CN102391279A - 3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯，含其的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

如下结构式所示的3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯，具有C-3和C-4位开裂的新颖骨架且对人白血病细胞株HL-60、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株A549具有广谱高效抑制活性，以其为治疗有效量的药物组合物，它们在制备治疗癌症的药物中的应用，及其制备方法。

Description

3,4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯,含其的药物组合物及其制备方法和应用

所属领域：

本发明属于药物化合物领域，具体地，涉及从大三叶升麻(C.heracleifolia)根茎中分离提取的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯即KSY 17，其在制备抗癌的药物中的应用，含其的药物组合物及其制备方法。

技术背景：

升麻是我国著名的常用中药，地下根茎入药，其药用功效为清热解毒、升举阳气和发表透疹。民间主治头痛、牙痛、咽喉痛、麻疹及子宫脱垂等妇科疾病。在我国，升麻的药用价值早在《神农本草经》中就有记载，并被列为“上品”药材。在国内升麻属植物：绿升麻(Cimicifuga foetida L.)、兴安升麻(Cimicifuga dahurica Maxim)和大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia Kom)的根茎均作为中药升麻载入《中华人民共和国药典》2010版。同属植物黑升麻(Cimicifugaracemosa L.)，又称蛇根草，在欧美国家也有很长的使用历史。印地安人饮用煎煮的黑升麻药汁解除疲劳，治疗喉痛、关节炎与毒蛇咬伤等症，同时也用于治疗一些妇科疾病，并在1820-1926年被收入到美国药典。英国也将黑升麻载入英国草药典，1749年Linnaeus将黑升麻收入《Materia Medica》，20世纪初成为顺势疗法的主要药物之一。

升麻属植物的化学成分和药理活性一直是国内外研究热点。近十年来从其中分离得到三萜及其苷类、苯丙素类、色酮及其他类型化合物200多个。国际上对升麻中化学成分的研究主要集中在其环阿尔廷烷三萜类成份上，对其药理活性研究则以类雌激素、抗骨质疏松为主。在德国、日本、美国等发达国家都分别开发出了治疗更年期综合症和骨质疏松症的药物。与国际上研究的热点不同，为了拓展升麻三萜化合物研究的新领域，充分利用我国升麻属植物资源，开发其新用途。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种现有技术中未见报道的具有C-3和C-4位开裂的新颖骨架且对人白血病细胞株HL-60、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株A549具有广谱高效抑制活性的升麻三萜类化合物KSY 17即3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯(methyl3，4-seco-4-hydroxy-3-cimigenolate)，以其为活性成分的药物组合物，其制备方法和其在制备治疗癌症的药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

如下结构式所示的3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐，

药物组合物，含有治疗有效量的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐在制备治疗癌症的药物中的应用。

化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐在制备治疗白血病、肝癌、肺癌的药物中的应用。

制备化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯的方法，取干燥的大三叶升麻根茎，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3-4次，每次1-2天，合并提取液，减压浓缩至无甲醇蒸出，得到浸膏，浸膏用一定量的蒸馏水稀释后，用石油醚萃取3-4次，减压回收石油醚后，得到石油醚萃取部分；剩下的水层用乙酸乙酯萃取4-5次，减压回收后得到富集三萜类化合物的乙酸乙酯萃取部分，经常压硅胶柱上柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱进行粗分，用TLC检测，得到4-6个部分.50∶1氯仿-甲醇部分再用氯仿-丙酮梯度洗脱，得到3-4个部分.20∶1氯仿-丙酮部分再经过减压反相RP-18柱层析，用甲醇-水梯度洗脱得到3-4个部分，75∶25甲醇-水部分在常压硅胶上柱层析，用15∶1氯仿-丙酮洗脱后经60％→90％乙氰HPLC反复分离得化合物。

所述的制备化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯的方法，取干燥的大三叶升麻根茎，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3次，每次一天，每次用甲醇3升，合并提取液，减压蒸馏除去大部分甲醇后得浸膏，用200-300目硅胶胶层析，1∶0→0∶1的氯仿∶甲醇梯度洗脱，TLC检测合并相同的部分，得到5个组分I-V，取组分II即50∶1氯仿∶甲醇洗脱部分，经60％→100％的MeOH的RP-18梯度洗脱分为5个极性部分Fr.2.1-2.5，Fr.2.4部分用硅胶柱层析，20∶1的氯仿∶丙酮洗脱后经60％→90％乙氰的HPLC反复分离即得。

所述的药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸如酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。

