CN102300590B - 双功能螯合剂与甘露糖基人血清白蛋白的复合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及与双功能螯合剂(BCA)结合的甘露糖基人血清白蛋白(MSA)及其放射性同位素标记的化合物，所述化合物用于免疫系统例如巨噬细胞、肝巨噬细胞、网状内皮系统(RES)和淋巴系统的显像。本发明包括BCA-MSA结合物、其放射性标记的化合物和用于放射性标记的药盒。本发明改良了放射性标记操作、表现出较高的淋巴系统吸收，并使得能够通过正电子发射断层摄影(PET)显像。

Description

双功能螯合剂与甘露糖基人血清白蛋白的复合物
技术领域
本发明涉及新的放射性药物，其用于免疫细胞或由免疫细胞构成的组织例如巨噬细胞、肝巨噬细胞(Kupffer cell)、网状内皮系统(RES)和淋巴系统的显像。
背景技术
在核医学中，淋巴系统的显像对于淋巴结的诊断是重要的。在乳腺癌和黑素瘤的情况下，如果能够通过将放射性胶体注入肿瘤来检测哨兵淋巴结(离肿瘤组织最近的淋巴结)，则在手术过程中能够避免过度切除。将被检测的哨兵淋巴结进行活组织检查以检测转移灶(metastases)，转移灶的存在会影响切除决定的作出。这对手术后的不良反应和美观是非常重要的。(G.Mariani，L.Moresco，G.Viale，G.Villa，M.Bagnasco，G.Canavese，J.Buscombe，H.W.Strauss，G.Paganelli.″Radioguided sentinel lymph nodebiopsy in breast cancer surgery.″J.Nucl.Med.2001；42：1198-1215；G.Mariani，M.Gipponi，L.Moresco，G.Villa，M.Bartolomei，G.Mazzarol，M.C.Bagnara，A.Romanini，F.Cafiero，G.Paganelli，H.W.Strauss.″Radioguided sentinellymph node biopsy in malignant cutaneous melanoma″J.Nucl.Med.2002；43：811-827)。
可以使用适当的放射性胶体使淋巴结显像，所述放射性胶体被注射到组织中，随后移动并捕集到淋巴结中。可以通过γ探针来检测放射性蓄积于其中的淋巴结。用于显像和检测淋巴结的大多数放射性药物是99mTc标记的胶体，例如锑硫胶体(antimony sulfur colloid)(10-20nm)、白蛋白纳米胶体(albumin nano colloid)(50nm)和硫胶体(100-200nm)。由于快速的淋巴结吸收，粒径较小的胶体是更理想的。由于锑硫胶体的粒径最小，因此其在目前使用的胶体中是最好的。然而，它的粒径还是过大，并且需要2小时的沸腾时间进行标记，因此它不适合应在清晨接受手术的患者。另外，在强酸介质中制备的锑硫胶体可能在中和后变得不稳定。
为了解决这些问题，人们已使用了粒径为6-8nm的99mTc-人血清白蛋白(HSA)。99mTc-HSA能够被快速标记，并表现出向淋巴结的快速移动。然而，其显示出低对比度的淋巴结影像，并且不仅在哨兵淋巴结中吸收，还在其他淋巴结中吸收，因为它不在淋巴结中蓄积而是绕过淋巴结。(W.T.Phillips，T.Andrews，H.-L.Liu，R.Klipper，A.J.Landry Jr，R.Blumhardt，B.Goins.″Evaluation of [99mTc]liposomes as lymphoscintigraphic agents：comparison with[99mTc]sulfur colloid and[99mTc]human serum albumin″Nucl.Med.Biol.2001；28：435-444)。
为了解决这个问题，开发了被称为二硫还原甘露糖化人血清白蛋白(disulfide reduced mannosylated human serum albumin)(MSA)的新型放射性药物，其能够与存在于免疫细胞上的甘露糖受体牢固结合、易于用99mTc标记、具有适当的分子大小以被吸收到淋巴毛细管中，并对人体没有不良反应。(Korean Patent 10-0557008，Disulfide reduced mannosylated serumalbumin for lymphoscintigraphy and radiolabeled compounds comprising it.Feb23rd 2006；Jeong JM，Hong MK，Kim YJ，Lee J，Kang JH，Lee DS，Chung JK，Lee MC.Development of 99mTc-neomannosyl human serum albumin(99mTc-MSA)as a novel receptor binding agent for sentinel lymph node imaging.Nucl Med Commun.2004 25(12)：1211-7)。