CN113214154B - 三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与用途 - Google Patents

三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与用途，属于医药领域，具体涉及从蝙蝠葛中获得的一组三聚苄基异喹啉生物碱，分别是化合物：menidaurine E、menidaurine F、menidaurine G和menidaurine H。这些化合物具有显著的抗肿瘤和抗炎活性；对多种肿瘤细胞株显示强烈的抑制作用。本发明还涉及含有有效剂量化合物和药学上可接受的载体的药物组合物，及其在肿瘤和免疫疾病治疗领域的应用。

Description

三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与用途
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一组具有强生物活性的三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与在制备抗肿瘤药物或预防或治疗免疫疾病药物中的用途。
背景技术
恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一。根据数据统计，我国2015年新发肿瘤病例429.2万例，肿瘤致死病例281.4万例。化学疗法是治疗癌症的主要手段之一，包括烃基化剂、抗代谢药物、抗生素类、植物生物碱、固醇激素类及其他抗癌药物。
从天然产物中寻找抗癌活性成分并进行新药研制是创制全新结构抗肿瘤药物的重要途径，在已发现的天然抗肿瘤活性成分中，相当一部分是从有毒药用植物资源中获得的。有毒药用植物是一类特殊的生物资源，既有其毒性的一面，又有其治疗作用的一面，用之不当会发生毒副反应，而正确使用又往往能快速、有效的治疗多种危重疾病。国际上已从有毒植物中发现具有强烈活性且结构奇特的天然产物，其中一些活性天然产物直接或通过结构修饰已开发成新药如长春新碱、紫杉醇、拓扑替康、伊立替康等。尤其需要指出的是近十年在进行临床试验28种来源于植物的抗肿瘤新药中，有24种来源于有毒植物[1]；而另一些毒素可作探针，通过作用机制研究，发现新靶标。我国有毒植物有943种，分属101个科[2]。在900余种有毒植物中有500余种为药用植物[3]。截至到目前，在500余种有毒药用植物中进行过深入的化学、药理和毒理研究的不到30％。
蝙蝠葛植物概述
蝙蝠葛(Menispermum dauricum DC.)系防己科(Menispermaceae)蝙蝠葛属(Menispermum Linn.)植物，又名蝙蝠藤、苦豆根、黄条香、野豆根，为常用中药，产于中国东北、华北等地；日本和俄罗斯也有分布。蝙蝠葛生长于山坡林缘、灌丛中、田边、路旁及石砾滩地，或攀缘于岩石上，喜温暖、凉爽的环境，25-30℃最适宜生长。蝙蝠葛的根茎，味苦，性寒；有小毒；归肺、胃、大肠经；具有清热解毒、祛风止痛的功效；主治咽喉肿痛、热毒泻痢、风湿痹痛等病症。
蝙蝠葛生物碱概述
蝙蝠葛化学成分的研究多集中在生物碱部分，其总生物碱的含量较高[4]。刘瑞等[5]人发现蝙蝠葛正丁醇提取物对细菌、真菌有较明显的抑制作用；曾国钱等[6]发现蝙蝠葛碱对细胞钙内流具有明显抑制作用；说明蝙蝠葛碱可作为钙通道阻滞剂，这可能揭示蝙蝠葛碱在心血管系统疾病治疗中的作用机制。苏云明等[7]发现蝙蝠葛酚性碱在大鼠急性心肌缺血模型中对急性心肌缺血具有明显的保护作用。有研究提示蝙蝠葛生物碱对肿瘤细胞具有抑制作用，能诱导肿瘤细胞凋亡；但未给出明确的成分及活性数据。
参考文献
1.Butler MS.Natural products to drugs:natural product-derivedcompounds in clinical trials.Natural Product Reports,2008,25,475-516.
2.陈冀胜，郑硕.中国有毒植物，科学出版社(1987年),P7-9.
3.郭晓庄.有毒中草药大辞典，天津科技翻译出版公司(1992年)
4.Zhang ZJ,Zhang XQ,YE WC,et al.A new 1,4-phemanthraquinone fromMemispermum dauricum[J].Nat Prod Res.2004,18,301-304.