本发明的上述的药物组合物，作为适宜口服或注射给药的制剂形式。

本发明的上述的药物组合物，所述的口服给药的制剂形式为片剂、缓释片、控释片、锭剂、硬或软胶囊、滴丸、微丸、水性或油混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、口服溶液、糖浆剂或酏剂，所述的注射给药的制剂形式为灭菌的水性或油性溶液、无菌粉末、脂质体、乳剂、微乳剂、纳米乳剂或微囊。

本发明化合物KSY 17的制备方法可具体描述如下：

从大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia K)的根茎，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3-4次，每次1-2天，合并提取液，减压浓缩至无甲醇蒸出，得到浸膏。浸膏用一定量的蒸馏水稀释后，用石油醚萃取3-4次，减压回收石油醚后，得到石油醚萃取部分；剩下的水层用乙酸乙酯萃取4-5次，减压回收后得到富集三萜类化合物的乙酸乙酯萃取部分。乙酸乙酯部分经常压硅胶柱上柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱进行粗分，用TLC检测，得到4-6个部分.氯仿-甲醇(50∶1)部分再用氯仿-丙酮梯度洗脱，得到3-4个部分.氯仿-丙酮(20∶1)部分再经过减压反相(RP-18)柱层析，用甲醇-水梯度洗脱得到3-4个部分。甲醇-水(75∶25)部分在常压硅胶上柱层析，用氯仿-丙酮(15∶1)洗脱后经HPLC(60％→90％乙氰)反复分离得到化合物得到KSY 17。

KSY 17是本申请人从辽宁省清远县采集的大三叶升麻(C.heracleifolia)的根茎中首次分离得到的一个具有C-3和C-4位开裂的新颖骨架且对人白血病细胞株HL-60、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株A549具有广谱高效抑制活性的升麻三萜类化合物。KSY 17的名称为3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯(methyl3，4-seco-4-hydroxy-3-cimigenolate)。

本发明的化合物KSY 17的名称为3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯(methyl 3，4-seco-4-hydroxy-3-cimigenolate)或其盐可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天1-1000mg比较合适。

KSY 17可以作为适宜口服或非肠道给药(例如经静脉内、皮下或肌肉内给药)的制剂形式。所述的口服给药的制剂形式为片剂、缓释片、控释片、锭剂、硬或软胶囊、水性或油混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂、滴丸、微丸或口服溶液，所述的非肠道给药的制剂形式为灭菌的水性或油性溶液、无菌粉末、脂质体、乳剂、微乳剂、纳米乳剂或微囊。

本发明的药物组合物可以通过常规方法，利用本领域熟知的常规药物赋形剂来获得。所以，用于口服使用的组合物可以含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。

用于片剂制剂的适宜的可药用赋形剂包括例如，惰性稀释剂例如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；制粒和崩解剂例如玉米淀粉和藻酸；粘合剂例如淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯，和抗氧剂，例如抗坏血酸。片剂制剂可以是未包衣的，也可以采用包衣以改变其崩解作用以及活性成分在胃肠道内的后续吸收作用，或改进其稳定性和/或外观，在任意情况中，均可使用该领域熟知的常规包衣剂和方法。

口服使用的组合物可以是硬明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或是软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

水性混悬剂一般含有微粉形式的活性成分和一种或多种助悬剂，所述助悬剂例如为羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散或湿润剂，例如卵磷脂或烯基氧化物与脂肪酸的缩合物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七氧化亚乙基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧化乙烯山梨糖醇一油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧剂(例如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂、和/或甜味剂(例如蔗糖，糖精和天冬酰苯丙氨酸甲酯)。

可通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。油性混悬剂也可含有增稠剂例如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。可以加入如上所述的甜味剂和矫味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧剂例如抗坏血酸来防腐。

适合通过加入水制成水性混悬剂的可分散的散剂和颗粒剂一般含有活性成分和分散剂或湿润剂、助悬剂和一种或多种防腐剂。适当的分散或湿润剂和助悬剂如上所述。也存在另外的赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。

本发明药物组合物也可以采用水包油的乳剂的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或者矿物油，例如液体石蜡或者它们的混合物。适当的乳化剂可以是例如，天然树胶例如阿拉伯胶或西黄芪胶，天然磷脂例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇一油酸酯)，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧化乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。乳剂也可含有甜味剂、矫味剂和防腐剂。

糖浆剂和酏剂可与甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、阿司帕坦或蔗糖)配制，并且也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。

所述药物组合物还可以采用注射用无菌水性或油性混悬剂的形式，其可以按照已知方法利用一种或多种适宜的分散或湿润剂和助悬剂来配制，这些试剂如上所述。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的注射用无菌水性或油性混悬剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液。

