CN102369011A - 用于治疗造血恶性肿瘤的磷酸肌醇3-激酶抑制剂化合物与化学治疗剂的组合 - Google Patents
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Abstract
Description
相关申请的交叉参考
根据37CFR§1.53(b)提交的该非临时申请根据35USC§119(e)要求2009年3月12日提交的美国临时申请61/159,622的权益,将61/159,622整体并入作为参考。
技术领域
本发明大体上涉及具有抗造血恶性肿瘤活性的化合物的药物组合,所述具有抗造血恶性肿瘤活性的化合物包括抑制PI3激酶或mTOR活性的化合物。本发明还涉及使用所述化合物体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物和哺乳动物细胞的方法。
背景技术
将牵涉血细胞生成(hematopoiesis)过程中产生的细胞的癌症称作造血恶性肿瘤,所述血细胞生成过程为产生血液细胞元素例如白细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞、浆细胞和髓样细胞例如嗜中性粒细胞和单核细胞的过程。将可在血液和淋巴组织中发现的并且对于免疫应答重要的淋巴细胞分成两类主要的淋巴细胞:B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞(T细胞),它们分别介导体液免疫和细胞免疫。B细胞是在体液免疫应答中发挥较大作用的淋巴细胞(与由T细胞控制的细胞介导的免疫应答相反)。B细胞的主要功能是使抗体对抗抗原、执行呈递抗原细胞(APCs)的作用并最终在通过抗原相互作用活化后发展成记忆B细胞。B细胞是适应性免疫系统的重要组分。B细胞在骨髓中成熟并离开骨髓,在它们的细胞表面表达抗原结合抗体。当幼稚B细胞首次遇到其膜结合抗体的特异性抗原时,所述细胞开始迅速分裂,并且其子代分化成记忆B细胞和称作″浆细胞″的效应细胞。记忆B细胞具有较长的寿命并继续表达具有与原始母细胞相同特异性的膜结合抗体。浆细胞不产生膜结合抗体,但产生可被分泌形式的抗体。分泌的抗体是体液免疫的主要效应分子。
非霍奇金淋巴瘤是一组不同的造血恶性肿瘤,其涵盖非霍奇金淋巴瘤的任意淋巴瘤。淋巴瘤是一类源自淋巴细胞(一类白细胞)的癌症。已描述了多种非霍奇金淋巴瘤亚型;这些大体是通过它们的进攻性分组的。较小进攻性的非霍奇金淋巴瘤可能为存在多年的慢性疾病,而进攻性较强的非霍奇金淋巴瘤不进行治疗可能会快速致死。非霍奇金淋巴瘤可通过化学疗法、单克隆抗体、免疫疗法、放射疗法和造血干细胞移植的组合得到治疗。
淋巴瘤是一类起源于淋巴细胞(脊椎动物免疫系统中的一类白细胞)和淋巴结的新生物,表现为所述结的增大(肿瘤)。淋巴瘤与淋巴细胞性白血病紧密相关,淋巴细胞性白血病也起源于淋巴细胞但不形成实体瘤。存在多种类型的淋巴瘤,并且淋巴瘤又为被称作血液新生物的造血恶性肿瘤的宽组的一部分。
急性髓细胞样白血病(AML)为致力于myeloid linage development的造血干细胞恶性克隆障碍的异质组。在正常的造血分化中存在阻断(block),通常与增殖和凋亡的失调结合。这随后在贫血、嗜中性白血球减少症和血小板减少症中导致正常血细胞生成的进行性不足。AML占所有成人白血病的约80%。总发病率在过去的15-20年中为稳定或缓慢增加的。AML的预后仍很差,总5年期存活率为15-30%,而且患有由于骨髓增生异常综合征引起的AML的患者或年龄超过60岁的AML患者的预后更差,5年期存活率小于10%(Smith M.et al(2004)Crit.Rev.Oncol.Hematol.50:197-222)。针对AML患者的标准治疗方法为高剂量化学治疗,主要包含阿糖胞苷(Ara-C)和蒽环类抗生素例如柔红霉素或伊达比星。通常,AML对初期的化学治疗有反应,但在大多数患者中出现疾病复发。尽管AML治疗的结果在较年轻的患者(可耐受加强的治疗策略)中有改善,但在超过60岁年龄的个体中结果存在有限的变化。已达到用在AML中的标准化学疗法药物的可接受毒性的极限。因此,对于AML,仍明显迫切需要新的、理性设计的、最小毒性的和有效的疗法(Fathi A.T.and Karp J.E.(2009)Curr.Oncol.Rep.11:346-352;Stapnes etal(2009)Expert Opin.Investig.Drugs 18:433-455)。
现在,在给药方案中同时或先后给药的抗癌药物疗法的组合在癌症治疗中是常见的。成功的组合疗法提供优于单一疗法(即限于一种药物的药物治疗)的改进甚至协同的作用(Ouchi et al(2006)Cancer Chemother.Pharmacol.57:693-702;Higgins et al(2004)Anti-Cancer Drugs 15:503-512)。临床前研究已经是预测抗癌药物治疗组合(例如用于治疗乳癌的卡培他滨和紫杉烷)临床阶段协同作用的基础(Sawada et al(1998)Clin.Cancer Res.4:1013-1019)。组合疗法的特定剂量和时间表可在不破坏效力的情况下改善安全性(O’Shaughnessyet al(2006)Clin.Breast Cancer Apr 7(1):42-50)。已经将体外协同作用与临床阶段协同作用相关联(Steinbach et al(2003)Clin.Inf.Dis.Oct 1:37 Suppl3:S188-224)。
磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-Kinase)(PI3K)是淋巴瘤重要存活和生长信号的主要信号结,并且受磷酸酶PTEN活性的对抗。PI3K途径在淋巴瘤攻击形式中失调(Abubaker(2007)Leukemia 21:2368-2370)。8%DLBCL(弥散性大B-细胞淋巴瘤)癌症具有PI3CA(磷脂酰肌醇-3激酶催化亚单元α)错义突变,以及37%通过免疫组织化学试验为PTEN阴性的。
磷脂酰肌醇为在细胞膜中发现的多种磷脂中的一种,其参与细胞内信号转导。经由3′-磷酸化磷酸肌醇(3′-phosphorylated phosphoinositide)的细胞信号传导(Cell signaling)已经牵涉多种细胞过程,例如恶性转化(malignanttransformation)、生长因子信号传导、炎症和免疫(Rameh等人(1999)J.BiolChem,274:8347-8350)中。导致生成这些磷酸化信号传导产物的酶,即磷脂酰肌醇3-激酶(也称为PI 3-激酶或PI3K),最初被鉴定为具有与病毒癌蛋白和生长因子受体酪氨酸激酶相关的活性,所述酶对磷脂酰肌醇(PI)及其位于肌醇环的3′-羟基的磷酸化衍生物进行磷酸化(Panayotou等人(1992)Trends CellBiol 2:358-60)。磷酸肌醇3-激酶(PI3K)是在磷酸肌醇的肌醇环的3-羟基残基对脂质进行磷酸化的脂质激酶(lipid kinase)(Whitman等人(1988)Nature,332:664)。由PI3-激酶生成的3-磷酸化磷脂(PIP3)充当第二信使,所述第二信使募集具有脂质结合结构域(lipid binding domain)(包括锤型同源(PH)区域)的激酶如Akt和PDK1(磷酸肌醇依赖性激酶-1)。
PI3激酶家族包括至少15种不同的通过结构同源性分成亚类的酶,并且基于序列同源性和由酶催化形成的产物而分成3类。I类PI3激酶由两个亚单元构成:110kd催化亚单元和85kd调节亚单元。所述调节亚单元含有SH2结构域并与酪氨酸残基(被具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体磷酸化)或致癌基因产物结合,从而诱导磷酸化其脂质底物的p110催化亚单元的PI3K活性。I类PI3激酶牵涉细胞因子、整联蛋白、生长因子和免疫受体下游重要的信号转导事件,这表明控制该途径可得到重要的治疗作用例如调节细胞增殖和致癌作用。I类PI3K可磷酸化磷酸肌醇(PI)、磷酸肌醇-4-磷酸和磷酸肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),从而分别产生磷酸肌醇-3-磷酸(PIP)、磷酸肌醇-3,4-二磷酸和磷酸肌醇-3,4,5-三磷酸。II类PI3K磷酸化PI和磷酸肌醇-4-磷酸。III类PI3K可仅磷酸化PI。癌症中的重要PI3-激酶同工型为I类PI3-激酶即p110α,如在p110α中重复出现的致癌突变体所示(Samuels et al(2004)Science304:554).(US 5824492;US 5846824;US 6274327)。其它同工型在癌症中可能是重要的并且也牵涉在心血管和免疫炎症疾病中(Workman P(2004)Biochem Soc Trans 32:393-396;Patel et al(2004)Proc.Am.Assoc.of CancerRes.(Abstract LB-247)95th Annual Meeting,March 27-31,Orlando,Florida,USA;Ahmadi K and Waterfield MD(2004)“Phosphoinositide 3-Kinase:Function and Mechanisms”Encyclopedia of Biological Chemistry(Lennarz W J,Lane M D eds)Elsevier/Academic Press)。已在结肠实体肿瘤、乳腺实体肿瘤、脑实体肿瘤、肝实体肿瘤、卵巢实体肿瘤、胃实体肿瘤、肺实体肿瘤和头颈实体肿瘤中以显著的频率发现p110α的致癌突变体。在成胶质细胞瘤、黑素瘤、前列腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、乳癌、肺癌、头颈癌、肝细胞癌和甲状腺癌中发现PTEN异常。
PI3激酶是异源二聚体,其由p85和p110亚单元组成(Otsu等人(1991)Cell65:91-104;Hiles等人(1992)Cell 70:419-29)。已经鉴定出四种不同的I型PI3K,称为PI3Kα(alpha)、β(beta)、δ(delta)和γ(gamma),每种由不同的110kDa催化亚单元和调节亚单元组成。三种催化亚单元,即p110α、p110β和p110δ,每种与相同的调节亚单元p85相互作用;而p110γ与不同的调节亚单元p101相互作用。这些PI3K中的每种在人类细胞和组织中的表达模式也是不同的。在PI3Kα、β和δ亚型的每一种中,所述p85亚单元用于通过其SH2结构域与目标蛋白中的磷酸化酪氨酸残基(存在于适当的序列背景中)相互作用而使PI3激酶集中在质膜(Rameh et al(1995)Cell,83:821-30;Volinia et al(1992)Oncogene,7:789-93)。
PI3激酶/Akt/PTEN途径对癌症药物开发而言是有吸引力的靶标,这是因为这些药物被预期抑制细胞增殖、阻止来自基质细胞(提供癌细胞的存活和化学抗性)的信号、逆转对细胞凋亡的阻抑以及克服癌细胞对细胞毒素剂(cytotoxic agent)的内在抗药性。已经报道了PI3激酶抑制剂(Yaguchi et al(2006)Jour.of the Nat.Cancer Inst.98(8):545-556;US 7173029;US 7037915;US6608056;US 6608053;US 6838457;US 6770641;US 6653320;US 6403588;WO 2006/046031;WO 2006/046035;WO 2006/046040;WO 2007/042806;WO 2007/042810;WO 2004/017950;US 2004/092561;WO 2004/007491;WO 2004/006916;WO 2003/037886;US 2003/149074;WO 2003/035618;WO 2003/034997;US 2003/158212;EP 1417976;US 2004/053946;JP2001247477;JP 08175990;JP 08176070)。渥曼青霉素类似物在哺乳动物中具有PI3激酶活性(US 6703414;WO 97/15658)。
式I的噻吩并嘧啶化合物具有p110α结合、PI3激酶抑制活性,并抑制癌细胞的生长(US 2008/0207611;US 2008/0039459;US 2008/0076768;US2008/0076758;US 2008/0242665;US 2008/0269210。
示例性式I化合物GDC-0941(CAS登记号:957054-30-7,GenentechInc.)为选择性口服生物可利用的PI3K抑制剂,具有很有发展前途的药代动力学和药学性质(Folkes et al(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532;US2008/0076768;Belvin et al,American Association for Cancer Research AnnualMeeting 2008,99th:April 15,Abstract 4004;Folkes et al,American Associationfor Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-146;Friedman et al,American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-110)。示例性式I化合物GDC-0941在体外和体内与一些抗实体瘤细胞系的化学治疗剂组合中显示协同活性(US Ser.No.12/208,227,Belvin et al″Combinations OfPhosphoinositide 3-Kinase InhibitorCompounds And Chemotherapeutic agents,And Methods Of Use″,filed 10 Sept2008)。
发明内容
本发明大体上涉及具有抗癌活性以及更具体地具有PI3激酶或mTOR抑制活性的式I的噻吩并嘧啶化合物,将其与单克隆抗体药物或化学治疗剂组合给药,从而抑制造血恶性肿瘤的生长。式I化合物与化学治疗剂的一些组合在体外和体内抑制造血癌细胞生长方面显示协同作用。本发明的组合和方法可用于治疗造血恶性肿瘤。所述组合物可抑制哺乳动物肿瘤生长并可用于治疗人癌症患者。
本发明一个方面包括治疗造血恶性肿瘤的方法,包括向哺乳动物给药作为组合制剂的治疗组合或轮流给药至哺乳动物,其中所述治疗组合包含治疗有效量的具有式I的化合物和治疗有效量的化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松(dexamethasone)、塞替派(thioTEPA)、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱(vincristine)、利妥昔单抗(rituximab)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、泼尼松(prednisone)、美法仑(melphalan)、来那度胺(lenalidomide)、硼替佐米(bortezomib)、雷帕霉素(rapamycin)和阿糖胞苷(cytarabine)。
本发明还涉及使用治疗组合体外、原位和体内诊断或治疗与造血恶性肿瘤有关的哺乳动物细胞、有机体或相关病理病症的方法。
本发明一个方面提供治疗组合,其包含4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉(US 2008/0076768;US2008/0207611;Folkes et al(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532,也称作GDC-0941(Genentech,Inc.)并具有式Ia)和治疗有效量的化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
本发明的一个方面提供治疗组合,其包含具有式Ib的(S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙烷-1-酮(US 2008/0242665)和治疗有效量的化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
式I化合物包括其所有立体异构体、几何异构体、互变异构体、代谢物和可药用盐。一些式I化合物是有效的PI3K抑制剂,具有药物样物理化学性质和药代动力学性质。一些式I化合物表现出对Ia类PI3K的选择性特别是对P110α亚类的选择性超过对Ib类PI3K的选择性。式Ia和Ib化合物为口服生物可利用的并在多重人癌症模型(multiple human cancer model)中具有单药物抗肿瘤活性。
本发明的药物组合物和治疗组合包含化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
本发明的药物组合物可进一步包含可药用载体。
本发明另一个方面提供治疗由PI3激酶调节的造血恶性肿瘤的方法,包括向需要所述治疗的哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和化学治疗剂。式I化合物和化学治疗剂可共同配制用于以组合形式作为药物组合物给药,或者可将它们作为治疗组合单独轮流(顺序地、连续地)给药。
本发明另一个方面提供治疗造血恶性肿瘤的方法,包括向需要所述治疗的哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物和化学治疗剂。
本发明另一个方面提供使用本发明的药物组合物治疗哺乳动物由PI3激酶调节的造血恶性肿瘤疾病或病症的方法。
本发明另一个方面为本发明的药物组合物在制备用于治疗哺乳动物由PI3激酶调节的造血恶性肿瘤疾病或病症的药物中的用途。
本发明另一个方面包括制品或试剂盒,其包含式I化合物、化学治疗剂、容器和任选用于说明治疗造血恶性肿瘤的包装说明书或标签。
本发明另一个方面为产品,其包含式I化合物和化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷;其为组合制剂,用于分开、同时或顺序用在治疗造血恶性肿瘤中。
本发明另一个方面包括用于确定用在用于治疗癌症的组合中的化合物的方法,包括:a)向具有一种或多种突变的体外造血恶性肿瘤细胞系给予包含式I化合物和化学治疗剂的治疗组合,和b)测定协同或非协同作用。
本发明另一个方面为治疗性处理患有造血恶性肿瘤的哺乳动物的方法,其中所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的治疗组合,从而实现有效治疗性处理所述造血恶性肿瘤,例如非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤(diffuse large hematopoietic lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML和MCL。在一个实施方案中,所述治疗组合抑制一种或多种PI3K同工型。在一个实施方案中,所述治疗组合抑制mTOR。
本发明一个方面提供抑制非霍奇金淋巴瘤生长的方法,包括向患有非霍奇金淋巴瘤的患者给药所述治疗组合,从而抑制所述淋巴瘤的生长。
本发明一个方面提供抑制非霍奇金淋巴瘤生长的方法,包括向淋巴瘤细胞或向所述淋巴瘤中存在的细胞和/或向与所述淋巴瘤相邻的细胞给予治疗组合,从而抑制所述淋巴瘤的生长。在一个实施方案中,所述细胞不是非霍奇金淋巴瘤细胞(例如,其不是T或B细胞),例如所述细胞可为基质细胞。
附图说明
图1显示通过流式细胞仪针对式Ia(GDC-0941)处理的(右栏)和未处理的(左栏)细胞测量的药效(PD)标志物的减少,所述细胞为DoHH2、WSU-DLCL2、OPM2和U266。将细胞用5μM GDC-0941体外处理4小时。
图2显示细胞DoHH2、WSU-DLCL2、OPM2和U266中药效(PD)标志物p-AKT、p-S6RP、p-Bad和β-肌动蛋白的减少,如在用5μM GDC-0941体外处理4小时的细胞系中通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印记所测量。
图3显示PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)以及与地塞米松(Dex)和多柔比星(Dox)的组合对B-NHL细胞系DoHH2的作用。体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer Glo,Promega)测量不同抑制剂浓度(10-5至之前(近似)确定的IC50的10个相对单位)条件下的活细胞,所述不同抑制剂为式Ia、地塞米松、多柔比星和式Ia与地塞米松的组合;和式Ia与多柔比星的组合。
图4显示通过体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer Promega Corp.,Madison,WI)测量的PI3K单药物抑制剂对来自患者NHL600-A876细胞的原发性滤泡性淋巴瘤细胞的作用,所述体外细胞存活和增殖测定测量不同浓度(10-5至10μM)式Ia(GDC-0941)、GDC-0464和LY294002条件下的活细胞。
图5显示PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)及与多柔比星的组合对来自患者NHL640-A055的原发性弥散性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞的作用。通过体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer)测量不同浓度(10-5至20μM)式Ia、多柔比星和式Ia与多柔比星的组合条件下的细胞存活力。
图6显示通过体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer)测量的PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)及与地塞米松的组合对多发性骨髓瘤OPM2细胞的作用,所述体外细胞存活和增殖测定测量不同浓度(10-5至10μM)式Ia、地塞米松及式Ia与地塞米松的组合条件下的活细胞。
图7显示在10只具有WSU-DLCL2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群(cohorts)中历时20天的平均肿瘤体积变化,其中第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水(DI Water)中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)、CHOP和式Ia(73mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合、式Ia(73mg/kg)与CHOP的组合。在第0天开始向小鼠给药一次CHOP,在0、7和14天给药利妥昔单抗,同时通过口腔灌饲每天给药一次式Ia,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,以及在第0、1、2、3和4天给药泼尼松。
图8显示在10只具有DoHH-2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时35天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)、CHOP和式Ia(73mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合和式Ia(73mg/kg)与CHOP的组合。在第0、7和14天向小鼠静脉给药利妥昔单抗(每周一次,保持3周),在第1天开始给药CHOP,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,以及在0、1、2、3和4天给药泼尼松。
图9显示在10只具有DoHH2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时27天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(75mg/kg)、CHOP和式Ia(75mg/kg)与CHOP的组合和式Ia(75mg/kg)与环磷酰胺(30mg/kg)的组合、式Ia(75mg/kg)与多柔比星(2.47mg/kg)的组合、式Ia(75mg/kg)与长春新碱(0.38mg/kg)的组合和式Ia(75mg/kg)与泼尼松(0.15mg/kg)的组合。在第0天向小鼠给药CHOP,在第0天向小鼠给药环磷酰胺,在第0天向小鼠给药多柔比星,在第0天向小鼠给药长春新碱,和在第0-4天每天向小鼠给药泼尼松,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia,保持21天。CHOP组分方案为:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。
图10显示在10只具有BJAB淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时25天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、CHOP和式Ia(73mg/kg)与CHOP的组合。在第0天开始向小鼠给药一次CHOP,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia和媒介物,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,以及在0、1、2、3和4天给药泼尼松。
图11显示在10只具有BJAB淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时25天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(75mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)和式Ia(75mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合。在第0、7和14天向小鼠给药利妥昔单抗,同时通过口腔灌饲每天一次式Ia和媒介物,保持21天(口服给药,每天一次,保持21天)。
图12显示在10只具有NCI-H929多发性骨髓瘤异种移植物的小鼠的定群中历时22天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中),以及单药治疗:式Ia GDC-0941(73mg/kg)、硼替佐米(1mg/kg)、来那度胺(25mg/kg)和地塞米松(10mg/kg)。通过口腔灌饲每天给药式1a GDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。通过腹膜内注射每天给药来那度胺,保持21天。在第0、1、2、3、4、7、8、9和10天口服给药地塞米松。
图13显示在10只具有多发性骨髓瘤OPM-2细胞异种移植物的小鼠的定群中历时24天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中),单药治疗:式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天);硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周);25mg/kg来那度胺(腹膜内给药,保持5天/断掉2天/保持5天/断掉2天/保持5天);和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,保持5天/断掉2天/保持5天);和以下组合:式IaGDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)的组合;式IaGDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)的组合;和式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1a GDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。在第0-4、7-11和14-18天通过腹膜内注射给药来那度胺。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。
图14显示在10只具有多发性骨髓瘤MM1.s细胞异种移植物的小鼠的定群中历时27天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(1mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持2周半)、来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持21天)和地塞米松(10mg/kg)(口服给药,保持5天/断掉2天/保持5天)。通过口腔灌饲每天给药式1a GDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10和14天静脉给药硼替佐米。通过腹膜内注射每天给药来那度胺,保持21天。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。
图15显示在10只具有多发性骨髓瘤MM1.s细胞异种移植物的小鼠的定群中历时40天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中),单药治疗:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5);和以下组合:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)的组合;和式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。
图16显示10只具有多发性骨髓瘤H929细胞异种移植物的小鼠的定群中历时33天的平均肿瘤体积变化,其中第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中),单药治疗:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)、来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5);和以下组合:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)的组合;式IaGDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)的组合;和式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持1天4)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天,不同的是当与地塞米松组合时,将其给药14天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。在第0-4、7-11和14-18天通过腹膜内注射给药来那度胺。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。
图17显示在10只具有DoHH2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时33天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)、式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、式Ia GDC-0941(100mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、式Ib(2.5mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、式Ib(4mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天);和以下组合:雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)与式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)的组合;和雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)与式Ib(2.5mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)的组合。将式1aGDC-0941和式1b各自通过口腔灌饲每天给药,保持21天。在第0、7和14天静脉给药雷帕霉素。
图18显示在10只具有WSU-DLCL2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时21天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)、式Ia GDC-0941(60mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、式Ib(1mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天);和以下组合:雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)与式IaGDC-0941(60mg/kg)(口服给药,每天一次,保持18天)的组合;和雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)与式Ib(1mg/kg)(口服给药,每天一次,保持18天)的组合。
具体实施方式
定义
词语″包含(comprise)″、“含有(comprising)”、″包括(include)″、″包括(including)″和″包括(includes)″当在本说明书和权利要求书中使用时预期具体说明存在所指出的特征、整数、组分或步骤,但它们不排除存在或添加一个或多个其它特征、整数、组分、步骤或它们的组。
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性处置和预防性或防止性措施,其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理学变化或障碍如癌的生长、发展或扩散。需要治疗的对象包括已经患有障碍的对象以及易患所述障碍的对象或所述障碍应该被预防的对象。出于本发明的目的,有益的或期望的临床结果包括但不限于缓解症状、减小病变程度、稳定(即不是恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态以及好转(部分好转或完全好转),无论这些结果是可检测的还是不可检测的。“治疗(treatment)”还可表示与未接受治疗的预期存活相比延长的存活。需要治疗的对象包括已经患有病症或障碍的对象以及易患所述病症或障碍的对象或所述病症或障碍应该被预防的对象。
如果患者在根据本发明的方法接受治疗量的治疗组合后显示一种或多种以下症状,则就成功“治疗”了受试者或哺乳动物的造血恶性肿瘤例如非霍奇金淋巴瘤,所述症状为:(i)癌细胞数目可观察的和/或可测量的减少或不存在癌细胞;(ii)肿瘤尺寸的减小;抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞浸润到周围器官中,包括抑制癌症扩散到软组织和骨中;(iii)抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)肿瘤转移;(iv)在一定程度上抑制肿瘤生长;或(v)在一定程度上缓解与具体癌症相关的一种或多种症状,包括降低发病率和死亡率和提高生命质量。就治疗组合可预防癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞来说,其可为细胞生长抑制性的(细胞生长抑制)和/或细胞毒性的。患者也可感觉到这些征状(sign)或症状的减少。用于评估对疾病进行成功治疗和改善的上述参数可通过医师熟悉的常规操作容易地测量。对于癌症治疗而言,可例如通过评价疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量功效。可通过以下方法确定转移:分期试验(staging test)和骨扫描和用于钙水平的试验和确定扩散至骨的其它酶。也可进行CT扫描,从而寻找在所述区域内至骨盆和淋巴结的扩散。使用胸部X-射线和通过已知方法进行的肝脏酶水平测量分别用于寻找至肺和肝脏的转移。
术语″造血恶性肿瘤″是指在牵涉细胞例如白细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞、浆细胞和髓样细胞例如嗜中性粒细胞和单核细胞的造血过程中产生的癌症或过度增殖性疾病。造血恶性肿瘤包括表1中所列的疾病,人造血恶性肿瘤的WHO分类;造血和淋巴组织肿瘤(Jaffe E.S.,Harris N.L.,Stein H.,Vardiman J.W.(Eds.)(2001):World Health Organization Classification of Tumours.Pathology and Genetics of Tumours of Hematopoietic and Lymphoid Tissures.IARC Press:Lyon),具有疾病的国际分类的形态学编码(ICD-O)。对于恶性肿瘤,将行为编码为/3,以及对于低或不确定恶性潜能的损害,编码为/1。
表1.
