常细胞几乎没有毒性；对肿瘤细胞的克隆形成具有强烈的抑制作用。在多个疾病动物模型中，本发明化合物对肿瘤的生长均具有非常显著的抑制作用，而对正常小鼠无明显的毒副作用。
本发明化合物在体外和体内均有效地抑制肿瘤转移。在体外肿瘤细胞迁移和浸润模型中，对数种肿瘤细胞的迁移和浸润均有显著的抑制作用，并且显著抑制肿瘤细胞的上皮-间质转化(EMT)过程。在肿瘤转移动物模型中，本发明化合物对肿瘤转移具有很强的抑制效果，可作为抗肿瘤转移的先导化合物和临床候选化合物。
本发明化合物在体内和体外对肿瘤引起的溶骨性骨损伤和肿瘤肺转移引起的肺功能衰竭等并发症有明显的抑制效果。
本发明化合物有明确的作用靶点，并且该作用靶点在肿瘤生长和转移的信号传导通路上起关键调节作用。
本发明设计、合成了一类结构新颖的酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物，通过改变不同官能团的取代，不同的连接方式及位置，以及调节环系的大小来设计并合成了一系列以酰基四氢-β-咔啉结构或其衍生物为结构骨架的全新化合物，相关的药效学实验表明此类化合物在体外、体内均具有优异的抗肿瘤生长和转移活性。
本发明第一个目的是提供一种酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其具有如结构式(I)所示的结构：
Figure BDA0000101620540000041
其中：
n、m为0-3个CH2；
Figure BDA0000101620540000042
为芳香基或杂环芳香基，包括单环芳香基、多环芳香基、多杂环芳香基；所述单环芳香基包括苯基，氮杂芳香基、硫杂芳香基、氧杂芳香基；
R1为芳香环上的取代基，包括单取代和多取代，独立选自下列基团中的一个或多个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环胺基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C12环烷基、苄基、烷基羰基、C2-C12烯基羰基、C3-C12环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R2任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、卤素、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、烷胺基、烷基羰基和芳香基羰基、吗啉甲基、羟甲基；
R3取代基任意选自下列基团中的一个或多个：氢、烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、氨基、氰基、硝基、卤素；
R4、R5、R6和R7为苯环上的取代基，分别独立选自下列基团中的一个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、取代胺基、环烷氧基、环烷胺基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8的环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、烷基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C6环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R8任意选自下列基团中的一个或两个：氢、烷基、羟基、羟甲基、氨基、羧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、烷胺基、烷基羰基、芳香基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C8环烷基羰基；
R9取代基任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、羟甲基、烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C3-C8环烯基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷胺基。
结构式(I)中，当n为1个CH2、R3为氢时，由下述结构式(II)表示：
Figure BDA0000101620540000051
结构式(I)中，当n为1个CH2，R3、R8、R9为氢时，由下述结构式(III)表示：
结构式(I)中，当n为1个CH2、m为0个CH2，R3、R9为氢时，由下述结构式(IV)表示：
Figure BDA0000101620540000061
本发明还提供前述任一酰基四氢-β咔啉类化合物或其衍生物的小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐，包括但不限定于与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸等。
本发明酰基四氢-β-咔啉类小分子有化合物是包括但不限于用放射性、荧光基团或者生物素(Biotin)标记的。
本发明中，酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐包括但不限于下列化合物：
N-(2-噻吩乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(3，4-二羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-吡啶乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-氯苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-胺基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-N，N-二乙基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(1H-四氮唑乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-NHBoc-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-溴甲基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-羟基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(3-吗啉基丙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-羧基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-氨基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯丙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-((3-NHBoc-3-苯基)丙酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(S)-NHBoc-苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(R)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(3-氨基-3-苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(S)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-醛基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-溴甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-羟甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-羟基-2-苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-羟基-2，2-二苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(吗啉甲基苯基)-丙酰基))-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-((2-(4-(1H-1，2，4-三氮唑-1-yl)甲基)苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
1-苯基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
1-乙基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
2-(4-(2-NH-Biotin-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-((2-吗啉乙基氨基)甲基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-乙基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-羟基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-6-氟-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-6-溴-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉。
本发明提供一种药物组合物，其中含有本发明所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
其中，在一个具体实施方案中，所述组合物被配制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、透皮贴剂或赋形剂。
本发明提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐在抑制肿瘤细胞增殖、生长、迁移和浸润的应用。本发明还提供由上述化合物所制备的用于抑制肿瘤细胞增殖、生长、浸润和迁移的药物组合物及其制药用途，其中药物组合物含有上述的小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，所述肿瘤细胞包括但不限于肺癌细胞、乳腺癌细胞、表皮癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、前列腺癌细胞等。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括但不限于肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、口腔癌。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗恶性肿瘤转移与复发的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括但不限于肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、口腔癌。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗响应于EGF受体调节的肿瘤发生、发展和转移的疾病的药物中的应用。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备用于治疗响应于TGFβ受体调节的疾病的药物中的应用；其中，所述疾病包括但不限于肿瘤、糖尿病、肾小球肾炎、肾小球硬化、多种纤维化疾病、骨关节炎、骨质疏松。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备抗肿瘤治疗药物中的应用，所述药物用于诱发获得性耐药导致化疗失败后的抗肿瘤治疗。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗溶骨性骨损伤药物中的应用。
本发明还提供了酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤引起的肺功能衰竭的药物中的应用。
本发明所述药物单独使用或与其他药物联合使用。
本发明另一个目的在于提供如结构式(I)所示酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐的制备方法。所述方法以取代四氢-β-咔啉类化合物或其衍生物为原料，在偶联试剂或碱存在的前提下和酸、酸酐或酰卤发生偶联反应，得到所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物。或者所述方法以卤代酰基四氢-β-咔啉为原料，经过钯催化偶联的方法进一步衍生化得到所述酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物的衍生物。
在一个实施方案中，本发明制备方法包括如下几种：
方法一
Figure BDA0000101620540000091
方法一中，各种来源的取代四氢-β-咔啉类化合物或其衍生物1和不同的酸、酸酐或者酰卤等在偶联试剂或者碱存在的前提下反应得到产物2，加入碱和卤代物对所述产物2吲哚上的氮原子进行烷基化等得到产物3。其中，所述碱包括三乙胺、碳酸钾、吡啶、DMAP。
方法二
方法二中，各种来源的取代的色胺或其衍生物4和不同的取代醛进行Pictet-Spengler环化反应，参考文献报道，利用已建立的方法(例如Organic Letters(2002)4：4033-4036)等反应生成产物5，然后再通过偶联方法反应得到产物6和7。
方法三
Figure BDA0000101620540000093
方法三中，以从各种来源的取得芳环肼8为原料，通过与保护的胺基醛作用生成化合物9，再通过偶联方法制备杂环取代的化合物10。
方法四
方法四中，将各种来源的取代苯胺在酸的作用下发生重氮化反应生成重氮盐，与取代的2-哌啶酮-3-甲酸钠偶联生成中间体12，然后在酸的作用下关环生成化合物13(参考文献Syn.Comm.2007，37，1273-1280)，再经还原、偶联反应得到产物14。
方法五
Figure BDA0000101620540000101
方法五中，用偶联方法(钯催化偶联)将适当取代的溴取代-四氢-β-咔啉或其衍生物转变为芳香基或杂芳香基取代的化合物15。
与已有的连苯环结构的酰基四氢-β-咔啉类化合物相比，本发明所涉及的化合物(式I所示)有较为显著的差异，首先，结构上有明显差别，已报道专利中的活性化合物存在连苯环结构，且这一结构模块的存在对于此类化合物的酶抑制活性保持或增加都是非常必要的(WO2009/022104 A1)。而本发明所涉及的化合物不具有这一结构模块，对CDK4的抑制作用也非常微弱，非CDK4抑制剂；本发明化合物结构中含有一个链状的侧链取代基，实验结果表明本发明化合物非常特异性地抑制肿瘤细胞增殖和转移，而对正常细胞增殖的抑制效果很差。其次，二者所涉及的分子作用机制不同，本发明化合物对肿瘤生长的抑制主要涉及EGFR信号传导通路，对肿瘤转移的抑制主要涉及TGFβ信号传导通路，而文献报道的化合物则是CDK4抑制剂。
细胞试验证明，本发明化合物对多种肿瘤细胞增殖和克隆形成能力有非常明显的抑制效果，对人肺癌、乳腺癌、结肠癌等细胞克隆形成能力有显著的抑制作用，对正常细胞增殖无明显的抑制作用，并对肿瘤细胞具有优异的选择性。
