CN102357243A - 重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液 - Google Patents

Abstract

一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。所述滴眼液的组分及其用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；蛋白保护剂0.01-0.25mg；增稠剂1.0-5.0mg；渗透压调节剂1.0-5.0mg；磷酸缓冲液适量；和注射用水加至0.4ml；本品具有刺激性小、稳定性好的特点。

Description

重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液

技术领域

本发明涉及生物制品领域。特别是涉及一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。

背景技术

碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor，简写为bFGF)主要分布于中胚层和神经胚层来源的组织器官，对许多组织细胞有作用，可促进细胞分裂，调节细胞代谢，影响细胞的形态、浸润、分化和衰老，对角膜的上皮细胞基质细胞核内皮细胞均可产生影响，对碱烧伤角膜上皮的再生、角膜基质层和内皮层的修复均有促进作用。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，简写为rb-bFGF)是由含有高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后得到的活性因子。rb-bFGF可治疗各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变、复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼症、大泡性角膜炎、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状(或营养性)单疱性角膜溃疡等。

中国专利申请99117113(申请人为广州暨南大学医药生物技术研究开发中心)公开了一种滴眼剂，其含有0.5-20μg/ml选自碱性成纤维细胞生长因子、酸性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子中一种或多种的水溶液。该滴眼剂通常需要添加抑菌剂例如苯甲酸钠、羟苯乙酯等来保证其无菌性，而抑菌剂对眼睛尤其是眼睛受损部位的刺激性较大，易产生不良反应。

中国专利申请201010149385(申请人为南海朗肽制药有限公司)公开了一种滴眼液，其包含人碱性成纤维细胞生长因子、透明质酸钠、甘露醇、白蛋白、肝素钠和氯化钠，滴眼液的pH为6.75-7.5。该滴眼液虽然没有添加抑菌剂，但是其单位剂型中辅料的用量大，增加了眼部刺激的可能性，同时辅料之间的配伍并非最佳选择，滴眼液的稳定性有待进一步提高。

因此，仍然有需要开发一种新的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其使用的辅料用量较少，并且不含防腐剂，刺激性小且稳定性好。

发明内容

本发明的目的是提供一种刺激性小且稳定性好的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。

本发明的发明目的通过以下的实施方式来实现。

一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；

蛋白保护剂0.01-0.25mg；

增稠剂1.0-5.0mg；

渗透压调节剂1.0-5.0mg；

磷酸缓冲液适量

注射用水加至0.4ml；

其中，蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白；增稠剂选自透明质酸、聚乙烯醇和羟丙基甲基纤维素，优选透明质酸或羟丙基甲基纤维素；渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖或山梨醇。

在一个优选的实施方式中，所述的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU

蛋白保护剂0.2mg

增稠剂4mg

渗透压调节剂3mg

磷酸缓冲液 适量

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白；增稠剂选自透明质酸、聚乙烯醇和羟丙基甲基纤维素；渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖或山梨醇。

上述重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液的制备方法包含以下步骤：

(1)将增稠剂分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、渗透压调节剂和磷酸缓冲液适量溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

(3)在无菌条件下将步骤(1)所得的溶液和步骤(2)所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装，即得。

具体的，上述重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液的制备方法包含以下步骤：

(1)将1.0-5.0mg增稠剂分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将1000-3000IU重组牛碱性成纤维细胞生长因子、0.01-0.25mg蛋白保护剂、1.0-5.0mg渗透压调节剂、磷酸缓冲液适量溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

(3)在无菌条件下将步骤(1)所得的溶液和步骤(2)所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装，即得。

所述的磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合液，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠两者之间的配比百分比比例为公知技术的常规比例范围，例如10-90％∶90-10％，或20-50％∶50-80％。

本发明与现有技术相比，具有以下的优点和效果：

①作用快速有效，可治疗各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变、复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼症、大泡性角膜炎、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状(或营养性)单疱性角膜溃疡等。

②通过对重组牛碱性成纤维细胞生长因子选择特定的辅料及用量，减小了滴眼液中辅料的使用量，同时保证了滴眼液的稳定性；

③减小了滴眼液对眼睛使用部位的刺激性。

具体实施方式

下面结合本发明较佳的实施例做进一步的说明，这些实施例应理解为不会限制本发明的实施范围，其变型及等同方式均被涵盖在本发明的保护范围内。

实施例1：

处方：

具体制备方法为：

将透明质酸和羟丙基甲基纤维素分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；在无菌条件下将上述两个步骤所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装。

实施例2：

处方：

具体制备方法为：

将聚乙烯醇分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、山梨醇、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；在无菌条件下将上述两个步骤所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装，即得。

实施例3：

处方：

具体制备方法为：

将羟丙基甲基纤维素分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、聚乙二醇、葡萄糖、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；在无菌条件下将上述两个步骤所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装，即得。

试验例1：rb-bFGF滴眼液促进角膜碱烧伤模型愈合的试验研究

1、试验方法

试验动物：健康新西兰白兔，体重2-3kg，雌雄并用，手电筒及裂隙灯检查眼前段未见异常。120只动物随机分为五组，每组24只动物。

家兔角膜碱烧伤模型：外眼检查正常动物，生理盐水滴洗右眼2次，以地卡因滴眼液滴眼2次，表面麻醉，肌注氯胺酮，全身麻醉，将滤纸圆片于NaOH溶液中浸透，小心贴敷于已固定眼球位置的右眼角膜正中区数分钟，取下滤纸片后立即用生理盐水冲洗角膜和结膜囊，即制成角膜碱烧伤模型。