I.慢性骨髓增生性疾病(CHRONIC MYELOPROLIFERATIVE DISEASES)
慢性髓细胞性白血病(Chronic myelogenous leukemia)-ICD-O 9875/3
慢性嗜中性粒细胞性白血病(Chronic neutrophilic leukemia)-ICD-O
9963/3
慢性嗜酸细胞性白血病(Chronic eosinophilic leukemia)/嗜酸细胞增多综合征(hypereosinophilic syndrome)-ICD-O 9964/3
真性红细胞增多症(Polycythemia vera)-ICD-O 9950/3
慢性特发性骨髓纤维化症(Chronic idiopathic myelofibrosis)-ICD-O
9961/3
特发性血小板增多症(Essential thrombocytemia)-ICD-O 9962/3
慢性骨髓增生性疾病,不可分类的(Chronic Myeloproliferative disease,unclassifiable)-ICD-O 9975/3
II.骨髓发育不良性(MYELODYSPLAS TIC)疾病/骨髓增生性疾病(MYELOPROLIFERATIVE DISEASES)
慢性骨髓单核细胞性白血病(Chronic myelomonocytic leukemia)-ICD-O
9980/3
非典型慢性髓细胞性白血病(Atypical chronic myelogenousleukemia)-ICD-O 9876/3
幼年性粒单核细胞白血病(Juvenile myelomonocytic leukemia)-ICD-O
9946/3
骨髓发育不良性(Myelodysplastic)疾病/骨髓增生性疾病
(myeloproliferative diseases),不可分类的-ICD-O 9975/3
III.骨髓发育不良性综合征(MYELODYSPLASTIC SYNDROMES)
顽固性贫血(Refractory anemia)-ICD-O 9980/3
顽固性贫血伴环形铁粒幼红细胞(Refractory anemia with ringedsideroblasts)-ICD-O 9982/3
顽固性细胞减少症伴多细胞系发育不良(Refractory cytopenia withmultilineage dysplasia)-ICD-O 9985/3
顽固性贫血伴过多胚细胞(Refractory anemia with excess blasts)-ICD-O
9983/3
与分离的del(5q)染色体异常相关的骨髓发育不良性综合征
(Myelodysplastic syndrome associated with isolated del(5q)chromosomeabnormality)-ICD-O 9986/3
骨髓发育不良性综合征(Myelodysplastic syndrome),不可分类的9989/3
IV.急性髓细胞样白血病(ACUTE MYELOID LEUKEMIAS)
急性髓细胞样白血病伴复发性细胞遗传异常(Acute myeloid leukemiaswith recurrent cytogenetic abnormalities)
AML伴t(8;21)(q22;q22),AML1/ETO(AML with t(8;21)(q22;q22),
AML1/ETO)-ICD-O 9896/3
AML伴inv(16)(p13q22)或t(16;16)(p13;q22),CBFb/MYH11-ICD-O
9871/3
急性早幼粒细胞性白血病(Acute promyelocytic leukemia)(AML伴t(15;17)(q22;q 12),PML-RARa和变异体)-ICD-O 9866/3
AML伴11q23(MLL)异常(AML with 11q23(MLL)abnormalities)-ICD-O
9897/3
急性髓细胞样白血病多细胞系发育不良(Acute myeloid leukemiamultilineage dysplasia)-ICD-O 9895/3
急性髓细胞样白血病和骨髓发育不良性综合征,治疗相关的(Acutemyeloid leukemia and myelodysplastic syndrome,therapy related)-ICD-O
9920/3
急性髓细胞样白血病,未另外分类(Acute myeloid leukemia not otherwisecategorised)
急性髓细胞样白血病,最小分化的(Acute myeloid leukemia,minimallydifferentiated)-ICD-O 9872/3
急性髓细胞样白血病,无突变(Acute myeloid leukemia,withoutmaturation)-ICD-O 9873/3
急性髓细胞样白血病,有突变(Acute myeloid leukemia,withmaturation)-ICD-O 9874/3
急性粒-单核细胞性白血病(Acute myelomonocytic leukemia)-ICD-O
9867/3
急性成单核细胞性白血病和急性单核细胞性白血病(Acute monoblasticand monocytic leukemia)-ICD-O 9891/3
急性红细胞性白血病(Acute erythroid leukemia)-ICD-O 9840/3
急性成巨核细胞性白血病(Acute megakaryoblastic leukemia)-ICD-O
9910/3
急性嗜碱细胞性白血病(Acute basophilic leukemia)-ICD-O 9870/3
急性全骨髓增殖症伴骨髓纤维化(Acute panmyelosis withmyelofibrosis)-ICD-O 9931/3
髓样肉瘤(Myeloid sarcoma)-ICD-O 9930/3
不确定细胞系的急性白血病(Acute leukemia of ambiguouslineage)-ICD-O 9805/3
V.B-细胞新生物(B-CELL NEOPLASMS)
前体造血新生物(Precursor hematopoietic neoplasm)
前体B成淋巴细胞性白血病(Precursor B lymphoblastic leukemia)/-ICD-O
9835/3
淋巴瘤(lymphoma)-ICD-O 9728/3
成熟的造血新生物(Mature hematopoietic neoplasm)
慢性淋巴细胞性白血病(Chronic lymphocytic leukemia)/-ICD-O 9823/3
小淋巴细胞性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma)-ICD-O 9670/3
造血性前淋巴细胞性白血病(hematopoietic prolymphocyticleukemia)-ICD-O 9833/3
淋巴浆细胞性淋巴瘤(Lymphoplasmacytic lymphoma)-ICD-O 9671/3
脾边缘区淋巴瘤(Splenic marginal zone lymphoma)-ICD-O 9689/3
毛细胞性白血病(Hairy cell leukemia)-ICD-O 9940/3
浆细胞骨髓瘤(Plasma cell myeloma)-ICD-O 9732/3
骨孤立性浆细胞瘤(Solitary plasmacytoma of bone)-ICD-O 9731/3
骨外浆细胞瘤(Extraosseous plasmacytoma)-ICD-O 9734/3
粘膜相关淋巴样组织的结节外边缘区造血性淋巴瘤(MALT-淋巴瘤)(Extranodal marginal zone hematopoietic lymphoma ofmucosa-associated lymphoid tissue(MALT-lymphoma))-ICD-O 9699/3
结节边缘区造血性淋巴瘤(Nodal marginal zone hematopoieticlymphoma)-ICD-O 9699/3
滤泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma)-ICD-O 9690/3
套细胞淋巴瘤(Mantle cell lymphoma)-ICD-O 9673/3
弥散性大造血淋巴瘤(Diffuse large hematopoietic lymphoma)-ICD-O
9680/3
纵膈(胸腺)大细胞淋巴瘤(Mediastinal(thymic)large celllymphoma)-ICD-O 9679/3
血管内大造血性淋巴瘤(Intravascular large hematopoieticlymphoma)-ICD-O 9680/3
原发性渗出淋巴瘤(Primary effusion lymphoma)-ICD-O 9678/3
伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)/-ICD-O 9687/3
白血病(leukemia)-ICD-O 9826/3
不确定恶性潜能的造血性增殖(hematopoietic proliferations of uncertainmalignant potential)
淋巴瘤样肉芽肿病(Lymphomatoid granulomatosis)-ICD-O 9766/1
移植后淋巴增生性障碍,多形性的(Post-transplant lymphoproliferativedisorder,pleomorphic)-ICD-O 9970/1
VI.T-细胞和NK-细胞新生物(T-CELL AND NK-CELL NEOPLASMS)
前体T-细胞新生物(Precursor T-cell neoplasms)
前体T成淋巴细胞性白血病(Precursor T lymphoblastic leukemia)/-ICD-O
9837/3
淋巴瘤(lymphoma)-ICD-O 9729/3
胚芽NK细胞淋巴瘤(Blastic NK cell lymphoma)-ICD-O 9727/3
成熟T-细胞和NK-细胞新生物(Mature T-cell and NK-cell neoplasms)
T-细胞前淋巴细胞性白血病(T-cell prolymphocytic leukemia)-ICD-O
9834/3
T-细胞大颗粒淋巴细胞性白血病(T-cell large granular lymphocyticleukemia)-ICD-O 9831/3
进攻性NK细胞白血病(Aggressive NK cell leukemia)-ICD-O 9948/3
成人T-细胞白血病/淋巴瘤(Adult T-cell leukemia/lymphoma)-ICD-O
9827/3
结节外NK/T细胞淋巴瘤,鼻型(Extranodal NK/T cell lymphoma,nasaltype)-ICD-O 9719/3
肠病型T-细胞淋巴瘤(Enteropathy type T-cell lymphoma)-ICD-09717/3
肝脾T-细胞淋巴瘤(Hepatosplenic T-cell lymphoma)-ICD-O 9716/3
皮下脂膜炎样T-细胞淋巴瘤(Subcutaneous panniculitis-like T-celllymphoma)-ICD-O 9708/3
蕈样肉芽肿病(Mycosis fungoides)-ICD-O 9700/3
塞扎里综合征(Sezary Syndrome)-ICD-O 9701/3
原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(Primary cutaneous anaplastic large celllymphoma)-ICD-O 9718/3
外周T-细胞淋巴瘤,未指定的(Peripheral T-cell lymphoma,unspecified)-ICD-O 9702/3
血管免疫母细胞性T-细胞淋巴瘤(Angioimmunoblastic T-celllymphoma)-ICD-O 9705/3
间变性大细胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphoma)-ICD-O 9714/3
不确定恶性潜能的T-细胞增殖(T-cell proliferation of uncertain malignantpotential)
淋巴瘤样丘疹病(Lymphomatoid papulosis)-ICD-O 9718/1
VII.霍奇金淋巴瘤(HODGKIN LYMPHOMA)
结节性淋巴细胞主导的霍奇金淋巴瘤(Nodular lymphocyte predominantHodgkin lymphoma)-ICD-O 9659/3
典型霍奇金淋巴瘤(Classical Hodgkin lymphoma)-ICD-O 9650/3
结节性硬化症型典型霍奇金淋巴瘤(Nodular sclerosis classical Hodgkinlymphoma)-ICD-O 9663/3
富含淋巴细胞的典型霍奇金淋巴瘤(Lymphocyte-rich classical Hodgkinlymphoma)-ICD-O 9651/3
混合细胞型典型霍奇金淋巴瘤(Mixed cellularity classical Hodgkinlymphoma)-ICD-O 9652/3
淋巴细胞缺乏型典型霍奇金淋巴瘤(Lymphocyte-depleted classicalHodgkin lymphoma)-ICD-O 9653/3
VIII.组织细胞和树突细胞新生物(HISTIOCYTIC AND DENDRITIC-CELLNEOPLASMS)
巨噬细胞/组织细胞新生物(Macrophage/histiocytic neoplasm)
组织细胞性肉瘤(Histiocytic sarcoma)-ICD-O 9755/3
树突细胞新生物(Dendritic cell neoplasms)
朗格汉斯细胞组织细胞增多病(Langerhans cell histiocytosis)-ICD-O
9751/1
朗格汉斯细胞肉瘤(Langerhans cell sarcoma)-ICD-O 9756/3
交错树突细胞肉瘤/肿瘤(Interdigitating dendritic cellsarcoma/tumor)-ICD-O 9757/3/1
滤泡性树突细胞肉瘤/肿瘤(Follicular dendritic cell sarcoma/tumor)-ICD-O
9758/3/1
树突细胞肉瘤,未另外指定(Dendritic cell sarcoma,not otherwisespecified)-ICD-O 9757/3
IX.肥大细胞增生病(MASTOCYTOSIS)
皮肤肥大细胞增生病(Cutaneous mastocytosis)
静止性系统性肥大细胞增生病(Indolent systemic mastocytosis)-ICD-O
9741/1
系统性肥大细胞增生病伴相关克隆的血液性非肥大细胞谱系疾病(Systemic mastocytosis with associated clonal,hematological non-mast celllineage disease)-ICD-O 9741/3
进攻性系统性肥大细胞增生病(Aggressive systemic mastocytosis)-ICD-O
9741/3
肥大细胞白血病(Mast cell leukemia)-ICD-O 9742/3
肥大细胞肉瘤(Mast cell sarcoma)-ICD-O 9740/3
皮肤外肥大细胞瘤(Extracutaneous mastocytoma)-ICD-O 9740/1
“B细胞”是在骨髓中成熟的淋巴细胞,并且包括幼稚B细胞、记忆B细胞或效应B细胞(浆细胞)。本申请中的所述B细胞是正常或非恶性B细胞。
本申请中的术语″抗体″以其最宽的含义使用并具体覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如,双特异性抗体)和抗体片段,只要它们表现出所期望的生物活性就可以。
短语“治疗有效量”是指(i)治疗本申请描述的具体疾病、病症或障碍的本发明化合物的量,(ii)削弱、改善或消除本申请描述的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的本发明化合物的量,或(iii)预防或延迟本申请描述的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在癌症的情况中,治疗有效量的药物可降低癌细胞的数量;减小肿瘤尺寸;抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞浸润到周围器官中;抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)肿瘤转移;在一定程度上抑制肿瘤生长;和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。就药物可预防癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞来说,其可为细胞生长抑制性的和/或细胞毒性的,如通过TTP和/或确定应答率(RR)所测量。
术语″癌症(cancer)″和″癌的(cancerous)″是指或描述哺乳动物中典型特征为未调节的细胞生长的生理学状况。″肿瘤″包含一种或多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、白血病或淋巴样恶性肿瘤。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌),肺癌,包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(″NSCLC″)、肺腺癌(adenocarcinomaof the lung)和肺鳞状细胞癌(squamous carcinoma of the lung)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric or stomach cancer),包括胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳癌(breast cancer)、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌(vulval cancer)、甲状腺癌、肝脏癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。
″慢性″给药是指以与急性模式相对的连续模式给予药物,从而将最初的治疗作用(活性)维持较长的一段时间。″间歇(intermittent)″给药不是无间断连续进行的治疗,而是性质上为循环的治疗。
对于治疗癌症、缓解癌症症状的目的,″哺乳动物″是指被分类为哺乳动物的任意动物,包括人、家畜和农场动物,以及动物园动物、运动类动物或宠物例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。优选地,所述哺乳动物为人。
与一种或多种其它治疗药物“组合”给药包括同时(共同)和以任意顺序连续(轮流)给药。
″化学治疗剂″是用于治疗癌症的生物(大分子)或化学(小分子)化合物,而与其作用机理无关。化学治疗剂包括,但是不限于:烷化剂、抗代谢药、纺丝体毒性植物生物碱(spindle poison plant alkaloids)、细胞毒性/抗肿瘤抗生素(cytotoxic/antitumor antibiotics)、拓扑异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitors)、蛋白质、抗体、光敏性药物和激酶抑制剂。化学治疗剂包括在“靶向疗法”和非靶向常规化学疗法中使用的化合物。
化学治疗剂的实例包括:地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
化学治疗剂的实例还包括:厄洛替尼(erlotinib)(Genentech/OSI Pharm.)、多西紫杉醇(docetaxel)(Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶,5-氟尿嘧啶,CAS No.51-21-8)、吉西他滨(gemcitabine)(Lilly)、PD-0325901(CAS No.391210-10-9,Pfizer)、顺铂(顺-二胺,二氯化铂(II),CAS No.15663-27-1)、卡铂(CAS No.41575-94-4)、紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂二环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,CAS No.85622-93-1, ScheringPlough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺, )、多柔比星Akti-1/2、HPPD、雷帕霉素和拉帕替尼(lapatinib)(Glaxo SmithKline)。
化学治疗剂的更多实例包括:奥沙利铂(oxaliplatin)(Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)(Millennium Pharm.)、舒尼替尼(sutent)(SU11248,Pfizer)、来曲唑(letrozole)(Novartis)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(Novartis)、XL-518(MEK抑制剂,Exelixis,WO 2007/044515)、ARRY-886(MEK抑制剂,AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂,SemaforePharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂,Exelixis)、ABT-869(VEGF和PDGF家族受体酪氨酸激酶的多靶标抑制剂,Abbott Laboratories and Genentech)、ABT-263(Bcl-2/Bcl-xL抑制剂,AbbottLaboratories and Genentech)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(fulvestrant)(AstraZeneca)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)(亚叶酸)、lonafamib(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(CPT-11,Pfizer)、Tipifamib(ZARNESTRATM,Johnson&Johnson)、卡培他滨(capecitabine)(Roche)、ABRAXANETM(不含克列莫佛(Cremophor-free))、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂(albumin-engineerednanoparticle formulations of paclitaxel)(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(vandetanib)(rINN,ZD6474,AstraZeneca)、chloranmbucil、AG1478、AG1571(SU 5271;Sugen)、temsirolimus(Wyeth)、pazopanib(Glaxo SmithKline)、canfosfamide(Telik)、塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclosphosphamide)( );磺酸烷基酯(alkyl sulfonate)例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙啶如benzodopa、卡波醌(carboquone)、meturedopa和uredopa;乙撑亚胺(ethylenimine)和甲基蜜胺(methylamelamine),包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙基硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine);番荔枝内酯(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone));喜树碱(camptothecin)(包括合成性类似物托泊替康(topotecan));苔藓抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成性类似物);cryptophycins(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8);多拉司他汀(dolastatin);多卡米星(duocarmycin)(包括合成性类似物KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;spongistatin;氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard);亚硝基脲(nitrosoureas)如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫斯汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine);抗生素如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin),刺孢霉素γ1I、刺孢霉素ωI1;蒽环类抗生素(dynemicin),蒽环抗生素A(dynemicin A);二膦酸盐(bisphosphonate)如氯膦酸盐(clodronate);埃斯培拉霉素(esperamicin);以及新抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团(enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin、放线菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、去甲柔红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地拖比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、吗啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基吗啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉子基-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)和去氧多柔比星(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esombicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycins)如丝裂霉素C(mitomycin C)、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢药如甲氨喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU);叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤(methotrexate)、喋罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤类似物如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine);嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacytidine)、6-氮鸟苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine);雄激素如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone);抗肾上腺素(anti-adrenal)如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂(folic acid replenisher)如亚叶酸(frolinic acid);醋葡醛内酯(aceglatone);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid);恩尿嘧啶(eniluracil);安吖啶(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);伊达曲杀(edatraxate);地磷酰胺(defofamine);秋水仙胺(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfomithine;依利醋铵(elliptinium acetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓(gallium nitrate);羟基脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼达明(lonidainine);美登醇(maytansinoid)如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);mopidanmol;根瘤菌剂(nitraerine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);鬼臼酸(podophyllinic acid);2-乙基肼(2-ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofiran);锗螺胺(spirogermanium);细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亚胺醌(triaziquone);2,2′,2″-三氯三乙胺;单端孢菌毒素(trichothecene)(尤其是T-2毒素(T-2toxin)、verracurin A、杆孢菌素A和anguidine);乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine);达卡巴嗪(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”);环磷酰胺;塞替派;6-硫代鸟嘌呤;巯嘌呤;甲氨喋呤;铂类似物如顺铂和卡铂;长春碱(vinblastine);依托泊苷(etoposide)(VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);长春新碱;长春瑞滨(vinorelbine)诺消灵(novantrone);替尼泊苷(teniposide);伊达曲杀(edatrexate);柔红霉素(daunomycin);氨基喋呤(aminopterin);伊班膦酸盐(ibandronate);CPT-11;拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DMFO);类视黄醇(retinoid)如视黄酸(retinoic acid);以及上述任何物质的可药用盐、酸和衍生物。
″化学治疗剂″的定义内还包括:(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药物,如抗雌激素药物(anti-estrogen)和选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM),包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括枸橼酸他莫昔芬(tamoxifen citrate))、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和(枸橼酸托米芬(toremifinecitrate));(ii)抑制芳香酶(调节肾上腺中雌激素产生)的芳香酶抑制剂,例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、(依西美坦(exemestane);Pfizer)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、(伏氯唑(vorozole))、(来曲唑;Novartis)和(阿那曲唑(anastrozole);AstraZeneca);(iii)抗雄激素药物(anti-androgen),如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物);(iv)蛋白激酶抑制剂,例如MEK抑制剂(WO 2007/044515);(v)脂质激酶抑制剂;(vi)反义寡核苷酸,特别是抑制异常细胞增殖中所涉及的信号传导途径中的基因表达的反义寡核苷酸,例如PKC-α、Raf和H-Ras,如oblimersen(Genta Inc.);(vii)核酶如VEGF表达抑制剂(例如)和HER2表达抑制剂;(viii)疫苗如基因治疗疫苗,例如 和 拓扑异构酶1抑制剂如 (ix)抗血管生成药物如贝伐单抗(bevacizumab)(Genentech);以及上述任何物质的可药用盐、酸和衍生物。
