CN102366493A

CN102366493A - 治疗绝经后骨质疏松症的中药复方提取物及其制备方法

Info

Publication number: CN102366493A
Application number: CN2011102913415A
Authority: CN
Inventors: 张丹丹; 朴成玉; 任燕冬; 刘海洋; 张春蕾; 张宁; 王发善
Original assignee: 张宁
Priority date: 2011-09-30
Filing date: 2011-09-30
Publication date: 2012-03-07
Anticipated expiration: 2031-09-30
Also published as: CN102366493B

Abstract

本发明涉及一种具有治疗绝经后骨质疏松症作用的中药复方提取物。本发明中的中药复方提取物是以白花败酱草、白鲜皮、仙鹤草、柴胡、蛇床子、红景天、决明、柏子仁、金荞麦、泽泻和甘草等十一种中药为原料，采用二氧化碳超临界萃取技术和大孔吸附树脂富集技术，在一定工艺参数下提取制得的提取物。该提取物具有显著的治疗绝经后骨质疏松症的作用，该提取物可以直接安全地应用于治疗绝经后骨质疏松症的药物制剂和保健食品的制备。

Description

治疗绝经后骨质疏松症的中药复方提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药复方提取物，具体是涉及一种采用二氧化碳超临界萃取技术和大孔吸附树脂富集技术，以白花败酱草、白鲜皮、仙鹤草、柴胡、蛇床子、红景天、决明、柏子仁、金荞麦、泽泻和甘草为原料制得的提取物，该提取物具有明显的治疗绝经后骨质疏松症的作用。本发明还涉及了该提取物在制备治疗绝经后骨质疏松症药物制剂和保健食品中的应用。

背景技术

绝经后骨质疏松症是指绝经后妇女由于卵巢功能衰退、雌激素水平下降，发生的以低骨量及骨组织微结构退行性病变为特征的一种全身性骨骼疾病，属于原发性骨质疏松症，临床主要表现为疼痛、身材变矮及骨折。发病率可高达25％～50％，并随着年龄增大发病率增高，50岁以上女性发生髋关节、脊椎、四肢关节等部位骨折的比例占40％，绝经20年以上者可达53.62％～57.89％。由于绝经后女性骨量的急剧变化，特别是脊椎和髋关节骨折常会导致瘫痪，绝经后骨质疏松症及其骨折带来的高致残率和致死率给社会带来沉重的经济和人力负担。随着老龄化社会的到来，绝经后骨质疏松症的防治工作越发受到重视。

绝经后骨质疏松症发病与雌激素水平降低有关，因此，雌激素是当前防治绝经后骨质疏松的首选药物，此疗法称为激素替代疗法。但是，由于雌激素的长期单一使用增加卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌的患病率及其它不良反应，从而限制了其应用。中药治疗骨质疏松症有悠久的历史，且不良反应轻，寻找能够有效治疗绝经后骨质疏松症的中药组方，并开展现代新药研发，对拓宽绝经后骨质疏松症的防治手段意义重大。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种具有治疗绝经后骨质疏松症作用的中药复方提取物。

本发明另一个目的是提出该中药复方提取物在制备治疗绝经后骨质疏松症的药物制剂和保健食品中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：

组方药材及比例为：以重量份数计，白花败酱草5份、白鲜皮3份、仙鹤草3份、柴胡3份、蛇床子3份、红景天3份、决明子3份、柏子仁3份、金荞麦3份、泽泻2份、甘草1份。

以重量份数计，按照白花败酱草5份、白鲜皮3份、仙鹤草3份、柴胡3份、蛇床子3份、红景天3份、决明子3份、柏子仁3份、金荞麦3份、泽泻2份、甘草1份，称取各药材适量，混合粉碎，过药典2号筛，药粉装入二氧化碳超临界萃取装置中，加入夹带剂无水乙醇，用量为0.5ml/g药粉，设定萃取温度为45℃，萃取压力为40MPa，解析I压力为10MPa、温度为40℃，解析II压力为4MPa、温度为25℃，萃取时间为2h，得棕黄色粘稠油状物。将上一步二氧化碳超临界萃取后的药渣，加入10倍量70％乙醇浸泡12小时，加热回流提取2小时，过滤，向药渣中再加入5倍量70％乙醇加热回流提取2小时，过滤，合并滤液，减压干燥得浸膏。将浸膏加适量水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中(上样量以生药量与树脂量之比计算为1∶2)，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压干燥后粉碎，制得棕色粉末。将此粉末与二氧化碳超临界萃取制得的棕黄色粘稠油状物混合，即得本发明的中药复方提取物。