5.刘瑞,马养民,张弘弛等.蝙蝠葛茎叶正丁醇提取物抑菌作用研究[J].西北农业学报,2007,16,77-81.
6.Zeng GQ,Rui YC.Effect of anisodamine and daurieine onproliferation,DNA synthesis and calcium influx in bovine anterior cerebralarterial smooth muscle cells in culture[J].Acta Phar.Sic.,1991,12,308-311.
7.苏云明,张树明,苏慧等.蝙蝠葛酚性碱对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的保护作用[J].中医药学报,2004,32,3-4.
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一组从蝙蝠葛中提取的三聚苄基异喹啉生物碱、其制法和药物组合物与用途。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了如下式所示的一组三聚苄基异喹啉生物碱或其药学上可接受盐，此组化合物属于三苄基苯醚类新结构化合物，其特征在于，含有三个苄基异喹啉单元，通过一个苯环相连接。这种三聚的异喹啉生物碱在防己科中为首次发现。生物活性试验显示具有强抗肿瘤活性。
本发明技术方案的第二方面是提供了第一方面所述化合物的分离制备方法，化合物分离，方法如下：
蝙蝠葛干燥根茎(50kg)，经粉碎处理。用95％乙醇浸泡过夜后，加热回流提取三次，每次120L，2小时。合并三次提取液，减压浓缩得到7kg总浸膏。将7kg浸膏溶解于70L水溶液中，加盐酸调节pH＝2，过滤去除不溶物(4kg)，用乙酸乙酯萃取后，酸水液中再加入氨水调节pH＝10，使生物碱游离出来，采用二氯甲烷(50L)萃取三次，再用正丁醇(50L)萃取三次。合并二氯甲烷萃取液，减压浓缩，得到蝙蝠葛根茎总生物碱800g。
将400g蝙蝠葛根茎总生物碱进行碱性硅胶(200-300目)柱色谱分离。依次采用二氯甲烷(100L)、二氯甲烷:甲醇＝80:1(30L)、二氯甲烷:甲醇＝40:1(15L)、二氯甲烷:甲醇＝30:1(70L)、二氯甲烷:甲醇＝15:1(100L)、二氯甲烷:甲醇＝10:1(80L)、二氯甲烷:甲醇＝5:1(80L)、二氯甲烷:甲醇＝1:1(80L)、甲醇梯度洗脱(50L)。合并后分段，然后采用硅胶柱色谱、ODS中压柱色谱、凝胶柱色谱、制备型高效液相色谱等手段分离得到所述化合物。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含第一方面所述的化合物或其药学上可接受盐或药学上可接受的载体或赋形剂。
所述的药物组合物的剂型选自口服制剂、注射剂以及局部使用制剂；其中口服制剂包括片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂或口服液；注射剂包括粉针剂、小针剂或大输液；局部使用制剂选自凝胶剂、酊剂、软膏剂。
本发明还涉及所述的药物组合物一种含有有效剂量化合物5-8(menidaurine E、menidaurine F、menidaurine G和menidaurine H)和药学上可接受的载体的药物组合物。根据本发明的实施方案，所述的本发明化合物还包括其药学上可接受的盐、盐的水合物、酯或前体药物。
本发明还涉及含有作为活性成份的本发明化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1～95重量％的本发明化合物。在单元剂型中本发明化合物一般含量为0.1～100mg，优选的单元剂型含有4～50mg。
本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。
本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明的化合物的用量为0.001～100mg/kg体重,可一次服用或分2～4次服用。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。
本发明技术方案的第四方面是提供了第一方面所述化合物或其药学上可接受盐或第三方面所述的药物组合物在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用；提供了第一方面所述化合物或其药学上可接受盐或第三方面所述的药物组合物在制备预防或治疗免疫疾病药物中的应用。所述的免疫疾病包括关节炎、肾炎、炎性肠病、结缔组织病、血管炎、肉芽肿性病变等外周炎症免疫相关疾病，以及阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症等中枢神经系统炎症性疾病。
有益技术效果