有关制剂的其他信息可参考Comprehensive Medicinal Chemistry的第5卷，25.2章(Corwin Hanschl；Chairman of Editorial Board)，PergamonPress 1990。

可以根据被治疗宿主和具体给药途径的不同，来确定与一种或多种赋形剂混合以制备单一剂量形式活性成分的量。例如，用于对人口服给药的制剂一般含有例如0.5mg-2g的活性剂以及适当的和常规量的赋形剂(约占组合物总重的5-98％)。单位制剂中一般约含有1mg-500mg的活性成分。有关给药途径和给药方案的进一步信息可参考ComprehensiveMedicinal Chemistry的第5卷，25.3章(Corwin Hanschl；Chairman of Editorial Board)，Pergamon Press 1990。

供治疗或预防目的的KSY 17化合物的给药量，应根据病症的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别和给药途径，按照药物的已知原理来改变。

在基于治疗或预防目的使用KSY 17化合物时，一般是以日剂量在例如0.001mg-100mg/kg体重的范围内给药，如有需要可以分剂量给药。通常，以肠胃外途径给药时采用较低剂量，例如经静脉内给药时，一般采用例如0.001mg-10mg/kg体重范围内的剂量。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

KSY 17即3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯(methyl3，4-seco-4-hydroxy-3-cimigenolate)的制备：

1、植物材料与特征：

大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia K.主要分布于我国辽宁、吉林及黑龙江，生山坡草丛或灌木丛中，在朝鲜和俄罗斯远东地区也有分布。为多年生草本植物，根茎粗壮，表面黑色，有许多下陷圆洞状的老茎残痕。茎高1米或更高，下部微聚槽，无毛。下部的茎叶为二回三出复叶，无毛；顶生小叶倒卵形至倒卵状椭圆形，顶端三浅裂，基部圆形、圆楔形或微心形，边缘有粗齿，侧生小叶通常斜卵形，比顶生小叶为小，无毛，或背面沿脉疏被白色柔毛；茎上部通常为一回三出复叶。花序具2-9条分支，分枝和花序轴所成的角度通常小于45°；苞片钻形，长约1毫米；花梗长2-4毫米；萼片黄白色，倒卵形至宽椭圆形，长3-4毫米，宽2.5-3毫米；退化雄蕊椭圆形，长2.4-4毫米，宽1.6-2毫米，顶部白色，近膜质，通常全缘；花丝丝形，长3-6毫米；心皮3-5枚，有短柄，无毛；蓇葖长5-6毫米，宽3-4毫米，下部有长约1毫米的细柄；种子通常2粒，长约3毫米，四周生膜质鳞翅。8-9月开花，9-10月结果。

2、制备：

2006年9月从辽宁省清远县采集大三叶升麻(Cimicifugaheracleifolia K)根茎1.0Kg，植物种名由昆明植物研究所王宗玉副研究员鉴定，生药标本存放于中国科学院昆明植物所植物化学和西部植物资源持续利用国家重点实验室(KUN No.200609004)。

取干燥的大三叶升麻根茎1.0kg，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3次，每次一天，每次用甲醇3升左右，提取液合并，减压蒸馏除去大部分甲醇后得浸膏116g。

总浸膏用200g硅胶(200-300目)拌样，1.0kg硅胶(200-300目)进行硅胶层析，氯仿∶甲醇(1∶0→0∶1)梯度洗脱，TLC检测合并相同的部分，得到5个组分：I-V，组分I为氯仿洗脱的部分，TLC检测后见其中主要是脂肪酸类物质，未作进一步分离。

组分II：氯仿∶甲醇(50∶1)洗脱部分(11.1g)，经RP-18(60％→100％的MeOH)梯度洗脱分为5个极性部分Fr2.1-2.5。Fr2.4(1.1g)用3g硅胶拌样，30g硅胶柱层析，氯仿∶丙酮(20∶1)洗脱后经HPLC(60％→90％乙氰)反复分离得到化合物KSY 17(0.8mg)。

3、化合物KSY 17的结构表征：

化合物KSY 17，C₃₁H₅₀O₇，白色粉末，[α]²⁰ _D＝19.87(c 0.05，MeOH)，高分辨质谱(HRTOF-ESIMS)(m/z：)569.3236[M+Cl]^-计算值(C₃₁H₅₀O₇Cl，569.3245)