细胞试验证明，本发明化合物强烈抑制肿瘤细胞的迁移和浸润，其中对肺癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞等的迁移和浸润能力都有很强的抑制作用，而对正常细胞迁移无明显的抑制作用。
细胞试验证明，本发明化合物能有效抑制肿瘤的上皮-间质转化(EMT)过程。
动物体内试验证明，与对照相比，本发明化合物对肿瘤在体内的生长具有非常强烈的抑制效果，并在一定范围内呈剂量依赖关系，同时对测试动物无明显的毒副作用，具有优异的毒理效应。
动物体内试验证明，本发明化合物对肿瘤在体内转移具有明确的治疗效果，其中能显著治疗肿瘤的肺转移病症。并具有强烈抑制乳腺癌和其他肿瘤向其它器官转移的能力。
本发明化合物显著提高乳腺癌、肺癌、结肠癌和其他肿瘤转移动物模型的生存率。
本发明化合物对动物乳腺癌骨转移以及由之引起的溶骨性骨损伤有明显的抑制作用。
本发明化合物能抑制TGFβ信号通路的活化和TGFβ调节的下游基因表达，充分说明了其治疗机理显著不同于已有的连苯环结构的苯酰基四氢-β-咔啉类化合物。
本发明化合物能抑制EGF受体信号传导通路，充分说明了其治疗机理显著不同于现有的连苯环结构的苯酰基四氢-β-咔啉类化合物。
本发明化合物的制备工艺较为简单，易于生产。
附图说明
图1所示为本发明化合物在10.0μmol/L时对人肺癌细胞H1299增殖的抑制率(％)的结果图，虚线表示50％抑制率。
图2所示为本发明化合物在10.0μmol/L时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率(％)的结果图，虚线表示50％抑制率。
图3所示为本发明化合物在10.0μmol/L时对各种肿瘤细胞及两株正常细胞增殖的抑制率(％)的结果图，虚线表示50％抑制率。
图4所示为本发明化合物对人肺癌细胞A549克隆形成能力影响的结果图，其中6个培养皿从左至右药物浓度分别是0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L。
图5所示为本发明化合物对肺癌细胞H1299细胞迁移抑制率的影响图。其中，图5A为细胞迁移情况，竖线表示细胞划痕的最初位置，超过竖线的即视为迁移细胞。图5B为图5A的统计图，以对照组(药物浓度为零时)迁移细胞数为100％，其余各组与对照组比较，确定其相对迁移率，横线代表迁移率为50％。
图6所示为本发明化合物对人肺癌细胞H1299浸润的抑制的结果图。其中，图6A为细胞浸润的结果，肿瘤细胞经结晶紫染色，呈蓝紫色，即图片中显示黑色的部分。图6B为图6A的统计图，以对照组(药物浓度为零时)浸润细胞数为100％，其余各组与对照组比较，确定其相对浸润率，横线代表浸润率为50％。
图7所示为本发明化合物对小鼠乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的抑制的结果图，说明该类化合物非常明显地抑制乳腺癌细胞的迁移。其中，图7A为细胞迁移情况，竖线表示细胞划痕的最初位置，超过竖线的即视为迁移细胞。图7B为图7A的统计图，以对照组(药物浓度为零时)迁移细胞数为100％，其余各组与对照组比较，确定其相对迁移率，横线代表迁移率为50％。
图8所示为本发明化合物对乳腺癌细胞MDA-MB-231浸润抑制率的影响的结果图，说明此类化合物具有优异的抗乳腺癌细胞浸润的能力。其中，图8A为细胞浸润的结果，肿瘤细胞经结晶紫染色，呈蓝紫色。图8B为图8A的统计图，以对照组(药物浓度为零时)浸润细胞数为100％，其余各组与对照组比较，确定其相对浸润率。
图9所示为本发明化合物对结肠癌细胞SW620浸润的抑制作用的结果图。肿瘤细胞经结晶紫染色，呈蓝紫色，即图片中的黑色部分。
图10所示为本发明化合物抑制肿瘤细胞的上皮-间质转化(EMT)的免疫荧光检测结果图，其中第一行使用fibronection，第二行使用vimentin，第三行使用F-actin。
图11所示为本发明化合物抑制肿瘤细胞的上皮-间质转化(EMT)的RT-PCR和免疫印迹实验的结果图。其中，图11A是RT-PCR实验结果，图11B是免疫印迹实验结果。
图12所示为本发明化合物对Bal b/c小鼠无明显毒副作用(10.0mg/kg/day，28天)的结果图。其中，图12A是测试后待处死的各组小鼠样品，图12B是各组小鼠中摘除的器官对照，图12C是各组小鼠中器官的免疫组化切片，图12D是各组小鼠的体重对比。
图13所示为本发明化合物对裸鼠肺癌生长的抑制作用的结果图。其中，图13A为肿瘤体积与给药天数的关系图，图13B为给药组与对照组的肿瘤体重对比。
图14所示为本发明化合物对小鼠乳腺原位癌的抑制以及对小鼠生存率的影响的结果图，其中，图14A是通过动物活体成像系统拍摄的用药20天后对小鼠乳腺原位癌的治疗效果照片，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深；图14B是通过动物活体成像系统计算小鼠乳腺中肿瘤的量；图14C是给药20天内整体动物实验模型中小鼠存活率的变化。
图15所示为本发明化合物对乳腺癌原位转移的抑制以及对小鼠生存率的影响的结果图。其中，图15A中第一行是通过动物活体成像系统拍摄的用药20天后对小鼠乳腺癌肺部转移的治疗效果照片，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深；图15A中第二行为用药20天后乳腺癌肺部转移灶的治疗效果照片(黑色箭头所示为肿瘤转移灶)；图15A中第三行为用药20天后小鼠肺部切片H&E染色照片(黑色箭头所示为肿瘤转移灶)。图15B是通过动物活体成像系统计算小鼠乳腺癌肺转移的量，图15C是给药20天后整体动物实验模型中小鼠存活率的变化。
图16所示为本发明化合物对小鼠乳腺癌原位转移模型的治疗作用的结果图。其中，图16所示为通过动物活体成像系统拍摄的用药20天后对小鼠乳腺癌全身各器官转移的治疗效果照片，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深。
图17所示为本发明化合物对乳腺癌肺转移小鼠存活率的影响的结果图。
图18所示为本发明化合物对乳腺癌骨转移以及由此引发的溶骨性骨损伤的抑制的结果图。其中，图18A中第一行是通过动物活体成像系统拍摄的用药20天后对小鼠乳腺癌骨转移的治疗效果照片，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深，图18A中第二行为用药20天后小鼠胫骨骨损伤治疗效果照片(X光成像检测，箭头所示为骨损伤位置)；图18B是通过动物活体成像系统计算小鼠乳腺癌骨转移的量；图18C是通过X光成像系统计算小鼠胫骨骨损伤的面积。
图19所示为本发明物抑制肿瘤转移过程中起关键作用的TGFβ信号通路的结果图。其中，图19A显示TGFβ信号通路中关键蛋白Smad2/3磷酸化水平的变化(免疫印迹实验)，图19B为TGFβ信号通路活性检测(双荧光报告基因实验)。
图20所示为本发明化合物抑制肿瘤生长和转移过程中起关键作用的EGF信号通路的结果图，显示EGF信号通路中关键蛋白EGFR，FAK，ERK1/2，Akt，c-src磷酸化水平的变化(免疫印迹实验)。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
1H-NMR用Bruker 300或Bruker 400型仪测定；MS用VG ZAB-HS或VG-7070型仪测定，除注明外均为ESI方法；所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法；所使用的硅胶，包括200-300目和GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
实施例一：各化合物的制备
实施例1-1、N-(2-噻吩乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS001)的制备
Figure BDA0000101620540000131
取化合物1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(I)(172mg，1.0mmol)于二氯甲烷中，加入Et3N，将体系冷却至0℃时滴加2-噻吩乙酰氯(148μL，1.2mmol)，加毕，反应5小时，常规处理后柱层析纯化得IBMS001(207mg，产率70％)。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.86(br s，1H)，7.40-7.38(m，1H)，740(d，J＝6.8Hz，1H)，7.31-7.28(m，1H)，7.05-7.00(m，1H)，6.97-6.96(m，1H)，6.95(d，J＝6.8Hz，1H)，6.93-6.90(m，1H)，4.76-4.69(m，2H)，4.09-4.07(m，2H)，3.86-3.82(m，2H)，2.67-2.65(m，2H).
实施例2-45、表1所示IBMS002-45咔啉类化合物的制备(具体过程见后文参考)
Figure BDA0000101620540000151
Figure BDA0000101620540000161
Figure BDA0000101620540000171
Figure BDA0000101620540000181
Figure BDA0000101620540000191
表1
实施例二：化合物在一定剂量下对人肺癌细胞、乳腺癌细胞和结肠癌细胞等增殖的抑制作用及对肿瘤细胞克隆形成能力的抑制效果
(一)、细胞的培养
本实验中所用细胞均购自中科院上海细胞库(具体见下表2)，贴壁培养在37℃恒温培养箱(湿度95％，CO25％)中，培养基是DMEM高糖培养基(Gibco)含10％胎牛血清(Front)。
Figure BDA0000101620540000201
(二)、SRB(磺酰罗丹明)法测定细胞增殖
肿瘤细胞以5x103个/孔密度接种至96孔板(Corning)，常规培养24h后，依次加入不同浓度本发明化合物，使其终浓度分别为0.01μmol/L，0.05μmol/L，0.10μmol/L，0.50μmol/L，1.0μmol/L，5.0μmol/L，10.0μmol/L，100.0μmol/L，对照组加入等量的DMSO(每组设6个复孔)。继续培养48h后，加预冷却的TCA(三氯乙酸，50％，w/V)，25μl/孔，轻轻混匀。4℃孵育60min固定细胞。固定后，流水冲洗5遍，风干。每孔加入50μl SRB染液(4％，w/V)，室温孵育10min染色。将染液吸出，每孔加入1％醋酸100μl洗5遍，除去未结合染料。风干后，每孔加入浓度为10mmol/L Tris溶液100μl，震荡溶解结合的SRB染料。将96孔板置于酶标仪(SPECTRAMAX 190)中，在515nm波长下测定OD值。统计分析药物对于细胞增殖水平的影响。
Figure BDA0000101620540000202
结果如图1-3所示，其中：
(1)本发明化合物在10.0μmol/L时对人肺癌细胞H1299的增殖具有非常强烈的抑制效果，见图1。大部分化合物对肺癌细胞增殖的抑制效果显著，在所列举的化合物中，化合物IBMS001、IBMS011、IBMS012、IBMS023、IBMS024、IBMS027、IBMS028、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038等化合物在10.0μmol/L浓度下对肺癌细胞H1299增殖活性的抑制率达到60％以上。
(2)本发明化合物在10.0μmol/L时对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖具有非常明显的抑制作用，见图2。可以发现，大部分化合物对乳腺癌细胞生长的抑制效果非常明显，在列举的化合物中，IBMS001、IBMS002、IBMS012、IBMS027、IBMS028、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038在10.0μmol/L浓度下对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖活性的抑制率达到50％以上，显见此类化合物非常明显地抑制了此乳腺癌细胞的增殖。
(3)本发明化合物对癌细胞具有很强的抑制效果，而对正常细胞增殖无明显的抑制作用。在所测试的化合物中IBMS007、IBMS012、IBMS021、IBMS024、IBMS030、IBMS031和IBMS038等对多种肿瘤细胞增殖都具有很强的抑制选择性，而对相应正常细胞增殖的抑制活性很差。从图3中可以发现，化合物在10.0μmol/L时对非小细胞肺癌(如A549和H1299)、大细胞肺癌(如95D)和乳腺癌(如MCF-7、MDA-MB-231、BT-549和Hs578T)的数株癌细胞的增殖均有很强的抑制作用，而对正常细胞(如肺成纤维细胞MRC5和乳腺上皮细胞MCF-10A)的增殖抑制效果很差，表明此类化合物对肿瘤细胞具有优异的选择性。
(三)、克隆形成法(colony formation)：检测肿瘤细胞体外形成克隆的增殖和成瘤能力
肿瘤细胞在体内可以通过自身分裂增殖最终形成肉眼可见的实体瘤，在体外实验模型中，可以根据肿瘤细胞的克隆形成能力的强弱来反映其在体内生成实体瘤能力的强弱。
将肿瘤细胞以1x103个/皿的密度接种于35mm培养皿中，培养24h后分组，分别加入不同浓度的待测化合物，使其终浓度分别为0.10μmol/L，0.50μmol/L，1.0μmol/L，5.0μmol/L，10.0μmol/L，对照组加入等量的DMSO。继续培养，每3天更换一次培养基和相应浓度化合物。21天后，弃去培养基，PBS洗3遍，4％多聚甲醛室温固定10min，1％结晶紫染色10min，自来水冲洗。显微镜下拍照，计算细胞克隆形成数量。实验结果如图4所示。其中，化合物IBMS002、IBMS020、IBMS030、IBMS031、IBMS033和IBMS038对非小细胞肺癌细胞(如A549细胞)克隆形成能力有明显的抑制作用，化合物在0.5μmol/L浓度作用下对这株肺癌细胞的克隆能力有明显的抑制，在5.0μmol/L浓度下基本抑制该肺癌细胞的克隆形成，而在10.0μmol/L浓度下完全抑制该肺癌细胞的克隆形成，从另外一个角度说明此类化合物具有很强的抑制肿瘤生长的作用。
实施例三：化合物对肿瘤细胞迁移和浸润抑制的部分试验
(一)、划痕法(wound healing)检测对肿瘤细胞迁移能力的抑制
细胞在体外培养时会沿培养平面向细胞较少的部分运动。利用这一现象，在已经长满细胞的培养孔中人为“划”出一条“伤痕”，则“伤痕”两侧的细胞会向“伤痕”区域运动，最终重新布满该区域，即所谓“伤痕愈合”的效果。根据运动至“伤痕”区域的细胞数量及“伤痕愈合”程度，即可判断细胞的运动能力。
肿瘤细胞接种至12孔板，细胞在37℃5％CO2培养箱中培养24h，至细胞长至100％满。更换无血清培养基，继续培养12h。在长满细胞的培养孔中，用10μl的灭菌tip沿培养孔直径纵向划痕，划痕后用PBS洗细胞两次，将浮起的细胞洗走，每孔中加入1.0ml完全培养基。分别向细胞培养孔中加入不同浓度药物，将培养板放入CO2培养箱，37℃继续常规培养24h。显微镜下观察细胞想划线部分运动的情况，拍照。统计分析不同剂量药物组迁移进入划线区域的细胞数量，确定药物对细胞迁移能力的影响。与此同时，用SRB法(如前文所述)检测相应细胞在相应浓度药物作用24h的增殖情况，以确定划痕实验是否受细胞增殖影响。
Figure BDA0000101620540000221
结果如图5、7所示，其中：
(1)从图5可以看出，图5A为肿瘤细胞迁移效果图，图5B为结果统计，在肺癌细胞H1299的细胞划痕迁移实验模型中，化合物IBMS011、IBMS017、IBMS019、IBMS024、IBMS030、IBMS031、IBMS036和IBMS038对H1299迁移抑制的半数有效浓度IC50在0.05～0.10μmol/L之间，说明此类化合物在这一迁移模型中明显抑制了该肿瘤细胞的迁移。