已知MSA能够牢固结合甘露糖受体(P.Stahl.等人，Cell 1980；19：207-215)。因此在上述专利中，如果MSA被适当的用于显像的放射性核素(例如99mTc)标记，则假定能够将淋巴结显像。此外，由于MSA的6-8nm的小粒径，其会表现出较快的淋巴结吸收。然而，在不修饰的情况下，MSA本身并不能用99mTc标记。因此，通过用适当的还原剂(例如β-巯基乙醇和二硫苏糖醇)处理来制备二硫还原MSA。有报道在通过用还原剂处理以还原二硫键后，用99mTc标记二硫还原半乳糖基化或乳糖基化人血清白蛋白。(Korean Patent 0464917.New disulfidereduced galactosylated serum albumin thereof；a liver function imagingcomposition；and a radiolabeled compound comprising it.Dec 24th 2004)。然而，这些99mTc标记的药物不能通过正电子发射断层摄影(PET)显像。
最近，对用于免疫细胞显像的正电子标记的放射性药物的需求增加，原因是由于PET优于传统γ显像而得以广泛使用，此外，开发出了用于检测转移灶的正电子探针或β探针。一般而言，正电子发射体(例如18F、11C、13N和15O)是由回旋加速器产生的。在这些发射体中，由于18F较其他放射性核素而言有相对长的半衰期(110分钟)，因此仅18F可应用于淋巴结显像。然而，它的标记操作需要在高温下蒸发和加热，这些太过复杂并且导致蛋白质变性。此外，18F的产生还需要昂贵的回旋加速器系统。
发明内容
本发明的目的是开发双功能螯合剂(BCA)与MSA的结合物、其放射性标记的化合物以及用于放射性标记的药盒的制备。因此预期效果是便于用正电子发射体68Ga标记、标记的化合物具有更高稳定性，以及由于在淋巴结、肝和脾中高度蓄积而导致的优异的免疫系统(包括淋巴结)显像。
与68Ga形成稳定复合物的候选BCA是1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA)和1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)，两者之中更优选NOTA。
所选择的用于标记MSA与BCA结合物以检测和显像免疫细胞的放射性核素是68Ga。
本发明的另一目的是提供药盒，其能够容易地制备用于检测和显像免疫细胞的放射性药物制剂。具体而言，本发明的目的是提供药学相容的用于显像免疫细胞的药盒，其在无菌瓶中包含BCA-MSA和缓冲液，并且可以容易地用金属放射性核素标记。
本发明涉及：
(1)由下式1表示的双功能螯合剂(BCA)与甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的结合物：
(Man-L1)n-A-(L2-BCA)m
[式1]
其中，Man是甘露糖基；
L1和L2独立地是一个或多个连接基(linker)或直接结合(directionconjugation)；
A是人血清白蛋白；
BCA是选自1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA)或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)的双功能螯合剂；并且
m和n独立地是1至58的整数；
(2)第(1)项的结合物，其中L1和L2独立地是直接结合或一个或多个连接基，所述连接基包含一个或多个选自C1-C10烷基、C4-C10芳基、硫脲、三唑、单肽、二肽、三肽、C4-C10环烷基、苄基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、肼、酰肼、戊糖基和己糖基的残基；
(3)第(1)项的结合物，其中L1和L2独立地选自下式：
Figure BPA00001426252600041
其中，Man是甘露糖基；并且HSA是人血清白蛋白；
(4)第(1)项的结合物，其中甘露糖的C1碳与白蛋白或连接基结合；
(5)组合物，其包含上述第(1)项或第(2)项的双功能螯合剂(BCA)与甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的结合物，所述结合物用用于免疫系统显像的金属放射性同位素标记；
(6)第(5)项的组合物，其中免疫系统是淋巴系统或网状内皮系统；