核磁共振氢谱数据δ_H(ppm，C₅D₅N，500MHz)：4.55(1H，d，J＝8.5Hz，15-H)，3.58(3H，s，3-OCH₃)，3.27(1H，m)1.65(1H，m)(1-H)，3.12(1H，m)2.47(1H，m)(2-H)，2.35(1H，m)1.27(1H，overlapped)(11-H)，2.09(1H，m)1.08(1H，m)(7-H)，1.68(1H，m)1.54(1H，m)(12-H)，1.68(1H，m)0.71(1H，m)(6-H)，1.65(1H，m，20-H)，1.61(1H，m，8-H)，1.59(1H，m，5-H)，1.51(1H，brd，J＝11.0Hz，17-H)，0.83(1H，J＝4.0Hz)0.59(1H，d，J＝4.0Hz)(19-H)，1.16(3H，s，18-H)，0.85(3H，d，J＝6.5Hz，21-H)，1.48(3H，s，26-H)，1.46(3H，s，27-H)，1.26(3H，s，28-H)，1.37(3H，s，29-H)，1.37(3H，s，30-H)。

核磁共振碳谱数据δc(ppm，C₅D₅N，600MHz)：175.3(s，3-C)，112.5(s，16-C)，90.7(d，24-C)，81.2(d，15-C)，75.6(s，4-C)，72.3(d，23-C)，71.5(s，25-C)，60.2(d，17-C)，51.8(q，3-OCH₃)，49.5(d，8-C)，47.9(s，14-C)，46.2(d，5-C)，41.9(s，13-C)，38.5(t，22-C)，34.7(t，12-C)，32.9(t，19-C)，32.9(t，2-C)，31.4(t，1-C)，27.0(t，11-C)，26.5(t，7-C)，26.7(s，10-C)，25.8(t，6-C)，24.5(d，20-C)，23.2(s，9-C)，20.3(q，18-C)，19.9(q，21-C)，27.7(q，26-C)，25.9(q，27-C)，12.5(q，28-C)，32.5(q，29-C)，26.8(q，30-C)。

红外光谱数据IR(KBr)v_max：3403，2965，2828，1741，1456，1380，1023，978em^-1。

4、KYY 17的化学结构：

KYY 17的名称为：3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯(methyl3，4-seco-4-hydroxy-3-cimigenolate)。

化合物KYY 17是新颖的C-3和C-4开裂的环阿尔廷烷型三萜类化合物，该类成分是首次在升麻属植物中分离得到。化合物KYY 17显示出了对人白血病细胞株HL-60、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株A549广谱高效的抑制活性，可作开发光谱的治疗抗肿瘤药品的前提化合物。

实施例2：

化合物KSY 17的抗肿瘤活性：

表-1化合物KSY 17的细胞毒生物生物活性(IC₅₀ in μM)

从表1中数据可以看出：在人白血病(HL-60)、肝癌(SMMC-7721)、肺癌(A549)细胞株上进行抗肿瘤活性筛选时，化合物KSY 17显示出了广谱高效的细胞毒活性：对HL-60细胞株的抑制活性与阳性对照物顺铂相当，IC₅₀值为0.83μM；而对SMMC-7721和A549细胞株的抑制活性都比顺铂强10倍以上，IC₅₀值分别为2.59和1.41μM，活性突出。这个化合物具有很好的广谱的抗肿瘤生物活性，在治疗肿瘤药物开发及其利用的有着广阔的前景。

本发明采用体外抗肿瘤细胞毒性的生物活性测定方法为：

抗肿瘤药物筛选的细胞系培养于含5％胎牛血清，2m M L-谷氨酸的RPMI 1640培养基中。一个典型的筛选过程如下：于96孔板中每孔加入100μl密度为5×10⁴-4×10⁵/ml的细胞。细胞密度的选择依赖于细胞传代的时间即由一个细胞变为两个细胞所需要的时间。然后置于37℃，5％CO₂，95％空气，100％相对湿度环境下培养24小时。24小时后，每个细胞系取两块板，用含TCA的situ固定，以测定药物加入前的细胞数(Tz)。待测药物用DMSO溶解，终浓度为所需浓度的400倍，冷冻保存。按所需取出药物，融化，用含50μg/ml庆大霉素的完全培养基稀释至浓度为所需最大浓度的2倍。除4倍梯度稀释外，也采用10倍或者1/2log梯度稀释药物。每个药物5个梯度，设对照。然后向含细胞的孔中每孔加入稀释好的药物100μl，那么药物浓度为所需浓度。