“化学治疗剂”定义中还包括治疗性抗体,比如阿仑珠单抗(alemtuzumab,Campath)、贝伐珠单抗(Genentech);西妥昔单抗(Imclone);帕木单抗(panitumumab,Amgen)、利妥昔单抗(Genentech/Biogen Idec)、培妥珠单抗(pertuzumab,2C4,Genentech)、曲妥单抗(Genentech)、托西莫单抗单抗(Bexxar,Corixia)和抗体药物轭合物奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin,Wyeth)。
具有作为化学治疗剂的治疗潜力而与本发明的PI3K抑制剂联用的人源化单克隆抗体包括:阿仑珠单抗(alemtuzumab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、贝伐珠单抗(bevacizumab)、莫比伐珠单抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠单抗(cantuzumabmertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、达克珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、pectuzumab、培妥珠单抗(pertuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、ralivizumab、雷珠单抗(ranibizumab)、瑞利珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利珠单抗(talizumab)、特非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、曲司珠单抗(trastuzumab)、Tucotuzumab西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗(urtoxazumab)和维西珠单抗(visilizumab)。
术语″哺乳动物″包括但不限于人、小鼠、大鼠、豚鼠、猴、狗、猫、马、牛、猪和羊及家禽。
本申请使用的术语″烷基″是指1-12个碳原子的饱和直链或支链单价烃基,其中所述烷基可任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。烷基基团的实例包括但不限于甲基(Me,-CH3)、乙基(Et,-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr,正丙基,-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr,异丙基,-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu,正丁基,-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu,异丁基,-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu,仲丁基,-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu,叔丁基,-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基,-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。
术语“烯基”是指具有2-12个碳原子且具有至少一个不饱和位点(即碳碳sp2双键)的直链或支链单价烃基,其中所述烯基可任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基,并包括具有“顺式”和“反式”取向(或者“E”和“Z”取向)的基团。实例包括但不限于乙烯基(ethylenyl或vinyl)(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)等。
术语“炔基”是指具有2-12个碳原子(C2-C8)且具有至少一个不饱和位点(即碳碳sp叁键)的直链或支链单价烃基,其中所述炔基可任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)等。
术语“碳环(carbocycle)”、“碳环基(carbocyclyl)”、“碳环状环(carbocyclicring)”和“环烃基(cycloalkyl)”是指具有3至12个碳原子作为单环或7至12个碳原子作为二环的单价非芳香性饱和或部分不饱和的环。具有7至12个原子的二环碳环可排列为例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统,具有9或10个环原子的二环碳环可排列为二环[5,6]或[6,6]系统,或排列为桥连系统(bridged system)如二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一碳基、环十二碳基等。
术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”和“杂环状环(heterocyclic ring)”在本申请中可交换使用,是指具有3至约20个环原子的饱和或部分不饱和(即在环中具有一个或多个双键和/或叁键)的碳环基团,其中至少一个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子,其余环原子为C,其中一个或多个环原子任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子以及1至4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子以及1至6个选自N、O、P和S的杂原子)的二环,例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环描述在Paquette,Leo A.;“Principles of Modem Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)(特别是第1、3、4、6、7和9章);“The Chemistryof Heterocyclic Compounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,NewYork,1950 to present)(特别是第13、14、16、19和28卷);以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中。术语“杂环”包括杂环烷氧基。“杂环基”还包括杂环基团与饱和、部分不饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基(piperidino)、吗啉代(morpholino)、硫吗啉代(thiomorpholino)、硫杂氧杂环己基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基(homopiperidinyl)、氧杂环庚烷基(oxepanyl)、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧杂氮杂基(oxazepinyl)、二氮杂基(diazepinyl)、硫杂氮杂基(thiazepinyl)、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、二硫杂环己基(dithianyl)、二硫杂环戊基(dithiolanyl)、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基、3-氮杂二环[4.1.0]庚烷基、氮杂二环[2.2.2]己烷基、3H-吲哚基、喹嗪基和脲基吡啶基(N-pyridyl urea)。螺环部分也包括在本定义的范围内。其中两个环碳原子取代有氧代(=O)部分的杂环基的实例为嘧啶酮基(pyrimidinonyl)和1,1-二氧代-硫吗啉基。本申请的杂环基团任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。
“芳基”表示通过从母体芳族环系中的单个碳原子除去一个氢原子得到的、具有6-20个碳原子的单价芳族烃基。在示例性结构中一些芳基表示为“Ar”。芳基包括含有与饱和、部分不饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的芳族环的二环基团。典型的芳基包括但不限于由苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚基(indenyl)、茚满基(indanyl)、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等得到的基团。芳基可任选独立地被一个或多个本申请所述取代基取代。
术语“杂芳基”是指具有5、6或7元环的单价芳族基团,以及包括5-20个原子的稠环系(其中至少一个环是芳族的),其含有独立选自氮、氧和硫中的一个或多个杂原子。杂芳基的实例为吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。本申请的杂芳基任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。
杂环或杂芳基在可能的情况下可以是碳连接的(碳联的)、氮连接的(氮联的)或氧连接的(氧联的)。通过举例而非限制,碳连接的杂环或杂芳基在以下位置进行连接:吡啶的2、3、4、5或6位;哒嗪的3、4、5或6位;嘧啶的2、4、5或6位;吡嗪的2、3、5或6位;呋喃、四氢呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位;噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位;异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位;氮丙啶的2或3位;氮杂环丁烷的2、3或4位;喹啉的2、3、4、5、6、7或8位;或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
通过举例而非限制,氮连接的杂环或杂芳基在以下位置进行连接:氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位;异吲哚或异二氢吲哚的2位;吗啉的4位;和咔唑或β-咔啉的9位。
术语“碳联单环杂芳基”是指未取代的五或六元单环杂芳基或取代的五或六元单环杂芳基,其含有独立选自N、O和S中的1、2、3或4个环杂原子。所述碳联单环杂芳基可在单环杂芳基R3基团的任何碳原子处与式I的嘧啶环的C-2位相连。碳联单环杂芳基包括,但不限于:吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、哒嗪-3-基、哒嗪-4-基、哒嗪-5-基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、嘧啶-6-基、吡嗪-2-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、三唑-3-基、三唑-1-基、四唑-5-基、四唑-1-基和四唑-2-基。碳联单环杂芳基任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。
含有独立选自氮、氧和硫的一个或多个杂原子的“碳联稠合二环C3-C20杂环基”和“碳联稠合二环C1-C20杂芳基”仅在于其芳香性不同,并且含有两个稠合在一起的环,即共享一个相同的键。碳联稠合二环杂环基和碳联稠合二环杂芳基在作为R3基团的稠合二环C3-C20杂环基或稠合二环C1-C20杂芳基的任意碳原子处与式I的嘧啶环的C-2位连接。碳联稠合二环杂环基和碳联稠合二环杂芳基包括但不限于:1H-吲唑基、1H-吲哚基、二氢吲哚-2-酮基、1-(二氢吲哚-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-二氮杂萘基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基。稠合二环杂环基和稠合二环杂芳基任选独立地取代有一个或多个本申请所述的取代基。
所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、稠合二环C4-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有以下取代基,所述取代基包括F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、任选取代的C1-C12烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C3-C12碳环基、任选取代的C2-C20杂环基、任选取代的C6-C20芳基、任选取代的C1-C20杂芳基、-(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)NR10R11和(CR4R5)t-NR10R11。
“代谢物”是通过具体化合物或其盐在体内的代谢而产生的产物。可使用本领域已知的常规技术鉴定化合物的代谢物,并使用如本申请所述的试验确定它们的活性。所述产物可起因于例如所给药化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶法裂解等。因此,本发明包括本发明化合物的代谢物,包括由以下方法产生的化合物,所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。
术语“包装说明书”是指通常包括在治疗产品的市售包装中的说明书,其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息,这些信息涉及上述治疗产品的使用。
本申请使用的短语“药用盐”是指本发明化合物的药用有机或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐(tannate)、泛酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(mesylate)、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1′-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药用盐可涉及另一种分子如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包合物(inclusion)。抗衡离子可以是稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。此外,药用盐可在其结构中具有多于一个带电原子。多个带电原子为药用盐的部分的情况可具有多个抗衡离子。因此,药用盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
若本发明化合物为碱,则期望的药用盐可通过本领域可得的任何合适方法来制备,例如用无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等)或用有机酸(如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羟乙酸、水杨酸、吡喃糖苷基酸(pyranosidyl acid)如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸如枸橼酸或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如对甲苯磺酸或乙磺酸等)处理游离碱。通常被认为适于由碱性药物化合物形成药学上有用的或可药用的盐的酸由例如以下文献讨论:P.Stahl et al,Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH;S.Berge et al,Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1 19;P.Gould,International J.ofPharmaceutics(1986)33201217;Anderson et al,The Practice of MedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York;Remington’s PharmaceuticalSciences,18th ed.,(1995)Mack Publishing Co.,Easton PA;and in The OrangeBook(Food&Drug Administration,Washington,D.C.on their website)。将这些文献公开的内容并入本文作为参考。
若本发明化合物为酸,则期望的可药用盐可通过任何合适方法来制备,例如用无机或有机碱(如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等)处理游离酸。合适盐的示例性实例包括但不限于从以下物质得到的有机盐:氨基酸如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环状胺如哌啶、吗啉和哌嗪;以及从以下物质得到的无机盐:钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。
短语“药用的”表示所述物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。
本申请使用的术语″协同的″是指比两种或更多种单个药物的加和作用(additive effect)更有效的治疗组合。对式I化合物与一种或多种化学治疗剂之间的协同相互作用的确定可基于由本申请所述测定得到的结果。使用以下方法分析这些测定的结果:Chou&Talalay组合法和使用CalcuSyn软件的剂量-效应分析(Dose-Effect Analysis),以得到联合指数(Chou&Talalay,TrendsPharmacol.Sci.4:450-454;Chou,T.C.(2006)Pharmacological Reviews68(3):621-681;Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。在数个测定系统中评价本发明提供的组合,并且可使用用于量化抗癌药物之间协同作用、加和作用和拮抗作用的标准程序来分析数据。所使用的示例性程序由Chou&Talalay在″New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy,″Academic Press,1987,Chapter 2中描述。联合指数值小于0.8表明协同,联合指数值大于1.2表明拮抗作用和联合指数值在0.8至1.2之间表明加和作用。所述联用疗法可提供“协同(synergy)”并证明为“协同的(synergistic)”,即,当所述活性成分一起使用时实现的作用大于分别使用这些化合物导致的作用的总和。当活性成分:(1)在组合的单位剂量制剂中同时配制并且同时给药或递送时;(2)作为分开的制剂经轮流或平行递送时;或(3)通过一些其它方案给药时,可达到协同作用。当在轮流疗法中递送时,当化合物例如通过在分开的注射器中分开注射而先后给药或递送时,可达到协同作用。一般而言,在轮流治疗期间,将有效剂量的各种活性成分先后(即顺次)给药,而在联用疗法中,将有效剂量的两种或更多种活性成分一起给药。
本申请使用的″载体″包括在所用的剂量和浓度对暴露于它的细胞或哺乳动物无毒的可药用载体、赋形剂和稳定剂。通常,生理学可接受的载体为pH缓冲的水溶液。生理学可接受的载体的实例包括缓冲剂如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸;低分子量(少于约10个残基)多肽;蛋白质,如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,如EDTA;糖醇如甘露醇或山梨醇;成盐的抗衡离子,如钠;和/或非离子型表面活性剂,如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
术语″治疗有效量″是指有效治疗受试者或哺乳动物的疾病或障碍的治疗组合的量。在癌症的情况下,治疗有效量的拮抗剂可降低癌细胞的数量;减小肿瘤尺寸;抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞浸润到周围器官中;抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)肿瘤转移;在一定程度上抑制肿瘤生长;和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。参见本申请的“治疗”定义。就药物可预防现存的癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞来说,其可为细胞生长抑制性的和/或细胞毒性的。
治疗组合的″生长抑制量″是能够体外或体内抑制细胞特别是肿瘤细胞例如癌细胞生长的量。出于抑制新生物细胞生长目的的治疗组合的″生长抑制量″可凭经验确定和以常规方式确定。
治疗组合的″细胞毒性量″是能够体外或体内造成细胞特别是肿瘤细胞例如癌细胞破坏的量。
术语“癌症(cancer)”和“癌的(cancerous)”是指或描述哺乳动物中典型特征为细胞数目未调节的增加(在本申请中通常称作细胞生长)的生理状况,其可能是由于细胞增殖的异常增加、细胞死亡的异常减少或细胞增殖和细胞死亡数量的失衡。癌症的实例包括但不限于造血癌症或血液相关癌症,例如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴样恶性肿瘤,也包括脾癌和淋巴结癌。
术语″过度增殖性″是指与一定程度的异常细胞增殖有关的障碍。在一个实施方案中,过度增殖性疾病为癌症。
本申请使用的″肿瘤″是指所有新生物性细胞生长和增殖,无论是良性的还是恶性的,并且包括所有癌变前细胞和癌变前组织和癌细胞和癌组织。本申请所称的术语″癌症″、″癌的″、″细胞增殖性障碍″、″增殖性障碍″和″肿瘤″不互相排斥。
本申请使用的术语″非霍奇金淋巴瘤″或″NHL″是指非霍奇金淋巴瘤的淋巴系统癌症。霍奇金淋巴瘤可大体上通过在霍奇金淋巴瘤中存在Reed-Sternberg细胞和在非霍奇金淋巴瘤中缺少所述细胞而与非霍奇金淋巴瘤区分开。由本申请所使用的术语涵盖的非霍奇金淋巴瘤的实例包括由本领域技术人员(例如,肿瘤学家或病理学家)根据本领域已知的分类方案所识别的任意非霍奇金淋巴瘤,例如在Color Atlas of Clinical Hematology,ThirdEdition;A.Victor Hoffbrand and John E.Pettit(eds.)(Harcourt Publishers Limited2000)(参见,具体地图11.57、11.58和/或11.59)中描述的修定的欧洲-美国淋巴瘤(Revised European-American Lymphoma,REAL)方案。更具体的实例包括但不限于复发或顽固性NHL(relapsed or refractory NHL)、前线低度NHL(frontline low grade NHL)、III/IV期NHL(Stage III/IV NHL)、化学治疗抗性NHL(chemotherapy resistant NHL)、前体B成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤(precursor B lymphoblastic leukemia and/or lymphoma)、小淋巴细胞性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma)、B细胞慢性淋巴细胞性白血病(B cell chroniclymphocytic leukemia)和/或前淋巴细胞性白血病(prolymphocytic leukemia)和/或小淋巴细胞性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma)、造血性前淋巴细胞性淋巴瘤(hematopoietic prolymphocytic lymphoma)、免疫细胞瘤(immunocytoma)和/或淋巴浆细胞性淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma)、边缘区B细胞淋巴瘤(marginal zone B cell lymphoma)、脾边缘区淋巴瘤(splenic marginal zonelymphoma)、结节外边缘区--MALT淋巴瘤(extranodal marginal zone--MALTlymphoma)、结节边缘区淋巴瘤(nodal marginal zone lymphoma)、毛细胞性白血病(hairy cell leukemia)、浆细胞瘤(plasmacytoma)和/或浆细胞骨髓瘤(plasmacell myeloma)、低度/滤泡性淋巴瘤(low grade/follicular lymphoma)、中度/滤泡性NHL(intermediate grade/follicular NHL)、套细胞淋巴瘤(mantle celllymphoma)、滤泡中心淋巴瘤(滤泡性的)(follicle center lymphoma(follicular))、中度弥散性NHL(intermediate grade diffuse NHL)、弥散性大造血淋巴瘤(diffuselarge hematopoietic lymphoma)、进攻性NHL(aggressive NHL)(包括进攻性前线NHL(aggressive front-line NHL)和进攻性复发NHL(aggressive relapsed NHL))、自体干细胞移植后的NHL复发或抗自体干细胞移植的NHL(NHL relapsingafter or refractory to autologous stem cell transplantation)、原发性纵膈大造血性淋巴瘤(primary mediastinal large hematopoietic lymphoma)、原发性渗出淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、高度成免疫细胞性NHL(high grade immunoblasticNHL)、高度成淋巴细胞性NHL(high grade lymphoblastic NHL)、高度小无核裂细胞性NHL(high grade small non-cleaved cell NHL)、肿块病变性NHL(bulkydisease NHL)、伯基特淋巴瘤、前体(外周)T-细胞成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤(precursor(peripheral)T-cell lymphoblastic leukemia and/or lymphoma)、成人T-细胞淋巴瘤和/或白血病(adult T-cell lymphoma and/or leukemia)、T细胞慢性淋巴细胞性白血病(T cell chronic lymphocytic leukemia)和/或前淋巴细胞性白血病(prolymphocytic leukemia)、大颗粒淋巴细胞性白血病(large granularlymphocytic leukemia)、蕈样肉芽肿病(mycosis fungoides)和/或塞扎里综合征(Sezary syndrome)、结节外自然杀伤细胞/T-细胞(鼻型)淋巴瘤(extranodalnatural killer/T-cell(nasal type)lymphoma)、肠病型T-细胞淋巴瘤(enteropathytype T-cell lymphoma)、肝脾T-细胞淋巴瘤(hepatosplenic T-cell lymphoma)、皮下脂膜炎样T-细胞淋巴瘤(subcutaneous panniculitis like T-cell lymphoma)、皮肤(皮肤性)淋巴瘤(skin(cutaneous)lymphomas)、间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma)、血管中心淋巴瘤(angiocentric lymphoma)、肠T细胞淋巴瘤(intestinal T cell lymphoma)、外周T-细胞(未另外说明)淋巴瘤(peripheral T-cell(not otherwise specified)lymphoma)和血管免疫母细胞T-细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma)。
因此,非霍奇金淋巴瘤包括造血性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、滤泡性淋巴瘤(follicularlymphoma)、小淋巴细胞性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma)、恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)、恶性T细胞淋巴瘤(malignant T cell lymphoma)、间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma)和粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosal associated lymphoid tissue lymphoma)。
式I化合物
本发明包括治疗组合,其包括具有以下结构式的式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或可药用盐:
其中:
R1选自H、F、Cl、Br、I、CN、-(CR14R15)mNR10R11、-C(R14R15)nNR12C(=Y)R10、-(CR14R15)nNR12S(O)2R10、-(CR14R15)mOR10、-(CR14R15)nS(O)2R10、-(CR14R15)nS(O)2NR10R11、-C(OR10)R11R14、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-C(=Y)NR12OR10、-C(=O)NR12S(O)2R10、-C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11、-NO2、-NR12C(=Y)R11、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-NR12SO2NR10R11、-SR10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R2选自H、F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR10、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R3为碳联单环杂芳基、碳联稠合二环C3-C20杂环基或碳联稠合二环C1-C20杂芳基,其中所示单环杂芳基、稠合二环C3-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团选自F、Cl、Br、I、-CN、-NR10R11、-OR10、-C(O)R10、-NR10C(O)R11、-N(C(O)R11)2、-NR10C(O)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-C(=O)OR10、-C(=O)NR10R11、C1-C12烷基和(C1-C12烷基)-OR10;
R10、R11和R12独立地为H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基,