1、本发明化合物为首次获得的化合物，为纯天然成分。
2、本发明化合物体外具有明显的抑制多种肿瘤细胞生长的活性，且作用较强。
3、本发明化合物体外具有明显的抑制NO生成的活性，即抗炎活性。
附图说明
图1：化合物5的氢谱图；
图2：化合物5的碳谱图；
图3：化合物6的氢谱图；
图4：化合物6的碳谱图；
图5：化合物7的氢谱图；
图6：化合物7的碳谱图；
图7：化合物8的氢谱图；
图8：化合物8的碳谱图。
具体实施方式
实施例1
蝙蝠葛干燥根茎(50kg)，经粉碎，用95％乙醇浸泡过夜后，加热回流提取三次，每次120L，2小时。合并三次提取液，减压浓缩得到7kg总浸膏。将7kg浸膏溶解于70L水溶液中，加盐酸调节pH＝2，过滤去除不溶物(4kg)；用乙酸乙酯萃取后，酸水液中再加入氨水调节pH＝10；用二氯甲烷(50L)萃取三次，合并萃取液，减压浓缩，得到蝙蝠葛根茎总生物碱800g。
取400g总生物碱进行碱性硅胶(200-300目)柱色谱分离。依次采用二氯甲烷(100L)、二氯甲烷：甲醇＝80：1(30L)、二氯甲烷：甲醇＝40：1(15L)、二氯甲烷：甲醇＝30：1(70L)、二氯甲烷：甲醇＝15：1(100L)、二氯甲烷：甲醇＝10：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝5：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝1：1(80L)、甲醇(50L)梯度洗脱。经薄层色谱检识合并得到9个组分，FrA(0.9g)、FrB(6.5g)、FrC(8g)、FrD(105.9g)、FrE(166.5g)、FrF(42.6g)、FrG(35.2g)、FrH(24.8g)、FrI(14.7g)。FrD经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1～2:1)，得到4个组分D1～D4；D3再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(20:1～1:1)，得到5个组分D3a～D3e。D3d用制备型高效液相色谱法(流动相：乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)＝28:72；流速：4ml/min)，纯化得到化合物5(menidaurine E，10mg，tR＝36min)。
化合物5为淡黄色油状固体；测定分子式为C63H69O10N3。1H NMR和13C NMR数据见下述表格。附图1和附图2为此化合物的氢谱和碳谱图。化合物5的结构式如下：
化合物5的氢谱和碳谱数据
实施例2
蝙蝠葛干燥根茎(50kg)，经粉碎，用95％乙醇浸泡过夜后，加热回流提取三次，每次120L，2小时。合并三次提取液，减压浓缩得到7kg总浸膏。将7kg浸膏溶解于70L水溶液中，加盐酸调节pH＝2，过滤去除不溶物(4kg)；用乙酸乙酯萃取后，酸水液中再加入氨水调节pH＝10；用二氯甲烷(50L)萃取三次，合并萃取液，减压浓缩，得到蝙蝠葛根茎总生物碱800g。
取400g总生物碱进行碱性硅胶(200-300目)柱色谱分离。依次采用二氯甲烷(100L)、二氯甲烷：甲醇＝80：1(30L)、二氯甲烷：甲醇＝40：1(15L)、二氯甲烷：甲醇＝30：1(70L)、二氯甲烷：甲醇＝15：1(100L)、二氯甲烷：甲醇＝10：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝5：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝1：1(80L)、甲醇(50L)梯度洗脱。经薄层色谱检识合并得到9个组分，FrA(0.9g)、FrB(6.5g)、FrC(8g)、FrD(105.9g)、FrE(166.5g)、FrF(42.6g)、FrG(35.2g)、FrH(24.8g)、FrI(14.7g)。FrD经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1～2:1)，得到4个组分D1～D4；D3再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(20:1～1:1)，得到5个组分D3a～D3e。D3d用制备型高效液相色谱法(流动相：乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)＝28:72；流速：4ml/min)，纯化得到化合物6(menidaurine F，3mg，tR＝42min)。
化合物6为淡黄色油状固体，测定分子式为C63H69O10N3。1H NMR和13C NMR数据见下述表格。附图3和附图4为此化合物的氢谱和碳谱图。化合物6的结构式如下：
化合物6的氢谱和碳谱数据