作为对上述技术方案的改进和补充：

1、组方中药材的相对量可以按照：白花败酱草4-6份、白鲜皮2-4份、仙鹤草2-4份、柴胡2-4份、蛇床子2-4份、红景天2-4份、决明子2-4份、柏子仁2-4份、金荞麦2-4份、泽泻1-3份、甘草1-2份的比例进行调整。

2、在进行二氧化碳超临界萃取时，萃取温度可以设定为30-60℃。

3、在进行二氧化碳超临界萃取时，萃取压力可以设定为20-60MPa。

4、在进行二氧化碳超临界萃取时，萃取时间可以设定为1h或以上。

5、在进行二氧化碳超临界萃取时，夹带剂可以为乙醇或浓度为95％以上的乙醇，并且用量可以设定为0.1-1ml/g药粉。

6、在用旋转蒸发仪对二氧化碳超临界萃取液进行减压浓缩回收乙醇时，温度可以设定为45℃或以下。

7、在对二氧化碳超临界萃取后的药渣进行提取时，提取溶剂可以是30％-100％乙醇。

8、在对二氧化碳超临界萃取后的药渣进行提取时，提取方式可以是加热回流提取、超声提取或者渗漉提取。

9、在对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，使用的柱脂可以是D-101型或者AB-8型，以及其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂。

10、在对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，洗脱溶剂可以是水或不同浓度的乙醇，依照乙醇浓度由低到高依次洗脱。

通过上述技术方案制备得到的提取物，具有明显的治疗绝经后骨质疏松症作用，可以用于制备治疗绝经后骨质疏松症的药物制剂和保健食品。

当将上述提取物混合进具有治疗绝经后骨质疏松症作用的药物制剂和保健食品时，除这些提取物外，在不防碍本发明效果的范围内，可以根据需要适当混合用于通常的药物制剂和保健食品的其他成分中，例如：交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲淀粉钠、微晶纤维素、乳糖、阿司巴坦、硬脂酸镁等内加辅料、外加辅料和包衣辅料。其型剂可以是任何一种药学上所说的剂型，优选丸剂、片剂、胶囊剂或口服液。

本发明中药复方提取物是药食兼用的纯天然的植物提取物，随后的药效实验将证明，本发明中药复方提取物具有治疗绝经后骨质疏松症的作用。

附图说明

图1是正常组大鼠骨组织HE染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图2是模型组大鼠骨组织HE染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图3是TQW组大鼠骨组织HE染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图4是尼尔雌醇组大鼠骨组织HE染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图5是正常组大鼠骨组织低倍电镜下(×12)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图6是模型组大鼠骨组织低倍电镜下(×12)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图7是TQW组大鼠骨组织低倍电镜下(×12)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图8是尼尔雌醇组大鼠骨组织低倍电镜下(×12)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图9是正常组大鼠骨组织高倍电镜下(×100)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图10是模型组大鼠骨组织高倍电镜下(×100)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图11是TQW组大鼠骨组织高倍电镜下(×100)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图12是尼尔雌醇组大鼠骨组织高倍电镜下(×100)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图13是正常组大鼠骨组织高倍电镜下(×500)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图14是模型组大鼠骨组织高倍电镜下(×500)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图15是TQW组大鼠骨组织高倍电镜下(×500)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图16是尼尔雌醇组大鼠骨组织高倍电镜下(×500)的皮质骨、松质骨、骨小梁形态结构图

图17是正常组大鼠骨组织I型胶原免疫组化染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图18是模型组大鼠骨组织I型胶原免疫组化染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图19是TQW组大鼠骨组织I型胶原免疫组化染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

图20是尼尔雌醇组大鼠骨组织I型胶原免疫组化染色后显微镜下(×100)骨形态结构图

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。为说明方便，以下将本发明提取物简称为TQW。

实施例1(TQW对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响)

去卵巢骨质疏松大鼠模型是国际公认模拟妇女绝经后骨质疏松症的经典动物模型，本实施例用此模型来验证TQW治疗妇女绝经后骨质疏松症的作用。

1材料与方法

1.1材料

清洁级7月龄Wistar大鼠，雌性，体重350±20g，购自黑龙江中医药大学GLP中心。

TQW混悬液：将TQW混悬蒸馏水中，ig剂量为15mg/kg。

尼尔雌醇混悬液(Nilestrdiol)：尼尔雌醇(购自上海医药集团华联制药厂，国药准字：H3102164)，混悬蒸馏水中，ig 0.5mg/kg。

1.2方法

1.2.1大鼠去卵巢骨质疏松模型的建立

3％戊巴比妥麻醉后，手术摘除双侧卵巢，术后给予青霉素防止感染。

1.2.2动物分组及给药

术后30天，将大鼠按体重随机分为模型组、TQW组、阳性对照(尼尔雌醇)组，在造模同时预留同批未进行去卵巢手术的大鼠作为正常组，每组12只。

分组后开始给药，正常组：每日灌胃蒸馏水5mL/kg体重；模型组：每日灌胃蒸馏水5mL/kg体重；TQW组：每日灌胃TQW(15mg/kg体重)混悬液，阳性对照组：每日灌胃尼尔雌醇(0.5mg/kg体重)，以上各组均每日给药1次，连续给药24周。

