RU2646804C1 - Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза - Google Patents
Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2646804C1 RU2646804C1 RU2016152365A RU2016152365A RU2646804C1 RU 2646804 C1 RU2646804 C1 RU 2646804C1 RU 2016152365 A RU2016152365 A RU 2016152365A RU 2016152365 A RU2016152365 A RU 2016152365A RU 2646804 C1 RU2646804 C1 RU 2646804C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ophthalmic agent
- cornea
- eye
- ophthalmic
- peptides
- Prior art date
Links
- 239000003732 agents acting on the eye Substances 0.000 title claims abstract description 115
- 229940125702 ophthalmic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 113
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 title claims abstract description 66
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 102
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 71
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 71
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 71
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 49
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229940054534 ophthalmic solution Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 229940069265 ophthalmic ointment Drugs 0.000 abstract 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 38
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 24
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 20
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 19
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 17
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 17
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 16
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 16
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 16
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 13
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 13
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 13
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 12
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 12
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 12
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 12
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 9
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 8
- 108090000288 Glycoproteins Chemical class 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- -1 keratansulfate sodium salt Chemical class 0.000 description 5
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 5
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 4
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 208000009043 Chemical Burns Diseases 0.000 description 3
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 3
- 201000002287 Keratoconus Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L water blue Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1N.[Na+].[Na+] XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 206010015911 Eye burns Diseases 0.000 description 2
- 102000003972 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 2
- 108090000385 Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 2
- 229920000288 Keratan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002807 Thiomer Polymers 0.000 description 2
- 102000006747 Transforming Growth Factor alpha Human genes 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 description 2
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 2
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940068935 insulin-like growth factor 2 Drugs 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 2
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 2
- 229940023490 ophthalmic product Drugs 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 2
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 2
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 206010051559 Corneal defect Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 102100031372 Thymidine phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 108700023160 Thymidine phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002322 anti-exudative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940006423 chondroitin sulfate sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003683 corneal stroma Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 208000018769 loss of vision Diseases 0.000 description 1
- 231100000864 loss of vision Toxicity 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000074 matrix-assisted laser desorption--ionisation tandem time-of-flight detection Methods 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для регенерации роговицы глаза. Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза включает пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена. Указанное средство используется в составе офтальмологической формы из числа: глазной раствор, глазные капли, глазная мазь. Использование изобретения позволяет повысить эффективность регенерации роговицы глаза при повреждениях и дегенеративных заболеваниях. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области удовлетворения жизненных потребностей человека и может быть использовано в медицине, фармацевтике, ветеринарии для регенерации роговицы глаза, но не ограничивается указанной областью. Более детально, заявленное техническое решение относится к пептидам, получаемым из коллагена, нативного коллагена, денатурированного коллагена, гидролизованного коллагена, желатина, используемым для лечения повреждений и дегенеративных заболеваний роговицы глаза.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены биополимеры и их аналоги для лечения заболеваний и повреждений роговицы глаза, относящиеся, например, к классам полисахаридов, гликопротеинов, пептидов. Заявленное техническое решение относится к классу пептидов.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено изобретение по патенту РФ №2272635 - фармакологически активная субстанция для лечения заболеваний и повреждений роговицы глаза, включающая полисахариды. Сущностью являются сульфатированные гликозаминогликаны, отличающееся тем, что она (субстанция) содержит сухую смесь компонентов - натриевой соли кератансульфата и натриевой соли хондроитинсульфата, общее количество которых в смеси составляет не менее 98 мас. %, при следующем соотношении компонентов, мас. %: натриевая соль кератансульфата - 2-90, натриевая соль хондроитинсульфата - 8-96, физиологический раствор - остальное.
Существенный недостаток известной субстанции по патенту РФ №2272635 заключается в том, что она (субстанция) является, преимущественно, средством для снятия воспаления роговицы глаза за счет антиэкксудативного и дегидратирующего действия, то есть не обладает собственной регенеративной активностью по отношению к поврежденным тканям роговицы, таким образом, изобретение не предназначено для эффективного лечения повреждений роговицы глаза. Указанные недостатки существенно ограничивают область применения.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены офтальмологическое лекарственное средство и способ его применения, по патенту РФ №2220687, сущностью технического решения являются офтальмологическое лекарственное средство и способ его применения, в отношении своего состава включающее гликопротеин и фармацевтически приемлемый носитель, отличающееся тем, что оно содержит в качестве гликопротеина сывороточный гликопротеин, выделенный из сыворотки крови млекопитающих изоэлектрическим фокусированием в градиенте рН с отбором необходимой фракции, растворимый в насыщенном растворе сульфата аммония, имеющий изоэлектрическую точку в диапазоне рН от 4,5 до 5,1 и кажущуюся молекулярную массу от 10 до 37 килодальтон и, возможно, хлористый кальций при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Сывороточный гликопротеин 1⋅10-16 - 1⋅10-9
Кальций хлористый 0-0,01
Носитель - остальное.
Средство по патенту РФ №2220687 применяют для лечения заболеваний и повреждений роговицы глаза путем инсталляции (закапывания) на роговицу глаза 2-7 кратно в сутки в течение 10-15 суток.
Существенными недостатками известного изобретения являются трудоемкость процесса выделения сывороточного гликопротеина методом изоэлектрического фокусирования, высокий риск передачи инфекции из крови млекопитающих, многократная (от 20 до 105 в течение полного курса лечения) инсталляция на роговицу глаза, свидетельствующая о кратковременности действия офтальмологического средства, его низкой регенеративной активности и, как следствие, необходимости длительного лечения. Кроме того, вышеуказанное средство обладает присущей сывороточным гликопротеинам низкой стабильностью при хранении. Указанные недостатки существенно ограничивают область применения.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлен ряд относящихся к классу пептидов аналогов, используемых для регенерации роговицы глаза.
Наиболее активными среди средств пептидной природы для регенерации роговицы глаза являются факторы роста, приведенные далее.