或者,R10和R11与它们连接的氮一起形成C2-C20杂环状环,所述杂环状环任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自氧代、(CH2)mOR12、NR12R12、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R12、C(=O)R12、NR12C(=Y)R12、NR12S(O)2R12、C(=Y)NR12R12、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R14和R15独立地选自H、C1-C12烷基或-(CH2)n-芳基,
或者,R14和R15与它们连接的原子一起形成饱和或部分不饱和C3-C12碳环状环;
其中所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、-SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
Y为O、S或NR12;
m为0、1、2、3、4、5或6;和
n为1、2、3、4、5或6。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R1为-(CR14R15)mNR10R11,其中m为1,以及R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代的C3-C20杂环状环。所述C3-C20杂环状环可为哌嗪基,其任选取代有一个或多个基团,所述基团选自NR10R11、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R10、C(=O)R10、NR12C(=Y)R11、NR12S(O)2R11、C(=Y)NR10R11和C1-C12烷基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R1不是H。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R2为H、CH3、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基。所述C1-C20杂芳基可为单环杂芳基,其选自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、哒嗪-3-基、哒嗪-4-基、哒嗪-5-基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、嘧啶-6-基、吡嗪-2-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、三唑-3-基、三唑-1-基、四唑-5-基、四唑-1-基和四唑-2-基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3为2-氨基嘧啶-5-基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3为二环杂芳基,所述二环杂芳基选自1H-吲唑基、1H-吲哚基、二氢吲哚-2-酮基、1-(二氢吲哚-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-二氮杂萘基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3为1H-吲唑-4-基。
式I化合物的一个实例的命名为4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉;登记为CAS登记号:957054-30-7;在US 2008/0076768中描述并要求保护;在Folkes etal(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532;Belvin et al,AmericanAssociation for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 15,Abstract4004;Folkes et al,American Association for Cancer Research Annual Meeting2008,99th:April 14,Abstract LB-146;Friedman et al,American Association forCancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-110中披露;其具有式Ia:
式I化合物的另一个实例的命名为(S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙烷-1-酮;在US2008/0242665中披露并要求保护;其具有式Ib:
式I化合物的制备
可通过包括了与化学领域公知的那些操作类似的操作的合成路线合成式I化合物。起始物质通常从商业来源例如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)获得或可容易地使用本领域熟练技术人员公知的方法制备(例如,通过在Louis F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,N.Y.(1967-1999ed.或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin(包括增刊)(也可通过Beilstein在线数据库获得)中大体描述的方法制备)。
可使用制备其它噻吩和嘧啶(US 6608053;US 6492383;US 6232320;US 6187777;US 3763156;US 3661908;US 3475429;US 5075305;US2003/220365;GB 1393161;WO 93/13664);和其它杂环(在ComprehensiveHeterocyclic Chemistry,Editors Katritzky and Rees,Pergamon Press,1984中描述)的操作制备式I化合物。
可通过常规方法将式I化合物转化成可药用盐,并且可将盐转化成游离碱化合物。式I化合物可为治疗有效的游离碱或可药用盐,依赖于所期望的性质例如溶解度、溶出度、吸湿性质和药代动力学。可药用盐的实例包括与无机酸(如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸和磷酸等)或与有机酸(如甲磺酸、苯磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、乙磺酸、天冬氨酸和谷氨酸)形成的盐。所述盐可为甲磺酸盐、盐酸盐、磷酸盐、苯磺酸盐或硫酸盐。盐可为单盐或二盐。例如,所述甲磺酸盐可为单甲磺酸盐或二-甲磺酸盐。
式I化合物和盐也可作为水合物或溶剂化物存在。
在制备式I化合物中可能需要保护中间体的官能团(例如,伯胺或仲胺)。对所述保护的需要会根据远端官能团(remote functionality)的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。对所述保护的需要可容易地由本领域技术人员确定。关于保护基的一般描述及其用途,参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,NewYork,1991。
为了说明目的,方案1-7显示了制备本发明化合物以及重要中间体的一般方法。关于对各反应步骤更详细的描述,参见下面的实施例部分。本领域技术人员会理解,其它合成路径可用于合成本发明的化合物。尽管具体的起始物质和试剂在方案中描述并如下讨论,但可容易地用其它起始物质和试剂替代,从而得到各种衍生物和/或反应条件。此外,可根据本说明书使用本领域技术人员公知的常规化学对通过下述方法制备的化合物中的一些进行进一步修饰。
方案1
方案1显示由2-羧基酯、3-氨基噻吩试剂51制备噻吩并嘧啶中间体53的一般方法,其中Hal为Cl、Br或I;以及R1、R2和R10如针对式I化合物或其前体或前药所定义。
方案2
方案2显示在碱性条件下在有机溶剂中用吗啉从二-卤代噻吩并嘧啶中间体54上选择性置换4-卤素的一般方法,从而制备2-卤代-4-吗啉代噻吩并嘧啶化合物55,其中Hal为Cl、Br或I;以及R1和R2如针对式I化合物或其前体或前药所定义。
方案3
方案3显示对2-卤代-4-吗啉代-6-氢噻吩并嘧啶化合物56的6-位进行衍生的一般方法,其中R1为H。用锂化试剂处理56以除去6位质子,然后加入酰化剂R10C(O)Z,其中Z为离去基团例如卤素离子、NHS酯基、羧酸酯基或二烷基氨基,得到2-卤代-4-吗啉代-6-酰基噻吩并嘧啶化合物57,其中Hal为Cl、Br或I;以及R2和R10如针对式I化合物或其前体或前药所定义。制备6-甲酰基化合物(R10=H)的R10C(O)Z的一个实例为N,N’-二甲基甲酰胺(DMF)。
方案4
方案4显示2-卤代嘧啶中间体58与单环杂芳基硼酸(R15=H)或硼酸酯(R15=烷基)、稠合二环杂环基硼酸(R15=H)或硼酸酯(R15=烷基)或稠合二环杂芳基硼酸(R15=H)或硼酸酯(R15=烷基)试剂进行苏楚基-型偶联的一般方法,从而制备式I的2-取代的(Hy)-4-吗啉代噻吩并嘧啶化合物59,其中Hal为Cl、Br或I;和R1和R2如针对式I化合物或其前体或前药。关于苏楚基反应的综述,参见:Miyaura et al.(1995)Chem.Rev.95:2457-2483;Suzuki,A.(1999)J.Organomet.Chem.576:147-168;Suzuki,A.in Metal-Catalyzed Cross-CouplingReactions,Diederich,F.,Stang,P.J.,Eds.,VCH,Weinheim,DE(1998),pp 49-97。所述钯催化剂可为通常用于苏楚基-型交叉偶联反应的的任意催化剂,例如PdCl2(PPh3)2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、PdCl2(dppf)-DCM、Pd2(dba)3/Pt-Bu)3(Owenset al(2003)Bioorganic&Med.Chem.Letters 13:4143-4145;Molander et al(2002)Organic Letters 4(11):1867-1870;US 6448433)。
方案5
方案5显示合成炔61的一般方法,所述炔61可用于制备炔基化衍生物即化合物63。可在适当碱(Cs2CO3或类似物)存在下通过炔丙基溴60与式R10R11NH的胺(其中R10和R11独立地选自H、烷基、芳基和杂芳基,或者R10和R11与它们连接的氮一起形成杂环状环)反应来制备炔丙基胺61。关于炔丙基胺和相关合成的综述,参见Booker-Milburn,K.I.,Comprehensive OrganicFunctional Group Transformations(1995),2:1039-1074;和Viehe,H.G.,(1967)Angew.Chem.,Int.Ed.Eng.,6(9):767-778。炔61可随后与中间体62(X2=溴或碘)经由Sonogashira偶联发生反应,从而得到化合物63,其中R2和R3如针对式I化合物或其前体或前药所定义。
方案6
方案6显示用于合成炔65的一般方法,所述炔65可用于制备炔化衍生物即化合物66。可使用由Zaragoza et al(2004)J.Med.Chem.,47:2833描述的方法制备偕-二烷基炔丙基胺65。根据方案6,在CuCl和适当碱(例如,TEA或类似物)存在下,偕-二烷基氯化物64(R14和R15独立地为甲基、乙基或其它烷基)可与式R10R11NH的胺(其中R10和R11独立地选自H、烷基、芳基和杂芳基,或者R10和R11与它们连接的氮一起形成杂环状环)反应,得到炔65。炔65可与中间体62反应(经由Sonogashira偶联)得到化合物66,其中R2和R3如针对式I化合物或其前体或前药所定义。
方案7
方案7显示合成炔68的一般方法,所述炔68可用于制备炔基化衍生物即化合物69。可使用由Olomucki M.et al(1960)Ann.Chim.5:845描述的反应通过炔67(LG=甲苯磺酸酯基或其它离去基团)与式R10R11NH的胺(其中R10和R11独立地选自H、烷基、芳基和杂芳基,或R10和R11与它们连接氮一起形成杂环状环)反应来制备丁-3-炔-1-胺68(其中R14和R15独立地为H、烷基、芳基、杂芳基,或者R14和R15与它们连接的碳原子一起形成碳环状环或杂环状环)。根据针对方案5和6分别提供的描述,炔68可随后与中间体62经由Sonogashira偶联发生反应,得到化合物69,其中R2和R3如针对式I化合物或其前体或前药所定义。
可使用常规技术制备式I的噻吩并嘧啶化合物的可药用盐。通常,所述方法包括在合适的溶剂中用合适的酸处理如上所定义的式I的噻吩并嘧啶。
在如上定义的本发明的方法中,氨化步骤和Pd-介导的交叉偶联步骤都在常规条件下发生。所述钯催化剂可为通常用于苏楚基-型交叉偶联的任意催化剂,例如PdCl2(PPh3)2。所述还原剂通常为硼氢化物,例如NaBH(OAc)3、NaBH4或NaCNBH4。
化学治疗剂
一些与式I化合物组合的化学治疗剂在体外或体内抑制细胞增殖中具有经证明的出人意料和意想不到的性质。所述化学治疗剂包括:地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
地塞米松为具有抗炎和免疫抑制剂活性的有效的糖皮质激素类固醇激素。在肿瘤学中,将地塞米松给予经受化学疗法的癌症患者,从而抵抗它们抗肿瘤治疗的一些副作用。地塞米松可提高5-HT3受体拮抗剂如昂丹司琼(ondansetron)的止吐作用。地塞米松也可用在一些血液恶性肿瘤中,特别是用在治疗多发性骨髓瘤中,其中将地塞米松单独给予或与沙利度胺一起(thal-dex)给予或与阿霉素(多柔比星)和长春新碱(VAD)的组合一起给予。在脑肿瘤(原发性的或转移的)中,地塞米松用于抵抗浮肿的发展,所述浮肿可最终压迫其它脑结构。地塞米松的命名为(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-氟-11,17-二羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10,13,16-三甲基-6,7,8,11,12,14,15,16-八氢环戊并[a]菲-3-酮(CAS登记号:50-02-2)并且具有以下结构:
塞替派(tespa,thiophosphoamide,tespamin,tspa,tifosyl,)为烷化化学治疗剂,用于治疗乳癌、卵巢癌和膀胱癌(Maanen et al(2000)CancerTreat Rev 26(4):257-68;US 2670347)。也将其用作用于骨髓移植的预处理(conditioning)。塞替派的命名为N,N′N′-三亚乙基硫代磷酰胺、硫次膦基三氮丙啶(phosphinothioylidynetrisaziridine)或1,1′,1″-硫代偶磷基三氮丙啶(1,1′,1″-phosphorothioyltriaziridine)(CAS登记号:52-24-4)并且具有以下结构:
多柔比星(羟基柔红霉素(hydroxyldaunorubicin))是自20世纪60年代来广泛用在化学疗法中的DNA-干扰药物(DNA-interacting drug)。其为蒽环类抗生素并且结构上与柔红霉素相关,所述柔红霉素也嵌入在DNA中。多柔比星通常用在治疗宽范围癌症中。多柔比星的命名为(8S,10S)-10-(4-氨基-5-羟基-6-甲基-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-6,8,11-三羟基-8-(2-羟基乙酰基)-1-甲氧基-7,8,9,10-四氢并四苯-5,12-二酮(CAS登记号:23214-92-8)并具有以下结构:
长春新碱(22-氧代长春碱(22-oxovincaleukoblastine);醛基长春碱(leurocristine),VCR,LCR硫酸盐形式:长春新碱硫酸盐,Kyocristine,(Lilly),Vincosid,Vincrex)是来自马达加斯加长春花属长春花(Madagascar periwinkle Catharanthus roseus,以前称为Vinca rosea)(Johnson etal(1963)Cancer Res.23:1390-1427;Neuss et al(1964)J.Am.Chem.Soc.86:1440)的长春花生物碱。与半合成衍生物长春地辛和长春瑞滨一样,长春新碱通过与微管蛋白结合并阻止细胞制造细胞分裂时移动染色体所必需的纺锤体抑制中期的有丝分裂。长春新碱是化学治疗剂,其被给予用于治疗一些类型癌症包括白血病、淋巴瘤、乳癌和肺癌。长春新碱(leurocristine,VCR)在治疗儿童白血病和非霍奇金淋巴瘤中是最有效的,其中长春碱(vincaleukoblastine,VLB)用于治疗霍奇金病。长春新碱(CAS号:57-22-7)具有以下结构:
利妥昔单抗(Genentech/Biogen Idec;Roche,CAS登记号:174722-31-7)是定向抗CD20抗原的遗传工程化的嵌合的鼠/人单克隆抗体。利妥昔单抗是在US 5736137中称作“C2B8″的抗体。利妥昔单抗被指示用于治疗患有复发或顽固性低度或滤泡性CD20-阳性B-细胞NHL的患者。利妥昔单抗结合至细胞表面CD-20并导致B-细胞耗竭(Cartron et al(2002)Blood 99:754-758;Idusogie et al(2000)J.Immunol.164:4178-4184;AJ,et al(1999)Semin Oncol;26:66-73;US5736137)。RITUXAN(US 5677180;US 5736137)是在造血恶性肿瘤中最广泛使用的单克隆抗体并在普遍的临床实践中得到证实。RITUXAN在1997年首次获得FDA批准用于治疗复发或顽固性低度或滤泡性CD20-阳性B-细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。其在1998年6月在欧联邦也获得批准,商标名为2006年2月,与氨甲喋呤组合的RITUXAN也获得FDA批准,用于减少患有中度-至-重度活性的类风湿性关节炎的成年患者的征状或症状,所述患者已对一种或多种TNF拮抗剂治疗具有不充足的应答。利妥昔单抗抗体(也称作C2B8)的氨基酸序列及其经由在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中重组表达进行生产的示例性方法在美国专利5736137中披露。
环磷酰胺(Cytoxan,Neosar,Revimmune,cyclophosphane,B-518,Cycloblastin,Cyclostin,Endoxan,Procytox,Sendoxan,cytophosphane)为氮芥烷化剂,来自氧杂氮杂环膦烷类(oxazophorines group),用于治疗各种类型癌症和一些自身免疫性疾病(″A Review of Cyclophosphamide″,D.L.Hill(1975)Charles C.Thomas,Springfield,340pp;IARC Monographs(1975)9:135-156;Fraiser et al(1991)Drugs 42:781-795;Colvin,OmM.(1999)Curr.Pharmaceut.Design 5:555-560)。环磷酰胺是在肝脏中转化成具有化学治疗活性的活性形式的前药。环磷酰胺的主要用途是在淋巴瘤、一些形式白血病和一些实体瘤的治疗中与其它化学治疗剂一起(Shanafelt et al(2007)Cancer 109(11):2291-8;Brock N(1996)Cancer 78(3):542-7)。其是通过减慢或阻止细胞生长并通过减少免疫系统对各种疾病的应答发挥作用的化学治疗剂。
环磷酰胺的命名为N,N-二(2-氯乙基)-1,3,2-氧杂氮杂磷杂环己烷-2-胺2-氧化物(N,N-bis(2-chloroethyl)-1,3,2-oxazaphosphinan-2-amine 2-oxide)、N,N-二(2-氯乙基)四氢-2H-1,3,2-氧杂氮杂磷杂环己二烯-2-胺-2-氧化物(N,N-bis(2-chloroethyl)tetrahydro-2H-1,3,2-oxazaphosphorin-2-amine-2-oxide);1-二(2-氯乙基)氨基-1-氧代-2-氮杂-5-氧杂环膦己烷一水合物(1-bis(2-chloroethyl)amino-1-oxo-2-aza-5-oxaphosphoridin monohydrate);二(2-氯乙基)-磷酰胺环状丙醇酰胺酯(bis(2-chloroethyl)-phosphamide cyclicpropanolamide ester);或N,N-二(β-氯乙基)-N′,O-亚丙基磷酸酯二酰胺(N,N-bis(beta-chloroethyl)-N′,O-propylenephosphoric acid ester diamide),包括水合物形式(CAS号:50-18-0),并具有以下结构:
泼尼松(Meticorten,Sterapred,Sterapred DS,retrocortine,Colisone,Cortancyl,Dacortin,Decortin,Deltacortene,Deltacortone,Deltasone,Deltison,Di-Adreson,Encorton,Hostacortin,Meticorten,Orasone,Rectodelt,Sone或Ultracorten)是合成性皮质类固醇药物(US 2897216;US 2837464;US3134718;US 2579479)。泼尼松是在肝脏中转化成泼尼松龙(CAS登记号:50-24-8)的前药,所述泼尼松龙为11-羟基类似物,并主要具有糖皮质激素作用。泼尼松可口服给药或通过注射给药。泼尼松是特别有效的免疫抑制剂并用于治疗自身免疫性疾病、炎症性疾病(例如重度哮喘、过敏症、毒漆藤皮炎(poison ivy)、皮炎、狼疮、类风湿性关节炎和克罗恩病(Crohn′s disease)),以及用于预防和治疗器官移植排斥。泼尼松用于治疗癌症,包括急性成淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。泼尼松的命名为17-羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10,13-二甲基-7,8,9,10,12,13,14,15,16,17-十氢-6H-环戊并[a]菲-3,11-二酮;或17,21-二羟基孕-1,4-二烯-3,11,20-三酮;1,4-孕二烯-17α,21-二醇-3,11,20-三酮;(CAS号:53-03-2),并具有以下结构:
美法仑(L-苯丙氨酸氮芥(L-phenylalanine mustard);丙氨酸氮芥(alaninenitrogen mustard);L-PAM;左旋溶肉瘤素(melfalan);L-溶肉瘤素(L-sarcolysine);NSC-8806;CB-3025;(Glaxo SmithKline);沙可来新(Sarcoclorin))为氮芥烷化剂型化学治疗剂(US 3032584;US 3032585)。美法仑主要用于治疗多发性骨髓瘤、卵巢癌和黑素瘤(IARC Monographs(1975)9:167-180;Fumer et al(1980)Cancer Treat.Rep.64:559-574)。美法仑的命名为2-氨基-3-[4-[二(2-氯乙基)氨基]苯基]-丙酸;4-[二(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸;或对-二(2-氯乙基)氨基-L-苯基丙氨酸(CAS登记号:148-82-3),其具有以下结构:
来那度胺(CC5013,Revimid,Celgene Inc.)是沙利度胺的衍生物,在2004年(US 5635517,US 6281230)被介绍用于治疗炎症性疾病和癌症。有多种作用机理,包括直接的抗肿瘤作用、抑制肿瘤细胞的微环境载体(microenvironment support)和免疫调节作用。在体外,来那度胺通过抑制骨髓基质细胞载体、通过抗血管发生作用和抗破骨细胞发生作用和通过免疫调节活性而直接和间接地诱导肿瘤细胞凋亡。来那度胺最初预期用于治疗多发性骨髓瘤(对于多发性骨髓瘤,沙利度胺为受认可的治疗形式),但其对已知为骨髓发育不良性综合征的血液类疾病也显示效力(Richardson et al(2002)Blood 100:3063;Bartlett et al(2004)Nature Rev.4:314-322;Mitsiades et al(2004)Curr.Opin.Invest.Drugs 5:635-647;Armoiry et al.(2008)J of Clin Pharmacy&Therapeutics 33:219-226;List et al(2005)N.Engl.Jour.Med.352:549-57)。来那度胺的命名为3-(4-氨基-1-氧代异二氢吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮;3-(4-氨基-1,3-二氢-1-氧代-2H-异吲哚-2-基)-2,6-哌啶二酮;1-氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基异二氢吲哚(CAS登记号:191732-72-6)并具有以下结构:
硼替佐米(MG-341,PS-341,Millenium Pharm.)为在美国获准用于治疗复发性多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的硼酸蛋白酶抑制剂(WO96/13266;US 5780454;US 6083903;US 6297217;US 6617317;US6713446;US 6747150;US 6958319;US 7119080)。硼替佐米中的硼原子以高亲和力和特异性与26S蛋白酶催化位点结合。在正常的细胞中,所述蛋白酶通过降解泛素化蛋白而调节蛋白表达和功能并还清除细胞的异常或错折叠蛋白(Adams et al(2004)Cancer Invest 22(2):304-11;Bonvini(2007).Leukemia21(4):838-42)。硼替佐米的命名为[(1R)-3-甲基-1-({(2S)-3-苯基-2-[(吡嗪-2-基羰基)氨基]丙酰基}氨基)丁基]硼酸;(R)-3-甲基-1-((S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰氨基)丙酰氨基)丁基硼酸;或[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]-硼酸(CAS登记号:179324-69-7)并具有以下结构:
雷帕霉素(西罗莫司(sirolimus),)为用于预防器官移植排斥的免疫抑制药物,并且在肾脏移植中特别有用。雷帕霉素是由从称作Rapa Nui岛屿(更熟知为Easter Island)获得的土壤样品中的细菌即吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的大环内酯类抗生素(Pritchard DI(2005).Drug Discovery Today 10(10):688-691)。雷帕霉素抑制对白细胞介素-2(IL-2)的应答,从而阻断T-和造血因子(hematopoietics)的活化。雷帕霉素的作用模式是结合胞质蛋白FK-结合蛋白12(FKBP12)。雷帕霉素-FKBP12复合物通过直接结合mTOR Complex1(mTORC1)抑制雷帕霉素(mTOR)途径的哺乳动物靶标。也将mTOR称作FRAP(FKBP-雷帕霉素相关蛋白)或RAFT(雷帕霉素和FKBP靶标)。雷帕霉素类似物(″Rapalogs″)包括Temsirolimus(CCI-779,Wyeth)、Everolimus(RAD001,Novartis)、Deforolimus(AP23573,MK-8669,Ariad,Merck)。雷帕霉素的命名为(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9,27-二羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧杂氮杂环三十一烷-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-五酮(CAS登记号:53123-88-9)并具有以下结构:
阿糖胞苷(胞嘧啶阿糖核苷(cytosine arabinoside),Ara-C,普强(Upjohn))主要用在治疗血液恶性肿瘤包括急性髓细胞样白血病(AML)和NHL中(US3116282;Shen et al(1965)J.Org.Chem 835);Capizzi,R.L.(1996)Invest.New Drugs 14:249-256;Grant S.(1998)Adv.Cancer Res.72:197-233)。阿糖胞苷的命名为4-氨基-1-((2R,3S,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)嘧啶-2(1H)-酮;4-氨基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮;1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶;(CAS登记号:147-94-4)并具有以下结构:
CHOP为治疗非霍奇金淋巴瘤的化学疗法方案的首字母缩写词,所述化学疗法方案包括环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松/泼尼松龙(Fisher etal(1993)N Engl J Med 328(14):1002-6)。通常以4周为一周期给药CHOP。常见的治疗方案持续至少6个周期。
生物评价
一些式I化合物特异性结合PI3激酶同工型并抑制肿瘤细胞的增殖(US2008/0207611;US 2008/0039459;US 2008/0076768;US 2008/0076758;US2008/0242665;US 2008/0269210)。一些示例性式I化合物具有PI3K结合活性,IC50值小于10nM。一些式I化合物具有基于肿瘤细胞的活性,EC50值小于100nM。
对式I化合物和本申请描述的化学治疗剂的一些示例性治疗组合的抗肿瘤细胞的体外活性进行测定(实施例15)。一些式I化合物结合所述p110α同工型,其IC50小于1微摩尔,并且在小鼠异种移植物模型中显示单药体内肿瘤生长抑制。因此,式I化合物可用于治疗由异常细胞生长引起的疾病或障碍,作为单药发挥作用或发生作用或在与一种或多种化学治疗剂的联合疗法中发挥作用或发生作用。
KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA中的突变激活了在癌细胞中介导增殖和抗细胞凋亡信号传导的两种主要途径。因此,对于抑制这些途径中重要节点的目标药物,这些基因中的突变可构建伴随诊断试验(companion diagnostictest),因为突变的存在可用作病理激活的征状并依赖具体肿瘤中的给定途径。在一大组不同起源组织的细胞系中,这些基因的突变情况和其它情况可得到与对MEK和PI3激酶的选择性抑制剂的应答的相关性。此外,可对由少量异种固定的肿瘤组织(heterogeneous fixed tumor tissue)构成的临床样品进行突变检测,可使用用于KRAS、NRAS、BRAF和PI3激酶中最普遍取代的等位基因特异性Taqman测定对所述样品进行分析。
图1显示通过FACS流式细胞仪针对式Ia(GDC-0941)处理的(右栏)和未处理的(左栏)细胞测量的药效(PD)标志物的减少,所述细胞为DoHH2(淋巴瘤细胞)、WSU-DLCL2(淋巴瘤细胞)、OPM2(多发性骨髓瘤细胞)和U266(多发性骨髓瘤细胞)。实施例18提供了FACS方案,该方案用于在GDC-0941处理后细胞内检测磷酸-AKT(p-Akt)和p-S6核糖体蛋白(p-S6RP)。将细胞用5μM GDC-0941体外处理4小时。在未处理细胞(左栏)中,所述细胞系中的三种显示PI3K途径激活迹象,如由高水平p-AKT所证明,并且全部四种细胞系显示远端途径激活迹象,如由高水平磷酸-S6核糖体蛋白信号所证明。在右栏中,用GDC-0941处理的细胞具有消除的p-AKT信号和减少或消除的p-S6RP信号。针对pS6rp的剩余信号与PI3k活性对该磷酸化事件部分负责的模型一致。总的来说,这些数据表明PI3k途径在这些细胞类型中被激活,以及表明GDC-0941对完整细胞中的PI3k途径具有有效的抑制剂活性。
图2显示细胞DoHH2、WSU-DLCL2、OPM2和U266中药效(PD)标志物p-AKT、p-S6RP、p-Bad的减少,如在细胞系中通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印记所测量,其中将所述细胞系用5μM GDC-0941体外处理4小时。实施例17提供在用GDC-0941处理B细胞和骨髓瘤细胞系后通过Western印记检测p-Akt、p-BAD和p-S6核糖体蛋白的方案。如所说明的那样对细胞进行处理并通过Western印记分析溶胞产物。β肌动蛋白印记表明,每个泳道中约相等的溶胞产物负荷。所述细胞系中的三种显示PI3K途径激活迹象,如通过高水平p-AKT所证明,以及所有四种细胞系显示远端途径激活迹象,如通过未处理细胞中高水平p-S6RP信号所证明。通过用GDC-0941处理使针对p-AKT和p-S6RP的信号明显减少(当存在时),这表明这些细胞中的PI3K途径已被激活,并且表明GDC-0941对完整细胞中的所述途径具有显著的抑制剂活性。两种PD标志物的水平遵循相同的等级次序并且在图1与图2之间良好相关。