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实施例3
蝙蝠葛干燥根茎(50kg)，经粉碎，用95％乙醇浸泡过夜后，加热回流提取三次，每次120L，2小时。合并三次提取液，减压浓缩得到7kg总浸膏。将7kg浸膏溶解于70L水溶液中，加盐酸调节pH＝2，过滤去除不溶物(4kg)；用乙酸乙酯萃取后，酸水液中再加入氨水调节pH＝10；用二氯甲烷(50L)萃取三次，合并萃取液，减压浓缩，得到蝙蝠葛根茎总生物碱800g。
取400g总生物碱进行碱性硅胶(200-300目)柱色谱分离。依次采用二氯甲烷(100L)、二氯甲烷：甲醇＝80：1(30L)、二氯甲烷：甲醇＝40：1(15L)、二氯甲烷：甲醇＝30：1(70L)、二氯甲烷：甲醇＝15：1(100L)、二氯甲烷：甲醇＝10：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝5：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝1：1(80L)、甲醇(50L)梯度洗脱。经薄层色谱检识合并得到9个组分，FrA(0.9g)、FrB(6.5g)、FrC(8g)、FrD(105.9g)、FrE(166.5g)、FrF(42.6g)、FrG(35.2g)、FrH(24.8g)、FrI(14.7g)。FrD经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1～2:1)，得到4个组分D1～D4；D3再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(20:1～1:1)，得到5个组分D3a～D3e。D3c再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(30:1～1:1)，得到5个组分D3c1～D3c5。D3c4用制备型高效液相色谱法(流动相：乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)＝28:72；流速：4ml/min)，纯化得到化合物7(menidaurine G，2mg，tR＝12min)。
化合物7为淡黄色油状固体，测定分子式为C62H67O10N3。1H NMR和13C NMR数据见下述表格。附图5和附图6为此化合物的氢谱和碳谱图。化合物7的结构式如下：
化合物7的氢谱和碳谱数据
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实施例4
蝙蝠葛干燥根茎(50kg)，经粉碎，用95％乙醇浸泡过夜后，加热回流提取三次，每次120L，2小时。合并三次提取液，减压浓缩得到7kg总浸膏。将7kg浸膏溶解于70L水溶液中，加盐酸调节pH＝2，过滤去除不溶物(4kg)；用乙酸乙酯萃取后，酸水液中再加入氨水调节pH＝10；用二氯甲烷(50L)萃取三次，合并萃取液，减压浓缩，得到蝙蝠葛根茎总生物碱800g。
取400g总生物碱进行碱性硅胶(200-300目)柱色谱分离。依次采用二氯甲烷(100L)、二氯甲烷：甲醇＝80：1(30L)、二氯甲烷：甲醇＝40：1(15L)、二氯甲烷：甲醇＝30：1(70L)、二氯甲烷：甲醇＝15：1(100L)、二氯甲烷：甲醇＝10：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝5：1(80L)、二氯甲烷：甲醇＝1：1(80L)、甲醇(50L)梯度洗脱。经薄层色谱检识合并得到9个组分，FrA(0.9g)、FrB(6.5g)、FrC(8g)、FrD(105.9g)、FrE(166.5g)、FrF(42.6g)、FrG(35.2g)、FrH(24.8g)、FrI(14.7g)。FrD经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1～2:1)，得到4个组分D1～D4；D3再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(20:1～1:1)，得到5个组分D3a～D3e。D3c再经碱性硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(30:1～1:1)，得到5个组分D3c1～D3c5。D3c4用制备型高效液相色谱法(流动相：乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)＝28:72；流速：4ml/min)，纯化得到化合物8(menidaurine H，4mg，tR＝20min)。
化合物8为淡黄色油状固体，测定分子式为C62H67O10N3。1H NMR和13C NMR数据见下述表格。附图7和附图8为此化合物的氢谱和碳谱图。化合物8的结构式如下：
化合物8的氢谱和碳谱数据