Например, известен эпидермальный фактор роста (далее по тексту - ЭФР) по патенту на изобретение US 4959353 А «Ускорение заживления повреждений роговицы глаза с помощью эпидермального фактора роста человека, полученного с помощью технологии рекомбинантной ДНК». Сущностью технического решения является способ лечения повреждений роговицы глаза, включающий применение рекомбинантного эпидермального фактора роста (далее по тексту - ЭФР), где указанный ЭФР получают путем создания генетической конструкции, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, идентичной природному ЭФР.
Существенным недостатком изобретения является высокая трудоемкость и длительность процесса получения ЭФР, получаемого технологией рекомбинантных ДНК и используемого в составе средства для заживления роговицы глаза. Указанные недостатки существенно ограничивают область применения.
Известен тромбоцитарный фактор роста (далее по тексту - ТФР) по патенту на изобретение US 5955436 А «Использование фактора роста тромбоцитов для усиления заживления ран», сущностью является способ ускорения заживления роговицы глаза при локальном введении определенного количества ТФР в зону повреждения в дозе, эффективной для ускорения заживления раны.
Существенным недостатком изобретения является высокая трудоемкость и длительность процесса получения ТФР, производимого способами генной инженерии, и, как следствие, высокая себестоимость содержащего ТФР ранозаживляющего средства. Недостаток существенно ограничивает область применения.
Наиболее близким к заявленному техническому решению, выбранное заявителем в качестве прототипа, совпадающему с техническим решением по назначению, является композиция по патенту на изобретение US 5942487 А, сущностью являются композиция на основе фактора стволовых клеток (далее по тексту - ФСК) и способ стимулирования регенерации эпителия роговицы глаза, заключающийся в нанесении композиции на поверхность поврежденной роговицы в терапевтически эффективной дозе.
Таким образом, композиция по прототипу US 5942487 А содержит терапевтически эффективное количество ФСК и фармацевтически приемлемый носитель, содержит, по меньшей мере, один пептид из числа: эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-1), инсулиноподобный фактор роста 2 (IGF-2), инсулин, интерферон, интерлейкин, фактор роста кератиноцитов (KGF), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), тромбоцитарный фактор роста эндотелиальных клеток (PD-ECGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), трансформирующий фактор роста альфа (TGF-α), трансформирующий фактор роста бета (TGF-β). Способ применения изобретения по прототипу US 5942487 А заключается в нанесении вышеуказанной композиции на основе ФСК в терапевтически эффективной дозе и фармацевтически приемлемого носителя на поверхность роговицы для лечения повреждений роговицы глаза.
Существенным недостатком прототипа является необходимость применения в составе композиции на основе ФСК вышеуказанных природных факторов роста для достижения терапевтического эффекта - регенерации роговицы глаза.
Существенный недостаток природных факторов роста заключается в том, что в тканях и клетках высших организмов факторы роста содержатся в низкой концентрации, например, в бычьем гипофизе - 5 мг/кг [1], в сыворотке крови человека - 604-780 пг/мл [2]. Вследствие этого, процесс выделения природных факторов роста в промышленном производстве технологически и экономически не обоснован. Технологически возможно получение аналогов природных факторов роста - рекомбинантных факторов роста - генно-инженерными и биотехнологическими способами. Указанные способы включают использование генетических конструкций (ДНК-плазмид) и микроорганизмов-продуцентов [3].
Существенными недостатками рекомбинантных факторов роста являются:
1) высокая трудоемкость, большое число стадий и длительность технологического процесса, включающего, по меньшей мере, получение генетической конструкции, создание и культивирование генно-модифицированных микроорганизмов, многоэтапное выделение и очистку целевого продукта;
2) необходимость высокой степени очистки целевого продукта от компонентов бактериальных клеток;
3) высокий риск токсичности, иммуногенности, аллергенности целевого продукта, обусловленных остаточными примесями, например бактериальными токсинами;
4) низкий выход целевого продукта (факторов роста).
В целом, недостатками известного технического решения - по прототипу (US 5942487 А), является то, что для регенерации роговицы глаза требуются рекомбинантные факторы роста, характеризующиеся:
- необходимостью получения, культивирования и сохранения генно-модифицированных микроорганизмов;
- необходимостью многоэтапного, трудоемкого и длительного выделения факторов роста из микроорганизмов;
- низким содержанием факторов роста в микроорганизмах и, как следствие, низкой производительностью процесса выделения;
- необходимостью многоэтапной и трудоемкой очистки факторов роста от опасных компонентов микроорганизмов;
- необходимостью многократного применения по назначению (для регенерации эпителиальной ткани роговицы глаза).
Указанные недостатки существенно ограничивают область применения прототипа (US 5942487 А) в медицине, фармацевтике и ветеринарии.
Целью предлагаемого изобретения является разработка офтальмологического средства, характеризующегося сопоставимой с факторами роста регенеративной активностью и устраняющего недостатки прототипа US 5942487 А, предназначенного для регенерации роговицы глаза при повреждениях и дегенеративных заболеваниях.
Цели достигают применением офтальмологического средства, содержащего пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена. Офтальмологическое средство применяют в составе офтальмологической формы из числа: глазной раствор, глазные капли, глазная мазь.
В качестве источника полипептидных цепей коллагена используют нативный коллаген, денатурированный коллаген, гидролизованный коллаген, желатин. Т.е. заявленное офтальмологическое средство может быть получено из любых вышеуказанных видов коллагена. Вышеуказанные виды коллагена могут являться промышленным продуктом крупнотоннажной переработки тканей млекопитающих.
Заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, обладает существенными преимуществами по сравнению с прототипом, а именно:
- исключает необходимость использования генно-модифицированных микроорганизмов и, как следствие, не требует их (микроорганизмов) получения, культивирования и сохранения;
- исключает необходимость выполнения многоэтапного, трудоемкого и продолжительного процесса выделения факторов роста из микроорганизмов, который требует значительного расхода реагентов;
- исключает необходимость многоэтапной и трудоемкой очистки факторов роста от иммуногенных и токсичных компонентов микроорганизмов, например эндотоксинов;
- требует меньшей частоты применения, например - три раза в сутки в течение четырех суток (12 процедур) против не менее двадцати процедур (два раза в сутки в течение десяти суток) по прототипу при сопоставимой эффективности процесса регенерации тканей роговицы.