(2)从图7同样可以发现，图7A为肿瘤细胞迁移效果图，图7B为结果统计，在乳腺癌细胞MD-MBA-231的Wound healing迁移实验模型中，化合物IBMS001、IBMS005、IBMS010、IBMS017、IBMS019、IBMS024、IBMS030、IBMS031、IBMS036和IBMS038对MDA-MB-231的迁移抑制的半数有效浓度IC50在0.1～0.5μmol/L之间，说明该类化合物非常明显地抑制该乳腺癌细胞的迁移。
(二)、Transwell法检测细胞浸润
Transwell小室底部所铺的透水聚碳酸酯薄膜上有大量直径8μm的微孔，实验时，将Transwell小室放入24孔板中，聚碳酸酯薄膜将整个孔分为上、下两室，Transwell小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，Transwell小室上室预先铺一层胶原基质Matrigel，再将细胞接种其中。由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以诱导到上室内的细胞向下迁移，使得从薄膜的上室面移动到下室面。但是，肿瘤细胞若要运动至下室，即必须先利用自身释放的各种化学物质溶解胶原基质，再通过溶解出的空洞运动，这一过程，与肿瘤细胞在体内的浸润过程相似，可以用来反映肿瘤细胞的侵袭浸润能力。因此本实验是研究细胞浸润的经典实验。
药物处理细胞：取对数生长期的肿瘤细胞以1x105个/孔接种到6孔板中，培养24h后分组，分别加入不同浓度的待测化合物，使其终浓度分别为0.01μmol/L，0.05μmol/L，0.10μmol/L，0.5μmol/L，1.0μmol/L，5.0μmol/L，对照组加入等量的DMSO。继续培养12h后，用0.25％胰酶消化体外培养的药物预处理的肿瘤细胞，以1x105个/孔的密度接种到预先铺有50％Matrigel(BD)的Transwell小室的上室中，加药组如上文所示分别加入0.01μmol/L，0.05μmol/L，0.10μmol/L，0.50μmol/L，1.0μmol/L，5.0μmol/L的药物，对照组加入等量的DMSO。下室中分别各加入600μl含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基。37℃CO2培养箱中培养7h～12h。取出transwell小室，用棉签蘸擦拭transwell小室的上室一面，将未穿膜的细胞擦掉。将Transwell在4％多聚甲醛室温固定10min，1％结晶紫染色10min，自来水冲洗。显微镜下拍照，计数每孔内上下左右中5个视野的细胞数目，获得穿膜细胞数/视野。每组平均设3个滤膜。统计比较不同剂量药物组穿膜细胞数量，确定药物对细胞迁移能力的影响。
结果如图6、8-9所示，其中：
(1)如图6所示，图6A为化合物抑制细胞浸润效果图，图6B为结果统计图，在肺癌细胞H1299的Transwell浸润实验模型中，这些化合物对H1299浸润抑制的半数有效浓度IC50在0.1～0.5μmol/L之间；说明此类化合物在浸润模型中表现出优异的抗肺癌细胞浸润的能力。
(2)从图8可以看出，图8A为化合物抑制细胞浸润效果图，图8B为结果统计图，在乳腺癌细胞MDA-MB-231的Transwell浸润实验模型中，该类化合物对MDA-MB-231浸润抑制的半数有效浓度IC50在0.1～0.5μmol/L之间；说明此类化合物具有优异的抗乳腺癌细胞浸润的能力。
(3)由图9所示，在结肠癌细胞SW620的Transwell浸润实验模型中，在化合物浓度为1.0μmol/L的条件下，化合物IBMS005、IBMS011、IBMS017、IBMS019、IBMS024、IBMS030、IBMS031、IBMS036和IBMS038对结肠癌细胞SW620的浸润具有明显抑制，说明该类化合物对结肠癌细胞的浸润也有很好的抑制作用。
实施例四：化合物对肿瘤细胞上皮-间充质转换(EMT)抑制的部分实验
(一)、肿瘤细胞上皮-间质转换(EMT)检测
人表皮细胞HaCaT以2×104/孔接入预先放置玻片的24孔板中，37℃5％CO2培养箱中培养12h，至细胞贴壁到玻片上。更换无血清培养基，继续培养12h。加入5ng/ml的TGFβ刺激HaCaT细胞发生上皮-间充质转换(EMT)，同时，实验组加入不同浓度的化合物(0.05μmol/L，0.5μmol/L，5.0μmol/L)，对照组加入等量DMSO。48h后，吸出孔中培养基，PBS清洗三次。4％多聚甲醛室温固定10min。随后采用免疫荧光法(Immunofluorescence)检测细胞内EMT标记蛋白vimentin和fibronectin的表达变化。鬼笔环肽染色法(Phalloidin)标记HaCaT细胞F-actin骨架变化，显示细胞EMT过程中的形态变化。RT-PCR和免疫印迹(Western blot)检测HaCaT细胞内EMT标记蛋白的变化。TGFβ刺激HaCaT细胞发生EMT和化合物处理方式与上述实验相似。药物处理48小时后，HaCaT细胞被裂解分别提取其mRNA和蛋白质进行RT-PCR和免疫印迹检测。GAPDH蛋白作为内参保证检测中每组样品上样量一致。
结果图10-11所示，其中：
(1)如图10显示，免疫荧光检测显示，随着药物浓度的升高，EMT标记蛋白fibronetin和vimentin的表达有了明显的下降，如图10所示。因此，本发明化合物IBMS002、IBMS012、IBMS023、IBMS027、IBMS030和IBMS031可以明显抑制由TGFβ刺激引起的上皮细胞向间质转化(EMT)的转化过程。
(2)如图11显示，RT-PCR和免疫印迹实验也显示了类似的结果，如图11所示，鬼笔环肽染色显示TGFβ刺激引起的EMT导致上皮细胞发生形态变化，而本发明化合物则能很明显抑制这种变化的发生。
实施例五：本发明部分化合物在小鼠肿瘤生长和转移模型
(一)、本发明化合物在对正常的Bal b/c小鼠无明显的毒副作用.
四周龄的Bal b/c雌性小鼠按照体重平均分为三组，分别作为未注射组，溶剂组(DMSO)和药物组，每天腹腔注射药物一次(10.0mg/kg/day)。每天记录小鼠体重，观察其行为变化。28天后，将小鼠处死。取其重要器官如心脏、肺、肝脏、脾脏和肾脏与未注射组/溶剂组对比，检测化合物的毒副作用。
结果如图12所示，其中，在此模型中化合物IBMS001、IBMS009、IBMS020、IBMS025、IBMS030、IBMS031和IBMS038以10.0mg/kg/day的剂量连续给药28天后，小鼠的行为、体重及重要器官如心脏、肺、肝脏、脾脏和肾脏与对照组相比均无明显变化，说明该类化合物对Bal b/c小鼠无明显的毒副作用。
(二)、本发明化合物在小鼠肺癌生长模型对胰腺癌生长的抑制作用：
将50万个人非小细胞肺癌细胞A549皮下注射到免疫缺陷小鼠(裸鼠)背部皮下，待皮下肿瘤长到100立方毫米左右时，将小鼠分为两组(平均肿瘤体积相同)，加药组小鼠每天腹腔注射10mg/kg溶于DMSO的本发明化合物，对照组仅注射DMSO，每天测量并记录小鼠体重以及肿瘤的长与宽，施药34天后处死小鼠，取皮下肿瘤，拍照。按照公式体积＝长×宽2×0.52计算，统计肿瘤体积。
结果如图13所示，其中化合物IBMS001、IBMS012、IBMS027、IBMS029、IBMS030和IBMS031连续给药34天后，结果发现，相对于对照组，在10mg/kg/day的剂量下该类化合物对肺癌的原位生长(包括肿瘤的大小和体积)均有非常明显的抑制作用。
(三)、Bal b/c小鼠乳房垫原位荷瘤模型检测肿瘤转移能力。
该实验模拟了临床上乳腺癌转移的发病和治疗过程。4-6周Bal b/c雌性小鼠，乳房垫原位注射5×104个小鼠乳腺癌细胞4T1。荷瘤7天后，至原位瘤生长至直径约5mm，按小鼠原位瘤大小随机平均分为3组，分别为对照组，1.0mg/kg/day剂量给药组和5.0mg/kg/day剂量给药组。给药组分别按照相应的剂量腹腔注射药物，对照组注射等量溶剂(DMSO)。每天注射化合物前称量小鼠体重，并记录小鼠存活情况。持续给药至20天，采用小鼠活体成像技术(IVIS)，观察肿瘤细胞向小鼠肺部转移情况。
结果如图14所示，图14A为用药20天后对小鼠乳腺原位癌的治疗效果图(通过动物活体成像系统拍照图片，由于肿瘤细胞中带有荧光，可以利用荧光来确定肿瘤细胞的位置和多少，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深。结果显示在1.0mg/kg/day剂量的化合物IBMS001、IBMS027、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038显著抑制乳腺原位癌的生长，而5.0mg/kg/day剂量的化合物则基本抑制乳腺原位癌的生长。图14B是通过动物活体成像系统计算小鼠乳腺中肿瘤的量，可以明显看出该化合物对肿瘤大小具有明显的抑制作用，并呈剂量依赖关系。图14C为给药20天内整体动物实验模型中小鼠存活率的变化，从中可以发现，相对于对照组，该类化合物对小鼠存活率有明显的正面影响，在5.0mg/kg/day剂量下有90％左右的小鼠生存下来，1.0mg/kg/day剂量下有80％左右的小鼠生存下来，而对照组只有50％左右的小鼠生存下来。
(四)、裸鼠尾静脉注射模型检测肿瘤肺转移能力以及由肿瘤引起的肺功能衰竭情况。
该实验模拟了临床上治疗乳腺癌肺转移的发病和治疗过程。在4-6周龄的雌性Bal b/c小鼠乳房垫处接种5×104个/只的乳腺癌细胞4T1或者MDA-MB-231，7天后，待小鼠原位长出直径约5mm的原位瘤后，按小鼠体重平均分为三组，分别为对照组，1.0mg/kg/day剂量给药组和5.0mg/kg/day剂量给药组。通过动物活体荧光成像系统(IVIS)定期观察计算乳腺癌细胞的转移数量，以明确该化合物对于乳腺癌肺转移进程的影响，并计算小鼠存活率。癌细胞接种20天后，将小鼠处死。取其心，肺，肝，胃，肾，脾和肠，IVIS系统下观察肿瘤细胞的转移分布情况。
结果如图15-17所示，其中：
(1)图15显示，图15为用药20天后小鼠乳腺癌原位转移模型的治疗效果图(通过动物活体成像系统拍照图片，由于肿瘤细胞中带有荧光，可以利用荧光来确定肿瘤细胞的位置和多少，图中白色*所示阴影代表荧光信号，表明该区域有肿瘤细胞聚集，且由外到内细胞聚集程度加深。由于该乳腺癌原位转移模型往往转移到肺部，所以可见对照组小鼠肺部有大量的肿瘤细胞转移，包括小鼠肺部的解剖图和HE染色图均显示已有大量的肿瘤细胞。但是在化合物(IBMS001、IBMS027、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038)1.0mg/kg/天和5.0mg/kg/天的剂量下，小鼠转移病灶的分布分别减少了50％和94％，在5.0mg/kg/天的剂量下，基本看不到肿瘤细胞转移到肺部的成像，如图15所示，说明此类化合物对肿瘤的转移具有明显的抑制作用。此外，该类化合物对小鼠生存率也有非常明显的提升作用，给药20天后，对照组的小鼠基本上都无法生存，低剂量(1.0mg/kg/天)药物作用后的小鼠有60％以上都能生存下来，高剂量(5.0mg/kg/天)药物作用后，小鼠的生存率达到80％以上，该药物对小鼠的生存率有显著的提高，对肿瘤的肺转移有明显的治疗作用，这也从另外一个角度说明了药物对乳腺癌肺转移的抑制效果。
(2)图16显示，在10.0mg/kg/day剂量下，本发明化合物IBMS001、IBMS027、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038在实验过程中(42天)对小鼠乳腺癌原位的生长有明显的抑制作用，对小鼠乳腺癌原位转移也有强烈的抑制作用。从表3统计数据可以发现，本发明化合物对小鼠乳腺癌向肺、肝、脾和肾的转移都有非常强烈的抑制作用，在10.0mg/kg/day剂量下没有发现肿瘤细胞向肺、肝、脾和肾转移，而对照组小鼠的转移发生率分别为62.5％、75％、50％和37.5％对相应的肠转移的发生率也由62.5％下降到25％左右，表明此类化合物具有强烈抑制乳腺癌向其它器官转移的能力。
(3)由图17可知，给药20天后，对照组老鼠基本都无法生存，而给药组(化合物IBMS001、IBMS027、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038)老鼠在1.0mg/kg/day和5.0mg/kg/day的剂量下小鼠生存率分别提高至50％和80％，而10.0mg/kg/day的剂量下的老鼠基本都能生存下来，显见化合物对小鼠生存率具有非常显著的提升作用。
表3.肿瘤转移发生率
Figure BDA0000101620540000261
(五)、裸鼠左心室荷瘤模型检测肿瘤向骨转移能力以及由肿瘤引起的溶骨性骨损伤情况。
该实验模拟了临床上乳腺癌骨转移以及由此引起的溶骨性骨损伤的发病和治疗过程。在4-6周龄的雌性裸鼠左心室接种5×104个/只的乳腺癌细胞，该部分细胞将随血液循环最终转移至小鼠的胫骨处，并在此处引起破骨细胞过度活化，导致溶骨性骨损伤。按小鼠体重平均分为3组，分别为对照组，1.0mg/kg/day剂量给药组和5.0mg/kg/day剂量给药组。以此观察该化合物对于乳腺癌骨转移以及由此引起的溶骨性骨损伤的影响。给药20天后，将小鼠处死，通过动物活体荧光成像系统(IVIS)计算乳腺癌细胞的转移数量，并利用X射线成像方法确定由乳腺癌骨转移引起的溶骨性骨损伤的面积。
结果如18显示，该类化合物(IBMS001、IBMS027、IBMS029、IBMS030、IBMS031和IBMS038)对于乳腺癌骨转移以及由此引起的溶骨性骨损伤具有显著的治疗效果。给药20天后，通过动物活体荧光成像系统计算乳腺癌细胞的转移数量，并利用X射线成像方法确定由乳腺癌骨转移引起的溶骨性骨损伤的面积。实验表明，在1.0mg/kg/天和5.0mg/kg/天的剂量下，小鼠乳腺癌骨转移分别降低了75％和90％，而溶骨性骨损伤的面积也分别下降了75％和94％，说明该化合物对小鼠乳腺癌骨转移以及由之引起的溶骨性骨损伤有明显的抑制作用。
实施例六：本发明化合物对TGFβ信号传导通路的抑制作用
乳腺癌细胞以1×105/孔的密度接种于6孔板中，经过24小时待细胞贴壁后，换用无血清培养基继续培养，并加入相应浓度化合物预处理。6小时后，加入TGFβ1刺激细胞1小时，裂解细胞提取蛋白进行免疫印迹检测。
结果如图19所示，其中：
(1)图19左表明，在乳腺癌细胞中，本发明化合物IBMS003、IBMS012、IBMS030和IBMS031对TGFβ诱导的smad2，smad3蛋白磷酸化水平有着明显的抑制作用，并且呈现浓度梯度依赖性。说明本发明化合物抑制了TGFβ信号通路的活化和TGFβ调节的下游基因表达。
(2)图19右表明，本发明化合物抑制TGFβ诱导的Smad蛋白的转录调控活性。TGFβ信号通路活化后，能使smad蛋白转入细胞核中，从而能使smad蛋白作为转录因子，结合在SMAD结合原件(Smad binding element)上启动下游基因转录。而本发明化合物能梯度依赖性地抑制该蛋白的转录活性，说明本发明化合物抑制了TGFβ信号通路的活化和TGFβ调节的下游基因表达。
实施例七：本发明化合物对EGF受体信号传导通路的抑制
肺癌细胞以1×105/孔的密度接种于6孔板中，经过24小时待细胞贴壁后，换用无血清培养基继续培养，并加入相应浓度化合物预处理。6小时后，加入EGF刺激细胞15分钟，裂解细胞提取蛋白进行免疫印迹检测。
结果如图20所示，在乳腺癌细胞中，本发明化合物IBMS001、IBMS027、IBMS030和IBMS031对EGF受体诱导的EGFR，FAK，ERK1/2，c-src蛋白磷酸化水平有着明显的抑制作用，并且呈现浓度梯度依赖性。说明本发明化合物抑制了EGF受体信号通路的活化和EGF调节的下游基因表达。
参考实施例2-45
实施例1-2、N-(3，4-二羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS002)
Figure BDA0000101620540000281
