CN104606666B - 重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。所述滴眼液的组分及其用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子1500~2500IU、人血白蛋白0.04~0.12mg、聚乙烯醇2.0~6.0mg、氯化钠4.0~6.0mg、磷酸氢二钠0.20~0.30mg、磷酸二氢钠0.40~0.50mg和注射用水加至0.4ml，本发明减少了滴眼液中辅料的使用量，同时保证了滴眼液的稳定性，延长滴眼液的保质期，扩大其应用范围，本发明不添加抑菌剂，避免了抑菌剂引起的潜在危险和对眼睛的毒副作用，减少了滴眼液对眼部的刺激性，滴眼液的使用更安全，患者依从性更高。

Description

重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液

技术领域

本发明涉及生物制品领域。特别是涉及一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。

背景技术

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)属于FGF家族(23个已知成员)，是一种肝素结合生长因子，能够促进包括间叶细胞、神经外胚层和血管内皮细胞在内的一系列细胞的增殖。碱性成纤维细胞生长因子在体内还具有潜在的促血管生成活性。bFGF主要分布于中胚层和神经胚层来源的组织器官，对许多组织细胞有作用，可促进细胞分裂，调节细胞代谢，影响细胞的形态、浸润、分化和衰老，对角膜的上皮细胞基质细胞核内皮细胞均可产生影响，对碱烧伤角膜上皮的再生、角膜基质层和内皮层的修复均有促进作用。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子（Recombinantbovinebasicfibroblastgrowthfactor，简写为rb-bFGF）是由含有高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后得到的活性因子。rb-bFGF可治疗各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变、复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼症、大泡性角膜炎、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状（或营养性）单疱性角膜溃疡等。

中国专利申请2011103424399公开了一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其包含重组牛碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂、增稠剂、渗透压调节剂和磷酸缓冲液，滴眼液的pH为7.0。该滴眼液虽然没有添加抑菌剂，但滴眼液的稳定性有待进一步提高。

因此，仍然有需要开发一种新的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其辅料配伍合理、用量少，并且不含防腐剂，刺激性小且稳定性好。

发明内容

本发明的目的是提供一种刺激性小且稳定性好的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法。

本发明的目的通过以下的实施方式来实现：

一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1500~2500IU；

人血白蛋白0.04~0.12mg；

聚乙烯醇2.0~6.0mg；

氯化钠4.0~6.0mg；

磷酸氢二钠0.20~0.30mg；

磷酸二氢钠0.40~0.50mg；

注射用水加至0.4ml。

作为本发明优选的实施方式，所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

人血白蛋白0.08mg；

聚乙烯醇4.0mg；

氯化钠3.2mg；

磷酸氢二钠0.22mg；

磷酸二氢钠0.48mg；

注射用水加至0.4ml。

本发明还提供了所述滴眼液的制备工艺，包括以下步骤：

（1）将聚乙烯醇分散于适量90℃注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却至室温，备用；

（2）将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌条件下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容，用0.22μm滤膜过滤；收集滤液；

（4）滤液按照规格分装。

本发明通过试验例1考察了本发明rb-bFGF滴眼液的刺激性试验，结果表明本发明rb-bFGF滴眼液无刺激性，对眼睛使用部位无刺激性。

本发明还通过试验例2考察了本发明rb-bFGF滴眼液的稳定性，结果表明本发明rb-bFGF滴眼液与现有技术相比，其稳定性有进一步的提高，可低温或常温下长期保存，使得本发明rb-bFGF滴眼液的保质期延长，扩大其应用范围。

本发明通过试验例3考察了本发明rb-bFGF滴眼液对眼角膜炎临床志愿者的治疗效果，结果显示，用本发明滴眼液治疗100例，其中痊愈90例，显效8例，无效2例，有效率98.0%。

因此，本发明与现有技术相比，具有以下的优点和效果：

通过对重组牛碱性成纤维细胞生长因子选择特定的辅料及用量，减少了滴眼液中辅料的使用量，同时保证了滴眼液的稳定性，延长滴眼液的保质期，扩大其应用范围；同时本发明不添加抑菌剂，避免了抑菌剂引起的潜在危险和对眼睛的毒副作用，减少了滴眼液对眼部的刺激性，滴眼液的使用更安全，患者依从性更高。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明所述的滴眼液进行适当改进、替换功效相同的组分，对于本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的范围之内。

实施例1、rb-bFGF滴眼液及其制备

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680000IU；

人血白蛋白0.08g；

聚乙烯醇4.0g；

氯化钠3.2g；

磷酸氢二钠0.22g；

磷酸二氢钠0.48g；

注射用水加至400ml；

共制1000支

具体制备方法为：

（1）将聚乙烯醇分散于适量90℃注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却至室温，备用；

（2）将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌条件下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容，用0.22μm滤膜过滤；收集滤液；

（4）滤液按照规格分装。

实施例2、rb-bFGF滴眼液及其制备

重组牛碱性成纤维细胞生长因子2500000IU；

人血白蛋白0.12g；

聚乙烯醇2.0g；

氯化钠4.0g；

磷酸氢二钠0.20g；

磷酸二氢钠0.40g；

注射用水加至400ml；

共制1000支

具体制备方法为：

（1）将聚乙烯醇分散于适量90℃注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却至室温，备用；

（2）将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌条件下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容，用0.22μm滤膜过滤；收集滤液；