Преимущества заявленного технического решения по сравнению с прототипом существенно расширяют область его (предлагаемого изобретения) применения по назначению: в медицине, фармацевтике и ветеринарии.
Далее заявителем приведен пример технологии производства заявленного офтальмологического средства.
Используют в качестве источника полипептидных цепей коллагена желатин, например желатин производства Sigma-Aldrich (США). Проводят гидролитическое расщепление полипептидных цепей коллагена одним протеолитическим ферментом с образованием офтальмологического средства, содержащего пептиды с различной молекулярной массой (далее по тексту - ММ), идентифицируемой стандартными методами, например масс-спектрометрией (см. ПРИМЕР ПЕРВЫЙ). Более детально, заявленное офтальмологическое средство содержит пептиды с ММ в диапазоне от 3600 до 10000 дальтон и не содержит исходные полипептиды коллагена, имеющие ММ массу более 100 кДа.
Проводят фракционирование и очистку офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена одним из известных способов, например диализом, хроматографией, ультрафильтрацией.
Таким образом, заявленное техническое решение не требует трудоемких, длительных и энергозатратных процессов, используемых по прототипу, таких как получение и культивирование микроорганизмов, лизиса клеток, выделения и очистки продукта (от нецелевых компонентов микроорганизмов).
Заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, обладает высокой регенеративной активностью, не уступающей регенеративной активности факторов роста по прототипу US 5942487 А, а именно обладает, по меньшей мере, высокой митогенной активностью, т.е. способностью усиливать пролиферацию (деление и рост) клеток млекопитающих и человека (см. ПРИМЕР ВТОРОЙ), а также усиливает функциональную активность клеток, например стимулирует биосинтез коллагена и других белков внеклеточного матрикса (см. ПРИМЕР ТРЕТИЙ).
Исследование свойств предлагаемого изобретения - офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена - выявило его способность усиливать регенерацию тканей роговицы глаза (соединительной ткани стромы и эпителиальной ткани), например - в модели химического (щелочного) ожога роговицы глаза крысы (см. ПРИМЕР ПЯТЫЙ и ПРИМЕР ШЕСТОЙ).
Далее заявителем описаны примеры применения заявленного технического решения по назначению и его (заявленного технического решения) преимущества.
Для проявления терапевтического эффекта офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена - достаточной является однократная в сутки в течение 7 суток инсталляция на роговицу глаза, тогда как при применении прототипа требуется многократная (4 раза в сутки) инсталляция в течение не менее 3 суток, а суммарное число инсталляций в течение терапевтического курса - не менее 12-ти (см. описание прототипа).
В совокупности, приведенная заявителем информация позволяет сделать вывод о том, что применение по назначению заявленного технического решения в качестве офтальмологического средства является более эффективным, по сравнению с аналогом, наиболее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности и результату, достигаемому при его использовании - прототипом по патенту на изобретение US 5942487 А.
Кроме изложенного выше, к характерным особенностям заявленного технического решения следует отнести способность офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена образовывать однородные стабильные растворы, вязкие гели и эмульсии, его совместимость с известными вспомогательными веществами и возможность изготовления на его основе различных препаративных форм, например глазных капель, гелей, мазей, не ограничиваясь ими.
Способность заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена усиливать процесс регенерации роговицы не ограничивается его применением в качестве терапевтического средства только при травматическом повреждении, например химическом ожоге (по ПРИМЕРАМ ПЯТОМУ и ШЕСТОМУ). Заявленное офтальмологическое средство применимо при иных патологиях, обусловленных, например недостаточной пролиферативной и/или синтетической активностью фибробластов и/или эпителиальных клеток.
Известны заболевания глаза, например кератоконус, проявляющиеся в дегенеративных изменениях структуры роговицы, например в истончении стромы и эпителия, изменении формы (сферичности) роговицы, приводящие к снижению остроты зрения [4]. В случае указанных дегенеративных изменений структуры роговицы офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена способен устранять дефекты роговицы за счет стимулирующей активности на пролиферацию и синтетическую активность клеток роговицы.
С учетом экспериментально выявленных свойств, пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена может быть применен в качестве заявленного офтальмологического средства при травматических повреждениях и дегенеративных заболеваниях роговицы глаза.
Заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, имеет следующие существенные преимущественные признаки перед прототипом:
- не требует получения генетических конструкций, получения, культивирования и сохранения генетически модифицированных микроорганизмов, и, как следствие, имеет пониженную трудоемкость и меньшую продолжительность процесса получения,
- не требует многоэтапного и трудоемкого процесса выделения целевого продукта;
- не содержит токсичных и иммуногенных примесей и, следовательно, не требует многоэтапной и трудоемкой очистки целевого продукта;
- требует меньшей кратности и длительности применения по назначению (для регенерации тканей роговицы).
Цели достигают применением офтальмологического средства для регенерации роговицы глаза, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена.
Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза, включающее пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена.
Офтальмологическое средство по п. 1 в составе офтальмологической формы из числа: глазной раствор, глазные капли, глазная мазь.
Заявленное техническое решение поясняется следующими материалами – Фиг. 1-6. Комментарии к Фигурам - в тексте описания.
На Фиг. 1 показаны результаты масс-спектрометрического анализа заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, по горизонтальной оси показан параметр масса/заряд для входящих в состав заявленного офтальмологического средства пептидов, численно соответствующий значениям ММ пептидов, по вертикальной оси - интенсивность параметра отношения массы к заряду. Фиг. 1 демонстрирует наличие в офтальмологическом средстве, в сущности своей - пептидов с ММ в диапазоне от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена и отсутствие исходных полипептидов коллагена, имеющих ММ массу более 100 килодальтон.
На Фиг. 2 показано максимальное стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена на пролиферацию мышиных фибробластов линии NIH 3Т3 в сравнении с факторами роста (в процентах относительно контроля), где 1 - заявленное офтальмологическое средство, 2 - FGF-2 (фактор роста фибробластов), 3 - EGF (эпидермальный фактор роста). Фиг. 2 демонстрирует, что заявленное офтальмологическое средство стимулирует пролиферацию фибробластов на 42,8%, что соизмеримо с действием вышеуказанных факторов роста, т.е. заявленное офтальмологическое средство обладает митогенной активностью, соизмеримой с активностью факторов роста.