取化合物I(225mg)于二氯甲烷中，在氩气氛围下加入EDC(326mg)和HOBt(194mg)，在冰浴下搅拌15分钟后加入3，4-二羟基苯乙酸(262mg)，此化合物在室温下搅拌反应5-8小时，经简单后处理后得到粗产物。经过柱层析纯化后得化合物IBMS002(131mg，产率31％)：1H NMR(DMSO，400MHz)：δ10.82(br s，1H)，8.83(br s，1H)，8.72(br s，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，6.94-6.91(m，1H)，6.66-6.62(m，2H)，6.53-6.47(m，1H)，4.66(br s，2H)，3.74-3.71(m，2H)，3.64-3.61(m，2H)，2.66-2.64(m，2H).
实施例1-3、N-(2-吡啶乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS003)
采用与制备化合物IBMS001的相似的方法，将2-噻吩乙酰氯换成2-吡啶乙酰氯，常规处理后纯化得化合物IBMS003，产率55％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.85(br s，1H)，8.49-8.44(m，1H)，7.73(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.39-7.33(m，2H)，7.31-7.24(m，2H)，7.02(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，6.94(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，4.79-4.68(m，2H)，4.00-3.98(m，2H)，3.89-3.81(m，2H)，2.67-2.60(m，2H).
实施例1-4、N-(4-氯苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS004)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-氯苯乙酸，最后得到化合物IBMS004，产率：52％。1H NMR(DMSO，300MHz)：δ10.83(br s，1H)，7.36-7.31(m，3H)，7.29-7.21(m，3H)，7.01(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，6.92(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，4.68(br s，2H)，3.85-3.80(m，4H)，2.64-2.61(m，2H)
实施例1-5、N-(4-胺基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS005)
取化合物I(225mg)于二氯甲烷中，在氩气氛围下加入EDC(326mg)和HOBt(194mg)，在冰浴下搅拌15分钟后加入化合物4-NHBoc-PhCH2COOH(327mg)，此化合物在室温下搅拌反应5-8小时，经简单后处理后得到粗产物。经过柱纯化后得中间体，然后将此中间体溶解在DCM(2.0mL)，在冰浴下滴加TFA(0.5mL)，继续反应两小时，简单后处理后得到化合物IBMS005，产率：52％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ10.83(br s，1H)，9.29(br s，1H)，7.38-7.32(m，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.11-6.89(m，3H)，6.69-6.67(m，2H)，6.64-6.59(m，1H)，4.68(s，2H)，3.84-3.72(m，4H)，2.68-2.48(m，2H).
实施例1-6、N-(3-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS006)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成3-羟基苯乙酸，最后得到化合物IBMS006，产率：30％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ10.83(br s，1H)，9.29(br s，1H)，7.38-7.32(m，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.11-6.89(m，3H)，6.69-6.67(m，2H)，6.64-6.59(m，1H)，4.68(s，2H)，3.84-3.72(m，4H)，2.68-2.48(m，2H).
实施例1-7、N-(4-N，N-二乙基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS007)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-N，N-二乙基苯乙酸，最后得到化合物IBMS007，产率：40％。1H NMR(DMSO，300MHz)：δ10.72(br s，1H)，7.17(dd，J＝7.5，7.5Hz，2H)，6.92-6.88(m，2H)，6.85-6.79(m，2H)，6.46(d，J＝8.4Hz，2H)，4.55(br s，2H)，3.68-3.64(m，2H)，3.53-3.51(m，2H)，2.50-2.43(m，2H)，2.37-2.33(m，4H)，0.93(t，J＝6.9Hz，6H).
实施例1-8、N-(4-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS008)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-氟苯乙酸，最后得到化合物IBMS008，产率：68％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.82(br s，1H)，7.40-7.34(m，1H)，7.32-7.27(m，3H)，7.15-7.09(m，2H)，7.03(dd，J＝7.8，7.2Hz，1H)，6.94(dd，J＝7.8，7.2Hz，1H)，4.72-4.69(m，2H)，3.86-3.84(m，2H)，3.83-3.81(m，2H)，2.67-2.62(m，1H).
实施例1-9、N-(2-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS009)
采用与制备化合物IBMS001的相似的方法，将2-噻吩乙酰氯换成2-氟苯乙酰氯，最后得到化合物IBMS009，产率48％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.88(br s，1H)，7.40(d，J＝7.6Hz，1H)，7.29(dd，J＝7.2，7.2Hz，2H)，7.26-7.24(m，1H)，7.16(d，J＝7.2Hz，1H)，7.11(d，J＝7.2Hz，1H)，7.05-7.01(m，1H)，6.96(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，4.79-4.70(m，2H)，3.89-3.88(m，2H)，3.86-3.82(m，2H)，2.75-2.67(m，2H).
实施例1-10、2-(1H-四氮唑乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS010)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成四氮唑乙酸，最后得到化合物IBMS010，产率：57％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.71(br s，1H)，9.34-9.33(m，1H)，7.45-7.41(m，1H)，7.36-7.31(m，1H)，7.09-7.04(m，1H)，6.99(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，5.83-5.82(m，2H)，4.81-4.72(m，2H)，3.88-3.84(m，2H)，2.91-2.73(m，2H).
实施例1-11、2-(4-(2-NHBoc-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS011)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-(2-NHBoc-乙氧基)-苯乙酸，最后得到化合物IBMS011，产率：30％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.86(brs，1H)，7.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.28(d，J＝7.8Hz，1H)，7.19-7.11(m，2H)，7.05-6.94(m，3H)，6.88-6.85(m，2H)，4.72-4.64(m，2H)，3.89(t，J＝4.2Hz，2H)，3.82-3.76(m，4H)，3.26(s，2H)，2.61-2.56(m，2H)，1.35(s，9H).
实施例1-12、2-(4-溴甲基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS012)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-溴甲基苯乙酸，最后得到化合物IBMS012，产率：72％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.08(br s，1H)，7.44-7.35(m，3H)，7.31-7.28(m，3H)，7.19-7.09(m，2H)，4.87-4.83(m，2H)，4.62-4.54(m，2H)，3.90-3.85(m，2H)，3.81-3.77(m，2H)，2.69-2.64(m，2H).
实施例1-13、2-(2-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS013)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-羟基苯乙酸，最后得到化合物IBMS013，产率：82％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.10(br s，1H)，9.57(s，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.08-6.80(m，4H)，6.82-6.69(m，2H)，4.70(s，2H)，3.86-3.80(m，2H)，3.72(s，2H)，2.64-2.60(m，2H).
实施例1-14、2-(4-醛基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS014)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-醛基苯乙酸，最后得到化合物IBMS014，产率：73％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.87(br s，1H)，9.97(br s，1H)，7.87-7.83(m，2H)，7.52-7.44(m，2H)，7.40-7.36(m，1H)，7.31-7.29(m，1H)，7.06-7.01(m，1H)，6.98-6.93(m，1H)，4.75-4.71(m，2H)，4.00-3.99(m，1H)，3.87-3.83(m，1H)，2.68-2.67(m，2H).
实施例1-15、2-(4-(2-羟基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS015)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-(2-羟基乙氧基)-苯乙酸，最后得到化合物IBMS015，产率：73％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ8.13(br s，1H)，7.43-7.41(m，1H)，7.31-7.28(m，1H)，7.23-7.18(m，2H)，7.15-7.09(m，2H)，6.90-6.81(m，2H)，4.86-4.82(m，2H)，4.06-4.03(m，2H)，3.98-3.93(m，2H)，3.84-3.81(m，2H)，3.80-3.78(m，2H)，2.68-2.63(m，2H).
实施例1-16、2-(4-(3-吗啉基丙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS016)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-(3-吗啉基丙氧基)-苯乙酸，最后得到化合物IBMS016，产率：58％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.36(br s，1H)，7.50-7.40(m，1H)，7.29-7.27(m，1H)，7.21-7.05(m，4H)，6.88-6.79(m，2H)，4.84-4.61(m，2H)，4.02-3.95(m，2H)，3.82-3.70(m，8H)，2.82-2.64(m，2H)，2.54-2.46(m，6H)，1.98-1.72(m，2H).
实施例1-17、2-(4-羧基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS017)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成(4-羧甲基)-苯甲酸甲酯，然后在LiOH作用下水解，最后得到化合物IBMS017，产率：55％。1H NMR (300MHz，DMSO)：δ12.47(s，1H)，10.81(br s，1H)，7.43-7.35(m，6H)，7.07-7.02(m，1H)，6.99-6.94(m，1H)，4.75-7.67(m，2H)，3.84-3.75(m，2H)，3.60-3.57(m，2H)，2.80-2.75(m，2H).
实施例1-18、2-(4-(2-氨基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS018)
取化合物IBMS011(72mg，0.23mmol)溶于2ml CH2Cl2中，将反应体系用冰水浴冷却10min，加入TFA(0.5ml)后反应20min，继续搅拌3h，常规处理后得到化合物IBMS018，产率：20％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.85(br s，1H)，7.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.29(d，J＝7.8Hz，1H)，7.20-7.12(m，2H)，7.03(dd，J＝7.5，7.2Hz，1H)，6.94(dd，J＝7.5，7.2Hz，1H)，6.86-6.84(m，2H)，4.70-4.65(m，2H)，3.92-3.88(m，2H)，3.83-3.81(m，2H)，3.78-3.76(m，2H)，2.90-2.86(m，2H)，2.67-2.65(m，1H)，2.60-2.58(m，1H).
