CN102338789A - 一种食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法 - Google Patents

一种食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法。本发明公开了一种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2快速仪器分析方法，包括下列步骤：称取一定量样品，加入一定比例乙腈-水溶液，超声提取，用超高效液相色谱-质谱联用仪在梯度洗脱的条件下选择特定母离子与子离子对四种黄曲霉毒素的含量进行测定。本发明所述方法的简单且效率高，测定结果的精密度好。所述黄曲霉毒素四种单体分离完全，回收率高，与现有技术相比，该方法具有检测速度快且准确，前处理简单的优点，能够准确的定性定量，满足研究和检测的需要。

Description

一种食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法
技术领域
本发明涉及一黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2快速仪器分析方法，特别是涉及食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法。 
背景技术
黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFT)是由黄曲霉和寄生曲霉真菌代谢产生的一类有毒的真菌毒素，广泛存在于各种食品、饲料中，甚至酒类和调味品等一些常见的食品中也能发现有黄曲霉毒素。目前检测黄曲霉毒素的国标主要是GB/T 5009.23-2006。但该方法前处理需衍生，比较繁琐，容易在处理过程中产生较大的损失，且检测周期较长，经常无法满足客户快速准确的检测要求，但是目前还没有制定食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法。因此建立一种快速、准确、方便和经济的检测方法，有利于监控食品、饲料、酒类和调味品黄曲霉毒含量，从而保障食品安全。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服传统检测方法处理繁琐，定性不准的缺点，提供一种步骤简单、能同时检测多种黄曲霉毒素的方法，能满足检测多种黄曲霉毒素的需求。 
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案： 
本发明提出的一种食品中黄曲霉毒素快速仪器分析方法包括如下步骤： 
①将样品于有机与水混合溶剂中提取，离心，过滤获得上清液； 
②利用超高效液相色谱-质谱联用仪检测，使用waters BEH C18，2.1×50mm，1.7μm色谱柱；柱温：40℃，流动相：0.1％甲酸水溶液(A)， 0.1％甲酸乙腈溶液(B)；流速：0.4ml/min；进样量：10μL；质谱条件：离子源：ESI+；脱溶剂气流速：800ml/h；脱溶剂温度：450℃；毛细管电压：0.5KV 
③将经过前处理的样品由注入所述色谱柱中，流动相进行梯度洗脱，洗脱程序如下： 
流动相梯度洗脱程序： 
  Time(min)   ％A   ％B
  0   90   10
  0.50   90   10
  3.00   20   80
  3.10   10   90
  4.00   10   90
  4.10   90   10
④所述被色谱柱分离的样品进入质谱检测器进行检测，离子选择如下。 
Figure DEST_PATH_GSB00000613593300021
本发明的技术成果在于： 
①前处理方法简单，使样品在前处理过程中损失较少，定量结果准确，回收率高； 
②采用超高效液相色谱-质谱联用仪UPLC-MS/MS技术进行检测，分析方法准确、快速、安全； 
③通过选择合适的色谱柱，设定合适的色谱柱的洗脱程序、监测离子、锥孔电压和碰撞电压，对样品中各组分进行最优化的分离和检测。 
【附图说明】
图1是本发明实施例1所检测的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的选择离子流图； 
该色谱图中的纵坐标代表峰的强度，横坐标代表峰的保留时间，单位为分钟。 
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。 
发明涉及一种黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，包括以下步骤： 
①利用超声萃取法对样品进行前处理，使用溶剂为腈类、腈/水类、醇类试剂，如乙腈、甲醇、乙腈/水。对该样品进行超声萃取的最佳时间为20～40min。 
②超高效液相色谱-质谱联用仪使用waters BEH C18，2.1×50mm，1.7μm色谱柱；柱温：40℃，流动相：0.1％甲酸水溶液(A)，0.1％甲酸乙腈溶液(B)；流速：0.4ml/min；进样量：10μL；质谱条件：离子源：ESI+；脱溶剂气流速：800ml/h；脱溶剂温度：450℃；毛细管电压：0.5KV。 
③将经过前处理的样品注入所述色谱柱中，流动相进行梯度洗脱，洗脱程序如下： 
流动相梯度洗脱程序： 
  Time(min)   ％A   ％B
  0   90   10
  0.50   90   10
  3.00   20   80
  3.10   10   90
  4.00   10   90
  4.10   90   10
④所述被色谱柱分离的样品进入质谱检测器进行检测，离子选择如下。 
Figure DEST_PATH_GSB00000613593300031
实施例1 
以0.1％甲酸乙腈-水(10∶90，V/V)为溶剂，配制黄曲霉毒素混合溶 液浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL的系列标准溶液，在上述色谱条件下进样测定峰面积，以外标法定量。标准溶液提取离子色谱图如图1，以峰面积y为纵坐标，浓度x为横坐标进行线性回归，结果如表1。 
表1四种黄曲霉毒素的保留时间，监测离子，线性方程及相关系数 
Figure DEST_PATH_GSB00000613593300041
按照样品质量5g，定容体积20mL计算，样品中的黄曲霉B1、G1的检出限均为0.2μg/kg，黄曲霉B2、G2的检出限均为0.04μg/kg。 
实施例2 
准确称取粉碎后面粉样品5g(精确至0.01g)，按照上述实验方法进行提取与测定，选择面粉样品，进行三个平行测定，实验编号分别为A-1、A-2、A-3，分析结果见表2。对第一个平行样(实验编号A-1)平行测定5次，分析结果见表3。由表2可知，平行样中黄曲霉B1、B2、G1、G2四种目标物相对标准偏差为1.1～4.1％。由表3可知，重复性测试的相对标准平均偏差在3.9％～6.4％之间。 
表2面粉样品中四种待测目标物的测试结果 
Figure DEST_PATH_GSB00000613593300042
表3面粉样品测试重复性 
实施例3 
将实施例1中的标准溶液加入到实施例2中的面粉样品中，按照上述样品前处理方法和仪器分析检测方法进行实验。对该样品作两个浓度加标测试，每个加标含量的样品作3次平行测量取平均值，根据实际加入量和实测结果，计算该样品的加标回收率。结果见表4。由表4可知，样品的加标回收率在83.3～91.6％。 
表3面粉样品的加标回收率 
Figure DEST_PATH_GSB00000613593300052
上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明专利的限制；应当指出的是，对于本领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，这些都属于本发明的保护范围。因此，凡跟本发明权利要求范围所做的均等变化与修饰，均应属于本发明权利要求的覆盖范围。 