通过以下测定针对一些示例性化合物测量药效和药代动力学性质(吸收、分布、代谢和排泄(ADME)),所述测定包括:Caco-2通透性、肝细胞清除(Hepatocyte Clearance)、细胞色素P450抑制、细胞色素P450诱导、血浆蛋白结合和hERG通道阻断。
本发明包括确定用在用于治疗癌症的组合中的化合物的方法,包括:a)向体外肿瘤细胞系给药具有式I化合物和化学治疗剂的治疗组合,和b)测量协同或非协同作用。
体外细胞增殖测定
通过以下方法测量式I示例性化合物的细胞毒性或细胞生长抑制活性:在细胞培养基中建立增殖哺乳动物肿瘤细胞系,加入式I化合物,将所述细胞孵育约6小时至约5天的一段时间;和测量细胞存活力(实施例15)。基于细胞的体外测定用于测量存活力,即增殖(IC50)、细胞毒性(EC50)和诱导细胞凋亡(胱天蛋白酶活化)。
通过实施例15的细胞增殖测定测量式I化合物与化学治疗剂的组合的体外效力;荧光细胞存活力测定,从Promega Corp.,Madison,WI商购。该均质测定(homogeneous assay)方法基于同翅目萤光素酶的重组表达(US 5583024;US 5674713;US 5700670)并基于存在的ATP(代谢活性细胞的指示物)的定量确定培养物中活细胞的数目(Crouch et al(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88;US 6602677)。所述测定以96或384孔模式进行,使其可进行自动高通量筛选(HTS)(Cree et al(1995)AntiCancer Drugs6:398-404)。所述均质测定操作包括将单一试剂(Reagent)直接加到在血清补充的培养基中孵育的细胞中。不需要洗涤细胞、除去培养基和多次移液步骤。在加入试剂并混合后的10分钟内,在384-孔模式中系统检出低至15个细胞/孔。
所述均质″加入-混合-测量(add-mix-measure)″模式导致细胞溶解并产生与存在的ATP的量成比例的荧光信号。ATP的量与在培养物中存在的细胞数目直接成比例。所述测定产生″辉光型″荧光信号(由荧光素酶反应产生),其具有通常大于五小时的半衰期,依赖于细胞类型和所使用的培养基。以相对发光单位(RLU)反映活细胞。通过重组萤火虫荧光素酶使底物(甲虫荧光素(Beetle Luciferin))氧化性脱羧,伴随着将ATP转化成AMP并产生光子。延长的半衰期使之不再需要使用试剂注射器并且使多板连续或多板分批模式加工具有灵活性。该细胞增殖测定可用于各种多孔模式,例如96或384孔模式。可通过光度计或CCD相机成像装置记录数据。呈现发光输出,其为随时间测量的相对光单位(RLU)。
将单独测量的式I化合物抗具体细胞的EC50值和将单独测量的化学治疗剂抗具体细胞的EC50值与组合EC50值比较。通过Chou&Talalay方法(Chou,T.and Talalay,P.(1984)Adv.Enzyme Regul.22:27-55)计算联合指数(CI)评分。CI小于0.8表明协同作用。CI在0.8和1.2之间表明加和性。CI大于1.2表明拮抗。根据Chou&Talalay评价协同作用的强度。图4-6中的一些治疗组合在体外细胞增殖测定中显示出人意料和意想不到的协同性质,其中肿瘤型细胞系包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥散性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤。其它组合没有显示协同作用;仅显示纯粹的加和性或拮抗作用。一些组合针对一种或多种肿瘤类型为协同的,但对其它肿瘤类型不是协同的。体外细胞增殖测定中证明的协同作用为预期在治疗人患者造血癌症(包括但不限于淋巴瘤和多发性骨髓瘤)中得到相应协同作用提供了基础。
图3显示PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)和与地塞米松(Dex)和多柔比星(Dox)的组合对B-NHL细胞系DoHH2的作用。体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer Glo,Promega)测量不同抑制剂浓度(10-5至之前(近似)确定的IC50的10个相对单位)条件下的活细胞,所述不同抑制剂为式Ia、地塞米松、多柔比星和以下组合:式Ia与地塞米松的组合;和式Ia与多柔比星的组合。注意到的是,药物之间在抑制剂最高浓度的细胞杀伤程度不同。在多柔比星的情况下,加入GDC-0941造成剂量应答曲线向左适度迁移,表明细胞对联合治疗的敏感性增加。计算该组合的联合指数(CI)为~0.75,表明加和性或协同作用。地塞米松单药的相对无活性反映为较高IC50值和在测定中较弱程度的信号减少(可能表明细胞生长抑制作用或仅表明弱的细胞毒性活性)。然而,在与GDC-0941的组合中,在所有浓度都获得所述剂量应答曲线出人意料和非常显著的向左迁移。在IC50点计算的CI值为~0.3,表明在试验药物之间很难看到的出其不意的和出人意料的强协同作用。
根据表2,式Ia(GDC-0941)对多种B淋巴瘤细胞系为细胞毒性的,单药诱导强细胞凋亡(robust apoptosis)。
表2
细胞系 | 肿瘤类型 | EC50(μM) |
SUDHL6 | DLBCL | 0.01 |
RI1 | B-NHL | 0.04 |
SUDHL5 | DLBCL | 0.08 |
WSUDLCL2 | DLBCL | 0.13 |
MC116 | NHL | 0.16 |
WSUNHL | NHL | 0.16 |
Rec1 | B-NHL | 0.16 |
Granta519 | MCL | 0.21 |
Farage | DLBCL | 0.24 |
DoHH2 | DLBCL/FLL | 0.26 |
OciLy19 | DLBCL | 0.32 |
Jeko1 | MCL | 0.32 |
Bjab | Burkit′s | 0.33 |
SUDHL4 | DLBCL | 1.35 |
HT | DLBCL | 2.84 |
DB | DLBCL | 10 |
Ramos | Burkit′s | 10 |
SC1 | DLBCL | 10 |
Toledo | DLBCL | 10 |
表2中的数据表明,GDC-0941为广泛细胞毒性的并且在临床可得到的剂量时有效抗淋巴瘤细胞系。
将例如图2中的那些实验扩展到其它细胞系并且用于GDC-0941与塞替派、多柔比星、长春新碱和地塞米松的组合。通过Chou-Talalay方法计算联合指数(CI)评分(表3)。我们没有在一种情况下发现CI值>1(CI值>1表明以组合形式试验时,GDC-0941拮抗这些其它药物)。大体上,GDC-0941与这些其它药物结合良好,至少显示加和性。对于与地塞米松结合,在所有试验的细胞系中获得出人意料的和非常显著的约0.3或更低的CI值。
表3
图4显示PI3K单药物抑制剂对来自患者NHL600的原发性滤泡性淋巴瘤细胞的作用,如通过体外细胞存活和增殖测定(PromegaCorp.,Madison,WI)所确定,所述测定测量不同浓度(10-5至10μM)式Ia、GDC-0464和LY294002条件下的活细胞。由于细胞系细胞毒性数据通常被认为过高估计了这些化合物的效力,因此所述数据表明式Ia(GDC-0941)具有出人意料的和意想不到的抗原发性人癌细胞的效力程度。GDC-0464(Genentech,Inc.)为有效的噻吩并嘧啶PI3K抑制剂(US 2008/0076758)。LY294002(Eli Lilly&Co.,CAS登记号:154447-36-6)也是有效的PI3激酶抑制剂(WO2003/035099)。
图5显示PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)和与多柔比星的组合对来自患者NHL640-A055的原发性弥散性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞的作用。通过体外细胞存活和增殖测定(Cell-Titer)测量不同浓度(10-5至20μM)式Ia、多柔比星和式Ia与多柔比星的组合条件下的细胞存活力。蒽环类抗生素(Anthracyline)是大多数化学疗法方案的骨干,因此其被认为是高活性化合物。这些结果表明,对于这些体外原发性肿瘤样品,GDC-0941明显比多柔比星更有效,并且出人意料地与用体外细胞系获得的结果不同(即所述组合并不明显比单药GDC-0941好)。
图6显示了通过体外细胞增殖测定(Cell-Titer)测量的PI3K单药物抑制剂即式Ia(GDC-0941)和与地塞米松的组合对多发性骨髓瘤OPM2细胞的作用,所述测定测量不同药物浓度(表达为它们之前确定的IC50值的函数,即“1”=作出IC50应答的[药物])条件下的活细胞,所述药物为式Ia、地塞米松(Dex)和式Ia与地塞米松按固定比例的组合。对地塞米松的相对弱应答通过与GDC-0941组合得到很大提高(无论是就效力而言还是对应答程度而言),并且获得0.45的CI值,这表明两种药物之间强的协同作用。表4显示了通过Chou&Talalay方法计算的用式Ia化合物(GDC-0941)与选自地塞米松(Dex)、多柔比星(Dox)、美法仑、来那度胺和硼替佐米的化学治疗剂的治疗组合处理多种多发性骨髓瘤细胞系的联合指数评分。一些组合显示协同作用(CI<0.8)、加和性(0.8-1.2)或拮抗作用(>1.2)。这些数据表明GDC-0941并不能与所有化学治疗剂都同样良好结合。用GDC-0941和硼替佐米获得的CI’s通常在0.8和更高范围内,而用GDC-0941+地塞米松获得的CI’s较低,这表明所试验的全部细胞系的协同和更普遍的应答。
表4
表5GDC-0941与长春新碱的组合
表5显示了通过Chou&Talalay方法计算的式Ia化合物GDC-0941与化学治疗剂长春新碱的治疗组合针对不同淋巴瘤细胞系的联合指数评分。一些组合显示协同作用(CI<0.8)、加和性(0.8-1.2)或拮抗作用(>1.2)。所述数据表明GDC-0941与长春新碱十分有利地组合,特别是针对BJAB、WSU-DHL4和WSU-DLCL2。在剂量应答曲线上的三个不同点即ED50、ED75和ED90显示所述CI值,并且在剂量应答曲线上的三个不同点获得相似CI值的这一事实表明数据是稳键的,并且整个应答曲线已经迁移从而在药物组合的情况下获得增加的生物应答。
表6显示了通过Chou&Talalay方法计算的在存在或不存在生长因子IL6和IGF-1的情况下,用式Ia化合物(GDC-0941)与地塞米松的治疗组合处理不同造血恶性肿瘤细胞系的联合指数评分。一些组合显示协同作用(CI<0.8)、加和性(0.8-1.2)或拮抗作用(>1.2)。所述数据表明GDC-0941与地塞米松十分有利地组合。在剂量应答曲线上的三个不同点即ED50、ED75和ED90显示所述CI值,并且在剂量应答曲线上的三个不同点获得相似CI值的这一事实表明数据是稳键的,并且整个应答曲线已经迁移从而在药物组合的情况下获得增加的生物应答。MM1.s细胞已知对地塞米松敏感并且当与GDC-0941组合时表现出明显的协同作用。该细胞系的MM1.r突变体已知为抗地塞米松的,并且与该性质一致的是观察到总体较小的CI值。细胞因子IL-6和IGF-1是多发性骨髓瘤的骨髓微环境中的主要生长因子并通过PI3K/AKT信号传导途径参与介导信号。生长因子IL-6和IGF-1通常被认为提供化学抗性,并且在每种细胞系中,加入细胞因子增加了联合指数值。
表6GDC-0941和地塞米松的组合
表7显示了通过Chou&Talalay方法计算的在存在或不存在生长因子IL6和IGF-1的情况下,用式Ia化合物(GDC-0941)与来那度胺的治疗组合处理不同造血恶性肿瘤细胞系的联合指数评分。一些组合显示协同作用(CI<0.8)、加和性(0.8-1.2)或拮抗作用(>1.2)。所述数据表明GDC-0941与来那度胺十分有利地组合。在剂量应答曲线上的三个不同点即ED50、ED75和ED90显示所述CI值,并且对于一些细胞系,在剂量应答曲线上的三个不同点获得相似CI值的这一事实表明数据是稳键的,并且整个应答曲线已经迁移从而在药物组合的情况下获得增加的生物应答。生长因子IL-6和IGF-1通常被认为提供化学抗性,并且在每种细胞系中,加入细胞因子增加了联合指数值。
表7GDC-0941和来那度胺的组合
在多发性骨髓瘤和AML细胞系(包括OPM2和H929)中,通过AnnexinV-FACS分析测量对单药图Ia和Ib化合物和以下组合的细胞凋亡应答,所述组合为:(i)图Ia化合物(GDC-0941)与雷帕霉素的组合,和(ii)图Ib化合物与雷帕霉素的组合。测量绝对IC50的筛选条件包括:第一天-在含有10%FBS的培养基中在384-孔板上以10,000个细胞/孔涂板细胞;第二天-用所指示的化合物方案(setup)向细胞给药。当雷帕霉素与图Ia或图Ib化合物组合使用时,雷帕霉素在所述培养基中的浓度为0.1uM;和第五天-Celltiter-Glo测定。所测量的凋亡数证明组合(i)和(ii)的协同作用。
在来自AML患者的母细胞中,图Ia GDC-0941与化学治疗剂阿糖胞苷或柔红霉素的组合与单药GDC-0941相比显示增强的抗白血病活性和增强的细胞凋亡效力,分别仅剩余30%和22%活细胞。
体内肿瘤异种移植物效力
可通过如下方法体内测量本发明组合的效力,所述方法为将癌细胞的同种移植物或异种移植物移植到啮齿动物中并用所述组合治疗所述携带肿瘤的动物。根据以下因素预期不同的结果:细胞系、肿瘤细胞中一些突变体的存在或不存在、式I化合物和化学治疗剂的给药顺序、给药方案和其它因素。用药物(一种或多种)或对照物(媒介物)治疗受试小鼠并历时数周或更长时间进行监测,从而测量时间对肿瘤体积倍增、细胞杀伤对数(log cell kill)和肿瘤抑制(实施例16)。
图7显示在10只具有WSU-DLCL2淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时20天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)、CHOP和以下组合:式Ia(73mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合、式Ia(73mg/kg)与CHOP的组合。在第0天开始向小鼠给药CHOP,在第0、7和14天给药利妥昔单抗,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天,给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,在第0、1、2、3和4天给药泼尼松。在该模型中,GDC-0941和基于CHOP的组合的化学疗法仅具有适度的活性。利妥昔单抗治疗显著地更加不同于媒介物(通过Control Dunnett’s t-检验p<0.01)。GDC-0941与利妥昔单抗的组合明显比GDC-0941更好,但通过时序(log-rank)分析表明,其与单独的利妥昔单抗没有不同。与任一种单独药物相比,GDC-0941与CHOP的组合在效力方面得到显著的增强。
图8显示在10只具有DoHH-2肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时34天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)、CHOP和以下组合:式Ia(73mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合和式Ia(100mg/kg)与CHOP的组合。在第0、7和14天向小鼠静脉给药利妥昔单抗(每周一次,保持3周)、从第1天开始给药CHOP,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,在第0、1、2、3和4天给药泼尼松。CHOP化学疗法定群或GDC-0941单一疗法定群显著不同于媒介物。利妥昔单抗单一疗法相对更有效,在治疗期间引起2个部分应答和4个完全应答。GDC-0941没有显著拮抗利妥昔单抗活性,但其没有提供额外的抗肿瘤活性。相反,GDC-0941与CHOP化学疗法的组合在益处方面获得非常显著的增加,超出了任一种单药的活性,并且产生2个部分应答和2个完全应答。
图9显示在10只具有DoHH2肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时27天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(75mg/kg)、CHOP和以下组合:式Ia(75mg/kg)与CHOP的组合、式Ia(75mg/kg)与环磷酰胺(30mg/kg)的组合、式Ia(75mg/kg)与多柔比星(2.47mg/kg)的组合、式Ia(75mg/kg)与长春新碱(0.38mg/kg)的组合和式Ia(75mg/kg)与泼尼松(0.15mg/kg)的组合。在第0天向小鼠给药CHOP,在第0天给药环磷酰胺,在第0天给药多柔比星,在第0天给药长春新碱,和在第0-4天每天给药泼尼松,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia,保持21天。CHOP组分方案为:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。该实验证实并扩展了图8的结果,从而表明GDC-0941和CHOP在所述模型中各自具有相似和仅适度的活性。如前面所述的那样,GDC-0941与CHOP组合在抗肿瘤活性方面得到非常显著的增强。出人意料地,由于没有由体外实验预测到这一点,因此实质上,在GDC-0941和CHOP之间注意到的所有协同作用可归因于正是由于GDC-0941和长春新碱的组合,而与GDC-0941逐个配对试验的CHOP的其它三种组分没有表现出增加的效力。
图10显示在10只具有BJAB淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时25天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(73mg/kg)、CHOP和以下组合:式Ia(73mg/kg)与CHOP的组合。在第0天开始向小鼠给药一次CHOP,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia和媒介物,保持21天。CHOP方案:环磷酰胺(30mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、多柔比星(2.475mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、长春新碱(0.375mg/kg,静脉注射,每天一次,保持1天)、泼尼松(0.15mg/kg,口服给药,每天一次,保持5天)。在第0天,给药一次环磷酰胺、多柔比星和长春新碱,和在第0、1、2、3和4天给药泼尼松。这些数据显示,在BJAB淋巴瘤模型中,GDC-0941或CHOP化学疗法仅具有适度的活性,并且尽管没有组实现统计学显著性,但所述组合具有增加的活性。
图11显示在10只具有BJAB淋巴瘤肿瘤异种移植物的小鼠的定群中历时25天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia(GDC-0941)(75mg/kg)、利妥昔单抗(5mg/kg)和以下组合:式Ia(75mg/kg)与利妥昔单抗(5mg/kg)的组合。在第0、7和14天向小鼠给药利妥昔单抗,同时通过口腔灌饲每天给药式Ia和媒介物,保持21天(口服给药,每天一次,保持21天)。如图10中所示,单药GDC-0941在该BJAB淋巴瘤模型中仅具有适度活性。与单药GDC-0941相比,利妥昔单抗的活性为适度的并且没有通过与GDC-0941组合而进一步增强。在该研究中,通过时序检验分析表明,所有组都与媒介物显著不同。
图12显示在10只具有NCI-H929多发性骨髓瘤异种移植物的小鼠的定群中历时22天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)和单药治疗:式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(1mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)、来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持21天)和地塞米松(10mg/kg)(口服给药,保持5天/断掉2天/保持4天)。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。通过腹膜内注射每天给药来那度胺,保持21天。在第0-4和7-10天口服给药地塞米松。该实验证明,GDC-0941的单药活性与来那度胺或地塞米松单药治疗的活性相似,它们的活性被硼替佐米效力超过。硼替佐米单药治疗在该模型中产生3个部分应答。
图13显示在10只具有多发性骨髓瘤OPM-2细胞异种移植物的小鼠的定群中历时24天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、单药治疗:式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天);硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周);来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,保持5天/断掉2天/保持5天/断掉2天/保持5天);和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,保持5天/断掉2天/保持5天);和以下组合:式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)的组合;式IaGDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)的组合;和式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。通过腹膜内注射在第0-4、7-11和14-18天给药来那度胺。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。在该实验中,减少剂量的硼替佐米导致与媒介物无差异的亚临床应答。用单药GDC-0941、来那度胺或地塞米松治疗的定群具有无差别的和适度的肿瘤活性,但向地塞米松中加入GDC-0941倾向于增加抗肿瘤活性。该结果是从之前的体外细胞系研究预测的,但不可从文献中公开的现有研究预测到。
图14显示10只具有多发性骨髓瘤MM1.s细胞异种移植物的小鼠的定群中历时27天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、式Ia GDC-0941(73mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(1mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持2周半)、来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持21天)和地塞米松(10mg/kg)(口服给药,保持5天/断掉2天/保持5天)。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10和14天静脉给药硼替佐米。通过腹膜内注射每天给药来那度胺,保持21天。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。该实验证明,GDC-0941的单药活性与来那度胺、硼替佐米或地塞米松单药治疗的活性相似。
图15显示在10只具有多发性骨髓瘤MM1.s细胞异种移植物的小鼠的定群中历时40天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、单药治疗:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5);和以下组合:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)的组合;和式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。MM1.s模型对这些单药和联合治疗为相对抗性的,但有一个例外;与体外实验一致的是,GDC-0941与地塞米松的组合与单药组分相比具有极好的活性。出人意料并意想不到的是,在GDC-0941+地塞米松定群进行组合药物治疗期间内,肿瘤消退,产生7个部分应答。没有其它组在该研究中产生客观应答。当在第11天停止地塞米松治疗时,肿瘤停止消退并以与用GDC-0941继续治疗的肿瘤一致的速度生长。这些数据清楚表明地塞米松与GDC-0941的组合意想不到的效力。
图16显示在10只具有多发性骨髓瘤NCI-H929细胞异种移植物的小鼠的定群中历时33天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持21天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中)、单药治疗:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每周两次,保持3周)、来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)和地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5);和以下组合:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与硼替佐米(0.5mg/kg)(静脉注射,每天一次,保持3天)的组合;式IaGDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)与来那度胺(25mg/kg)(腹膜内给药,5/2/5/2/5)的组合;和式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持1天4)与地塞米松(3mg/kg)(口服给药,5/2/5)的组合。通过口腔灌饲每天给药式1aGDC-0941,保持21天。在第0、3、7、10、14和17天静脉给药硼替佐米。在第0-4、7-11和14-18天通过腹膜内注射给药来那度胺。在第0-4和7-11天口服给药地塞米松。在H929模型中,在组合组中加入GDC-0941显著增强了单药硼替佐米、来那度胺和地塞米松的适度活性。
图17显示在每组10只具有预先建立的DoHH2人淋巴瘤细胞系异种移植物的小鼠的实验定群中历时40天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持20天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中);单药治疗:式Ia GDC-0941(75mg/kg或100mg/kg)(口服给药,每天一次,保持20天)、式Ib(2.5mg/kg或4mg/kg)(口服给药,每天一次,保持20天)、雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周);或联合疗法:式Ia GDC-0941(75mg/kg)(口服给药,每天一次,保持20天)+雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周),或2.5mg/kg式Ib(口服给药,每天一次,保持20天)+雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每周一次,保持3周)。雷帕霉素对肿瘤生长显示出很少的作用或没有显著作用,而单药治疗显示对肿瘤生长的剂量相关抑制,同时两种组合都显示对肿瘤生长显著增强的抑制。
图18显示了在每组10只具有预先建立的WSU-DLCL2人淋巴瘤细胞系异种移植物的小鼠的实验定群中历时25天的平均肿瘤体积变化,其中在第0天给药:媒介物(口服给药,每天一次,保持20天)(0.5%甲基纤维素于去离子水中:0.2%吐温80于去离子水中);单药治疗:式Ia GDC-0941(60mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、式Ib(1mg/kg)(口服给药,每天一次,保持21天)、雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持21天),或联合疗法:式Ia GDC-0941(60mg/kg)(口服给药,每天一次,保持18天)+雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持18天)或式Ib(1mg/kg)(口服给药,每天一次,保持18天)+雷帕霉素(6mg/kg)(腹膜内给药,每天一次,保持18天)。单药治疗对肿瘤生长显示很少的作用,而组合对肿瘤生长显示显著增强的抑制。
药物组合物
本发明的药物组合或制剂包括式I化合物、化学治疗剂和一种或多种可药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂的组合。
本发明的式I化合物和化学治疗剂可以呈非溶剂化形式以及与药用溶剂如水、乙醇等形成的溶剂化形式存在,预期的是本发明包括溶剂化和非溶剂化形式。
本发明式I化合物和化学治疗剂也可以呈不同互变异构形式存在,并且所有这些形式都包括在本发明的范围中。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指可通过低能垒互相转化的不同能量的结构异构体。例如,质子互变异构体(也称为质子移变互变异构体)包括通过质子迁移进行的互相转化,如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组进行的互相转化。
药物组合物包括未分装组合物(bulk composition)和单独的剂量单位,其包含不止一种(例如,两种)药物活性剂(包括式I化合物和选自本申请所述的其它药物列表的化学治疗剂)和任意无药物活性的赋形剂、稀释剂、载体或助流剂。所述未分装组合物和每种单独的剂量单位可含有固定量的前述药物活性剂。所述未分装组合物是还没有形成单独的剂量单位的物质。说明性剂量单位为口服剂量单位例如片剂、丸剂、胶囊等。类似地,通过给药药物组合物治疗患者的方法也预期包括给药所述未分装组合物和单独的剂量单位。
药物组合物还包括同位素标记的本发明化合物,其与本申请所述的化合物相同,只不过一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中常见原子质量或质量数的原子代替。预期任何具体原子或元素的所有同位素都包括在本发明化合物和它们的用途的范围中。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素,如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。某些同位素标记的本发明化合物(例如,用3H和14C标记的化合物)用于化合物和/或底物的组织分布测定。氚标记的(3H)和碳-14(14C)同位素由于其易于制备及可检测性,从而是有用的。此外,用较重的同位素如氘(即,2H)取代可得到起因于较好代谢稳定性的某些治疗优点(例如,体内半衰期增加或剂量需求降低),因此在一些情况中可以是优选的。发射正电子的同位素如15O、13N、11C和18F用于正电子发射成像(PET)研究以检查底物受体的占据。同位素标记的本发明化合物通常可通过遵循与方案中和/或下文本申请的实施例中披露的操作所类似的操作,通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
为了用在用于治疗性处置(包括预防性处置)哺乳动物(包括人)的过度增殖性疾病的治疗组合中,通常根据标准药学实践配制式I化合物和化学治疗剂。本发明提供了药物组合物,其包含式I化合物和一种或多种可药用载体、助流剂、稀释剂、添加剂或赋形剂。
合适的载体、稀释剂、添加剂和赋形剂是本领域技术人员公知的,并且包括以下物质,如碳水化合物、蜡、水溶性聚合物和/或水可溶胀聚合物(swellable polymer)、亲水性物质或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等。所用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用本发明化合物的方式和目的。通常基于本领域技术人员认为给予哺乳动物安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。一般而言,安全溶剂为无毒性含水溶剂如水和可在水中溶解或混溶的其它无毒性溶剂。合适的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如,PEG 400、PEG 300)、二甲基亚砜(DMSO)、Cremophor(例如,CREMOPHOR BASF)及其混合物。制剂还可包括以下物质中的一种或多种:缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂(opaquing agent)、助流剂、加工助剂(processing aid)、着色剂、增甜剂、芳香剂、矫味剂和提供药物(即本发明化合物或其药物组合物)的优质外观或辅助制造药物产品(即药物)的其它已知添加剂。