实施例1-19、2-(4-((甲氧羰基)甲氧基)苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS019)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-((甲氧羰基)甲氧基)苯乙酸，最后得产物IBMS019，产率：43％：1H NMR(300MHz，DMSO)：δ11.02(br s，1H)，7.39(d，J＝8.1Hz，1H)，7.30(d，J＝8.1Hz，2H)，7.22-7.19(m，1H)，7.03(dd，J＝7.2，6.9Hz，1H)，6.97(d，J＝7.2Hz，1H)，6.92-6.89(m，2H)，4.95-4.92(m，2H)，4.74-4.63(m，3H)，3.80-3.77(m，2H)，3.69-3.67(m，1H)，3.34-3.31(m，1H)，2.82-2.67(m，2H).
实施例1-20、N-(苯丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS020)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成苯丙酸，最后得到化合物IBMS020：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.82(s，1H)，7.38-7.35(m，1H)，7.28-7.23(m，5H)，7.17-7.13(m，1H)，7.02(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，6.94(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，4.66(s，2H)，3.81(t，J＝4.0Hz，1H)，3.74(t，J＝4.0Hz，1H)，2.87-2.81(m，2H)，2.74-2.71(m，4H).13C NMR(100MHz，DMSO)：δ170.7，141.5，135.9，131.4，128.5，128.3，126.6，125.9，120.8，118.5，117.5，111.0，106.7，43.3，34.2，30.8，30.7，21.6.
实施例1-21、N-(3-NHBoc-3-苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS021)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-NHBoc-3-苯基丙酸，得到化合物IBMS021，1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.83(br s，1H)，7.37-7.35(m，1H)，7.30-7.28(m，2H)，7.26-7.24(m，2H)，7.21-7.18(m，2H)，7.03(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，6.95(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，4.82-4.72(m，2H)，4.54-4.50(m，1H)，3.88-3.84(m，2H)，2.69-2.61(m，2H)，2.45-2.41(m，2H)，1.30(s，9H).
实施例1-22、N-(2-(2-(R)-NHBoc-苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS022)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(2-(R)-NHBoc-苯基)乙酸，最后得到化合物IBMS022，产率56％：1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.83(br s，1H)，7.42-7.40(m，2H)，7.37-7.34(m，2H)，7.32-7.31(m，1H)，7.29-7.26(m，3H)，7.01(dd，J＝7.6Hz，7.6Hz，1H)，6.93-6.91(m，1H)，5.75-5.71(m，1H)，4.79-4.63(m，2H)，3.82-3.67(m，2H)，2.49(m，2H)，1.37(s，9H)。
实施例1-23、N-(2-(2-(S)-NHBoc-苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS023)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(2-(S)-NHBoc-苯基)乙酸，最后得到化合物IBMS023，产率64％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.83(br s，1H)，7.41(d，J＝7.2Hz，2H)，7.36(d，J＝7.2Hz，2H)，7.32-7.31(m，2H)，7.29-7.28(m，2H)，7.00(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，6.92(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，6.93-6.90(m，1H)，5.72(d，J＝8.0Hz，1H)，4.77(d，J＝16.8Hz，1H)，4.65(d，J＝16.8Hz，1H)，3.81-3.76(m，1H)，3.73-3.68(m，1H)，2.67-2.63(m，1H)，2.11-2.09(m，1H)，1.37(s，9H).
实施例1-24、N-(2-(2-(R)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS024)
取化合物IBMS022(180mg，0.44mmol)溶于二氯甲烷(2.0mL)，冰浴条件下滴加三氟乙酸(0.5mL)，2小时后，减压除去过量的溶剂，然后用1M NaOH溶液将体系调节至pH＝12左右。产率60％：1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.83(br s，1H)，7.39-7.37(m，2H)，7.34-7.31(m，3H)，7.28-7.26(m，2H)，7.02(dd，J＝7.6Hz，7.6Hz，1H)，6.93-6.90(m，1H)，5.07-5.01(m，1H)，4.89-4.65(m，2H)，3.75-3.55(m，2H)，3.59-3.41(m，2H)，2.66-2.56(m，1H)，2.14-2.10(m，1H).
实施例1-25、N-(3-氨基-3-苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS025)
采用与制备化合物IBMS024的相似的方法，将化合物IBMS022换成IBMS021，得到化合物IBMS025，产率：57％。1H NMR(DMSO，400MHz)：δ10.78(br s，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23-7.19(m，2H)，7.17-7.14(m，3H)，7.03(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，6.95(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，4.80-4.70(m，2H)，4.09-4.05(m，1H)，3.99-3.91(m，2H)，3.77-3.75(m，2H)，3.31(br s，2H).
实施例1-26、N-(2-(2-(S)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS026)
采用与制备化合物IBMS024的相似的方法，将化合物IBMS022换成IBMS023，最后得产物IBMS026，产率72％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.85(br s，1H)，7.42(d，J＝7.2Hz，2H)，7.35(d，J＝7.2Hz，2H)，7.31-7.30(m，2H)，7.29-7.28(m，2H)，7.02(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，6.93(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，6.93-6.90(m，1H)，5.07-5.04(m，1H)，4.77(d，J＝16.8Hz，1H)，4.65(d，J＝16.8Hz，1H)，3.81-3.78(m，2H)，3.56-3.50(m，2H)，2.68-2.62(m，2H).
实施例1-27、N-(2-(4-醛基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS027)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-醛基苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS027，产率60％：1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ9.91(br s，1H)，8.45(brs，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，2H)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.06(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，4.95(d，J＝16.8Hz，1H)，4.81(d，J＝16.8Hz，1H)，4.13(t，J＝5.6Hz，1H)，3.73-3.70(m，2H)，2.72-2.65(m，1H)，2.33-2.27(m，1H)，2.05(d，J＝5.6Hz，3H)。
实施例1-28、N-(2-(4-溴甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS028)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-溴甲基苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS028，产率40％：1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.15(br s，1H)，7.44-7.42(m，1H)，7.39-7.32(m，4H)，7.27-7.25(m，1H)，7.17(dd，J＝7.2Hz，7.2Hz，1H)，7.10(dd，J＝7.2Hz，7.2Hz，1H)，4.99-4.88(m，2H)，4.12(q，J＝6.8Hz，1H)，3.74(m，2H)，2.72(d，J＝15.2Hz，1H)2.36(d，J＝15.2Hz，1H)，1.60(d，J＝6.8Hz，3H)
实施例1-29、N-(2-(4-羟甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS029)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-羟甲基苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS029，产率45％：1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.33(br s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.35-7.33(m，2H)，7.31-7.29(m，2H)，7.25(d，J＝8.0Hz，1H)，7.14(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.07(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，4.84(d，J＝16.4Hz，1H)，4.79(d，J＝16.4Hz，1H)，4.68(s，2H)，4.09(t，J＝6.4Hz，1H)，3.75-3.68(m，2H)，2.70-2.64(m，1H)，2.33-2.27(m，1H)，1.53(d，J＝6.4Hz，3H)
实施例1-30、N-(2-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS030)
采用与制备化合物IBMS001的相似的方法，将2-噻吩乙酰氯换成苯乙酰氯，常规处理后纯化得IBMS030，产率82％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.85(s，1H)，7.30-7.27(m，6H)，7.22-7.20(m，1H)，7.03-7.01(m，1H)，6.94-6.91(m，1H)，4.68(s，2H)，3.85-3.81(m，4H)，3.30(s，2H).
实施例1-31、N-(4-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS031)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-羟基苯乙酸，最后得到化合物IBMS031，产率57％：1H NMR(400MHz，DMSO)：δ10.84(br s，1H)，9.26(s，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.29(d，J＝10.4Hz，1H)，7.06(d，J＝11.2Hz，1H)，7.02(d，J＝9.6Hz，1H)，6.98-6.92(br m，2H)，6.71-6.66(m，2H)，4.68(s，2H)，3.84-3.77(m，2H)，3.72-3.70(m，2H)，2.55-2.53(m，2H).13C NMR(100MHz，DMSO)：δ170.7，141.5，135.9，131.4，128.5，128.3，126.6，125.9，120.8，118.5，117.5，111.0，106.7，43.3，34.2，30.8，21.6.
实施例1-32、N-(2-羟基-2-苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS032)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-羟基-2-苯基乙酸，最后得到化合物IBMS032，产率22％：1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.86(br s，1H)，7.42-7.36(m，4H)，7.34-7.31(m，3H)，7.15(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，6.92(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，5.83-5.73(m，2H)，5.49(d，J＝10.0Hz，1H)，4.81-4.73(m，2H)，3.84-3.78(m，2H).