（4）滤液按照规格分装。

实施例3、rb-bFGF滴眼液及其制备

重组牛碱性成纤维细胞生长因子2000000IU；

人血白蛋白0.10g；

聚乙烯醇6.0g；

氯化钠6.0g；

磷酸氢二钠0.30g；

磷酸二氢钠0.50g；

注射用水加至400ml；

共制1000支

具体制备方法为：

（1）将聚乙烯醇分散于适量90℃注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却至室温，备用；

（2）将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌条件下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容，用0.22μm滤膜过滤；收集滤液；

（4）滤液按照规格分装。

对比例一、选自中国专利CN102357243B说明书中实施例1制得的rb-bFGF滴眼液。

试验例1、刺激性试验

取本发明实施例1所制备的滴眼液及空白辅料，观察动物眼睛接触试验样品后对结膜、角膜和虹膜的刺激反应情况。

给药分组：取眼部检查无损伤的健康家兔9只(角膜无浑浊，结膜无充血、水肿及分泌物，瞳孔圆形，两侧等大，对光反射良好)，按体重随机分为3组，3只/组，第1组左右眼均给生理盐水，第2组左眼给生理盐水作自身对照，右眼给空白辅料滴眼液。第3组左眼也给生理盐水作自身对照，右眼都分别给实施例1所制备的滴眼液。

给药方法：分别将药液滴于家兔眼结膜囊内，压迫鼻泪管，并使眼睛被动闭合约5～10秒。4次/天，每次1～2滴(约50ul)，连续滴眼14天，于每次给药前以及最后一次给药后1、2、4、24、48和72小时，直接肉眼观察或用放大镜观察角膜、虹膜、结膜是否有刺激性，并对刺激性进行评分，适时用2％荧光素钠染色，观察各部位是否有着色，结果按表1进行刺激反应评分，将每一个观察时间每一家兔的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后平均分值，并与左眼进行比较。然后，按表2评价标准判断样品对眼刺激性。当角膜、虹膜、结膜的刺激强度不一致时，应分别做出评价。所有的观察结束后处死家兔，剪取双眼及上下眼睑，肉眼观察有无红肿等异常变化，然后在10％甲醛液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，进行组织病理学检查。刺激性结果：参见表3。

表1眼刺激反应分值标准

表2眼刺激性评价标准

表3rb-bFGF滴眼液刺激性试验结果

通过动物眼部刺激性试验结果可知，实施例1所制备的滴眼药与空白辅料和生理盐水均无刺激。

试验例2、稳定性研究

1、低温长期试验：

将实施例1和对比例一的滴眼液灌装于无色塑料瓶中，分别标记为样品1和样品2，密封置于4℃下进行实验，分别于6、9、12、18个月检测滴眼液的含量、pH、外观、无菌和离心试验（300r/min）。结果如下表4：

表4、低温长期试验结果

结果表明，本发明滴眼液在低温长期试验中质量稳定，可存放长达18个月，而样品2在存放18个月后出现微量沉淀，说明本发明滴眼液与现有技术相比，其稳定性有进一步的提高。

2、室温长期试验：

将实施例1和对比例一的滴眼液灌装于无色塑料瓶中，分别标记为样品1和样品2，密封置于室温25℃下进行实验，分别于3、6、9、12个月检测滴眼液的含量、pH、外观、无菌和离心试验（300r/min）。结果如下表5：

表5、室温长期试验结果

结果表明，本发明滴眼液在室温长期试验中质量稳定，可存放长达12个月，而样品2在存放12个月后出现少量沉淀，且pH值降低，呈弱酸性，对眼睛的刺激性增大，说明本发明滴眼液与现有技术相比，其稳定性有进一步的提高。

试验例3、本发明rb-bFGF滴眼液治疗眼角膜炎临床志愿者实验研究

选取珠海市眼角膜炎临床志愿者100例，其中男60例，女40例：年龄25～56岁，平均42岁；视力低于0.1者12例，0.1～0.4者20例，0.4～0.7者38例，0.7以上者12例。

2、治疗方法采用本发明rb-bFGF滴眼液，每天点眼四次，1周为一个疗程。

3、疗效标准：痊愈：眼部充血消退，角膜水肿消退，溃疡愈合，荧光素染色阴性；显效：眼部充血及角膜水肿基本消退，荧光素染色仅少量点状着色；无效：治疗后症状未见改善。

4、治疗结果：用本发明rb-bFGF滴眼液，在治疗各种角膜炎中取得了最佳疗效。用本发明滴眼液治疗100例，其中痊愈90例，显效8例，无效2例，有效率98.0%。经长期临床观察，无毒、无副作用，并不产生耐药性。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其特征在于，所述滴眼液的组分及其用量为：

重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

人血白蛋白0.08mg；

聚乙烯醇4.0mg；

氯化钠3.2mg；

磷酸氢二钠0.22mg；

磷酸二氢钠0.48mg；

注射用水加至0.4ml。

2.根据权利要求1所述的重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液，其特征在于，所述滴眼液的制备工艺为：

（1）将聚乙烯醇分散于适量90℃注射用水中，在121℃热压灭菌，冷却至室温，备用；

（2）将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶于适量注射用水中，用0.22μm滤膜无菌过滤；

（3）在无菌条件下将步骤（1）所得的溶液和步骤（2）所得的溶液混合均匀，用无菌注射用水定容，用0.22μm滤膜过滤；收集滤液；

（4）滤液按照规格分装。