(7)第(5)项的组合物，其中金属放射性同位素选自67Ga、68Ga、111In、99mTc、186Re、60Cu、61Cu、62Cu、64Cu、67Cu、212Pb、212Bi和109Pd；
(8)第(5)项的组合物，其中金属放射性同位素是68Ga；
(9)用于制备用金属放射性同位素标记的药物组合物的液体状态、冷冻状态或冻干状态的无菌且无热原的药盒，其包含10ng-100mg的第(1)项的结合物；
(10)第(9)项的药盒，其还包含0.01mL-10mL的1μM-10M的缓冲液(pH 1-9)；
(11)第(10)项的药盒，其中所述缓冲液是选自乙酸、磷酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、碳酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡糖二酸和硼酸的酸及其钠盐或钾盐的混合物。
在本发明中，与用于显像和检测免疫系统的传统放射性标记药物相比，BCA-MSA衍生物、其放射性标记的化合物以及其放射性标记药盒由于具有高淋巴系统累积而表现出更易于用金属正电子发射体(例如68Ga)标记、表现出更高的稳定性，并且表现出更好的淋巴系统显像的特性。
本发明涉及由下式1表示的BCA-MSA结合物：
(Man-L1)n-A-(L2-BCA)m
[式1]
其中，Man是甘露糖基；
L1和L2独立地是一个或多个连接基或直接结合；
A是人血清白蛋白；
BCA是选自1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA)或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)的双功能螯合剂；并且
m和n独立地是1至58的整数。
上述人血清白蛋白包含单一多肽蛋白，所述多肽蛋白的分子量为66,462，长轴为8nm，短轴为6nm，等电点是4.8，并包含约50％的血清蛋白。其含有59个氨基残基，所述氨基残基包括58个赖氨酸和一个N端。因此，与氨基结合的BCA和甘露糖最多可以是总共59个。
上述BCA-MSA溶液在冷冻状态更为稳定。然而，如果将它冷冻干燥，则它会在冷藏下稳定。该冷冻干燥产品可能在无氧条件或真空条件下更为稳定。
在本发明中，当BCA或甘露糖与人血清白蛋白结合时，它们可以是直接结合或通过连接基结合。连接基或人血清白蛋白可以与甘露糖的任意C1-C6位相结合。如果与C5结合，则可以打开甘露糖环。此外，在C1位包括α-结合或β-结合。虽然在实施例中仅给出β-C1-结合，但本发明包括所有上述结合。上述连接基L1和L2可以是一个或多个选自C1-C10烷基、C4-C10芳基、硫脲、三唑、单肽、二肽、三肽、C4-C10环烷基、苄基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、肼、酰肼、戊糖基和己糖基的残基。
优选的L1和L2如下式所示：
Figure BPA00001426252600061
其中，Man是甘露糖基；并且HSA是人血清白蛋白。
上述甘露糖基和包含一个或多个连接基的甘露糖基与血清白蛋白的氨基结合。例如，与甘露糖直接结合或通过一个或多个连接基结合的血清白蛋白如下式2和3所示。如果需要，所述甘露糖基人血清白蛋白可以包含1-58个甘露糖或含有一个或多个连接基的甘露糖。
Figure BPA00001426252600062
式2显示直接结合的甘露糖和人血清白蛋白，并且式3显示通过作为连接基的苯基结合的甘露糖和人血清白蛋白。式2或式3中的上述MSA与BCA(例如NOTA或DOTA)结合。
本发明包括式1的BCA-MSA结合物的制备方法。具体而言，其包括将甘露糖与人血清白蛋白直接结合或通过连接基结合以制备MSA的步骤(步骤1)，以及将BCA(例如NOTA或DOTA)与MSA直接结合或通过连接基结合的步骤(步骤2)，其中步骤1和2的顺序可以颠倒。
步骤1包括：化学修饰甘露糖或其连接基以得到诸如硫氰酸基(thiocyanate)、酯、醛或亚氨基甲氧基烷基(iminomethoxyalkyl)的官能团以使它们能够与人血清白蛋白结合，以及与人血清白蛋白结合。具体而言，路线1显示了使用2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫-β-D-甘露糖(IME-硫代甘露糖)制备式2中的MSA的方法。
将D-甘露糖乙酰化、溴化、与硫脲结合，并与氯乙腈反应来产生氰甲基2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-硫-β-D-吡喃甘露糖苷。使该产物与甲醇钠在甲醇溶液中反应以产生IME-硫代甘露糖。通过使人血清白蛋白与IME-硫代甘露糖在pH 8-9下反应以形成硫代氨甲酰基键来合成MSA(路线1)。根据路线2合成由式3表示的苯基甘露糖基人血清。