实施例1-33、N-(2-羟基-2，2-二苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS033)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-羟基-2，2-二苯基乙酸，最后得到化合物IBMS033，产率23％：1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.01(br s，1H)，7.44-7.39(m，3H)，7.37-7.34(m，2H)，7.31-7.27(m，4H)，7.26-7.24(m，2H)，7.14(dd，J＝7.6，7.6Hz，2H)，7.07-7.05(m，1H)，5.00(br s，2H)，3.52(br s，2H)，2.95-2.88(m，2H).
实施例1-34、N-(2-(4-吗啉甲基苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS034)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-(吗啉甲基)苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS034，产率：60％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.82(br s，1H)，7.28-7.20(m，6H)，7.00(dd，J＝7.8，7.2Hz，1H)，6.91(dd，J＝7.2，7.2Hz，1H)，4.87(d，J＝16.8Hz，1H)，4.55(d，J＝16.8Hz，1H)，4.24-4.17(m，1H)，3.84-3.80(m，1H)，3.50-3.54(m，6H)，2.58-2.54(m，1H)，2.33-2.29(m，4H)，2.03-1.99(m，1H)，1.31(d，J＝6.3Hz，3H).
实施例1-35、N-(2-(4-((二乙基氨基)甲基)苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS035)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-((二乙氨基)甲基)苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS035，产率：36％。1H NMR(DMSO，300MHz)：δ10.70(br s，1H)，7.24(d，J＝7.8Hz，2H)，7.17(dd，J＝7.8，7.8Hz，2H)，6.92-6.87(m，2H)，6.84-6.79(m，2H)，4.51(br s，2H)，3.67-3.63(m，2H)，3.62-3.58(m，2H)，2.63-2.59(m，2H)，1.98(br s，6H).
实施例1-36、2-((2-(4-(1H-1，2，4-三氮唑-1-yl)甲基)苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS036)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-((1H-1，2，4-三氮唑-1-)甲基)苯基)丙酸，最后得到化合物IBMS036，产率：30％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.90(br s，1H)，8.70-8.61(m，1H)，7.99-7.94(m，1H)，7.32-7.21(m，6H)，7.01(dd，J＝7.5，7.2Hz，1H)，6.92(dd，J＝7.5，7.2Hz，1H)，5.42-5.35(m，2H)，4.76-4.62(m，1H)，4.27-4.23(m，1H)，3.73-3.70(m，1H)，3.50-3.46(m，2H)，2.64-2.50(m，1H)，2.16-2.05(m，1H)，1.30-1.27(m，3H).
Figure BDA0000101620540000351
实施例1-37、1-苯基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS037)
取色胺(690mg/4.30mmol)于甲苯(60ml)中，往体系中滴加三氟乙酸(0.64ml)，待溶液变为均相后再逐滴加入苯甲醛(0.53ml/4.8mmol)，烧瓶上安装油水分离器，将反应体系加热至140℃回流4-8h，待水分基本无产生后，将溶液冷却至室温，减压浓缩除去绝大部分溶剂，粗产物经柱层析得到中间产物-1-苯基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉。再将此化合物溶解在DMF中，在EDC/HOBt的存在下，加入苯乙酸经过类似的处理后得到目标产物。再将此化合物溶解在DMF中，在EDC/HOBt的存在下，加入苯乙酸经过类似的处理后得到目标产物IBMS037，产率49％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.18(br s，1H)，7.46(d，J＝7.5Hz，1H)，7.25-7.16(m，11H)，7.13-7.08(m，2H)，3.96-3.90(m，1H)，3.81-3.74(m，2H)，3.38-3.30(m，1H)，2.76-2.70(m，1H)，2.60-2.56(m，1H)，1.71-1.68(m，1H).13C NMR(400MHz，CDCl3)：δ22.1，40.5，41.5，52.3，109.7，111.5，118.2，119.6，122.2，126.7，127.0，128.2，128.6，128.8，128.9，131.8，135.1，136.5，140.1，170.0.
实施例1-38、1-乙基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-三氢-1H-β-咔啉(IBMS038)
采用与制备化合物IBMS037的相似的方法，将苯甲醛换成丙醛，最后得到化合物IBMS038，产率：35％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.58(br s，1H)，7.53-7.50(m，1H)，7.45-7.37(m，6H)，7.25(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.21-7.16(m，1H)，5.90(t，J＝6.9Hz，1H)，4.23-4.19(m，1H)，4.04-4.00(m，2H)，3.60-3.49(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，2.68-2.58(m，1H)，2.09-2.03(m，1H)，1.98-1.90(m，1H)，1.88-1.86(m，2H)，1.13(t，J＝7.5Hz，1H).
实施例1-39、2-(4-(2-NH-Biotin-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS039)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成4-(2-NH-Biotin-乙氧基)-苯乙酸，最后得到化合物IBMS039，产率：71％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.86(brs，1H)，8.07-8.04(m，1H)，7.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.29(d，J＝7.8Hz，1H)，7.21-7.13(m，2H)，7.05-7.01(m，2H)，6.97-6.95(m，2H)，6.90-6.85(m，2H)，6.43-6.36(m，2H)，4.74-4.65(m，2H)，4.28-4.26(m，1H)，4.09-4.07(m，1H)，3.94-3.92(m，2H)，3.81-3.76(m，4H)，3.36-3.34(m，1H)，3.05-3.03(m，1H)，2.80-2.77(m，1H)，2.58-2.50(m，2H)，2.08-2.06(m，2H)，1.50-1.45(m，3H)，1.30-1.21(m，3H).ESI-MS m/z calcd for C31H38N5O4S[M+H]+：576；C31H37N5O4SNa[M+Na]+：598.
实施例1-40、N-(2-(4-((2-吗啉乙基氨基)甲基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS040)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-((2-吗啉乙基氨基)甲基)苯基)-丙酸，最后得到化合物IBMS040，产率：67％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.35(br s，1H)，7.39-7.33(m，2H)，7.30-7.27(m，4H)，7.17-7.10(m，1H)，7.09-7.07(m，1H)，4.93(d，J＝16.8Hz，1H)，4.80(d，J＝16.8Hz，1H)，4.07-4.03(m，1H)，3.82-3.77(m，2H)，3.74-3.65(m，6H)，2.83-2.70(m，4H)，2.52-2.48(m，2H)，2.40-2.36(m，4H)，2.31-2.18(m，1H)，1.90-1.84(m，2H)，1.51(d，J＝6.9Hz，3H).
实施例1-41、N-(2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS041)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3，4-二羟基苯乙酸换成2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酸，最后得到化合物IBMS041，产率：49％。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.29(br s，1H)，7.42-7.40(m，1H)，7.30-7.27(m，1H)，7.22-7.16(m，2H)，7.14-7.08(m，2H)，6.86-6.77(m，2H)，5.24-5.23(m，1H)，4.79-4.71(m，2H)，4.15-4.08(m，2H)，4.00-3.74(m，2H)，3.84-3.81(m，2H)，3.78-3.76(m，2H)，3.58-3.54(m，1H)，3.38-3.34(m，2H)，2.73-2.67(m，2H).
实施例1-42、N-苯乙酰基-1-乙基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉(IBMS042)
取5-苄氧基色胺(390mg，1.50mmol)溶于冰醋酸(6ml)中，搅拌10min后逐滴加入丙醛(91μl，1.60mmol)，将反应体系加热至80℃，反应4小时后加NaOH中和至pH＝9，萃取得粗产物，将此化合物溶解在DMF中，采用与制备化合物IBMS002的方法，在EDC/HOBt的存在下，加入苯乙酸经过类似的处理后得到目标产物IBMS042，产率：62％：1HNMR(300MHz，DMSO)：δ10.68(br s，1H)，7.45(d，J＝6.9Hz，2H)，7.39(d，J＝6.9Hz，2H)，7.33-7.30(m，4H)，7.25-7.22(m，1H)，7.18(d，J＝8.7Hz，2H)，6.95-6.94(m，1H)，6.75(dd，J＝8.7，2.4Hz，1H)，5.55-5.52(m，1H)，5.06(s，2H)，4.20-4.14(m，1H)，3.89(d，J＝15.0Hz，1H)，3.82(d，J＝15.0Hz，1H)，3.39-3.34(m，1H)，2.60-2.57(m，1H)，2.46-2.42(m，1H)，1.97-1.87(m，1H)，1.78-1.66(m，1H)，0.90(t，J＝7.5Hz，3H).13C NMR(75MHz，DMSO)：δ169.7，152.1，137.8，136.0，135.9，131.0，128.8，128.3，128.2，127.5，126.6，126.3，111.5，111.1，106.0，101.6，69.8，49.7，49.6，40.3，26.9，21.7，10.7.
实施例1-43、N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉(IBMS043)
采用与制备化合物IBMS042的相似的方法，将丙醛换成乙醛，产率：79％，1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.70(br s，1H)，7.45-7.43(m，2H)，7.38-7.34(m，2H)，7.31-7.15(m，7H)，6.95(dd，J＝2.1，8.7Hz，1H)，6.74(dd，J＝2.4，8.7Hz，1H)，5.54(q，J＝6.6Hz，1H)，5.05(s，2H)，4.13(dd，J＝3.9，13.5Hz，1H)，3.82(s，2H)，3.35-3.26(m，1H)，2.60-2.52(m，1H)，2.42-2.32(m，1H)，1.37(t，J＝6.6Hz，3H).
实施例1-44、N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-羟基-1H-β-咔啉(IBMS044)
取化合物IBMS043(107mg，0.26mmol)悬浮于甲醇(10ml)中，用Pd(10％wt)作为催化剂在氢气环境下进行氢化脱除苄基，最终得到产物IBMS044(71mg，产率：86％)：1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.52(br s，1H)，8.54(br s，1H)，7.32-7.23(m，5H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，6.64-6.63(m，1H)，6.55-6.53(m，1H)，5.57-5.45(m，1H)，4.15-4.09(m，1H)，3.85-3.71(m，1H)，3.31-3.24(m，1H)，2.60-2.51(m，1H)，2.44-2.32(m，1H)，1.37(d，J＝6.9Hz，3H).
实施例1-45、N-苯乙酰基-6-氟-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS045)
将3-(2，3-哌啶二酮)-(4-氟苯基)-腙(754mg，3.41mmol，制备方法参考文献Syn.Comm.2007，37，1273-1280)溶于20ml甲酸中，在80℃下搅拌24小时，减压除去甲酸，常规处理后得灰白色固体1-氧-6-氟-1，3，4，9-四氢-β-咔啉，产率84％。该咔啉中间体经氢化锂铝还原后与苯乙酸偶联得最终产物IBMS045，产率：62％。1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.96(br s，1H)，7.29-7.17(m，6H)，7.13-7.10(m，1H)，6.89-6.83(m，1H)，4.70(s，2H)，3.86-3.81(m，4H)，2.65-2.56(m，2H).
实施例1-46、N-苯乙酰基-6-溴-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉(IBMS046)
采用与制备化合物IBMS002的相似的方法，将3-(2，3-哌啶二酮)-(4-氟苯基)-腙换成3-(2，3-哌啶二酮)-(4-溴苯基)-腙，最后得到化合物IBMS046，产率：62％：1H NMR(300MHz，DMSO)：δ10.84(br s，1H)，7.36-7.23(m，6H)，7.05-7.00(m，1H)，6.97-6.92(m，1H)，4.70(s，2H)，3.86-3.82(m，4H)，2.69-2.59(m，2H).