На Фиг. 3 (4 фото) показаны светлопольные микрофотографии, окрашенных гистологическими красителями (пикриновой кислотой, анилиновым синим) NIH 3Т3 фибробластов, выращенных в питательной среде с добавлением заявленного офтальмологического средства (фото 2), или фактора роста фибробластов (FGF-2) (фото 3), или эпидермального фактора роста (EGF) (фото 4) по сравнению с необработанными (контрольными) фибробластами (фото 1) по истечении 48 часов культивирования. Фиг. 3 демонстрирует, что заявленное офтальмологическое средство стимулирует биосинтетическую активность фибробластов до уровня, сопоставимого с действием факторов роста.
На Фиг. 4 (2 фото) показаны светлопольные микрофотографии срезов роговицы глаза крысы, обработанной заявленным офтальмологическим средством и без обработки (инсталляции), через 7 суток после химического (щелочного) ожога. Окраска: железный гематоксилин, увеличение 400×. Фото 1 - контроль (ожог без последующей инсталляции), фото 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства. Фигурной скобкой выделена строма роговицы, стрелкой указана передняя пограничная (боуменова) мембрана. Фиг. 4 демонстрирует, что заявленное офтальмологическое средство приводит к восстановлению поврежденной структуры роговицы по сравнению с необработанной роговицей.
На Фиг. 5 показаны результаты измерения толщины регенерирующего эпителия (среднее значение) через 7 суток после химического (щелочного) ожога, где: 1 - контроль (ожог без инсталляции), 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства. Фиг. 5 демонстрирует, что заявленное офтальмологическое средство (2) приводит к увеличению толщины эпителия (на 23%) по сравнению с эпителием необработанной роговицы (1).
На Фиг. 6 показаны результаты подсчета числа слоев эпителиоцитов в составе регенерирующего эпителия (среднее значение) через 7 суток после химического ожога, где 1 - контроль (ожог без инсталляции), 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства. Фиг. 6 демонстрирует существенное увеличение числа слоев эпителиоцитов (от 1,65 слоев в контроле до 2,5 слоев после инсталляции заявленного офтальмологического средства), т.е. существенный прирост числа клеточных слоев (на 52%) по сравнению с эпителием необработанной роговицы (1).
Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.
ПРИМЕР ПЕРВЫЙ, показывающий характеристики заявленного офтальмологического средства.
Заявителем в ПРИМЕРЕ ПЕРВОМ приведены источники полипептидных цепей коллагена и физико-химические характеристики заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена.
Используют коллаген, например бычий коллаген производства Sigma-Aldrich (США). Способ реализуют следующим образом: растворяют коллаген в подкисленном водном растворе, например 2,5% соляной кислоте, нейтрализуют раствор коллагена раствором гидроксида натрия (0,1 моль/л) и уравновешивают буферным раствором, например фосфатно-солевым буферным раствором (далее по тексту - ФСБ) с рН 7,4.
Используют желатин, например бычий желатин производства Sigma-Aldrich (США). Готовят водный раствор желатина, например в ФСБ с концентрацией желатина не более 20,0 мас. %
Проводят гидролитическое расщепление коллагена и/или желатина обработкой различными факторами, например ферментами, например трипсином из поджелудочной железы свиньи (РАА Laboratories) с концентрацией, например 0,5%, и температуре, например плюс 37°С. Останавливают гидролитическое расщепление, например путем добавления соляной кислоты (1,0 моль/л). Проводят очистку продуктов гидролитического расщепления одним из известных способов, например диализом - через избирательно проницаемую полимерную мембрану.
В результате реализации указанной выше последовательности действий получают заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды из полипептидных цепей коллагена, при этом способы очистки пептидов не ограничиваются указанным выше.
Определяют ММ пептидов в заявленном офтальмологическом средстве, например масс-спектрометрией матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации [5] с использованием масс-спектрометра MALDI-TOF/TOF ultrafleXtrme (Bruker Daltonik GmbH, Германия).
На Фиг. 1 показаны результаты масс-спектрометрического анализа заявленного офтальмологического средства, в сущности своей пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, по горизонтальной оси показан параметр масса/заряд для входящих в состав заявленного офтальмологического средства пептидов, численно соответствующий значениям ММ пептидов, по вертикальной оси - интенсивность параметра отношения массы к заряду. Как видно из Фиг. 1, заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды из полипептидных цепей коллагена, содержит пептиды с ММ в диапазоне от 3600 до 10000 дальтон (см. стрелки на Фиг. 1) и не содержит исходные полипептиды коллагена с ММ более 100 килодальтон.
Приведенный пример демонстрирует, что заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, например бычьего коллагена, содержит смесь пептидов из коллагена с ММ в диапазоне от 3600 до 10000 дальтон, т.е. вышеуказанные молекулярные массы пептидов меньше ММ полипептидов коллагена. Аналогичное заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена - получают при использовании источников, полипептидных цепей коллагена, например желатин, известный также как денатурированный (гидролизованный) коллаген [6], без ограничения им.
ПРИМЕР ВТОРОЙ, показывающий стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства на пролиферацию клеток (в сравнении с факторами роста).
Используют фибробласты линии NIH 3Т3 от компании АТСС (США). Культивируют фибробласты асептически в стандартных условиях: питательная среда α-МЕМ, 10% эмбриональная телячья сыворотка, атмосфера 5% CO2, температура плюс 37°С [7]. Фибробласты рассеивают в 96-луночные планшеты в количестве 2000 клеток в каждой лунке и культивируют 24 часа. Полученное по ПРИМЕРУ ПЕРВОМУ заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена добавляют к фибробластам до конечной концентрации не менее 1 нг/мл и культивируют клетки в течение 72 часов. Добавляют в лунки в качестве препарата сравнения основной фактор роста фибробластов человека (далее по тексту - FGF-2) и эпидермальный фактор роста (далее по тексту - EGF), например производства ООО «Компания «ПанЭко» (Россия). FGF-2 и EGF являются одними из наиболее биологически активных природных факторов роста [1, 2].