2实验结果

2.1对骨质疏松模型大鼠腰椎、股骨骨密度及骨矿含量的影响

结果见表1。给药24周后，与模型组比较，TQW组和尼尔雌醇组均可增加质疏松模型大鼠的股骨、腰椎的骨密度及骨矿含量(P＜0.05)。

表1 TQW对骨质疏松模型大鼠骨密度及骨矿含量的影响

注：#与正常对照组比较P＜0.05，*与模型对照比较P＜0.05；

2.2对骨质疏松模型大鼠骨去脂干重、灰重、骨钙、骨磷的影响

结果见表2。给药24周后，与模型组比较，TQW组和尼尔雌醇组均可增加股骨去脂干重、灰重，而且提高了骨中钙和磷含量(P＜0.05)，提示TQW能促进骨中钙和磷的贮积，增加骨矿物质含量，增加骨矿物质与基质含量。

表2 TQW对骨质疏松大鼠骨去脂干重、灰重、骨钙、骨磷的影响

注：#与正常对照组比较P＜0.05，*与模型对照比较P＜0.05；

2.3对骨质疏松模型大鼠骨代谢指标的影响

结果见表3。与正常对照组相比，模型组血清骨钙素(BGP)和血清碱性磷酸酶(ALP)活性比值显著升高，血清雌激素(E₂)水平显著降低(P＜0.05)。给药24周后，与模型组比较，TQW组和尼尔雌醇组的血清BGP及ALP的活性显著降低(P＜0.05)，血清E₂水平显著升高(P＜0.05)。

表3 TQW对骨质疏松模型大鼠骨代谢指标的影响

注：^#与正常对照组比较P＜0.05，^*与模型对照比较P＜0.05

2.4对骨质疏松模型大鼠骨组织病理形态学的影响

2.4.1HE染色光镜下观察结果

结果见说明书附图1-4。正常组可见骨小梁粗壮，饱满，形态结构完整，排列紧密而规则，小梁间连接呈网状，连接性好，骨髓腔相对较小，而且骨小梁表面可见较多整齐且呈单行排列的成骨细胞，细胞椭圈形或立方形。模型组骨小梁结构排列稀硫，总数明显减少，骨小梁间连接性差，出现大量骨小梁盲端，小梁壁的厚度不一致，骨髓腔增大，骨组织与骨小梁面积比增大。给药24周后，TQW组和尼尔雌醇组骨小梁数增多，骨小梁增宽，结构排列形态与正常组接近，小梁间连接好，骨髓腔缩小，骨髓组织与骨小梁面积比缩小，骨小梁表面成骨细胞数目逐渐增加，排列较紧密，髓腔中破骨细胞及其前体逐渐减少。

2.4.2病理图像分析结果

结果见表4。采用显微图像分析系统分析计算骨髓组织与骨小梁面积百分比，并对骨小梁的平均厚度进行测量，利用SPSS 10.0软件进行统计学处理。与正常组比较，模型空白组骨小梁厚度缩小，髓腔面积百分率(％)明显增大差异显著(P＜0.05)；给药24周后，TQW组和尼尔雌醇组的骨小梁厚度增加，骨髓腔面积百分率明显缩小，差异显著(P＜0.05)。

表4 TQW对骨质疏松模型大鼠骨小梁形态计量比较

Figure 182134DEST_PATH_GSB00000708252200041

Figure 577343DEST_PATH_GSB00000708252200042

注：#与正常对照组比较P＜0.05，*与模型对照比较P＜0.05；n＝10(高倍视野数)

2.5对骨质疏松大鼠骨微结构的影响

结果见说明书附图5-16。与正常组比较，模型组骨小梁完全失去层迭拱桥结构，骨小梁变薄变少、排列杂乱无章甚至板结，随处可见骨小梁断裂的微骨折现象，吸收陷窝可见，偶出现吸收空洞，纤丝排列紊乱松散，可见残剩的有明显的退行性改变的纤维丝。与模型组相比，TQW组和尼尔雌醇组骨小梁较粗，层迭的拱桥结构仍良好，偶可见骨小梁断裂，吸收陷窝可见但较少，覆盖骨小梁表面的胶原纤维丝粗细均匀，纤维丝之间走向排列规则、整齐而且紧密靠近。