Claims (20)

1.一种酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，其由下述结构式(I)表示：
其中：
n、m为0-3个CH2；
Figure FDA0000101620530000012
为芳香基或杂环芳香基，包括单环芳香基、多环芳香基、多杂环芳香基；所述单环芳香基包括苯基，氮杂芳香基、硫杂芳香基、氧杂芳香基；
R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环胺基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C12环烷基、苄基、烷基羰基、C2-C12烯基羰基、C3-C12环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R2任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、卤素、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、胺基、烷基羰基和芳香基羰基、吗啉甲基、羟甲基；
R3任意选自下列基团中的一个或多个：氢、烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、氨基、氰基、硝基、卤素；
R4、R5、R6和R7独立选自下列基团中的一个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环烷胺基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8的环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、烷基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C6环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R8任意选自下列基团中的一个或两个：氢、烷基、羟基、羟甲基、氨基、羧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、烷胺基、烷基羰基、芳香基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C8环烷基羰基；
R9任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、羟甲基、烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C3-C8环烯基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷胺基。
2.根据权利要求1所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，当n为1个CH2，R3为氢时，其由下述结构式(II)表示：
Figure FDA0000101620530000021
其中：
m为0-3个CH2；
Figure FDA0000101620530000022
为芳香基或杂环芳香基，包括单环芳香基、多环芳香基、多杂环芳香基；所述单环芳香基包括苯基，氮杂芳香基、硫杂芳香基、氧杂芳香基；
R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环胺基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C12环烷基、苄基、烷基羰基、C2-C12烯基羰基、C3-C12环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R2任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、卤素、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、胺基、烷基羰基和芳香基羰基、吗啉甲基、羟甲基；
R4、R5、R6和R7独立选自下列基团中的一个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环烷胺基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8的环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、烷基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C6环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R8任意选自下列基团中的一个或两个：氢、烷基、羟基、羟甲基、氨基、羧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、烷胺基、烷基羰基、芳香基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C8环烷基羰基；
R9任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、羟甲基、烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C3-C8环烯基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷胺基。
3.根据权利要求1所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，，其特征在于，当n为1个CH2，R3、R8、R9为氢时，其由下述结构式(III)表示：
Figure FDA0000101620530000031
其中：
m为0-3个CH2；
Figure FDA0000101620530000032
为芳香基或杂环芳香基，包括单环芳香基、多环芳香基、多杂环芳香基；所述单环芳香基包括苯基，氮杂芳香基、硫杂芳香基、氧杂芳香基；
R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环胺基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C12环烷基、苄基、烷基羰基、C2-C12烯基羰基、C3-C12环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R2任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、卤素、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、胺基、烷基羰基和芳香基羰基、吗啉甲基、羟甲基；
R4、R5、R6和R7独立选自下列基团中的一个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环烷胺基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8的环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、烷基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C6环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基。
4.根据权利要求1所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，当n为1个CH2，m为0个CH2，R3、R9为氢时，其由下述结构式(IV)表示：
Figure FDA0000101620530000033
其中：
Figure FDA0000101620530000034
为芳香基或杂环芳香基，包括单环芳香基、多环芳香基、多杂环芳香基；所述单环芳香基包括苯基，氮杂芳香基、硫杂芳香基、氧杂芳香基；
R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环胺基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C12环烷基、苄基、烷基羰基、C2-C12烯基羰基、C3-C12环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R2任意选自下列基团中的一个：氢、烷基、卤素、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、胺基、烷基羰基和芳香基羰基、吗啉甲基、羟甲基；
R4、R5、R6和R7为苯环上的取代基，独立选自下列基团中的一个：氢、氨基、氰基、羟基、硝基、卤素、羧基、烷基、烷氧基、胺基、环烷氧基、环烷胺基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8的环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、烷基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C6环烷基羰基、苯基羰基、苄基羰基、烷氧羰基、酯基、亚砜基、砜基、亚磺酰胺基、磺酰胺基；吗啉基；哌嗪基；
R8任意选自下列基团中的一个或两个：氢、烷基、羟基、羟甲基、氨基、羧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、芳香基、杂环芳香基、苄基、苯乙基、苯丙基、烷氧基、烷胺基、烷基羰基、芳香基羰基、C2-C6烯基羰基、C3-C8环烷基羰基。
5.一种根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，包括所述酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物与酸形成的酸加成盐；其中，所述酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，其以放射性、荧光基团或者生物素标记。
7.根据权利要求1所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，其特征在于，包括：
N-(2-噻吩乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(3，4-二羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-吡啶乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-氯苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-胺基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(3-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-N，N-二乙基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-氟苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(1H-四氮唑乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-NHBoc-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-溴甲基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-醛基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-羟基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(3-吗啉基丙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-羧基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-(2-氨基乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯丙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-((3-NHBoc-3-苯基)丙酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(R)-NHBoc-苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(S)-NHBoc-苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(R)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(3-氨基-3-苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(2-(S)-氨基苯基)乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-醛基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-溴甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-羟甲基苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(4-羟基苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-羟基-2-苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-羟基-2，2-二苯基乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(吗啉甲基苯基)-丙酰基))-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-((二乙基氨基)甲基)苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-((2-(4-(1H-1，2，4-三氮唑-1-yl)甲基)苯基)丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
1-苯基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
1-乙基-N-苯乙酰基-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
2-(4-(2-NH-Biotin-乙氧基)-苯乙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-((2-吗啉乙基氨基)甲基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-(2-(4-(2-(2-NHBoc-乙基氨基)乙氧基)苯基)-丙酰基)-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-乙基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-苄氧基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-1-甲基-1，3，4，9-四氢-6-羟基-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-6-氟-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉、
N-苯乙酰基-6-溴-1，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉。
8.一种药物组合物，其中含有权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物被配制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、透皮贴剂或赋形剂。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物、水合物或药学上可接受的盐在抑制肿瘤细胞增殖、生长、迁移和浸润的应用；其中，所述肿瘤细胞包括肺癌细胞、乳腺癌细胞、表皮癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、前列腺癌细胞。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物在制备治疗恶性肿瘤的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、口腔癌。
12.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗恶性肿瘤转移与复发的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、皮肤癌、口腔癌。
13.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗响应于EGF受体调节的肿瘤发生、发展和转移的疾病的药物中的应用。
14.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备用于治疗响应于TGFβ受体调节的疾病的药物中的应用；其中，所述疾病包括肿瘤、糖尿病、肾小球肾炎、肾小球硬化、多种纤维化疾病、骨关节炎、骨质疏松。
15.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备抗肿瘤治疗药物中的应用，其特征在于，所述药物用于诱发获得性耐药导致化疗失败后的抗肿瘤治疗。
16.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗溶骨性骨损伤药物中的应用。
17.根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤引起的肺功能衰竭的药物中的应用。
18.根据权利要求11-17中任一项所述的应用，其特征在于，所述药物单独使用或与其他药物联合使用。
19.一种根据权利要求1-4中任一项所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物或其水合物或药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述方法以取代四氢-β-咔啉类化合物或其衍生物为原料，在偶联试剂或碱存在的前提下和酸、酸酐或酰卤发生偶联反应，得到所述的酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物；或者所述方法以卤代酰基四氢-β-咔啉为原料，经过钯催化偶联的方法进一步衍生化得到所述酰基四氢-β-咔啉类小分子有机化合物的衍生物。
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，包括：
如反应式(1)所示的方法一
其中，取代四氢-β-咔啉类化合物或其衍生物1和酸、酸酐或者酰卤在偶联试剂或者碱存在的前提下通过偶联方法反应得到产物2，加入碱和卤代物对所述产物2吲哚上的氮原子进行烷基化等得到产物3；其中，所述碱包括三乙胺、碳酸钾、吡啶、DMAP；
如反应式(2)所示的方法二
Figure FDA0000101620530000072
其中，取代的色胺或其衍生物4和取代醛进行Pictet-Spengler环化反应生成产物5，再通过偶联方法反应得到产物6和7；
如反应式(3)所示的方法三
Figure FDA0000101620530000081
其中，以芳环肼8为原料，通过与保护的胺基醛作用生成化合物9，再通过偶联方法制备杂环取代的产物10；
如反应式(4)所示的方法四
其中，取代苯胺在酸的作用下发生重氮化反应生成重氮盐，与取代的2-哌啶酮-3-甲酸钠偶联生成中间体12，然后在酸的作用下关环生成化合物13，再经还原、偶联反应得到产物14；
如反应式(5)所示的方法五
Figure FDA0000101620530000083
其中，通过钯催化偶联方法将取代的溴取代-四氢-β-咔啉或其衍生物转变为芳香基或杂芳香基取代的产物15。
CN201110326410.1A 2011-10-24 2011-10-24 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法 Active CN102424681B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110326410.1A CN102424681B (zh) 2011-10-24 2011-10-24 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法
PCT/CN2012/079841 WO2013060179A1 (zh) 2011-10-24 2012-08-08 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110326410.1A CN102424681B (zh) 2011-10-24 2011-10-24 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102424681A true CN102424681A (zh) 2012-04-25
CN102424681B CN102424681B (zh) 2014-10-15