试验样品：阴性对照品为不含重组牛碱性成纤维细胞生长因子的滴眼液，辅料组成同实施例1，每次1-2滴，每日4次；本发明样品为实施例1滴眼液，每次1-2滴，每日4次；阳性对照品为素高捷疗眼膏，每次1滴，每日4次。

给药方法：将阴性对照品、本发明滴眼液和阳性对照品分别对模型动物给药，连续治疗二周；

评价指标：分别在治疗1、2、4、6、10、14天时将荧光素染色裂隙灯显微镜标准照相照片，经过计算机图象系统测量分析出各组不同时间角膜上皮愈合面积(结果见表1)和角膜上皮愈合率(结果见表2)。角膜上皮愈合面积和角膜上皮愈合率越高，表明治疗效果越好。

2、试验结果

表1、各组不同时间的角膜上皮愈合面积(mm²；X±S)

治疗时间(天)	阴性对照组	本发明组	阳性对照组
				1	14.5±0.6	47.8±1.0	20.2±4.0
2	40.8±4.6	51.9±3.8	45.2±1.5
				4	30.7±10.9	39.5±2.2	30.1±8.1
6	35.3±7.8	49.5±0.9	38.7±2.2
				10	38.6±1.9	51.9±3.8	47.7±2.3
14	34.6±5.6	51.9±3.8	45.4±6.5

表2.各组不同时间的角膜上皮愈合率(％；X±S)

治疗时间(天)	阴性对照组	本发明组	阳性对照组
				第1天	28.7±1.1	92.1±1.9	38.7±7.6
第2天	80.9±9.1	100±0.5	86.9±2.9
				第4天	61.0±21.7	76.2±4.2	57.7±15.6
第6天	70.1±15.4	95.3±1.8	74.2±4.3
				第10天	76.5±3.7	100±1.1	91.5±4.5
第14天	68.7±11.1	100±0.7	87.2±12.5

由表1和表2的结果可以看出，在第1天时，本发明组的上皮愈合面积明显大于阴性对照组和阳性对照组；在第4天时，上皮愈合率呈现一定反复；在第14天时，本发明组的角膜上皮愈合率大于阴性对照组和阳性对照组，且与阴性对照组有显著性差异。

试验例2：稳定性研究

1、高温高湿试验：

将实施例2的滴眼液灌装于无色塑料瓶中，压盖密封，密封置于60℃、相对湿度75％条件下进行加速试验，分别于1、5、10天检测滴眼液的含量、pH、外观和无菌。结果如下表：

表3、高温高湿试验结果

	1天	5天	10天
				含量	100.32％	100.01％	99.98％
pH	7.0	7.0	7.0
				外观	无色澄清	无色澄清	无色澄清
无菌	合格	合格	合格

结果表明，本发明的滴眼液在高温高湿试验中质量稳定。

2、低温长期试验：

将实施例1的滴眼液灌装于无色塑料瓶中，密封置于4℃下进行试验，分别于1、3、6、12个月检测滴眼液的的含量、pH、外观和无菌。结果如下表：

表4、低温试验结果

	1个月	3个月	6个月	12个月
					含量	99.99％	100.02％	99.99％	99.98％
pH	7.0	7.0	7.0	7.0
					外观	无色澄清	无色澄清	无色澄清	无色澄清
无菌	合格	合格	合格	合格

结果表明，本发明的滴眼液在低温长期试验中质量稳定。

3、光照加速试验：

将实施例2的滴眼液灌装于无色塑料瓶中，压盖密封，置于光线强度为3000Lx光下照射1、5、10、30天，检测滴眼液的含量、pH、外观和无菌。结果如下表：

表4、光照加速试验结果

	1天	5天	10天	30天
					含量	99.99％	100.01％	100.02％	99.98％
pH	7.0	7.0	7.0	7.0
					外观	无色澄清	无色澄清	无色澄清	无色澄清
无菌	合格	合格	合格	合格

结果表明，本发明的滴眼液在光照加速试验中质量稳定。

Claims (6)

1.一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1000-3000IU；

蛋白保护剂0.01-0.25mg；；

增稠剂1.0-5.0mg；

渗透压调节剂1.0-5.0mg；

磷酸缓冲液 适量

注射用水 加至0.4ml；

其中，蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，增稠剂选自透明质酸、聚乙烯醇和羟丙基甲基纤维素，渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖或山梨醇。

2.根据权利要求1所述的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其特征在于所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

蛋白保护剂0.2mg；

增稠剂4mg；

渗透压调节剂3mg；

磷酸缓冲液 适量

注射用水 加至0.4ml；

其中，所述蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，增稠剂选自透明质酸、聚乙烯醇和羟丙基甲基纤维素；渗透压调节剂为氯化钠、葡萄糖或山梨醇。

3.如权利要求1或2所述的滴眼液，其特征在于，所述的蛋白保护剂为人血白蛋白。

4.如权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的增稠剂为透明质酸。

5.如权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的增稠剂为羟丙基甲基纤维素。

6.根据权利要求1-5任一所述的滴眼液其特征在于其制备工艺为：

(1)将增稠剂分散于适量注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却后备用；

(2)将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、渗透压调节剂和磷酸缓冲液适量溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

(3)在无菌条件下将步骤(1)所得的溶液和步骤(2)所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容后立即分装，即得。