制剂可使用常规溶出和混合操作制备。例如,将大块的药品(即,本发明化合物或化合物的经稳定形式(例如,与环糊精衍生物或其它已知复合剂(complexation agent)的复合物))在一种或多种上述赋形剂存在下溶于合适的溶剂中。通常将本发明化合物配制成提供容易可控制药物的剂量且使患者能够依从所开出的方案的药物剂型。
取决于用于给药药物的方法,用于施用的药物组合物(或制剂)可按多种方式包装。一般地,用于分配的物品包括容器,容器内存放有适当形式的药物制剂。合适的容器是本领域技术人员公知的,并且包括以下物质,如瓶(塑料的和玻璃的)、小袋(sachet)、安瓿、塑料袋、金属圆筒等。容器还可包括防止不慎重取得包装中的内含物的的防干扰装置(tamper-proof assemblage)。此外,在容器上具有描述容器中的内含物的标签。所述标签还可包括适当的注意事项。
可制备本发明化合物的药物制剂用于多种给药途径和类型。例如,具有期望的纯度的式I化合物可任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂(Remington′s Pharmaceutical Sciences(1995)18th edition,Mack Publ.Co.,Easton,PA)以冻干制剂、磨细的粉末剂或水溶液剂形式混合。配制可如下进行:在环境温度在适当的pH以及在适当的纯度与生理学可接受的载体(即在采用的剂量和浓度下对受体是无毒性的载体)混合。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度,但范围可为约3至约8。
药物制剂优选为无菌的。用于体内给药的制剂必须是无菌的。这样的灭菌通过用无菌过滤膜过滤容易地实现。
药物制剂通常可储存为固体组合物、冻干制剂或水溶液剂。
本发明的药物制剂将按照与良好医学实践一致的方式(即量、浓度、时间表、过程、媒介物和给药途径)来确定剂量和给药。在此背景下考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、病症的起因、药物的递送位点、给药方法、给药的时间表和医学实践者已知的其它因素。所给药的化合物的“治疗有效量”将由这些考虑因素控制,并且是预防、改善或治疗凝结因子介导的病症所需的最小量。所述量优选低于对宿主有毒或明显使宿主对流血更敏感的量。
每剂量口服或肠胃外给药的初始药学有效量的式I化合物为约每日0.01-1000mg/kg,即约0.1至20毫克/kg患者体重,所使用的化合物的典型的最初范围为0.3至15毫克/kg/日。所给药的式I化合物的剂量和化学治疗剂的剂量各自在约1mg至约1000mg/单位剂量形式范围内,或约10mg至约100mg/单位剂量形式。式I化合物和化学治疗剂的剂量可按约1∶50至约50∶1的重量比给药,或按约1∶10至约10∶1的重量比。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定性在所用的剂量和浓度下对受体是无毒性的,并且包括缓冲剂如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸和蛋氨酸(methionine);防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵;氯化六甲双铵(hexamethonium chloride);苯扎氯铵、苄索氯铵;苯酚、丁醇或苄醇;对羟基苯甲酸烷基酯,如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯;儿茶酚;间苯二酚(resorcinol);环己醇;3-戊醇和间甲酚);低分子量(少于约10个残基)多肽;蛋白质,如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,如EDTA;糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇;成盐的抗衡离子,如钠;金属络合物(例如,Zn-蛋白质络合物);和/或非离子型表面活性剂,如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分还可包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中,例如在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊(nanocapsules))中或在巨乳液(macroemulsion)中,分别为羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。所述技术披露于Remington′s Pharmaceutical Sciences 16thedition,Osol,A.Ed.(1980)中。
可制备式I化合物的缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有式I化合物的固态疏水性聚合物的半渗透性基质,其中基质以成形的物品形式(例如薄膜或微胶囊)存在。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如,聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(US3773919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸γ-乙酯的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羟乙酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-羟乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
所述药物制剂包括适于本申请详述的给药途径的制剂。制剂可适宜地以单位剂量形式存在并可通过药学领域公知的任何方法制备。技术和制剂通常参见Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。所述方法包括使活性成分与构成一种或多种助剂(accessory ingredient)的载体结合的步骤。通常制剂如下制备:使活性成分与液态载体或微细分散的固态载体或与这两种载体同时均匀和紧密的结合,然后必要时,对产品进行成型。
适于口服给药的式I化合物和/或化学治疗剂的制剂可制备为离散的单位,如各自含有预定量的式I化合物和/或化学治疗剂的丸剂(例如,硬丸剂或软丸剂)、明胶胶囊剂、扁囊剂、含片(troche)、锭剂(lozenge)、水性混悬剂或油性混悬剂、可分散散剂或颗粒剂、乳剂、糖浆剂或酏剂。式I化合物的量和化学治疗剂的量可作为组合制剂配制在丸剂、胶囊剂、溶液剂或混悬剂中。可选择地,式I化合物和化学治疗剂可单独配制在丸剂、胶囊剂、溶液剂或混悬剂中,用于轮流给药。
可根据本领域公知的用于制备药物组合物的任意方法制备制剂,并且所述组合物可含有一种或多种试剂,包括增甜剂、矫味剂、着色剂和防腐剂,以提供适口的制剂。压制片可如下制备:在合适的机器中对自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分以及任选混合的粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂进行压制。模制片可如下制备:在合适的机器中对用惰性液态稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制。可任选对片剂进行包衣或刻痕,并任选进行配制以提供活性成分从其中缓慢或控制释放。
本发明药物制剂的片剂赋形剂可包括:填料(或稀释剂),增加组成片剂的药物粉末的总体积;崩解剂,当将片剂吞服时推动所述片剂崩解为小的碎片(理想上为单独的药物颗粒)并促进药物快速溶出和吸收;粘合剂,保证颗粒和片剂以所需的机械强度形成并在压制片剂后保持片剂在一起,防止片剂在包装、运输和常规操作过程中崩解成组成粉末(component powder);助流剂,提高构成片剂的粉末在制备过程中的流动性;润滑剂,保证压片粉末在制备过程中不粘附在用于压制所述片剂的设备上。它们促进粉末混合物流动通过所述压片机并使加工完成的片剂排出所述设备时的摩擦和破碎最小化;抗粘附剂具有与所述助流剂相似的功能,减少构成所述片剂的粉末与用于冲压片剂形状的机器之间在制备过程中的粘附;结合到片剂中的矫味剂赋予所述片剂更可口的味道或掩盖难闻的味道,和着色剂有助于识别和患者顺应。
含有活性成分以及混合有适于制造片剂的无毒性可药用赋形剂的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是,例如,惰性稀释剂,如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠;造粒剂和崩解剂(granulating and disintegrating agent),如玉米淀粉或海藻酸;粘合剂,如淀粉、明胶或阿拉伯胶;以及润滑剂,如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的或可通过已知技术(包括微胶囊化)包衣,以延迟在胃肠道的崩解和吸收,由此在较长的时间提供持续的作用。例如,可采用延时物质,如单独的或与蜡结合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
对于治疗眼部或其它外部组织如嘴和皮肤而言,所述制剂优选作为局部软膏剂(ointment)或乳膏剂(cream)使用,其含有的活性成分的量为例如,0.075至20%w/w。当配制成软膏剂时,活性成分可与石蜡(paraffinic)或可与水混溶的软膏基质一起使用。可供选择地,活性成分可与水包油性乳膏基质一起配制成乳膏。
乳膏基质的水相可包括多元醇,即,具有两个或更多个羟基的醇,如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及这些醇的混合物。局部制剂可理想地包括增强活性成分吸收或渗透通过皮肤或其它感染区域的化合物。所述皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
本发明的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成,包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地,包括亲水性乳化剂以及作为稳定剂的亲脂性乳化剂。合起来,含有或不含有稳定剂的乳化剂构成了所谓的乳化蜡(emulsifying wax),所述蜡和油和脂肪一起构成了形成乳膏制剂的油性分散相的乳化软膏基质。适用于本发明制剂的乳化剂和乳化稳定剂包括60、80、十八醇/十六醇(cetostearyl alcohol)、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
本发明药物制剂的水性混悬剂含有活性物质以及混合有适于制备水性混悬剂的赋形剂。所述赋形剂包括助悬剂,如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶,以及分散或润湿剂(dispersing or wetting agent),如天然存在的磷脂(例如,卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如,聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如,十七亚乙氧基十六醇(heptadeca ethyleneoxycetanol))、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇脱水物(hexitol anhydride)的偏酯的缩合产物(例如,聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(polyoxyethylene sorbitan monooleate))。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种增甜剂如蔗糖或糖精。
药物组合物可呈无菌注射制剂,如无菌注射水性混悬剂或油性混悬液制剂形式存在。该混悬液可使用上文已提及的合适的分散剂或润湿剂和助悬剂根据本领域已知方法配制。无菌注射制剂还可以是于无毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液,如于1,3-丁二醇中的溶液,或由冻干粉末制备的。可使用的可接受媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液(Ringer′s solution)和等张氯化钠溶液。此外,无菌不挥发性油(sterile fixed oil)通常可用作溶剂或助悬介质。出于该目的,可采用任何温和的不挥发性油,包括合成性甘油一酯或甘油二酯。此外,脂肪酸如油酸同样可用于制备注射剂。
可与载体物质结合以产生单一剂量形式的活性成分的量将随着所治疗的宿主和具体的给药模式而变化。例如,意在对人类口服给药的定时释放制剂可含有约1至1000毫克活性物质,以及含有适当和适宜量的载体物质,所述载体其可占总组合物(重量:重量)的约5至约95%。可制备药物组合物以提供给药时容易测量的量。例如,意在用于静脉输注的水溶液每毫升溶液可含有约3至500μg活性成分,从而合适体积的输注以约30毫升/小时的速率出现。
适于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂,其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期受体的血液等张的溶质;以及水性和非水性无菌混悬剂,其可包括助悬剂和增稠剂。
适于局部给药至眼部的制剂还包括滴眼剂,其中将活性成分溶于或悬浮于合适的载体(尤其是活性成分的含水溶剂)中。在所述制剂中存在的活性成分的浓度优选为约0.5至20%w/w,例如约0.5至10%w/w,例如约1.5%w/w。
适于在口内局部给药的制剂包括糖锭(lozenge),其含有于矫味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性成分;锭剂(pastille),其含有于惰性基质(如明胶和甘油,或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分;以及漱口剂,其包含于合适液态载体中的活性成分。
适于直肠给药的制剂可呈现为栓剂形式,其具有合适基质(其包含例如可可脂或水杨酸酯)。
适于肺内或经鼻给药的制剂具有例如为0.1至500微米范围的粒度(包括在0.1和500微米之间,增量为例如0.5、1、30微米、35微米等的粒度),其通过鼻道经快速吸入给药或通过口经吸入给药,以便到达肺泡囊(alveolarsacs)。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适于气雾剂或干粉给药的制剂可根据常规方法制备,并可与其它治疗药物(如迄今用于治疗或预防下文所述的病症的化合物)一起递送。
适于阴道给药的制剂可呈现为阴道栓剂、棉塞(tampon)、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂,这些制剂除了活性成分外还含有本领域已知为适当的载体。
制剂可包装在单位剂量或多剂量容器例如密封安瓿或小瓶中,并且可在冷冻干燥(冻干)条件下储存,在立即使用前仅需要加入无菌液态载体例如水,用于注射。即时注射溶液剂和混悬剂(Extemporaneous injection solutions andsuspension)从前述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有本申请上文所述的日剂量或单位日亚剂量(sub-dose)或其适当分数的活性成分的制剂。
本发明还提供了兽用组合物(veterinary composition),由此其含有上文定义的至少一种活性成分以及兽用载体。兽用载体是用于给药所述组合物目的的物质,并可为固态、液态或气态物质,这些物质在兽医领域要么是惰性的要么是可接受的,并且与活性成分相容。这些兽用组合可经肠胃外、口服或经任何其它期望的途径给药。
联用疗法
式I的化合物可与一些化学治疗剂联用,用来治疗造血恶性肿瘤和恶化前过度增殖性病症和非新生物或非恶性过度增殖性病症。在某些实施方案中,式I的化合物与具有抗过度增殖性质或用于治疗造血恶性肿瘤的化学治疗剂在药物组合制剂或给药方案中作为联用疗法联用。药物组合制剂或给药方案的化学治疗剂优选具有对式I的化合物的补充活性,由此它们彼此不会不利地影响。治疗组合中的所述化合物可按对于所预期的目的是有效的量给药。在一个实施方案中,本发明的药物制剂包含例如本申请描述的式I化合物和化学治疗剂。在另一个实施方案中,通过以下给药方案给药所述治疗组合,其中将治疗有效量的式I化合物以每天两次至每三周一次(q3wk)的范围给药,并且将治疗有效量的化学治疗剂单独、轮流地、以每天两次至每三周一次(q3wk)的范围给药。
本发明的治疗组合包括产品,所述产品包含式I化合物和选自以下的化学治疗剂:地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷,其为组合制剂用于单独、同时或先后治疗过度增殖性疾病。
所述联用疗法可作为同时或先后方案给药。当先后给药时,所述组合可按两次或更多次给药方式给药。联用给药包括使用分开的制剂或单一的药物制剂同时给药,和以任一顺序先后给药,其中优选的是存在两种(或所有)活性药物同时发挥其生物活性的一段时间。
任何上述同时给药药物的合适剂量是目前所用的剂量,并且由于新鉴定的药物和其它化学治疗剂或治疗的联用作用(协同作用),所述剂量可降低,以增加治疗指数或减轻毒性或其它副作用或后果。
在抗癌治疗的一个具体的实施方案中,所述治疗组合与外科治疗和放射治疗联用作为辅助治疗。本发明的联用疗法包括给药至少一种式I的化合物和一种或多种其它癌症治疗方法或代谢物。对式I化合物(一种或多种)和化学疗法药物(一种或多种)的量和相对给药时限进行选择,以便实现期望的联用治疗效果。
药物组合物的给药
可通过适于要治疗的病症的任意途径给药本发明的治疗组合。合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、吸入、皮内、鞘内、硬膜外和输注技术)、透皮、直肠、鼻腔、局部(包括口腔和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。局部给药也可包括使用透皮给药例如透皮贴剂或离子透入装置。药物的配制在Remington′s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,(1995)Mack Publishing Co.,Easton,PA中讨论。药物制剂的其它实例可在Liberman,H.A.and Lachman,L.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,Vol3,2nd Ed.,New York,NY中找到。对于局部免疫抑制治疗,可通过损伤区内给药给予所述化合物,包括在移植前用所述抑制剂灌注所述移植物或以其它方式使所述移植物与所述抑制剂接触。应当理解的是,优选的途径可随例如接受者的状况而变化。当口服给药所述化合物时,可将其与可药用载体、助流剂或赋形剂一起配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。当胃肠外给药所述化合物时,可将其与可药用胃肠外媒介物或稀释剂一起以单位剂量可注射形式进行配制,如下面详述。
治疗人患者的剂量可在约10mg至约1000mg式I化合物范围内,例如约100mg至约300mg所述化合物。可将剂量每天给药一次(QD),每天给药两次(BID)或更频繁的给药,取决于药代动力学(PK)和药效学(PD)性质,包括具体化合物的吸收、分布、代谢和排泄。此外,毒性因素可能影响剂量和给药方案。当口服给药时,对于给定的一段时间,所述丸剂、胶囊或片剂可每天吞服两次、每天一次或更低频率例如每周一次或每两周一次或每三周一次。可将所述方案重复多个治疗周期。
治疗方法
(1)式I化合物和(2)化学治疗剂的治疗组合用于治疗疾病、病症和/或障碍,所述疾病、病症和/或障碍包括但不限于以PI3激酶途径的激活为特征的那些疾病、病症和/或障碍。因此,本发明的另一个方面包括治疗可通过抑制脂质激酶包括PI3进行治疗的疾病或病症的方法。在一个实施方案中,治疗造血恶性肿瘤的方法包括将治疗组合作为组合制剂或轮流给药至哺乳动物,其中所述治疗组合包含治疗有效量的式I化合物和治疗有效量的一种或多种化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。(1)式I或II化合物和(2)化学治疗剂的治疗组合可用于治疗过度增殖性疾病或障碍,所述过度增殖性疾病或障碍包括肿瘤、癌症或新生物组织,以及恶化前过度增殖性疾病和非新生物过度增殖性疾病或非恶性过度增殖性疾病。在一个实施方案中,将人患者用治疗组合和可药用载体、助剂或媒介物治疗,其中所述治疗组合的式I化合物或其代谢物以可检测地抑制PI3激酶活性的量存在。
造血恶性肿瘤包括非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML、MCL。
本发明的另一个方面提供药物组合物或治疗组合,用于治疗患有本申请的疾病或病症的哺乳动物例如人的所述疾病或病症。本发明还提供药物组合物在制备用于治疗患有本申请所述疾病或病症的温血动物如哺乳动物例如人的所述障碍的药物中的用途。
式I化合物的代谢物
本申请描述的式I化合物的体内代谢产物也落入本发明的范围内。所述产物可以是由例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱脂化、酶法裂解等而引起的。因此,本发明包括式I化合物的代谢物,包括由以下方法产生的化合物,所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。
代谢产物通常如下鉴定:制备本发明化合物的放射标记的(例如,14C或3H)同位素,将其以可检测的剂量(例如,大于约0.5mg/kg)肠胃外给药至动物,如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或给药至人,允许足够发生代谢的时间(通常约30秒至30小时),然后将其转化产物与尿、血样或其它生物试样分离。这些产物容易分离,因为它们进行了标记(其它的通过使用能够与代谢物中存活的抗原表位结合的抗体来分离)。以常规方式例如通过MS、LC/MS或NMR分析确定代谢物结构。一般而言,代谢物的分析以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究中相同的方式完成。所述代谢产物,只要它们不是在体内另外存在的,就用于本发明化合物的治疗剂量的诊断测定。
制品
在本发明的另一实施方案中,其提供了含有用于治疗上文描述的疾病和病症的式I化合物的制品和“试剂盒”。在一个实施方案中,所述试剂盒包含容器,所述容器包含式I的化合物。所述试剂盒还可包含附在容器上或容器中的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用来指通常包括在治疗产品的市售包装中的说明书,其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息,这些信息涉及所述治疗产品的使用。合适的容器包括,例如,瓶、小瓶、注射器、泡罩包装(blister pack)等。容器可从多种材料(如玻璃或塑料)形成。容器可装有有效治疗所述病症的式I的化合物或其制剂,并可具有无菌入口(例如,容器可为静脉注射溶液袋或具有可由皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶)。在组合物中至少一种活性药物是式I的化合物。标签或包装说明书指示所述组合物用于治疗选择的病症如癌症。在一个实施方案中,标签或包装说明书指示包含式I的化合物的组合物可用于治疗起因于异常细胞生长的病症。标签或包装说明书还可指示所述组合物可用于治疗其它病症。可供选择地或另外地,所述制品还可包含第二种容器,所述容器包含药用缓冲液,如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲生理盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。试剂盒还可包括从商业和使用者角度看是期望的其它物质,包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。
试剂盒还可包含给药式I的化合物以及第二种药物制剂(如果存在)的说明。例如,若试剂盒包含第一种组合物(含有式I的化合物)和第二种药物制剂,则试剂盒还可包含将第一种和第二种药物组合物同时、先后或分开给予需要所述制剂的患者的说明。
在另一实施方案中,试剂盒适于递送固态口服形式的式I的化合物,如片剂或胶囊剂。这样的试剂盒优选包括多个单位剂量。所述试剂盒可以包括卡片,所述卡片具有按预期使用次序定位的剂量。这样的试剂盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是公知的,并且广泛用于包装药物单位剂量形式。如果期望的话,可提供记忆辅助装置(memory aid),其可呈例如数字、字母或其它标记形式,或具有日历插页,所述记忆辅助装置指定在可对所述剂量进行给药的治疗时间表中的天数。
根据一实施方案,试剂盒可包含(a)在其中含有式I的化合物的第一个容器;以及任选的(b)在其中含有第二种药物制剂的第二个容器,其中所述第二种药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二种化合物。可供选择地或另外地,所述试剂盒还可包含第三个容器,其包含药用缓冲液,如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲生理盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。其还可包括从商用和使用者角度来看是期望的其它物质,包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。
当试剂盒包含式I和第二种治疗药物即化学治疗剂的组合物时,所述试剂盒可包含用于容纳分开的组合物的容器,如分开的瓶或分开的箔包装(foilpacket),然而,分开的组合物还可容纳在单一的未分开的容器中。典型地,试剂盒包含给药分开的组分的说明。当分开的组分优选以不同剂量形式(例如口服和肠胃外)给药时,当以不同剂量间隔给药时,或当对组合的单独组分进行滴定对主治医师是期望之时,所述试剂盒形式是特别有益的。
一般制备操作
一般操作A-1苏楚基偶联:
所述苏楚基-型偶联反应用于在嘧啶环的2-位连接稠合二环杂环或杂芳基(参见方案4)。一般而言,取代的2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶5可与1.5当量的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)1H-吲唑7合并并溶解在3当量的碳酸钠(其为浓度为1M的于水和等体积乙腈中的溶液)中。根据US 2008/0039459;US 2008/0076768;US 2008/0076758;US 2008/0207611的方法制备中间体7,将它们并入本文作为参考。加入催化量的或更多量的低价钯试剂例如二(三苯基膦)二氯化钯(II)。可用多种硼酸或硼酸酯代替所指示的吲唑硼酸酯。还可选择地,可例如用四氢吡喃基保护吲唑的氮。在一些情况下,用醋酸钾代替碳酸钠来调节水层的pH。然后将反应混合物在BiotageOptimizer微波反应器(Biotage,Inc.)中在一定压力加热至约140-150℃,保持10至30分钟。内容物用乙酸乙酯萃取或用另一种有机溶剂萃取。蒸发有机层后,可在硅胶上或通过反相HPLC纯化产物8。
一般操作A-2苏楚基偶联:
所述苏楚基-型偶联反应用于在嘧啶环的2-位连接单环杂芳基(参见方案4)。一般而言,取代的2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶5可与1.5当量的5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)嘧啶-2-胺7a结合并溶解在3当量碳酸钠或碳酸钾中(其为浓度为1M的于水和等体积乙腈中的溶液)。根据US 2008/0269210;US 2008/0242665的方法制备中间体7a,将它们并入本文作为参考。加入催化量的或更多量的低价钯试剂例如二(三苯基膦)二氯化钯(II)。可用多种硼酸或硼酸酯代替所指示的频那醇硼酸酯。还可选择地,可例如用四氢吡喃基保护嘧啶-2-胺的氮。可一些情况下,用醋酸钾代替碳酸钠来调节水层的pH。然后加热反应混合物,例如在Biotage Optimizer微波反应器(Biotage,Inc.)中在一定压力下加热至约100-150℃,保持10至30分钟。将内容物用乙酸乙酯或用另一种有机溶剂萃取。蒸发有机层后,可在硅胶上或通过反相HPLC纯化产物。
一般操作B酰胺偶联:
将2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲酸13用于DMF中的1.5当量HATU、3当量烷基胺和3当量DIPEA处理至约0.1M浓度。将反应混合物搅拌直到结束,并在乙酸乙酯中用饱和碳酸氢钠溶液萃取一次。干燥有机层,过滤并浓缩得到粗制中间体。该中间体经由反相HPLC纯化得到产物15。
一般操作B-1酰胺偶联:
将4-吗啉代-2-(吡啶-3-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲酸13a用于DMF中的1.5当量的HATU、3当量的烷基胺(R-NH2)和3当量的DIPEA处理至约0.1M浓度。搅拌反应混合物直到结束,并在乙酸乙酯中用饱和碳酸氢钠溶液萃取一次。干燥有机层,过滤并浓缩得到粗制中间体。将该中间体经由反相HPLC纯化得到产物15a。
一般操作B-2酰胺偶联:
将2-氯-4-吗啉代-6-((哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶用于DMF中的约1.5当量的偶联剂例如HATU、约3当量的羧酸(RCO2H)和过量的胺碱例如DIPEA处理至约0.1M浓度。将反应混合物搅拌直到结束并在乙酸乙酯中用饱和碳酸氢钠溶液萃取一次。干燥有机层,过滤并浓缩得到粗制中间体。
一般操作B-3还原性胺化:
将2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛溶解在二氯乙烷中至浓度为0.2M。向该溶液中加入1.5至2.0当量的伯胺或仲胺(R2NH)、约10当量的原甲酸三甲酯和约1当量乙酸。将混合物搅拌2-6小时,然后加入1.5当量的三乙酰氧基硼氢化钠。搅拌12至16小时后,将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠中并用乙酸乙酯萃取数次,得到还原性胺化中间体,将所述中间体在硅胶上纯化或以粗品用在下一反应中。
一般操作C磺酰胺形成:
将2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-磺酰氯17悬浮在DCM中,然后加入约2当量胺(HNR2)和约3当量胺碱例如DIPEA。通过LCMS监测反应直到结束。将粗制反应混合物用乙酸乙酯稀释,用饱和氯化铵萃取并用乙酸乙酯回提一次。合并有机层并浓缩至干。将粗制磺酰胺中间体18直接用在随后的苏楚基偶联反应中。
一般操作D醇合成
将2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶4悬浮在THF中,至浓度为0.2M,并在干冰/乙腈浴中冷却至-50℃,然后加入2当量浓度为2.5M的nBuLi的己烷溶液。15分钟后,向溶液中加入3.0摩尔当量的环状酮或非环状酮(R2C(=O)。将反应混合物继续在-50℃搅拌1小时,然后在大多数情况下使其至0℃。当通过TLC或质谱判断反应结束时,将其在饱和氯化铵水溶液中淬灭并用EtOAc萃取两次。浓缩有机层并作为粗制混合物使用,在硅胶上纯化,或可将产物12溶解在最少量的乙腈中并过滤,从而除去剩余的起始物质4。
一般操作E除去叔丁氧基羰基(BOC)
将十当量或更大当量的4N HCl/二噁烷(使用或不使用二氯甲烷作为共溶剂)加入到起始物质(上面所示的一般方案但也使用类似的框架(scaffold))中。偶尔需要加热至40℃,保持数小时,从而除去Boc基团。浓缩反应混合物至干并以粗品形式用在随后的反应中。
一般操作F一锅法苏楚基偶联反应