Figure BPA00001426252600072
如在上述路线2中所示，在苯基甘露糖的苯基端的异硫氰酸基与人血清白蛋白的氨基结合以产生式3的苯基甘露糖基人血清白蛋白。
步骤2包括MSA与BCA(例如NOTA或DOTA)结合。为此，NOTA或DOTA的羧基与MSA的氨基通过形成酰胺键而结合(路线3)，或者含有异硫氰酰基苄基的NOTA或DOTA衍生物与MSA的氨基通过形成硫脲而结合(路线4)，等等。
Figure BPA00001426252600081
本发明包括放射性标记的式1的BCA-MSA。
上述放射性同位素包括67Ga、68Ga、111In、99mTc、188Re、186Re、60Cu、61Cu、62Cu、67Cu、64Cu、212Pb、212Bi和109Pd，更优选包括68Ga和111In，最优选的是68Ga。
68Ga是从发生器制备的正电子发射体，并且可以通过BCA以高产率标记蛋白质。此外，由于68分钟的半衰期，它对于在手术过程中通过正电子探针来显像和检测淋巴结是理想的。
上述标记的化合物是通过向式1的BCA-MSA中加入放射性同位素来制备的。为了在制备后立即进行直接人体注射，该制备是在无菌且无热原的条件下进行的。
上述制备的化合物可以通过皮下注射向人体给药、在淋巴系统内累积、可以通过PET扫描仪显像，并且可以通过γ探针或β探针检测来确认淋巴结转移灶。如果上述药物是通过静脉注射给药，则它会显示肝巨噬细胞或骨髓巨噬细胞的影像。
此外，本发明包括药学相容的无热原且无菌的药盒，其包含10ng-100mg的由式1表示的BCA-MSA，所述药盒用于通过用金属放射性同位素标记来制备放射性药物。每个药盒还可以包含0.01-10mL的缓冲液(pH 1-9，1μM-10M)。该药盒可以作为溶液、冷冻溶液或冻干粉进行存储。
用于上述药盒的缓冲液是选自乙酸、磷酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、碳酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡糖二酸和硼酸的酸及其钠盐或钾盐的混合物。
上述药盒可以包含另外的抗氧化剂(例如抗坏血酸和龙胆酸)，用于防止在放射性标记后的辐射分解。抗氧化剂的推荐量是每剂量0-500mg。
上述药盒可以在惰性气体的存在下冷冻或冷冻干燥。上述药盒可以包含小瓶，所述小瓶含有用于放射性药物的常规制备的无菌缓冲液、生理盐水、注射器、过滤器、柱等。本领域普通技术人员公知，可以根据患者的个人需求或饮食需要或者提供的放射性同位素对这样的药盒进行修改和改变。
以每药盒(每BCA-MSA 1mg)0.1-500mCi向上述药盒中加入放射性核素，并保温0.1-30分钟来制备放射性药物。例如，在向用于免疫细胞显像和检测的药盒中加入发生器洗脱的68GaCl3，并在37℃下持续培养1-30分钟之后，可以以98-100％的效率成功制得68Ga-NOTA-MSA。
本发明的实施例证实了以＞95％的效率获得了68Ga-BCA-MSA，其在37℃的血清中2小时内是稳定的，并在注射到小鼠足垫后表现出向腹股沟淋巴结更快的移动。
附图简述
图1.本发明的BCA-MSA的示意图。甘露糖和BCA与人血清白蛋白直接结合或间接结合。
Man：甘露糖基，L1和L2：直接结合或连接基。
图2.通过TLC分析的实施例4的68Ga-NOTA-MSA。
图3.在不同pH下用68Ga标记的实施例2的NOTA-MSA。以标记效率对时间变化作图。
图4.在37℃下研究的实施例4的68Ga-NOTA-MSA在人血清中的稳定性。
图5.在向大鼠右足垫注射比较例(99mTc-HSA、99mTc-ASC和99mTc-MSA)后获得的γ照相机影像。在注射后1小时移动到淋巴结的放射性。
图6.实施例4的68Ga-NOTA-MSA的PET影像，显示在向小鼠右足垫注射后1小时向淋巴结移动的放射性强度。
图7.在通过小鼠尾静脉静脉注射实施例4的68Ga-NOTA-MSA后获得的PET影像。
实施例
以下实施例用于说明本发明。然而应当理解，本发明并不限于这些实施例中所描述的特定条件或细节。
实施例1.苄基NOTA-硫代甘露糖基人血清白蛋白的制备
步骤1.甘露糖基人血清白蛋白的制备(路线1)