Claims (5)

1.一种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，包括下列步骤：
a)样品前处理：称取5g样品置于20mL乙腈/水溶液中，超声提取，提取时间为30min，离心过滤，滤液待超高效液相色谱-质谱联用仪分析；
b)用超高效液相色谱-质谱联用仪采用梯度洗脱方式检测黄曲霉B1、B2、G1、G2四种目标物。对0.1％甲酸水溶液比例设定为90％～10％，0.1％甲酸乙腈溶液比例设定为10％～90％。
c)选择特定离子对四种目标物进行定量和定性。具体离子选择为：母离子：黄曲霉B1313.25、黄曲霉B2315.24、黄曲霉G1329.22、黄曲霉G2331.23；子离子：黄曲霉B1241.1与285.1、黄曲霉B2259.1与287.1、黄曲霉G1243.1与283.1、黄曲霉G2217.1与245.1；锥孔电压为40～45V；碰撞电压为22～38V。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述食品为固态食品。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述黄曲霉毒素为黄曲霉B1、B2、G1和G2。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述样品前处理步骤为：
称取5 g±0.01g的样品于离心管中，加入20mL乙腈-水溶液(84∶16，V/V)，漩涡振荡混合均匀，超声提取30min，取出后于离心机中5000r/min离心5min，取上清液过0.22μm有机滤膜，待超高效液相色谱-质谱联用仪分析。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述超高效液相色谱-质谱联用仪检测条件为：
色谱柱：waters BEH C18 2.1×50mm，1.7μm；柱温：40℃，流动相：0.1％甲酸水溶液(A)，0.1％甲酸乙腈溶液(B)，梯度洗脱；流速：0.4ml/min；进样量：10μL
流动相梯度洗脱程序表
 Time(min)     ％A     ％B  0     90     10  0.50     90     10  3.00     20     80  3.10     10     90
    4.00     10     90     4.10     90     10
质谱条件：
离子源：ESI+；脱溶剂气流速：800ml/h；脱溶剂温度：450℃；毛细管电压：0.5KV。 
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