将于1M Na2CO3水溶液(3当量)和乙腈(3当量)中的2-氯-6-碘-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶19(1当量)、苯基硼酸或杂环硼酸(R1-B(OH)2,1.1当量)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.1当量)在密封微波反应器中在100℃加热10至40分钟,得到5。一旦结束,将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑7(1.3eq)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.1eq)加到相同的锅中。将反应混合物在密封微波反应器中加热至150℃,保持10至15分钟。将混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取。将合并的有机层浓缩得到粗产物8。
一般操作G酰胺偶联反应
搅拌于二氯甲烷中的2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-胺22(1当量)、酰氯(约2当量)和三乙胺(2当量)。通过LC/MS监测反应直到结束。蒸发混合物得到粗制酰胺23,将其不经纯化直接用于下一步反应。
一般操作H乙酰胺、苯甲脒和磺酰胺的制备
向冷却至0℃的浓度为0.25至0.40M的1-(2-氯-4-吗啉代噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基)-N-甲基甲胺于DCM中的溶液中加入1.5当量TEA,然后滴加在DCM中稀释的1.0至1.5当量的烷基-酰氯或芳基-酰氯或磺酰氯。将反应混合物在环境温度搅拌并通过LCMS监测结束。结束后,用DCM增加反应体积并向溶液中加入稀碳酸氢钠水溶液。分离有机层和水层。最后,有机层用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。真空浓缩干燥的有机溶液,如果需要,通过硅胶色谱法纯化产物。
一般操作I针对苯胺的酰胺偶联反应
将于DMF中的3-(2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)苯胺24(1当量)、羧酸(1.5当量)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.2当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-(N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU,1.5当量)和N,N-二异丙基乙基胺(2.5当量)在室温搅拌。通过LC/MS监测反应直到结束。将反应混合物用乙酸乙酯稀释,用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用MgSO4干燥,过滤并蒸发得到酰胺产物25。
一般操作J 6-碘置换和2-苏楚基偶联
向2-氯-6-碘-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶19(0.05g,0.13mmol)于DMF(1.00mL)中的溶液中加入适当的苯胺(200mol%)、Cs2CO3(50mol%)、Pd2(dba)3(5mol%)和XANTPHOS(10mol%)。将反应混合物在Biotage optimizer微波反应器中在一定压力下加热至110℃,保持30分钟。进行一般操作A后真空浓缩所得溶液得到26。
一般操作K 6-氨基烷基酰化和2-苏楚基偶联
向(2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲胺27(50mg,0.2mmol)于CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入Et3N(84μL,0.6mmol)和适当的酰氯或其HCl盐(0.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌18-48小时,然后用水淬灭。水层用EtOAc萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥并真空浓缩。根据一般操作A使所述2-氯粗制产物与硼酸酯试剂7和钯催化剂偶联,得到28,将其通过反相HPLC纯化方法纯化。
可选择地,向(2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲胺27(111mg,0.39mmol)于DMF(5mL)的溶液中加入2,6-卢剔啶(48.2μL,0.41mmol)和适当的酰氯或其盐酸盐(0.39mmol)。将反应混合物在室温搅拌18-72小时,然后用水淬灭。水层用EtOAc萃取。合并的有机物用MgSO4干燥并真空浓缩。根据一般操作A使2-氯粗制产物与硼酸酯试剂7和钯催化剂偶联,得到20mg 28,通过反相HPLC纯化方法纯化所述28。
一般操作L氟代吡啶上的胺取代
将2-氯-6-(6-氟吡啶-3-基)-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶、约四当量的伯胺或仲胺(R=H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基)和约二当量的二异丙基乙基胺于N-甲基吡咯烷(~0.1M)中的混合物在密封微波反应器中加热至约130-140℃,保持10~40分钟,然后高真空除去挥发物。粗制混合物通过快速色谱法纯化得到中间体2-氯-6-(6-氨基吡啶-3-基)-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶,其可按照一般操作A与单环杂芳基、稠合二环杂环或杂芳基硼酸酯试剂发生苏楚基偶联。
实施例
为了说明本发明,将以下实施例包括在本发明中。然而,应当理解的是,这些实施例不是限制本发明,仅是意在说明实践本发明的方法。本领域技术人员会意识到,可容易地对所描述的化学反应进行调整以制备多种本发明的其它PI3K抑制剂,并且制备本发明化合物的供选方法被认为包括在本发明的范围内。例如,本发明的非示例性化合物的合成可通过对本领域技术人员而言显而易见的变化形式来顺利进行,这些变化形式例如,通过适当地保护干扰基团,通过利用并非本申请所述的本领域已知的其它合适试剂和/或通过反应条件的常规变化形式。可供选择地,本申请披露的或本领域已知的其它反应将被理解为具有制备本发明的其它化合物的适用性。
实施例1 2,4-二氯-噻吩并[3,2-d]嘧啶3
将3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯1(13.48g,85.85mmol)和脲(29.75g,5当量)的混合物在190℃加热2小时。将热的反应混合物倒在氢氧化钠溶液上,过滤除去任意不溶物质。然后将混合物酸化(HCl,2N)得到1H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-2,4-二酮2,其为白色沉淀物,过滤收集所述沉淀物并风干(9.49g,66%)。1HNMR 400MHz,d6-DMSO)δ6.90(1H,d,J=5.2Hz),8.10(1H,d,J=5.2Hz),11.60-11.10(2H,br s)。
将1H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-2,4-二酮2(9.49g,56.49mmol)和三氯氧磷(150mL)的混合物回流加热6小时。然后在剧烈搅拌下将反应混合物冷却并倒在冰/水上,得到沉淀物。然后过滤混合物得到2,4-二氯-噻吩并[3,2-d]嘧啶3,其为白色固体(8.68g,75%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(1H,d,J=5.5Hz),8.13(1H,d,J=5.5Hz)。
实施例2 2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶4
将2,4-二氯-噻吩并[3,2-d]嘧啶3(8.68g,42.34mmol)、吗啉(8.11mL,2.2当量)和MeOH(150mL)的混合物在室温搅拌1小时。然后过滤反应混合物,用水和MeOH洗涤,得到2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶4,其为白色固体(11.04g,100%)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ3.74(4H,t,J=4.9Hz),3.90(4H,t,J=4.9Hz),7.40(1H,d,J=5.6Hz),8.30(1H,d,J=5.6Hz)。
实施例3 2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10
在-78℃,向2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶4(1.75g,6.85mmol)于无水THF(40mL)中的悬浮液中加入2.5M正丁基锂(nBuLi)的己烷溶液(3.3mL,1.2当量)。搅拌1小时后,加入无水DMF(796μL,1.5当量)。将反应混合物在-78℃搅拌1小时,然后缓慢温热至室温。在室温再过2小时后,将反应混合物倒在冰/水上,得到黄色沉淀物。过滤收集该沉淀物并风干,得到2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10(1.50g,77%)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ3.76(4H,t,J=4.9),3.95(4H,t,J=4.9),8.28(1H,s),10.20(1H,s)。
实施例4 2-氯-6-碘-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶41
在-78℃,向2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶39(3.0g,11.1mmol;根据合成2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶的操作制备,不同的是用3-氨基-4-甲基-噻吩-2-甲酸乙酯开始)于THF(60mL)中的溶液中加入n-BuLi(8.9mL,2.5M于Et2O中)。将所得浆液温热至-40℃并搅拌50分钟。然后将反应混合物冷却至-78℃,加入I2(5.6g,22.2mmol)于THF(30mL)中的溶液。将溶液温热至室温并搅拌5小时。通过加入水将反应淬灭。分离有机层,水层用CH2Cl2萃取。合并的有机物用饱和Na2S2O3水溶液洗涤,用Na2SO4干燥,过滤并真空浓缩,得到2-氯-6-碘-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶41(3.8g,84%收率)。
实施例5
4-(2-氯-6-(哌嗪-1-基甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉30
在室温,将2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10(3.5g)、1-BOC-哌嗪(2.76g)和原甲酸三甲酯(4.05mL)的混合物在1,2-二氯乙烷(300mL)中搅拌1小时。向该混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.92g),将反应混合物在室温搅拌24小时。然后用盐水淬灭混合物,用二氯甲烷萃取,干燥(MgSO4)并真空除去溶剂。使用快速色谱法纯化残余物,得到4-(2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.4g)。用HCl于二氯甲烷/甲醇处理得到4-(2-氯-6-(哌嗪-1-基甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉30。
实施例6(2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)-N-甲基甲胺35
将2-氯-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10(2.0g)溶解在50mL甲苯和50mL THF中,然后加入20mL 40%甲基胺/H2O。将反应混合物在室温和氮气气氛中搅拌24小时。真空除去溶剂,将残余物溶解在50mL甲醇和50mLTHF中,逐份加入NaBH4。将该反应混合物在室温和氮气气氛中搅拌24小时,通过LCMS确定反应结束。真空除去溶剂,通过快速色谱法(EtOAc/EtOH)纯化粗制产物得到1.12g 35(53%收率)。MS(Q1)300(M+)。
实施例7(2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)-N-甲基甲胺37
将2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并-[3,2-d]嘧啶-6-甲醛36溶解在20mL甲苯和20mL THF中,然后加入15mL 40%甲基胺/H2O,将反应混合物搅拌24小时。真空浓缩反应混合物,将残余物溶解在30mL甲醇和30mL THF中,然后加入NaBH4。将反应混合物在室温搅拌至少24小时,通过LCMS确认产物形成。真空除去溶剂,通过快速色谱法纯化粗制产物得到2.53g(2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)-N-甲基甲胺37(70%收率)MS(Q1)314(M)+
实施例8
4-(2-氯-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉31
于二氯甲烷和三乙胺中的N-BOC-哌嗪和甲磺酰氯的反应得到4-甲磺酰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。使用于二氯甲烷中的HCl(2M)断裂BOC保护基,得到1-甲磺酰基-哌嗪HCl盐。
在室温,将2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10(1.00g)、1-甲磺酰基-哌嗪(750mg)和原甲酸三甲酯(3.80mL)的混合物在1,2-二氯乙烷(30mL)中搅拌6小时。向该混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(900mg),将反应混合物在室温搅拌24小时。然后用盐水淬灭混合物,用二氯甲烷萃取,干燥(MgSO4)并真空除去溶剂。残余物用热乙酸乙酯研磨得到4-(2-氯-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉31,其为白色固体(1.01g)。
实施例9 4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑7-路线1
根据US 2008/0076768;US 2008/0076758;WO 2006/046031的方法制备中间体7,将它们并入本文作为参考。
实施例10
1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑40
根据US 2008/0039459;US 2008/0076768;US 2008/0076758;US2008/0207611的方法制备中间体40,将它们并入本文作为参考。
实施例11
2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛11
将2-氯-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛10(100mg,0.35mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑(70)(95mg,0.39mmol)和碳酸钠(112mg)的混合物悬浮在甲苯(2.5mL)、乙醇(1.5mL)和水(0.7mL)中。向该混合物中加入二(三苯基膦)氯化钯(II)(13.5mg),将反应容器用氩气吹洗。将反应混合物在120℃微波处理1小时,然后在DCM和水之间分配,有机层用盐水洗涤,用硫酸镁干燥,过滤并真空蒸发。使用快速色谱法纯化所得残余物得到2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛11(97mg)。
实施例12
4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉(式Ia,GDC-0941):
将来自实施例4的4-(2-氯-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉31(2.00g)、4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑7(2.26g)、甲苯(24mL)、乙醇(12mL)、水(6mL)、碳酸钠(1.72g)和PdCl2(PPh3)2(325mg)的混合物在微波中加热至130℃,保持90分钟(US2008/0076768;WO 2006/046031,并入本文作为参考)。
冷却反应混合物,用氯仿稀释,用盐水洗涤,干燥(MgSO4)并真空除去溶剂。使用快速色谱法(乙酸乙酯,然后5%乙酸乙酯/甲醇)纯化残余物,然后用乙醚研磨,得到式Ia化合物GDC-0941(1.4g)。MS数据:(ESI+):MH+514。NMR数据:(CDCl3):δ2.67-2.71(4H,m),2.81(3H,s),3.29-3.33(4H,m),3.89(2H,s),3.89-3.93(4H,m),4.08-4.12(4H,m),7.41(1H,s),7.51(1H,t,J=7.2),7.60(1H,d,J=8.3),8.28(1H,d,J=7.5),9.02(1H,s),10.10(1H,br)。
实施例13
(S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙烷-1-酮(式Ib):
使2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛36(495mg)与Boc-哌嗪经由一般操作B-3反应,得到4-((2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
使4-((2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(777mg)经受一般操作E得到2-氯-7-甲基-4-吗啉代-6-((哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶的HCl盐。使2-氯-7-甲基-4-吗啉代-6-((哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶HCl盐(590mg)与乳酸经由一般操作B-2反应得到(S)-1-(4-((2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙烷-1-酮。
使(S)-1-(4-((2-氯-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙烷-1-酮(60mg)与50mg 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)嘧啶-2-胺经由一般操作A-2反应,得到10mg式Ib(US 2008/0242665,并入本文作为参考)。MS(Q1)499.3(M)+。
实施例14p110α(α)PI3K结合测定
结合测定:初始偏振实验在Analyst HT 96-384(Molecular Devices Corp,Sunnyvale,CA.)上进行。用于荧光偏振亲和力测量的试样如下制备:将1∶3连续稀释的p110αPI3K(Upstate Cell Signaling Solutions,Charlottesville,VA)(由20μg/毫升于偏振缓冲液(10mM Tris(pH 7.5)、50mM NaCl、4mM MgCl2、0.05%Chaps和1mM DTT)中的最终浓度开始)加至最终浓度为10mM的PIP2(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)中。在室温孵育30分钟后,反应通过分别加入GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)(最终浓度分别为100nM和5nM)来停止。在384孔黑色低容量Proxi板(PerkinElmer,Wellesley,MA.)中针对若丹明荧光团(rhodamine fluorophore)(λex=530nm;λem=590nm)用标准截止滤波器(cut-off filter)进行读数。将荧光偏振值描绘为蛋白质浓度的函数,EC50值通过使用KaleidaGraph软件(Synergy software,Reading,PA)将数据拟合成4-参数方程来获得。该实验还确立了在随后与抑制剂的竞争实验中使用的适当蛋白质浓度。
抑制剂的IC50值如下确定:将结合有PIP2(10mM最终浓度)的0.04毫克/毫升p110αPI3K(最终浓度)加至孔中,所述孔含有1∶3连续稀释的拮抗剂,在偏振缓冲液中的ATP最终浓度为25mM(Cell Signaling Technology,Inc.,Danvers,MA)。在室温孵育30分钟后,反应通过分别加入GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)(最终浓度分别为100nM和5nM)来停止。在384孔黑色低容量Proxi板(PerkinElmer,Wellesley,MA.)中针对若丹明荧光团(λex=530nm;λem=590nm)用标准截止滤波器进行读数。将荧光偏振值描绘为拮抗剂浓度的函数,IC50值通过在Assay Explorer软件(MDL,San Ramon,CA.)中将数据拟合成4-参数方程来获得。
可供选择地,对PI3K的抑制在放射性测定中使用浓度为1μM的纯化的重组酶和ATP来确定。将化合物在100%DMSO中进行连续稀释。将激酶反应混合物在室温孵育1小时,反应通过加入PBS终止。随后使用S形剂量响应曲线拟合(可变斜率)确定IC50值。
实施例15体外细胞增殖测定
式I或式II化合物的效力通过采用以下方案(Promega Corp.TechnicalBulletin TB288;Mendoza等人(2002)Cancer Res.62:5485-5488)进行的细胞增殖测定来测量。所述发光细胞存活力测定(包括试剂和方案)为商购的(Promega Corp.,Madison,WI,Technical Bulletin TB288)。所述测定评估化合物进入细胞和抑制细胞增殖的能力。测定原理基于通过对均质测定中存在的ATP进行定量确定存在的活细胞数目,其中加入Cell-Titer Glo试剂导致细胞溶解和通过荧光素酶反应生成发光信号。发光信号与存在的ATP的量成正比。
操作:第1天-向细胞板(Cell Plates)(384-孔黑色,透明底部,microclear,来自Falcon#353962的带盖子的TC板)接种,收获细胞,以1000个细胞/54μl/孔在384孔细胞板中接种细胞,进行3天测定。细胞培养基:RPMI或DMEM高糖(high glucose)、10%胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺,P/S。在37℃、5%CO2条件下孵育过夜(O/N)。
第二天-将药物加入到细胞中,稀释化合物,DMSO板(对于9个点以1∶2连续稀释),在96孔板的第2栏中加入20ul浓度为10mM的化合物。对于总共9个点,在整个板中使用Precision进行1∶2连续稀释(10μl+20μl100%DMSO)。培养基板为来自Nunc(目录编号:249946)的96-孔圆锥形底聚丙烯板(1∶50稀释)。在所有孔中加入147μl培养基。使用Rapidplate将来自DMSO板每个孔中的3μl DMSO+化合物转移到培养基板上每个相应孔中。对于2种药物组合研究(2drug combo study),使用Rapidplate将来自DMSO板的每个孔的针对一种药物的1.5μl DMSO+化合物转移到培养基板上的每个相应孔中。然后,将另一种药物(1.5ul)转移到培养基板上。
向细胞中加入药物,细胞板(1∶10稀释),向细胞中直接加入6μl培养基+化合物(在细胞上已有54μl培养基)。在37℃、5%CO2条件下,在不经常打开的培养箱中孵育3天。
第5天-培育板,在室温解冻Cell Titer Glo缓冲液。将细胞板从37℃移出并平衡至室温,保持约30分钟。向Cell Titer Glo底物中加入Cell Titer Glo缓冲液(瓶对瓶)。向每孔细胞中加入30μl Cell Titer Glo试剂(Promega目录编号:G7572)。在板震摇器上放置约30分钟。在Analyst HT板读数器上读取发光(半秒/孔)。
细胞存活力测定和组合测定:将细胞以1000-2000细胞/孔接种在384-孔板中,保持16小时。在第二天,在96孔板中在DMSO中制备9份化合物的1∶2系列稀释液。使用Rapidplate robot(Zymark Corp.,Hopkinton,MA)将所述化合物进一步稀释成生长培养基。然后将稀释的化合物加入到384-孔细胞板的四倍孔中,在37℃和5%CO2孵育。4天后,使用Cell-Titer Glo(Promega)根据制造商的指示通过发光测量活细胞的相对数目并在Wallac Multilabel读数器(PerkinElmer,Foster City)上读数。使用Prism 4.0软件(GraphPad,SanDiego)计算EC50值。将组合测定中的药物进行给药,以4X EC50的浓度开始。如果是药物的EC50>2.5μM的情况,则所使用的最高浓度为10μM。在所有测定中同时加入PI3K抑制剂和化学治疗剂或相隔4小时(相继)加入PI3K抑制剂和化学治疗剂。
体外细胞增殖测定中的额外实例包括以下步骤:
1.将等份的100毫升细胞培养物(在培养基中含有约104细胞(对于细胞系和肿瘤类型,参见图1A-C))沉积在384孔不透明壁板的每孔中。
2.制备含有培养基但不含细胞的对照孔。
3.将化合物加至实验孔中,然后孵育3-5天。
4.将板平衡至室温并保持约30分钟。
5.加入体积与每孔中存在的细胞培养基的体积相同的CellTiter-Glo试剂。
6.将内含物在定轨振荡器(orbital shaker)中混合2分钟以诱导细胞溶解。
7.将板在室温孵育10分钟以稳定发光信号。
8.记录发光信号并以图表形式报道,其为RLU=相对发光单位。
9.使用Chou和Talalay组合方法和使用了CalcuSyn软件(Biosoft,Cambridge,UK)的剂量-效应分析进行分析,目的是获得联合指数。
可选择地,将细胞以最佳密度在96-孔板中接种并在试验化合物的存在下孵育4天。随后向测定培养基中加入Alamar BlueTM,将细胞孵育6小时,然后在544nm激发,590nm发射读数。使用S形剂量响应曲线拟合计算EC50值。
可选择地,药物处理48小时后,使用Cell Titer glo试剂(Promega Inc.,Madison,WI)分析增殖/存活力。在所有存活力测定中,将DMSO处理用作对照。使用XL拟合软件(IDBS,Alameda,CA)计算IC50值。
从ATCC或DSMZ获得AML细胞系AP-1060、EOL-1、FKH-1、GF-D8、HEL、HL-60、HNT-34、Kasumi-1、KG-1、ME-1、ML-2、MOLM-13、MOLM-16、MV4-11、NOMO-1、OCI-AML2、OCI-AML3、OCI-AML5、OCI-M1、OCI-M2、PL-21、SET-2、SIG-M5、SKM-1、THP-1、UKE-1和UT-7。将细胞在含有10%热灭活FBS(Sigman-Aldrich)和2mol/L谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中维持。用于Western印记的抗体购自Cell Signal Technology,例外的是p110δ抗体从Epitomics获得。抑制剂GDC-0941在Genentech合成。雷帕霉素、Ara-C和柔红霉素购自Sigma。制备所有化合物,其为于DMSO中的原液并在使用时在测定缓冲液中稀释。通过Ficoll分离从AML患者外周血或骨髓样品中分离母细胞。在PBS中洗涤后,将分离的细胞在含有10%FBS和所指示的细胞因子混合物(IGF-1、SCF、GMCSF和IL-3,各自为10ng/ml)的RPMI 1640培养基中培养。
从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC,Manassas,VA)获得人多发性骨髓瘤细胞系,在早期的研究中也提及过该细胞系。在RPMI 1640培养基(补充有10%胎牛血清、100单位/ml青霉素、2mML-谷氨酰胺和100mg/ml链霉素(Life Technology,Grand Island,NY))中,在37℃和5%CO2中培养细胞。
实施例16体内小鼠肿瘤异种移植物效力
小鼠:雌性严重联合免疫缺陷小鼠(Fox ChaseC.B-17/IcrHsd,Harlan)为8至9周龄并在研究的第0天具有15.1至21.4克的BW范围。使动物随意摄入水(反渗透,1ppm Cl)和NIH 31修饰和辐射的Lab(含有18.0%粗蛋白、5.0%粗脂肪和5.0%粗纤维)。将小鼠关在于静态微分离器中的经辐射的试验动物寝具中,在21-22℃(70-72°F)和40-60%湿度采用12-小时光照周期。就约束、饲养管理、手术操作、饲料和流体管理和兽医护理而言,PRC明确遵守“实验动物管理和使用指南”的建议。在PRC的动物护理和使用程序得到国际实验动物管理评估及认证协会(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal CareInternational)(AAALAC)的认可,这确保了与接受的实验动物的护理和使用标准顺应。
肿瘤移植:用癌细胞引发异种移植物。将细胞在RPMI 1640培养基(补充有10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100单位/mL青霉素、100μg/mL硫酸链霉素和25μg/mL庆大霉素)中培养。在指数生长过程中收集细胞并重新悬浮在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中,浓度为5x107细胞/mL。在肿瘤移植当天,每只实验小鼠接受在右肋皮下移植的1x10∧7个细胞(0.2mL),监测肿瘤生长,其为接近目标范围100至150mm3的平均大小。肿瘤移植21天(指定为研究的第0天)后,将小鼠分成四组,每个小组由10至小鼠组成,单独肿瘤体积范围为75-172mm3,组平均肿瘤体积为120-121mm3(参见Appendix A)。使用以下公式计算体积:
肿瘤体积(mm3)=(w2xl)/2
其中w=肿瘤的宽和l=肿瘤的长,单位为mm。可估算肿瘤重量,假定1mg等于1mm3肿瘤体积。
治疗药物:提供式Ia化合物(GDC-0941,Genentech,Inc.),其为盐形式的干燥粉末,其含有73%活性药物,并在室温避光储存。每周制备于0.5%甲基纤维素/去离子水:0.2%吐温80/去离子水(MC/Tw80,“媒介物”)中的药物剂量,并在4℃储存。含有73%活性药物的所述盐形式计算在G-033829剂量的配制中。购买利妥昔单抗(10mg/mL用于注射,Genentech,Lot#M79901),其为临床药物。在给药的每一天,通过用无菌盐水(0.9%NaCl)稀释原液等分液制备利妥昔单抗的多次剂量。配制所有剂量用于以所示的mg/kg剂量递送,单位为0.2mL体积/20克体重(10mL/kg)。
治疗:所有剂量按单个动物的体重决定并且由每幅附图中所指示的途径提供。
结束点:使用侧径器每周测量肿瘤两次。单只监测小鼠并且当其肿瘤达到体积1500mm3或在第40天研究结束时(以先到的情况为准)将其安乐死。然而,由于对照肿瘤的自限生长,为了分析将结束点降至1000mm3。对于每只小鼠,由以下方程计算到达结束点的时间(TTE):
TTE(天)=[log10(结束点体积(mm3))-b]/m
其中b为通过对数变换的肿瘤生长数据集的线性回归获得的线的截距,m为斜率。所述数据集由第一次观察结果(超过了研究结束点体积)和三次连续的观察结果(即将达到结束点体积)构成。将没有达到结束点的动物指定为等于所述研究最后一天的TTE值。将根据由于事故(NTRa)导致的NTR(非治疗相关)死亡或由于未知原因(NTRu)导致的死亡分类的动物从TTE计算结果(和所有进一步分析)中排除出去。将根据由于TR(治疗相关的)死亡或NTRm(由于转移导致的非治疗相关死亡)分类的动物指定一个等于死亡当天的TTE值。通过肿瘤生长延迟(TGD)估测治疗结果,将其定义为与对照组相比的治疗组中至结束点(TTE)的中值时间的增加:
TGD=T-C
以天表达,或为对照组的中值TTE的百分比:
%TGD=(T-C)/Cx100
其中:T=治疗组的中值TTE,C=对照组的中值TTE(组1)。治疗可导致动物肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR响应(response)中,对于研究过程中的三次连续测量,肿瘤体积为其第1天体积的50%或更低,并且对于这三次测量中的一次或多次,肿瘤体积等于或大于13.5mm3。在CR响应中,对于研究过程中的三次连续测量,肿瘤体积小于13.5mm3。在研究结束时具有CR响应的动物被额外分类为无肿瘤存活者(TFS)。监测动物的消退响应。