加药后，37℃，5％CO₂，95％空气，100％相对湿度环境下培养48小时。对于贴壁细胞，通过加入冰冷的TCA杀死细胞。具体操作如下：逐滴加入50μl含50％(w/v)TCA(重浓度10％TCA)，4℃，放置60分钟，固定细胞，去上清，逐滴加入水，洗涤5次，空气中干燥。每孔加入100μl 0.4％(w/v且用1％乙酸稀释)，室温孵育10分钟。染色结束后用1％乙酸洗涤5次，除去未结合的染料，空气中干燥。结合的染料用10Mm trizma base溶解。自动读板仪测定光吸收(515nm)。对于悬浮细胞，杀死细胞时逐滴加入50μl 80％TCA(终浓度16％)，将细胞固定于板底，其余步骤与贴壁细胞相同。用7个光吸收值(加入药物前的：T_Z；对照：C；五个药物浓度：Ti；)，可以计算各个药物浓度下细胞的生长水平。

药物对肿瘤细胞生长抑制的计算如下：

当Ti≥Tz时，在药物浓度i的生长抑制率为：[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100；

当Ti≤Tz时，在药物浓度i的生长抑制率为：[(Ti-Tz)/Tz]×100；

反映量效的三个参数的计算如下：

GI₅₀(生长抑制50％)可由[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100＝50计算得出。其反映药物导致试验组蛋白增加比对照组增加减少50％时的药物浓度。

TGI(生长完全抑制)可由Ti＝Tz计算得出。

LC₅₀(导致药物处理后蛋白的含量比处理前减少50％的药物浓度)，显示处理后细胞的净损失，其可以由[(Ti-Tz)/Tz]×100＝50计算得出。如果活性达到一定水平的话，可以计算出这三个参数值。如果活性太低或者太高，参数的值可以用大于或者小于最大或者最小的试验浓度来表示。

实施例3：

注射液制剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例4：

粉针剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

实施例5：

粉剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9∶1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例6：

片剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为1∶5-1∶10的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例7：

口服液制剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。

实施例8：

胶囊剂、颗粒剂、或冲剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为5∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

实施例9：

胶囊剂、颗粒剂、或冲剂的制备：

按实施例1的方法先制得KSY 17，按其与赋形剂重量比为3∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

Claims (9)

1.如下结构式所示的3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐，

2.药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐在制备治疗癌症的药物中的应用。

4.权利要求1所述的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯或其药学上可接受的盐在制备治疗白血病、肝癌、肺癌的药物中的应用。

5.制备权利要求1所述的化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯的方法，取干燥的大三叶升麻根茎，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3-4次，每次1-2天，合并提取液，减压浓缩至无甲醇蒸出，得到浸膏，浸膏用一定量的蒸馏水稀释后，用石油醚萃取3-4次，减压回收石油醚后，得到石油醚萃取部分；剩下的水层用乙酸乙酯萃取4-5次，减压回收后得到富集三萜类化合物的乙酸乙酯萃取部分，经常压硅胶柱上柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱进行粗分，用TLC检测，得到4-6个部分.50∶1氯仿-甲醇部分再用氯仿-丙酮梯度洗脱，得到3-4个部分.20∶1氯仿-丙酮部分再经过减压反相RP-18柱层析，用甲醇-水梯度洗脱得到3-4个部分，75∶25甲醇-水部分在常压硅胶上柱层析，用15∶1氯仿-丙酮洗脱后经60％→90％乙氰HPLC反复分离得化合物。

6.如权利要求5所述的制备化合物3，4-裂-4-羟基-3-升麻酸甲酯的方法，其特征在于取干燥的大三叶升麻根茎，粉碎后用甲醇溶液70℃回流提取3次，每次一天，每次用甲醇3升，合并提取液，减压蒸馏除去大部分甲醇后得浸膏，用200-300目硅胶胶层析，1∶0→0∶1的氯仿∶甲醇梯度洗脱，TLC检测合并相同的部分，得到5个组分I-V，取组分II即50∶1氯仿∶甲醇洗脱部分，经60％→100％的MeOH的RP-18梯度洗脱分为5个极性部分Fr.2.1-2.5，Fr.2.4部分用硅胶柱层析，20∶1的氯仿∶丙酮洗脱后经60％→90％乙氰的HPLC反复分离即得。

7.如权利要求1-4所述的药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸如酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。

8.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于作为适宜口服或注射给药的制剂形式。

9.根据权利要求9的药物组合物，所述的口服给药的制剂形式为片剂、缓释片、控释片、锭剂、硬或软胶囊、滴丸、微丸、水性或油混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、口服溶液、糖浆剂或酏剂，所述的注射给药的制剂形式为灭菌的水性或油性溶液、无菌粉末、脂质体、乳剂、微乳剂、纳米乳剂或微囊。