Family

ID=45958716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110326410.1A Active CN102424681B (zh) 2011-10-24 2011-10-24 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN102424681B (zh)
WO (1) WO2013060179A1 (zh)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102977091A (zh) * 2012-11-06 2013-03-20 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗代谢性疾病中的应用
CN102977092A (zh) * 2012-11-06 2013-03-20 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗恶性肿瘤中的应用
CN105669666A (zh) * 2016-01-08 2016-06-15 华东师范大学 小分子化合物yf-452及其在制备抗血管新生药物中的应用
CN108727370A (zh) * 2018-05-25 2018-11-02 华东师范大学 一类羟基取代的四氢-β-咔啉类小分子有机化合物及其衍生物和医药用途
CN109453168A (zh) * 2018-12-25 2019-03-12 南京盖斯夫医药科技有限公司 一种四氢-β-咔啉衍生物的抗口腔癌用途
CN110025616A (zh) * 2018-12-29 2019-07-19 华东师范大学 一类苯乙酰基四氢-β-咔啉类小分子化合物及其应用
CN110582279A (zh) * 2017-03-21 2019-12-17 杭州领业医药科技有限公司 2-(6-甲基-吡啶-2-基)-3-基-[6-酰胺基-喹啉-4-基]-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑的共晶，其制备方法和药物组合物
CN111808100A (zh) * 2020-07-29 2020-10-23 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种吲哚类生物碱化合物及其制备方法和应用
CN114591323A (zh) * 2022-03-17 2022-06-07 济南大学 一类含有四氢咔啉结构的异羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其制备方法与用途
CN115521306A (zh) * 2022-09-26 2022-12-27 贵州大学 一种1,2,3,4-四氢-β-咔啉衍生物及其制备方法和应用
CN115806555A (zh) * 2021-09-16 2023-03-17 南开大学 Indoloazepinone衍生物及其制备和在防治植物病毒、杀虫、杀菌的应用
CN116199687A (zh) * 2023-03-10 2023-06-02 石河子大学 一种β-咔啉-3位连接1,2,3-三氮唑类化合物及其制备方法、应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101248046A (zh) * 2005-07-11 2008-08-20 德福根有限公司 作为激酶抑制剂的酰胺衍生物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2005222632B2 (en) * 2004-03-15 2012-02-09 Ptc Therapeutics, Inc. Carboline derivatives useful in the inhibition of angiogenesis
US20080103164A1 (en) * 2004-08-02 2008-05-01 Kristjan Gudmundsson Useful compounds for hpv infection

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101248046A (zh) * 2005-07-11 2008-08-20 德福根有限公司 作为激酶抑制剂的酰胺衍生物

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《Archiv der Pharmazie (Weinheim, Germany)》 19780131 Rehse, Klaus等 Dopamine analogous 1,2,3,4-tetrahydro-beta-carbolines CA摘要 1-4，7 第311卷, 第1期 *
《Archiv der Pharmazie (Weinheim, Germany)》 19780331 Rehse, Klaus等 Neuropsychotropic activity of reserpine analogs, 1,2,3,4-tetrahydro-beta-carbolines CA摘要 1-4，7 第311卷, 第3期 *
《Archiv der Pharmazie (Weinheim, Germany)》 19790731 Rehse, Klaus等 Neuropsychotropic activity of the dopamine-analogous 1,2,3,4-tetrahydro-beta-carbolines. Part 2. Alteration of activity by substituents CA摘要 1-4，7 第312卷, 第7期 *
AUBRY, CARINE等: "Design, synthesis and biological activity of new CDK4-specific inhibitors, based on fascaplysin", 《ORGANIC & BIOMOLECULAR CHEMISTRY》 *
BUSSOLARI, JACQUELINE C.等: "Parallel synthesis of 2-alkoxy- and 2-acyloxyphenylpropyl amides and amines using dihydrocoumarins as versatile synthons. Application of a novel resin quench-capture method", 《TETRAHEDRON LETTERS》 *
REHSE, KLAUS等: "Dopamine analogous 1,2,3,4-tetrahydro-β-carbolines", 《ARCHIV DER PHARMAZIE (WEINHEIM, GERMANY)》 *
REHSE, KLAUS等: "Neuropsychotropic activity of reserpine analogs, 1,2,3,4-tetrahydro-β-carbolines", 《ARCHIV DER PHARMAZIE (WEINHEIM, GERMANY)》 *
REHSE, KLAUS等: "Neuropsychotropic activity of the dopamine-analogous 1,2,3,4-tetrahydro-β-carbolines. Part 2. Alteration of activity by substituents", 《ARCHIV DER PHARMAZIE (WEINHEIM, GERMANY)》 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102977091A (zh) * 2012-11-06 2013-03-20 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗代谢性疾病中的应用
CN102977092A (zh) * 2012-11-06 2013-03-20 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗恶性肿瘤中的应用
CN102977092B (zh) * 2012-11-06 2016-02-24 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗恶性肿瘤中的应用
CN102977091B (zh) * 2012-11-06 2016-03-09 华东师范大学 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗代谢性疾病中的应用
CN105669666A (zh) * 2016-01-08 2016-06-15 华东师范大学 小分子化合物yf-452及其在制备抗血管新生药物中的应用
CN110582279A (zh) * 2017-03-21 2019-12-17 杭州领业医药科技有限公司 2-(6-甲基-吡啶-2-基)-3-基-[6-酰胺基-喹啉-4-基]-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑的共晶，其制备方法和药物组合物
CN110582279B (zh) * 2017-03-21 2023-07-14 杭州领业医药科技有限公司 2-(6-甲基-吡啶-2-基)-3-基-[6-酰胺基-喹啉-4-基]-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑的共晶，其制备方法和药物组合物
CN108727370A (zh) * 2018-05-25 2018-11-02 华东师范大学 一类羟基取代的四氢-β-咔啉类小分子有机化合物及其衍生物和医药用途
CN109453168A (zh) * 2018-12-25 2019-03-12 南京盖斯夫医药科技有限公司 一种四氢-β-咔啉衍生物的抗口腔癌用途
CN110025616A (zh) * 2018-12-29 2019-07-19 华东师范大学 一类苯乙酰基四氢-β-咔啉类小分子化合物及其应用
CN111808100A (zh) * 2020-07-29 2020-10-23 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种吲哚类生物碱化合物及其制备方法和应用
WO2022021683A1 (zh) * 2020-07-29 2022-02-03 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种吲哚类生物碱化合物及其制备方法和应用
CN115806555A (zh) * 2021-09-16 2023-03-17 南开大学 Indoloazepinone衍生物及其制备和在防治植物病毒、杀虫、杀菌的应用
CN115806555B (zh) * 2021-09-16 2024-05-28 南开大学 Indoloazepinone衍生物及其制备和在防治植物病毒、杀虫、杀菌的应用
CN114591323A (zh) * 2022-03-17 2022-06-07 济南大学 一类含有四氢咔啉结构的异羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其制备方法与用途
CN115521306A (zh) * 2022-09-26 2022-12-27 贵州大学 一种1,2,3,4-四氢-β-咔啉衍生物及其制备方法和应用
CN115521306B (zh) * 2022-09-26 2024-03-26 贵州大学 一种1,2,3,4-四氢-β-咔啉衍生物及其制备方法和应用
CN116199687A (zh) * 2023-03-10 2023-06-02 石河子大学 一种β-咔啉-3位连接1,2,3-三氮唑类化合物及其制备方法、应用
CN116199687B (zh) * 2023-03-10 2024-04-19 石河子大学 一种β-咔啉-3位连接1,2,3-三氮唑类化合物及其制备方法、应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN102424681B (zh) 2014-10-15
WO2013060179A1 (zh) 2013-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102424681B (zh) 酰基四氢-β-咔啉类化合物及其衍生物、用途及其制备方法
ES2299434T3 (es) Inhibidores de kinasa utilizados como agentes terapeuticos.
CN110172051B (zh) IRE-1α抑制剂
KR101760651B1 (ko) 피롤일 치환된 다이하이드로인돌 2 온 유도체, 그의 제조 방법 및 용도
CN110099900B (zh) 针对Smoothened突变株的刺猬通路抑制剂
CN102653526B (zh) 2,3-二芳香基噻唑啉酮类化合物及其在制备治疗肿瘤药物中的用途
WO2021088265A1 (zh) 咪唑并吡啶类化合物、包含该化合物的药物组合物及其制备方法和用途
PT2588457E (pt) Derivados de pirazoloquinolinas como inibidores de dna-pk
CN108191885A (zh) 一类哌啶并噻吩类小分子有机化合物及其应用
CN104829596B (zh) 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
WO2021115489A1 (en) Novel heterocyclic derivatives with cardiomyocyte proliferation activity for treatment of heart diseases
KR20200054096A (ko) Yap-tead 결합을 저해하는 화합물 및 이를 유효 성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
CN107056755A (zh) 五元杂环酰胺类wnt通路抑制剂
CN107151233B (zh) 含腙的嘧啶类衍生物及其用途
Song et al. Synthesis of selective PAK4 inhibitors for lung metastasis of lung cancer and melanoma cells
CN102977092B (zh) 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗恶性肿瘤中的应用
JP2021509399A (ja) インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤およびその調製方法と使用
CN112521336B (zh) 一种吲唑类、吡咯并吡啶类化合物及其应用
CN108456214B (zh) 含噁唑或咪唑结构的喹唑啉类化合物及其应用
CN108727370A (zh) 一类羟基取代的四氢-β-咔啉类小分子有机化合物及其衍生物和医药用途
CN104817553B (zh) 一种芳香基-杂环取代的嘧啶二胺类化合物及其衍生物及其医药用途
CN110577546B (zh) Vegfr抑制剂及其制备方法和应用
CN102977091B (zh) 芳香烷酰基四氢-β-咔啉及其衍生物在治疗代谢性疾病中的应用
CN106831747A (zh) 五元杂环取代的n-烷基酰胺类wnt通路抑制剂
CN104447608B (zh) 含有噻唑啉酮结构的异羟肟酸类小分子有机化合物及其衍生物、用途及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20160226

Address after: 201100. A2114, building B, building 555, Dongchuan Road, Minhang District, Shanghai

Patentee after: BIORAY LABORATORIES Inc.

Address before: 200062 Putuo District, Zhongshan North Road, No. 3663,

Patentee before: East China Normal University

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: Acyl tetrahydrogen- b- Carboline compounds and their derivatives, uses and preparation methods

Effective date of registration: 20211228

Granted publication date: 20141015

Pledgee: Minhang Branch of Shanghai Rural Commercial Bank Co.,Ltd.

Pledgor: BIORAY LABORATORIES Inc.

Registration number: Y2021310000165

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right

Date of cancellation: 20220826

Granted publication date: 20141015

Pledgee: Minhang Branch of Shanghai Rural Commercial Bank Co.,Ltd.

Pledgor: BIORAY LABORATORIES Inc.

Registration number: Y2021310000165

PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right