毒性:在研究的头五天,每天称重动物,之后每周称重两次。经常就任何不良的治疗相关副作用和临床毒性征状的明显征状对小鼠进行观察,当观察到时就进行记录。将可接受的毒性定义为研究过程中组平均体重(BW)的减少低于20%和十只治疗动物中不多于一只为治疗相关(TR)死亡。任意导致较大毒性的给药方案被认为高于最大耐受剂量(MTD)。如果由于治疗副作用导致死亡(如由临床征状和/或尸检所证明),则将该死亡归类为TR,或者如果在给药期间或最后给药10天内由于未知原因导致的死亡,则也将该死亡归类为TR。如果没有证据证明死亡与治疗副作用有关,则将该死亡归类为NTR。
实施例17用于在GDC-0941处理B细胞和骨髓瘤细胞系后检测p-Akt、p-BAD和p-S6核糖体蛋白的Westem印记。
物质:用于电泳的所有试剂和印记缓冲原液来自Invitrogen。
在Pen/Strep和谷氨酰胺存在下,将B细胞系(DoHH2和WSU-DLCL2)和骨髓瘤细胞系(OPM2和U266)维持在RPMI-1640/10%FBS中。
方案:
1.将每种细胞系的107个细胞接种在于10cm陪替培养皿中的10mL培养基中,每种细胞系使用2个培养皿。
2.向10mL培养物的一个培养皿中加入5uL浓度为10mM的GDC-0941原液(于DMSO中),最终药物浓度为5uM,并向另一个培养皿中加入5uLDMSO作为对照。
3.将细胞在培养箱中在37℃、5%CO2条件下维持4小时,然后收获。
4.收获9mL培养物(等于9x106个细胞),加到15mL锥形管中并使其沉淀,用1x SDS样品缓冲液制备细胞溶胞产物。将每种条件下的另外1mL(等于1x106个细胞)转移到5mL FACS管(BD)中用于FACS。
5.用冷PBS洗涤细胞一次。
6.测量蛋白样品的OD并用NuPAGE电泳系统试剂制备样品,每种负载20ug。
7.将进行电泳的每种蛋白样品与适当量的NuPAGE LDS样品缓冲液和还原剂混合,施加70℃加热,保持10分钟。
8.将10uL SeeBlue Plus2预染色标准品与20ug每种样品负载在4-12%NuPAGE Norvex Bis-Tris凝胶中,并在抗氧化剂存在下用MES-SDS缓冲液运行(在XCell SureLock Mini-Cell装置中在135伏进行1小时)。
9.使用iBlot装置将凝胶转移到印记膜上。
10.用1X TBST缓冲液洗涤一次。
11.用20mL 1x TBST 5%脱脂乳阻断所述膜,保持2小时。
12.用1X TBST缓冲液洗涤3次。
13.在10mL 1X TBST 5%BSA和初级abs(p-Akt、克隆193H12、p-BAD、克隆185D10和p-S6RP、克隆D57.2.2D、β-肌动蛋白、克隆13E5、细胞信号传导)中,以适当的稀释度在4C O/N.孵育膜,向相同的膜和其它膜中加入p-Akt和p-6SRP和β-肌动蛋白兔abs,各自在分开的膜上(在先生成多重凝胶(multiple gels))。
14.用1X TBST缓冲液洗涤3次。
15.将膜与HRP--结合的羊抗兔ab以适当的稀释度在10mL 1X TBST缓冲液/5%脱脂乳中在室温孵育2小时。
16.用1X TBST缓冲液洗涤3次。
17.将膜与3mL LumiGLO孵育3分钟,排除过量的溶液并暴露于x-射线胶片。
可选择地,将针对每种条件的10x106个细胞放在10cm2板中,将细胞用GDC-0941、地塞米松或来那度胺和/或它们的组合处理。DMSO处理用作对照。将细胞用冷PBS洗涤一次并用1X细胞溶解缓冲液(Cell SignalingTechnology,Beverly,MA)溶解。使用Nupage Bis-Tris凝胶(Invitrogen,Carlsbad,CA)溶解等量蛋白。使用以下物质进行Western印记分析:抗-磷酸-Akt(丝氨酸473)、抗-PTEN、抗-磷酸-BAD(丝氨酸136)、抗-磷酸-FoXO 1/3a、Bim、裂解的半胱天冬酶9、裂解的半胱天冬酶3、p27和裂解的PARP抗体(CellSignaling Technology、Beverly,MA)。将总AKT、总BAD、总FOXO3a和β-肌动蛋白(Sigma)水平用作负载对照。
实施例18用于GDC-0941处理后细胞内检测p-Akt和p-S6核糖体蛋白的FACS方案
在Pen/Strep和谷氨酰胺存在下,将B细胞系(DoHH2和WSU-DLCL2)和骨髓瘤细胞系(OPM2和U266)维持在RPMI-1640/10%FBS中。
方案:
1.将每种细胞系的107个细胞接种在于10em陪替培养皿中的10mL培养基中,每种细胞系使用2个培养皿。
2.向10mL培养物中加入5uL浓度为10mM的GDC-0941原液(于DMSO中),最终药物浓度为5uM,和向另一个培养皿中加入5uL DMSO作为对照。
3.将细胞在培养箱中在37℃、5%CO2条件下维持4小时,然后收获。
4.将每种情况下的1mL(等于106个细胞)转移到5mL FACS管(BD)中并在1200rpm旋转5分钟,然后固定(收获另外9mL培养物-9x106细胞,装在15mL锥形管中用于Westem)。
5.抽吸上清液并在室温用Fix/Perm培养基A(目录编号:GAS001S-100)固定所述细胞,保持15分钟。
6.用PBS/2%FBS洗涤细胞一次。
7.抽吸上清液并在室温用Fix/Perm培养基B(目录编号:GAS002S-100)渗透所述细胞,保持15分钟。
8.用PBS/2%FBS洗涤细胞1次。
9.用300uL PBS/2%BSA重新悬浮细胞并将细胞分装在3个管中,每个管各装100uL(一个管用于同种型-兔IgG Alexa Fluor-647,一个管用于p-AktAlexa Fluor-647克隆193H12和一个管用于p-S6RP Alexa Fluor-647克隆D57.2.2E,所有兔abs来自Cell Signaling)。
10.将每种Ab各50ng加到相应的管中并在室温孵育30分钟。
11.用PBS/2%FBS洗涤细胞一次。
12.将细胞用300uL PBS/2%BSA重新悬浮并在FACSCalibur(BD)上使用CellQuest程序获得数据。
13.使用FlowJo程序分析数据并在直方图中展示数据。
实施例19用于在GDC-0941处理后测量凋亡细胞和活细胞定量荧光的FACS方案
通过定量荧光分析使用荧光激活细胞分选(FACS)测定测量凋亡细胞和活细胞,进行了微小改变(Munugalavadla et al(2008)Mol.Cell Biol.28(23):7182-7198)。将多发性骨髓瘤细胞系(1x106)用DMSO或各种浓度的图Ia GDC-0941处理24小时,然后使用Annexin-V-APC/PI试剂盒(BDBiosciences,San Jose,CA)根据制造商的指示进行染色并通过流式细胞仪分析。在原发性多发性骨髓瘤患者样品的情况下,将2百万个有核BM细胞接种在于2ml高级-RPMI(Invitrogen,Carlsbad,CA)(补充有2%热失活牛生长血清(Hyclone,Waltham,MA)和2ng/ml重组IL6(R&D Systems Inc.,Minneapolis,MN))中的6孔板中。将细胞用媒介物(DMSO)、1μM或10μM GDC-0941处理72小时,然后通过流式细胞仪分析,从而评价药物诱导的凋亡。使用以下试剂:CD45RA-FITC、CD38-APC和碘化丙锭(所有都来自BD Pharmingen,SanJose,CA)。在CyanADP设备上获得数据(Dako Cytomation)并使用FlowJo软件(Tree Star)进行分析。将活的浆细胞称为CD38hiCD45RA-和PI-。
实施例20细胞周期分析
使用Click-iTTM Edu Cytometry测定试剂盒(Invitrogen,Carlsbad,CA)根据制造商的指示进行细胞周期分析。在BD LSR-II上测量荧光,使用FlowJo软件(Becton Dickinson)分析数据。
实施例21使用Meso Scale Discovery(MSD)测定在原发性MM骨髓单核细胞中测量pAKT
将来自MM供体的骨髓单核细胞细胞(BM-MNC)在10ml RPMI(补充有10%FBS)中培养过夜。孵育后,将细胞用生长培养基洗涤一次并重新悬浮在1ml培养基中。对于每种供体,在37℃,将细胞分成500mL等分液并用DMSO或1mM浓度的GDC-0941处理1小时。处理后,在1200rpm收集细胞沉淀,保持5分钟,用冷PBS将所述沉淀洗涤一次。将所述细胞沉淀用60ml 1XMesoscale Discovery(MSD,Gaithersburg,Maryland)溶解缓冲液重新悬浮,通过在4℃和在14000rpm离心10分钟使溶胞产物澄清。澄清的细胞溶胞产物用于评价磷酸-Akt(Ser473)和总Akt,使用MSD试剂盒,根据制造商的指示,进行了微小改变。
Claims (47)
1.治疗造血恶性肿瘤的方法,包括向哺乳动物以组合制剂形式或轮流给药治疗组合,其中所述治疗组合包含治疗有效量的具有式I的化合物和治疗有效量的一种或多种化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷;
其中式I化合物具有下式及其立体异构体、几何异构体、互变异构体或可药用盐:
其中:
R1选自H、F、Cl、Br、I、CN、-(CR14R15)mNR10R11、-C(R14R15)nNR12C(=Y)R10、-(CR14R15)nNR12S(O)2R10、-(CR14R15)mOR10、-(CR14R15)nS(O)2R10、-(CR14R15)nS(O)2NR10R11、-C(OR10)R11R14、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-C(=Y)NR12OR10、-C(=O)NR12S(O)2R10、-C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11、-NO2、-NR12C(=Y)R11、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-NR12SO2NR10R11、-SR10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R2选自H、F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-(CR14R15)m-NR12C(=O)(CR14R15)nNR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR10、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R3为碳联单环杂芳基、碳联稠合二环C3-C20杂环基或碳联稠合二环C1-C20杂芳基,其中所述单环杂芳基、稠合二环C3-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团选自F、Cl、Br、I、-CN、-NR10R11、-OR10、-C(O)R10、-NR10C(O)R11、-N(C(O)R11)2、-NR10C(O)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-C(=O)OR10、-C(=O)NR10R11、C1-C12烷基和(C1-C12烷基)-OR10;
R10、R11和R12独立地为H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基,
或者R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代有一个或多个基团的C2-C20杂环状环,所述基团独立地选自氧代、(CH2)mOR12、NR12R12、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R12、C(=O)R12、NR12C(=Y)R12、NR12S(O)2R12、C(=Y)NR12R12、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R14和R15独立地选自H、C1-C12烷基或-(CH2)n-芳基,
或者,R14和R15与它们连接的原子一起形成饱和或部分不饱和C3-C12碳环状环;
其中所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、-SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
Y为O、S或NR12;
m为0、1、2、3、4、5或6;和
n为1、2、3、4、5或6。
2.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为地塞米松。
3.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为塞替派。
4.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为多柔比星。
5.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为长春新碱。
6.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为利妥昔单抗。
7.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为环磷酰胺。
8.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为泼尼松。
9.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为美法仑。
10.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为来那度胺。
11.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为硼替佐米。
12.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为雷帕霉素。
13.权利要求1的方法,其中所述化学治疗剂为阿糖胞苷。
14.权利要求1的方法,其中所述治疗组合包含环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松。
15.权利要求1-14中任一项的方法,其中R1为-(CR14R15)mNR10R11,其中m为1,以及R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代的C3-C20杂环状环。
16.权利要求15的方法,其中所述C3-C20杂环状环为哌嗪基,其任选取代有一个或多个基团,所述基团选自NR10R11、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R10、C(=O)R10、NR12C(=Y)R11、NR12S(O)2R11、C(=Y)NR10R11和C1-C12烷基。
17.权利要求1-14中任一项的方法,其中R1不是H。
18.权利要求1-14中任一项的方法,其中R2为H、CH3、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基。
19.权利要求1-14中任一项的方法,其中R3为单环杂芳基,其选自吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、哒嗪-3-基、哒嗪-4-基、哒嗪-5-基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、嘧啶-6-基、吡嗪-2-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、三唑-3-基、三唑-1-基、四唑-5-基、四唑-1-基和四唑-2-基。
20.权利要求19的方法,其中R3为2-氨基嘧啶-5-基。
21.权利要求1-14中任一项的方法,其中R3为二环杂芳基,其选自1H-吲唑基、1H-吲哚基、二氢吲哚-2-酮基、1-(二氢吲哚-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-二氮杂萘基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基。
22.权利要求21的方法,其中R3为1H-吲唑-4-基。
23.权利要求2-14中任一项的方法,其中式I化合物为具有式Ia的4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉:
25.权利要求1-14中任一项的方法,其中式I化合物的可药用盐选自与以下酸形成的盐:盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、磷酸、苯磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、乙磺酸、天冬氨酸和谷氨酸。
26.权利要求1-14中任一项的方法,其中将治疗有效量的具有式I的化合物和治疗有效量的所述化学治疗剂作为组合制剂给药。
27.权利要求1-14中任一项的方法,其中将治疗有效量的具有式I的化合物和治疗有效量的所述化学治疗剂轮流给药至哺乳动物。
28.权利要求27的方法,其中向所述哺乳动物给药所述化学治疗剂,随后给药式I化合物。
29.权利要求27的方法,其中通过以下给药方案给药所述治疗组合,在所述给药方案中将治疗有效量的具有式I的化合物在每天两次至每三周一次的范围内给药,和将治疗有效量的所述化学治疗剂在每天两次至每三周一次的范围内给药。
30.权利要求29的方法,其中将所述给药方案重复一次或多次。
31.权利要求1-14中任一项的方法,其中给药所述治疗组合得到协同作用。
32.权利要求1-14中任一项的方法,其中所述造血恶性肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML和MCL。
33.权利要求1-14中任一项的方法,其中将式I化合物和所述化学治疗剂各自以约1mg至约1000mg/单位剂型的量给药。
34.权利要求1-14中任一项的方法,其中将式I化合物和所述化学治疗剂以约1∶50至约50∶1的重量比给药。
35.一种药物制剂,其包含式I化合物、化学治疗剂和一种或多种可药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷;
其中式I化合物具有以下结构或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或可药用盐:
其中:
R1选自H、F、Cl、Br、I、CN、-(CR14R15)mNR10R11、-C(R14R15)nNR12C(=Y)R10、-(CR14R15)nNR12S(O)2R10、-(CR14R15)mOR10、-(CR14R15)nS(O)2R10、-(CR14R15)nS(O)2NR10R11、-C(OR10)R11R14、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-C(=Y)NR12OR10、-C(=O)NR12S(O)2R10、-C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11、-NO2、-NR12C(=Y)R11、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-NR12SO2NR10R11、-SR10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R2选自H、F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR10R11、-(CR14R15)nOR11、-(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR10、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R3为碳联单环杂芳基、碳联稠合二环C3-C20杂环基或碳联稠合二环C1-C20杂芳基,其中所述单环杂芳基、稠合二环C3-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团选自F、Cl、Br、I、-CN、-NR10R11、-OR10、-C(O)R10、-NR10C(O)R11、-N(C(O)R11)2、-NR10C(O)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-C(=O)OR10、-C(=O)NR10R11、C1-C12烷基和(C1-C12烷基)-OR10;
R10、R11和R12独立地为H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基,
或者,R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代有一个或多个基团的C2-C20杂环状环,所述基团独立地选自氧代、(CH2)mOR12、NR12R12、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R12、C(=O)R12、NR12C(=Y)R12、NR12S(O)2R12、C(=Y)NR12R12、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R14和R15独立地选自H、C1-C12烷基或-(CH2)n-芳基,
或者,R14和R15与它们连接的原子一起形成饱和或部分不饱和C3-C12碳环状环;
其中所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、-SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
Y为O、S或NR12;
m为0、1、2、3、4、5或6;和
n为1、2、3、4、5或6。
36.权利要求35的药物制剂,其中所述式I化合物的可药用盐选自与以下的酸形成的盐,所述酸为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、乙磺酸、天冬氨酸和谷氨酸。
39.权利要求35-38中任一项的药物制剂,其包含可药用助流剂,所述助流剂选自二氧化硅、粉状纤维素、微晶纤维素、金属硬脂酸盐、硅铝酸钠、苯甲酸钠、碳酸钙、硅酸钙、玉米淀粉、碳酸镁、无石棉的滑石、Stearowet C、淀粉、淀粉1500、月桂基硫酸镁、氧化镁和它们的组合。
40.权利要求35-39中任一项的药物制剂,其中式I化合物和所述化学治疗剂各自的量为约1mg至约1000mg/单位剂型。
41.权利要求35-40中任一项的药物制剂,其用在治疗造血恶性肿瘤的方法中,所述造血恶性肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML和MCL。
42.权利要求1-14中任一项的治疗组合在制备用于治疗造血恶性肿瘤的药物中的用途,所述造血恶性肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML和MCL。
43.用于治疗造血恶性肿瘤的制品,其包含:
a)权利要求1-14中任一项的治疗组合;和
b)使用说明。
44.产品,其包含具有式I的化合物和化学治疗剂,所述化学治疗剂选自地塞米松、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷;作为组合制剂分开、同时或先后用在治疗造血恶性肿瘤中,所述造血恶性肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、弥散性大造血淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、AML和MCL;
其中式I化合物具有以下结构或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或可药用盐:
其中:
R1选自H、F、Cl、Br、I、CN、-(CR14R15)mNR10R11、-C(R14R15)nNR12C(=Y)R10、-(CR14R15)nNR12S(O)2R10、-(CR14R15)mOR10、-(CR14R15)nS(O)2R10、-(CR14R15)nS(O)2NR10R11、-C(OR10)R11R14、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-C(=Y)NR12OR10、-C(=O)NR12S(O)2R10、-C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11、-NO2、-NR12C(=Y)R11、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-NR12SO2NR10R11、-SR10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R2选自H、F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)nNR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR10、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R3为碳联单环杂芳基、碳联稠合二环C3-C20杂环基或碳联稠合二环C1-C20杂芳基,其中所述单环杂芳基、稠合二环C3-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团选自F、Cl、Br、I、-CN、-NR10R11、-OR10、-C(O)R10、-NR10C(O)R11、-N(C(O)R11)2、-NR10C(O)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-C(=O)OR10、-C(=O)NR10R11、C1-C12烷基和(C1-C12烷基)-OR10;
R10、R11和R12独立地为H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基,
或者R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代有一个或多个基团的C2-C20杂环状环,所述基团独立地选自氧代、(CH2)mOR12、NR12R12、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R12、C(=O)R12、NR12C(=Y)R12、NR12S(O)2R12、C(=Y)NR12R12、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R14和R15独立地选自H、C1-C12烷基或-(CH2)n-芳基,
或者,R14和R15与它们连接的原子一起形成饱和或部分不饱和C3-C12碳环状环;
其中所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、-SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
Y为O、S或NR12;
m为0、1、2、3、4、5或6;和
n为1、2、3、4、5或6。
45.确定用在治疗造血恶性肿瘤的组合中的化合物的方法,所述方法包括:
a)用具有式I的化合物与化学治疗剂的治疗组合治疗体外造血性肿瘤细胞系,和
b)测量协同作用或非协同作用;
由此确定治疗癌症的协同治疗组合;
其中式I化合物具有以下结构或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或可药用盐:
其中:
R1选自H、F、Cl、Br、I、CN、-(CR14R15)mNR10R11、-C(R14R15)nNR12C(=Y)R10、-(CR14R15)nNR12S(O)2R10、-(CR14R15)mOR10、-(CR14R15)nS(O)2R10、-(CR14R15)nS(O)2NR10R11、-C(OR10)R11R14、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-C(=Y)NR12OR10、-C(=O)NR12S(O)2R10、-C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11、-NO2、-NR12C(=Y)R11、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-NR12SO2NR10R11、-SR10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R2选自H、F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)nNR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR10、-NR12C(=Y)NR10R11、-NR12SO2R10、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R3为碳联单环杂芳基、碳联稠合二环C3-C20杂环基或碳联稠合二环C1-C20杂芳基,其中所述单环杂芳基、稠合二环C3-C20杂环基和稠合二环C1-C20杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团选自F、Cl、Br、I、-CN、-NR10R11、-OR10、-C(O)R10、-NR10C(O)R11、-N(C(O)R11)2、-NR10C(O)NR10R11、-NR12S(O)2R10、-C(=O)OR10、-C(=O)NR10R11、C1-C12烷基和(C1-C12烷基)-OR10;
R10、R11和R12独立地为H、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基或C1-C20杂芳基,
或者,R10和R11与它们连接的氮一起形成任选取代有一个或多个基团的C2-C20杂环状环,所述基团独立地选自氧代、(CH2)mOR12、NR12R12、CF3、F、Cl、Br、I、SO2R12、C(=O)R12、NR12C(=Y)R12、NR12S(O)2R12、C(=Y)NR12R12、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
R14和R15独立地选自H、C1-C12烷基或-(CH2)n-芳基,
或者,R14和R15与它们连接的原子一起形成饱和或部分不饱和C3-C12碳环状环;
其中所述烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选取代有一个或多个基团,所述基团独立地选自F、Cl、Br、I、CN、CF3、-NO2、氧代、R10、-C(=Y)R10、-C(=Y)OR10、-C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)nNR10R11、-(CR14R15)nOR10、-NR10R11、-NR12C(=Y)R10、-NR12C(=Y)OR11、-NR12C(=Y)NR10R11、-(CR14R15)mNR12SO2R10、=NR12、OR10、-OC(=Y)R10、-OC(=Y)OR10、-OC(=Y)NR10R11、-OS(O)2(OR10)、-OP(=Y)(OR10)(OR11)、-OP(OR10)(OR11)、-SR10、-S(O)R10、-S(O)2R10、-S(O)2NR10R11、-S(O)(OR10)、-S(O)2(OR10)、-SC(=Y)R10、-SC(=Y)OR10、-SC(=Y)NR10R11、C1-C12烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C12碳环基、C2-C20杂环基、C6-C20芳基和C1-C20杂芳基;
Y为O、S或NR12;
m为0、1、2、3、4、5或6;和
n为1、2、3、4、5或6。
46.权利要求45的方法,其中所述化学治疗剂选自地塞米松、塞替派、多柔比星、长春新碱、利妥昔单抗、环磷酰胺、泼尼松、美法仑、来那度胺、硼替佐米、雷帕霉素和阿糖胞苷。
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PCT/US2010/026903 WO2010105008A2 (en) | 2009-03-12 | 2010-03-11 | Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents for the treatment of hematopoietic malignancies |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120307 |