Далее оценивают число живых клеток в лунках - показатель пролиферативной (митотической) активности клеток - с помощью МТТ-теста [8] на микропланшетном анализаторе Infinite 200 PRO (Tecan, Швейцария) - по величине оптического сигнала продукта восстановления реагента МТТ (Promega, США). Уровень стимуляции пролиферативной активности клеток рассчитывают в процентах от контроля (необработанные клетки).
На Фиг. 2 показано максимальное стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, на пролиферацию мышиных фибробластов линии NIH 3Т3 в сравнении с факторами роста (в процентах относительно контроля), где 1 - заявленное офтальмологическое средство, 2 - FGF-2, 3 - EGF.
Таким образом, экспериментально выявлено, что максимальная стимуляция пролиферативной активности клеток заявленным офтальмологическим средством, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена составляет 42,8% (Фиг. 2, см. 1), а максимальная стимуляция пролиферативной активности препаратами сравнения FGF-2 (Фиг. 2, см. 2) и EGF (Фиг. 2, см. 3) и составляет 53,5% и 29,8% соответственно. Таким образом, заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, проявляет стимулирующий эффект на пролиферативную активность фибробластов, соразмерный с действием природных факторов роста. Это показывает, что по своей митогенной активности заявленное офтальмологическое средство не уступает используемым в прототипе (US 5942487 А) факторам роста. При этом заявленное офтальмологическое средство характеризуется отсутствием имеющихся у прототипа недостатков, при этом устраняет недостатки, так как не требует применения генно-инженерных (рекомбинантных) микроорганизмов (см. ПРИМЕР ПЕРВЫЙ).
ПРИМЕР ТРЕТИЙ, показывающий стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства на синтетическую активность клеток (в сравнении с факторами роста).
Выявляют стимулирующее действие полученного по ПРИМЕРУ ПЕРВОМУ заявленного офтальмологического средства на биосинтетическую активность клеток, например - фибробластов линии NIH 3Т3 от компании АТСС (США). Выполняют действия по ПРИМЕРУ ВТОРОМУ, но при этом культивируют фибробласты в 24-х луночных планшетах с добавлением заявленного офтальмологического средства, или основного фактора роста фибробластов человека (FGF-2), или эпидермального фактора роста (EGF) в течение 48 часов. Фиксируют клетки раствором 4% параформальдегида и окрашивают выявляющими коллаген гистохимическими красителями, например - последовательно пикриновой кислотой и анилиновым синим [9]. Проводят микроскопическое исследование окрашенных фибробластов, например на световом микроскопе Axio Observer Z1 (Carl Zeiss, Германия) при увеличении 400×.
На Фиг. 3 (4 фото) показаны светлопольные микрофотографии, окрашенных гистологическими красителями (пикриновой кислотой, анилиновым синим) NIH 3Т3 фибробластов, выращенных в питательной среде с добавлением заявленного офтальмологического средства (фото 2), или фактора роста фибробластов (FGF-2) (фото 3), или эпидермального фактора роста (EGF) (фото 4) по сравнению с необработанными (контрольными) фибробластами (фото 1) по истечении 48 часов культивирования. Из Фиг. 3, фото 2 (заявленное офтальмологическое средство) и фото 1 (контроль) видно, что заявленное офтальмологическое средство (фото 2) повышает интенсивность гистохимического окрашивания фибробластов по сравнению с контролем (фото 1), так как клетки на фото 2 более интенсивно окрашены по сравнению с клетками на фото 1. Полученные результаты свидетельствуют о стимулирующем эффекте заявленного офтальмологического средства на внутриклеточный синтез белков, например предшественников коллагена. При этом заявленное офтальмологическое средство (фото 2) проявляет сопоставимый стимулирующий эффект на биосинтетическую активность фибробластов с природными факторами роста - FGF-2 (фото 3) и EGF (фото 4). Таким образом, по своему стимулирующему эффекту на биосинтетическую активность клеток заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена не уступает используемым в прототипе (US 5942487 А) факторам роста. При этом заявленное офтальмологическое средство характеризуется отсутствием имеющихся у прототипа недостатков, при этом заявленное офтальмологическое средство устраняет их, так как не требует применения генно-инженерных (рекомбинантных) микроорганизмов (см. ПРИМЕР ПЕРВЫЙ).
ПРИМЕР ЧЕТВЕРТЫЙ, показывающий предлагаемые терапевтические формы заявленного офтальмологического средства.
Готовят различные офтальмологические формы, содержащие полученное по ПРИМЕРУ ПЕРВОМУ заявленное офтальмологическое средство, в сущности своей - пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена. Готовят водный раствор заявленного офтальмологического средства путем его растворения в очищенной воде или физиологическом солевом растворе, например 0,9% растворе хлорида натрия. Вводят в состав раствора заявленного офтальмологического средства один из известных антимикробных агентов, обладающих бактерицидным, бактериостатическим и/или противогрибковым действием или комбинацию антимикробных агентов. В состав раствора заявленного офтальмологического средства вводят вспомогательные вещества из числа: консерванты; стабилизаторы; увлажняющие средства, например гликоли; кератопротекторы; любриканты, например полисахариды, производные полисахаридов, поливиниловый спирт; мукоадгезивные полимеры; желатин; амфифильные поверхностно-активные вещества; эмульгаторы; обезболивающие средства; биологически активные вещества, например аминокислоты, витамины. Стерилизуют раствор заявленного офтальмологического средства любым из известных способов [10]. Применяют стерильный раствор заявленного офтальмологического средства в виде глазных капель путем инсталляции на роговицу глаза.
Смешивают раствор заявленного офтальмологического средства с одним из известных гелеобразующих полимеров, например производным целлюлозы. Вводят в состав полученного геля вспомогательные вещества из числа: консерванты; стабилизаторы; увлажняющие средства, например гликоли; кератопротекторы, любриканты, например полисахариды, производные полисахаридов, поливиниловый спирт; мукоадгезивные полимеры; желатин; амфифильные поверхностно-активные вещества; эмульгаторы; обезболивающие средства; биологически активные вещества, например аминокислоты, витамины. Стерилизуют гель (мазь) заявленного офтальмологического средства известными способами. Применяют стерильный гель (мазь) заявленного офтальмологического средства в виде глазного геля (мази) путем инсталляции на роговицу глаза.