2.6对骨质疏松大鼠骨组织相关蛋白——I型胶原表达的影响

结果见说明书附图17-20。与正常组相比，模型组I型胶原染色减少。与模型组相比，TQW组和尼尔雌醇组在骨发生中心处和骨小梁周围I型胶原染色增多、增强。

3小结

在成功复制大鼠去卵巢骨质疏松模型的基础上，证实TQW可增加模型大鼠的腰椎、股骨骨密度、骨矿含量及骨钙骨磷含量，改善骨小梁及纤维丝形态结构，降低骨质疏松引起的代偿性BGP、ALP的升高和E₂的降低，其治疗作用与尼尔雌醇相当，从而验证了TQW对绝经后骨质疏松症治疗作用。

实施例2(片剂的制备)

按重量份计，取TQW5～9份，加入滑石粉1～2份，淀粉1～2份，羧甲基淀粉钠1～2份，喷入95％乙醇润湿，湿法制粒，干燥，加入0.5～1％硬脂酸镁，混合均匀，压片；加入15％欧巴代包衣液包衣，增重7％包衣得薄膜衣片。

实施例3(胶囊剂的制备)

按重量份计，取TQW8～9份，加入滑石粉1～2份，喷入95％乙醇润湿，湿法制粒，干燥，加入0.5～1％硬脂酸镁，混合均匀，分装得胶囊剂。

Claims

1.一种具有治疗绝经后骨质疏松症作用的中药复方提取物，其提取方法如下：

以重量份计，按照白花败酱草4-6份、白鲜皮2-4份、仙鹤草2-4份、柴胡2-4份、蛇床子2-4份、红景天2-4份、决明子2-4份、柏子仁2-4份、金荞麦2-4份、泽泻1-3份、甘草1-2份，称取各药材适量，混合粉碎，过药典2号筛，药粉进行二氧化碳超临界萃取，以乙醇为夹带剂，在一定的工艺参数下萃取得棕黄色液体，减压浓缩回收乙醇，最终得棕黄色粘稠油状物；再将二氧化碳超临界萃取后的药渣，用适当浓度乙醇浸泡后提取，提取液干燥得浸膏，浸膏利用大孔吸附树脂柱进行富集，在一定的工艺参数下制得棕色粉末；将此粉末与二氧化碳超临界萃取制得的棕黄色粘稠油状物混合，即得本发明的中药复方提取物。

2.根据权利要求1所述的中药复方提取物，其特征在于对白花败酱草、白鲜皮、仙鹤草、柴胡、蛇床子、红景天、决明、柏子仁、金荞麦、泽泻和甘草药粉进行二氧化碳超临界萃取时，萃取温度为30-60℃，萃取压力为20-60MPa，萃取时间为1h或以上，夹带剂为无水乙醇或浓度为95％以上的乙醇，用量为0.1-1ml/g药粉，解析压力为20MPa或以下，解析温度为40℃或以下。

3.根据权利要求1所述的中药复方提取物，其特征在于对二氧化碳超临界萃取后的药渣进行提取时，提取溶剂为30％-100％乙醇，第一次用量为10倍量，浸泡12小时，加热回流提取或者超声提取或者渗漉提取2小时，过滤，向药渣中再加入5倍量30％-100％乙醇，再提取2小时，过滤，合并滤液，减压干燥得浸膏。

4.根据权利要求1所述的中药复方提取物，其特征在于在对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，将浸膏加适量水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型或者AB-8型，以及其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂柱中，上样量以生药量与树脂量之比计算为1∶2，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的不同浓度的乙醇进行洗脱，收集20％-50％乙醇洗脱液，减压干燥后粉碎，制得棕色粉末。

5.根据权利要求2所述的中药复方提取物，其特征在于在进行二氧化碳超临界萃取时，萃取温度为45℃，萃取压力为40MPa，萃取时间为2h，夹带剂无水乙醇用量为0.5ml/g药粉，解析I压力为10MPa、温度为40℃，解析II压力为4MPa、温度为25℃。

6.根据权利要求3所述的中药复方提取物，其特征在于对二氧化碳超临界萃取后的药渣进行提取时，提取方式为加热回流提取、超声提取或者渗漉提取。

7.根据权利要求4所述的中药复方提取物，其特征在于对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，使用的柱脂为D-101型或者AB-8型，以及其他非极性、弱极性或者中等极性大孔吸附树脂。

8.根据权利要求4所述的中药复方提取物，其特征在于对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，洗脱溶剂为水或不同浓度的乙醇，依照乙醇浓度由低到高依次洗脱。

9.根据权利要求4所述的中药复方提取物，其特征在于对乙醇提取浸膏进行大孔吸附树脂富集时，将浸膏加适量水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中(上样量以生药量与树脂量之比计算为1∶2)，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压干燥后粉碎，制得棕色粉末。

10.权利要求1-9中任何一项所述的中药复方提取物在治疗绝经后骨质疏松症的药物制剂及保健食品中应用。