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药理实验
实验例1细胞毒活性(MTT法)试验
取用生长良好的肿瘤细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培养基配制成1x104cell/mL细胞悬液。于96孔培养板内接种，每孔100μL(含1000个肿瘤细胞)；置37℃，5％CO2温箱内培养24小时后加药，实验设空白对照，供试样品设3个浓度(0.1,1,10μM)，每浓度3个平行孔，置37℃，5％CO2温箱内培养3天。弃去培养液，每孔加入MTT溶液(0.4mg/mL,RPMI1640配制)100μL，37℃孵育4小时。弃上清液，每孔加入DMSO 150μL，溶解Fomazan颗粒，轻度振荡后，用550型酶标仪在检测波长540nm，参考波长405nm下测定OD值(阳性对照药为紫杉醇)。
结果计算：以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度(IC50)。
化合物5-8对多种肿瘤细胞显示显著的毒性作用。
实验例2抗炎活性试验
实验原理：炎症反应是一种由多种细胞、因子参与的防御反应，这些因子包括NO、GM-CSF、TNF-a、IFN-g、IL-1、IL-6等。生物毒素、外伤刺激、化学刺激等都能诱发炎症。巨噬细胞在免疫反应发生过程中扮演着重要的角色，活化的巨噬细胞能产生许多诱发炎症的细胞因子。NO、TNF-a、IL-6为评价炎症反应发生较敏感的指标，本实验采用脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)在体外模拟炎症发生过程，采用Griess法测定亚硝酸盐(NO2 -)浓度来计算待测样品中NO的浓度，评价化合物的抗炎活性。
实验方法：
试剂：胎牛血清(Gibco)；RAW264.7细胞；DMEM培养基(Invitrogen)；LPS(Sigma)；Griess试剂(Sigma)。
实验器材：CO2培养箱(SANYO)；酶标仪。
细胞培养：DMEM+10％FBS培养RAW264.7细胞，培养条件为37℃，5％CO2，细胞呈对数增长时进行传代。当细胞达到80％融合率时，96孔铺板(密度：2′104个/孔)，于37℃，5％CO2培养箱中孵育24h。
实验设计：
对照组：10％FBS的培养基。
模型组：LPS(300ng/mL)。
样品组：LPS(300ng/mL)加化合物(10-5M)。
实验步骤：细胞96孔铺板，37℃，5％CO2孵育24h。加入相应浓度的待测化合物组(10-5M)及阳性药组(姜黄素10-5M)，孵育1h。加入LPS(300ng/mL)，孵育24h。取上清采用Griess法检测NO产生量。
评价指标：450nm处读取OD值，绘制标准曲线，求得样品NO浓度，计算抑制率。实验结果：化合物对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的抑制评价。
结果显示在10μmol/L给药浓度下化合物6,7,8均有较好的抗炎活性，其中化合物7,8优于阳性对照姜黄素。

Claims (7)

1.一种由以下结构表示的化合物或其药学上可接受盐：
2.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含权利要求1所述的化合物或其药学上可接受盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
3.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型选自口服制剂、注射剂以及局部使用制剂。
4.根据权利要求3的药物组合物，其特征在于，所述的口服制剂选自片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂或口服液；注射剂选自粉针剂、小针剂或大输液；局部使用制剂选自凝胶剂、酊剂、软膏剂。
5.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受盐或权利要求2-3任一项所述的药物组合物在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用。
6.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受盐或权利要求2-3任一项所述的药物组合物在制备预防或治疗免疫疾病药物中的应用。
7.根据权利要求6的应用，其特征在于，所述的免疫疾病选自关节炎、肾炎、炎性肠病、结缔组织病、血管炎、肉芽肿性病变，以及阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化症。
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