Приведенные выше офтальмологические формы заявленного офтальмологического средства: раствор, капли, гель (мазь) не ограничиваются изготовлением готовой формы на водорастворимой основе, но также могут быть изготовлены на липофильной основе, например в виде эмульсии, или в твердой форме, например в высушенном (сублимированном) виде.
ПРИМЕР ПЯТЫЙ, показывающий стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства на регенерацию соединительнотканной стромы роговицы глаза.
Выявляют стимулирующее действие заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена на регенерацию тканей роговицы глаза, например соединительнотканной стромы. Эксперимент проводят на лабораторных животных, например на 12 здоровых половозрелых белых крысах-самках Вистар массой 250±20 г, полученных из ООО «Питомник Российской академии медико-технических наук». Животных наркотизируют внутрибрюшинно раствором хлоралгидрата в дозе 340 мг/кг массы животного. Вызывают химический, например - щелочной, ожог роговицы глаза. Для этого на поверхность глаза накладывают двухслойный диск фильтровальной бумаги диаметром (далее по тексту - ∅) 5,0 мм, пропитанный 0,25 молярным раствором гидроксида натрия, и выдерживают в течение 30 сек. Удаляют диск, промывают глаз 0,9% раствором хлорида натрия.
На роговицу одного сожженного глаза инсталлируют 1 раз в сутки в течение 7 суток заявленное офтальмологическое средство, роговицу правого глаза используют в качестве контроля (без инсталляции).
Извлекают глазные яблоки, фиксируют в растворе 10% формалина (ООО Биовитрум, Россия) в ФСБ в течение 24 часов, вырезают роговицы и заключают в парафин по стандартной методике [9]. Получают парафиновые срезы, например на микротоме НМ 355S (Thermo Scientific, Германия) с микротомными лезвиями Feather S35 (Feather, Япония) и окрашивают по стандартной методике [9] гистологическими красителями, например железным гематоксилином (ООО БиоВитрум, Россия). Исследуют влияние заявленного офтальмологического средства на восстановление морфологического строения роговицы методом светлопольной микроскопии на микроскопе, например Axio Observer Z1 (Carl Zeiss, Германия). Количественный анализ проводят с использованием программного пакета Axio Vision для Observer Z1 версия 4.8.2 (Carl Zeiss, Германия). Для подсчета числа клеток в строме роговицы, измерения толщины эпителия и стромы роговицы используют микрофотографии гистологических срезов при увеличении 400×.
На Фиг. 4 (2 фото) показаны светлопольные микрофотографии срезов роговицы глаза крысы, обработанной заявленным офтальмологическим средством и без обработки (инсталляции), через 7 суток после химического (щелочного) ожога. Окраска: железный гематоксилин, увеличение 400×. Фото 1 - контроль (ожог без последующей инсталляции), фото 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства. Фигурной скобкой выделена строма роговицы, стрелкой указана передняя пограничная (боуменова) мембрана.
Как видно из Фиг. 4 (фото 2) заявляемое офтальмологическое средство приводит к формированию стромы (см. фигурную скобку), состоящей из параллельно расположенных пластинок коллагеновых фибрилл без пустот (щелей), в отличие от контроля (с пустотами) (Фиг. 4, фото 1, см. фигурную скобку). Наличие пустот между организованными в виде пластинок коллагеновыми волокнами является признаком дефектной роговицы - дефект проявляется в снижении остроты зрения, вплоть до полной потери зрения [4]. Формирование стромы с большим количеством коллагеновых пластинок и, следовательно, более плотной стромой является преимущественным признаком заявленного офтальмологического средства. Таким образом, результаты свидетельствуют о существенном стимулирующем действии заявленного офтальмологического средства на процесс регенерации поврежденной стромы роговицы.
ПРИМЕР ШЕСТОЙ, показывающий стимулирующее влияние заявленного офтальмологического средства на регенерацию эпителия роговицы глаза.
Выявляют стимулирующее действие заявленного офтальмологического средства на регенерацию тканей роговицы глаза, например эпителиальной ткани. Выполняют действия по ПРИМЕРУ ПЯТОМУ и после моделирования щелочного ожога исследуют эпителиальную ткань при действии заявленного офтальмологического средства.
На Фиг. 4 (фото 2) видно, что инсталляция заявленного офтальмологического средства приводит к формированию передней пограничной (боуменовой) мембраны (указана стрелкой) и пластов эпителиальных клеток, при этом эпителий более интенсивно (темно) окрашен, чем без обработки заявленным офтальмологическим средством (Фиг. 4, фото 1). Интенсивность окрашивания регенерирующей эпителиальной ткани роговицы гистологическими красителями является критерием пролиферативной активности клеток и интенсивности репаративных процессов.
На Фиг. 5 показаны результаты измерения толщины регенерирующего эпителия (среднее значение) через 7 суток после химического (щелочного) ожога, где 1 - контроль (ожог без последующей инсталляции), 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства. Из Фиг. 5 видно, что заявленное офтальмологическое средство (2) приводит к увеличению толщины эпителия (на 23%) по сравнению с эпителием необработанной роговицы (1).
На Фиг. 6 показаны результаты подсчета числа слоев эпителиоцитов в составе регенерирующего эпителия (среднее значение) через 7 суток после химического ожога, где 1 - контроль (ожог без инсталляции), 2 - ожог и инсталляция заявленного офтальмологического средства.
Как видно из Фиг. 6, заявленное офтальмологическое средство (1) приводит к увеличению числа клеточных слоев (от 1,65 слоев в контроле до 2,5 слоев после инсталляции заявленного офтальмологического средства), то есть наблюдается прирост числа клеточных слоев (на 52%) по сравнению с эпителием необработанной роговицы (1).
То есть из Фиг. 5 и Фиг. 6 видно, что увеличение толщины эпителия роговицы при применении заявленного офтальмологического средства происходит не за счет увеличения объема клеток, а вследствие интенсивной пролиферации клеток и увеличения числа клеточных слоев, что согласуется с наличием митогенной активности у заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена (ПРИМЕР ВТОРОЙ). Таким образом, результаты показывают существенное стимулирующее действие заявленного офтальмологического средства на процессы пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток, необходимые для регенерации роговицы.
Таким образом, ПРИМЕРЫ ПЯТЫЙ и ШЕСТОЙ подтверждают высокую регенеративную активность заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена в отношении тканей роговицы глаза, обусловленную его (заявленного офтальмологического средства) отличительными преимущественными признаками и позволяют применять заявленное офтальмологическое средство для регенерации тканей роговицы глаза.
Применение заявленного офтальмологического средства, в сущности своей пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена не ограничивается лечением химического (щелочного) ожога роговицы, но также может применяться при иных травмах роговицы глаза (термических ожогах, механических травмах, хирургических вмешательствах). Кроме того, благодаря установленной регенеративной активности (см. ПРИМЕРЫ ВТОРОЙ, ЧЕТВЕРТЫЙ, ПЯТЫЙ, ШЕСТОЙ) заявленное офтальмологическое средство может быть использовано для лечения заболеваний роговицы глаза, обусловленных недостаточной пролиферативной и/или синтетической активностью фибробластов стромы и клеток эпителия. Известен ряд заболеваний глаза, например кератоконус, сопровождающихся дегенеративными изменениями структуры роговицы, например истончением стромы и эпителия, изменением сферичности роговицы [4], и, как следствие, ухудшением зрения. Таким образом, заявленное офтальмологическое средство может быть применено и как офтальмологическое средство при дегенеративных заболеваниях роговицы глаза различной этиологии.
Приведенные примеры получения и применения предлагаемого изобретения показывают высокую эффективность заявленного офтальмологического средства, в сущности своей - пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена для регенерации роговицы. Таким образом, посредством получения и применения заявленного офтальмологического средства заявителем достигнута цель, устранены недостатки прототипа (US 5942487 А):
- разработано офтальмологическое средство, в сущности своей пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена, относящееся к классу пептидов и отличающееся значительно меньшими трудоемкостью, числом этапов и продолжительностью способа получения по сравнению с факторами роста по прототипу (ПРИМЕР ПЕРВЫЙ);
- более детально, заявленное техническое решение не требует получения и применения генетических конструкций, получения, культивирования и сохранения генно-модифицированных организмов (ПРИМЕР ПЕРВЫЙ);
- более детально, заявленное техническое решение характеризуется отсутствием нецелевых и токсичных компонентов микроорганизмов (ПРИМЕР ПЕРВЫЙ);
- вследствие вышеизложенного заявленное офтальмологическое средство не содержит опасных компонентов микроорганизмов, таких как токсины, вызывающих иммунные, аллергические и воспалительные реакции, следовательно, обладает безопасностью для организма;
- при наличии высокой, соизмеримой с прототипом (факторами роста), регенеративной активности пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена (ПРИМЕРЫ ВТОРОЙ, ТРЕТИЙ, ПЯТЫЙ, ШЕСТОЙ), заявленное офтальмологическое средство при этом требует меньшего числа инсталляций на роговицу глаза для проявления терапевтического эффекта (ПРИМЕРЫ ПЯТЫЙ, ШЕСТОЙ).
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемым к изобретениям, так как при анализе идентифицированных источников информации не выявлены иные офтальмологические средства для регенерации роговицы глаза с признаками, совпадающими с признаками, приведенными в формуле. Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», т.к. не является очевидным для специалистов в данной области техники, а полученные экспериментальные данные о применении пептидов с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена в качестве офтальмологического средства свидетельствуют о существенных отличительных признаках предлагаемого изобретения, преодолевающих вышеуказанные недостатки известных аналогов и прототипа (факторов роста), и не установлена известность влияния отличительных признаков на указанный технический результат.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, поскольку его можно реализовать в промышленном производстве с использованием крупнотоннажного сырья - источников полипептидных цепей коллагена и в деятельности организаций здравоохранения, ветеринарии посредством использования известных стандартных технических устройств и оборудования.
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ИСТОЧНИКИ
1. Gospodarowicz D. Purification of a fibroblast growth factor from bovine pituitary. The Journal of Biological Chemistry. 1975. 250: 2515-2520.
2. Joh Т., Itoh M., Katsumi K., Yokoyama Y., Takeuchi Т., Kato Т., Wada Y., Tanaka R.. Physiological concentrations of human epidermal growth factor in biological fluids: use of a sensitive enzyme immunoassay. Clinica Chimica Acta. 1986. 158(1): 81-90.
3. Demaina A.L., Vaishnavb P. Production of recombinant proteins by microbes and higher organisms. Biotechnology Advances. 2009. 27(3): 297-306.
4. Romero-Jimenez M., Santodomingo-Ribido J., Wolffsohn J.S. Keratoconus: a review. Cont. Lens Anterior Eye. 2010. 33(4): 157-66.
5. Gundry R., White M., Murray C.I. Preparation of Proteins and Peptides for Mass Spectrometry Analysis in a Bottom-Up Proteomics Workflow. Curr. Protoc. Mol. Biol. 2009. 34(5): 121-25.
6. Schrieber R., Gareis H. Gelatine Handbook: Theory and Industrial Practice, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany. 2007. doi: 10.1002/9783527610969. ch2.
7. Todaro G., Green H. Quantitative studies of the growth of mouse embryo cells in culture and their development into established lines. J. Cell Biol. 1963. 17: 299-313.
8. Berridge M., Herst P., Tan A. Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction. Biotechnology Annual Review. 2005. 11: 127-152.
9. Микроскопическая техника: Руководство / Под. ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.
10. Subhashini G., Meenakshi S. Systematic Review on Sterilization Methods of Implants and Medical Devices. International Journal of Chem. Tech. Research. 2015. 8(2): 897-911.
Claims (2)
1. Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза, включающее пептиды с молекулярной массой от 3600 до 10000 дальтон из полипептидных цепей коллагена.
2. Офтальмологическое средство по п. 1 в составе офтальмологической формы из числа: глазной раствор, глазные капли, глазная мазь.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016152365A RU2646804C1 (ru) | 2016-12-28 | 2016-12-28 | Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016152365A RU2646804C1 (ru) | 2016-12-28 | 2016-12-28 | Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2646804C1 true RU2646804C1 (ru) | 2018-03-07 |
Family
ID=61568643
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016152365A RU2646804C1 (ru) | 2016-12-28 | 2016-12-28 | Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2646804C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2700589C1 (ru) * | 2019-07-05 | 2019-09-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр реабилитации и курортологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ РК" Минздрава России) | Способ ускорения заживления роговицы при ее механических травмах |
RU2703302C1 (ru) * | 2019-07-05 | 2019-10-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр реабилитации и курортологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ РК" Минздрава России) | Применение раствора оксиэтиламмония метилфеноксиацетата |
RU2766298C2 (ru) * | 2021-11-29 | 2022-03-14 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Способ лечения ожогов роговицы |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2126235C1 (ru) * | 1995-06-15 | 1999-02-20 | Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" | Способ лечения повреждений и заболеваний роговицы глаза |
US20050208114A1 (en) * | 1998-03-24 | 2005-09-22 | Petito George D | Composition and method for healing tissues |
EP2207598A1 (en) * | 2007-11-16 | 2010-07-21 | Alcon Research, Ltd. | Methods and compositions for treating dry eye |
WO2011021706A1 (ja) * | 2009-08-19 | 2011-02-24 | 国立大学法人東北大学 | 角膜移植用シート |
WO2013063390A1 (en) * | 2011-10-28 | 2013-05-02 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | A suturable hybrid superporous hydrogel keratoprosthesis for cornea |
EP3053458A1 (en) * | 2015-01-28 | 2016-08-10 | Paninkret Chemisch-Pharmazeutisches Werk GmbH | Spray-Dried Composition Comprising an Acerola Fruit Extract and Hydrolyzed Collagen |
-
2016
- 2016-12-28 RU RU2016152365A patent/RU2646804C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2126235C1 (ru) * | 1995-06-15 | 1999-02-20 | Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" | Способ лечения повреждений и заболеваний роговицы глаза |
US20050208114A1 (en) * | 1998-03-24 | 2005-09-22 | Petito George D | Composition and method for healing tissues |
EP2207598A1 (en) * | 2007-11-16 | 2010-07-21 | Alcon Research, Ltd. | Methods and compositions for treating dry eye |
WO2011021706A1 (ja) * | 2009-08-19 | 2011-02-24 | 国立大学法人東北大学 | 角膜移植用シート |
WO2013063390A1 (en) * | 2011-10-28 | 2013-05-02 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | A suturable hybrid superporous hydrogel keratoprosthesis for cornea |
EP3053458A1 (en) * | 2015-01-28 | 2016-08-10 | Paninkret Chemisch-Pharmazeutisches Werk GmbH | Spray-Dried Composition Comprising an Acerola Fruit Extract and Hydrolyzed Collagen |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2700589C1 (ru) * | 2019-07-05 | 2019-09-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр реабилитации и курортологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ РК" Минздрава России) | Способ ускорения заживления роговицы при ее механических травмах |
RU2703302C1 (ru) * | 2019-07-05 | 2019-10-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр реабилитации и курортологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ РК" Минздрава России) | Применение раствора оксиэтиламмония метилфеноксиацетата |
RU2766298C2 (ru) * | 2021-11-29 | 2022-03-14 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Способ лечения ожогов роговицы |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gao et al. | Recombinant human hair keratin nanoparticles accelerate dermal wound healing | |
Chirila et al. | Evaluation of silk sericin as a biomaterial: in vitro growth of human corneal limbal epithelial cells on Bombyx mori sericin membranes | |
JP6829898B2 (ja) | 注入可能なマクロ多孔質ハイドロゲル | |
JP2834155B2 (ja) | コラーゲンフレーク体 | |
US4946450A (en) | Glucan/collagen therapeutic eye shields | |
RU2584348C2 (ru) | Композиционная коллагеновая губка и способ ее изготовления | |
AU2017267370B2 (en) | A method to enhance wound healing using silk-derived protein | |
CA2786400C (en) | Biomaterials made from human hair | |
EP2508196A1 (en) | Use of PEDF-derived polypeptides for promoting stem cells proliferation and wound healing | |
KR20190112868A (ko) | 천연(텔로펩티드) 태반 콜라겐 조성물 | |
RU2646804C1 (ru) | Офтальмологическое средство для регенерации роговицы глаза | |
JP7062667B2 (ja) | コラーゲンヒドロゲルの製造方法 | |
Zhou et al. | Hydrogels derived from acellular porcine corneal stroma enhance corneal wound healing | |
KR102232371B1 (ko) | 피부 이상 치료용 바이오물질 장치 및 국소 조성물 | |
US20210244659A1 (en) | Compositions and methods for in situ-forming tissue constructs | |
Mensah et al. | The chicken eggshell membrane: A versatile, sustainable, biological material for translational biomedical applications | |
CN117024575B (zh) | 一种酰化胶原蛋白、酰化胶原蛋白制剂及其应用 | |
RU2715715C1 (ru) | Стерильный прозрачный концентрированный раствор биосовместимого коллагена, способ его получения и применения | |
CN110339345B (zh) | 一种重组人截短型角质细胞生长因子-1滴眼液及其制备方法和应用 | |
RU2669933C2 (ru) | Пептидный препарат из коллагена для регенерации тканей кожи, способ его получения и применения | |
WO2020254807A1 (en) | Methacrylated collagen | |
KR20210025460A (ko) | 동물지방 유래 세포외기질 및 동물지방 유래 세포외기질 보존액 | |
CN105087482A (zh) | 一种细胞培养基质及其应用与使用方法 | |
Jorge E et al. | In vivo Biocompatibility of Chitosan and Collagen–Vitrigel Membranes for Corneal Scaffolding: a Comparative Analysis | |
Herculano et al. | Recent advances and perspectives on natural latex serum and its fractions for biomedical applications |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191229 |