在搅拌下将100g的D-甘露糖在30分钟内缓慢加入到400mL乙酸酐和3mL高氯酸的混合物中。将30g的红磷加入到该反应混合物中，并用冰冷却容器。缓慢加入180g的溴，同时保持混合物的温度低于20℃，并在30分钟内缓慢加入36mL的蒸馏水以防止温度升高。加盖，然后进行反应2小时，向该混合物中加入300mL的氯仿，并转移到含有800mL冰水的分液漏斗中。收集氯仿层，通过过滤除去磷，并将滤液用冰水洗涤两次。用碳酸氢钠溶液洗涤氯仿层以除去残留的酸，用氯化钙脱水，减压蒸发，溶解在乙醚中，重结晶，获得熔点为87℃的晶体。将9.74g(20mmol)的2-S-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃甘露糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐(2-S-(2，3，4，6-tetra-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-2-thiopseudourea HBr)溶解在40mL的水和丙酮(1∶1)混合物中，并加入5mL(79mmol)的氯乙腈至完全溶解。在室温下加入3.2g(23.2mmol)的碳酸钾和4.0g(40.4mmol)的亚硫酸氢钠并搅拌30分钟。将反应混合物加入到160mL冰水中并搅拌2小时。通过过滤收集沉淀，并用冷水洗涤。将风干的沉淀溶解于沸腾的甲醇中，并通过过滤去除杂质。在冰箱中储存后从滤液中获得晶体(产率：72％，熔点：95-97℃)。将40mg的回收晶体在40℃下溶解于1.5mL的无水甲醇中，在搅拌下加入0.8mg的甲醇钠，并在室温下反应48小时以产生IME-硫代甘露糖(22mg，产率55％)。在剧烈搅拌下将22mg的IME-硫代甘露糖加入到在1mL 0.2M硼酸盐缓冲液(pH＝8.5)中的100mg人血清白蛋白中。使混合物在37℃下反应1.5小时以产生MSA，并在-70℃下储存直至使用。
步骤2.苄基-NOTA-硫代甘露糖基人血清白蛋白的制备
将10mg的p-SCN-Bz-NOTA加入到1mL由上述步骤1的反应制备的MSA(13.6mg/mL)中，并反应1小时。使用Sephadex G-25柱色谱从该反应混合物中纯化苄基-NOTA-硫代甘露糖基人血清白蛋白。
实施例2.苄基-NOTA-苯基甘露糖基人血清白蛋白
步骤1.苯基甘露糖基人血清白蛋白的制备(路线3)
将20mL人血清白蛋白溶解于5mL的0.1M碳酸盐缓冲液(pH 9.5)中，然后加入5.5mg的α-L-吡喃甘露糖基苯基异硫氰酸盐，并在室温下在搅拌下反应20小时。将所得的苯基甘露糖基人血清白蛋白反应混合物在-70℃下储存直至使用。
步骤2.苄基-NOTA-苯基甘露糖基人血清白蛋白的制备
将10mg的p-SCN-Bz-NOTA加入到1mL由步骤1制备的苯基甘露糖基人血清白蛋白中，并在室温下反应1小时。使用Sephadex G-25柱色谱从该反应混合物中纯化所得的苄基-NOTA-苯基甘露糖基人血清白蛋白。
实施例3.用于免疫细胞显像的药盒的制备
将1mL的苄基-NOTA-苯基甘露糖基人血清白蛋白(13.6mg/mL)和0.3mL的0.5M乙酸钠缓冲液(pH 5.5)混合，并将该混合物分配到小瓶中，每个小瓶含有1mg蛋白。将小瓶在-70℃下冷冻并冻干。
实施例4.使用用于免疫细胞显像的药盒制备68Ga标记的药物
将1mL的在0.1M HCl中的68Ge/68Ga-发生器(Cyclotron Co.，Russia)洗脱的68GaCl3加入到上述实施例3制备的药盒中。将小瓶在37℃下培养，并在10分钟、30分钟、1小时和2小时时用TLC(固定相：TLC-SG(GelmanCo.，USA)，流动相：0.1M柠檬酸)检测标记效率。通过TLC扫描仪(BioscanCo.，USA)检测TLC板上的放射性分布。标记的68Ga保留在原点，并且未标记的68Ga移动到溶剂前沿(图2)。在37℃和pH 4～％下培养30分钟后反应完全。
比较例1.99mTc-锑硫胶体(ASC)
将1mL的99mTcO4-加入到ASC药盒(KAERI，Korea)中，并在50℃下反应30分钟。
比较例2.99mTc-锡胶体
将1mL的99mTcO4-加入到锡胶体药盒(KAERI，Korea)中，并在室温下反应10分钟。
比较例3.99mTc-人血清白蛋白(HSA)
将1mL的99mTcO4-加入到HSA药盒(Daiichi Co.，Japan)中，并在室温下反应10分钟。
比较例4.99mTc-甘露糖基人血清白蛋白(MSA)
将1mL的99mTcO4-加入到根据韩国专利10-055708制备的MSA药盒中，并在室温下反应10分钟。
实验例1.标记药物的稳定性测试
将10μL根据实施例4制备的68Ga-NOTA-MSA与100μL人血清混合，并在37℃下培养。使用如实施例4所述的ITLC检测放射化学纯度。结果显示在图4中。
在37℃下，68Ga-NOTA-MSA在人血清中表现出高于99％的稳定性(图4)。这种稳定性足以用于核医学实践，因为大多数标记药物应当在制备后1小时内向患者注射。
实验例2.使用γ照相机和PET显像对淋巴结吸收的确认
使用γ照相机(Sigma 410，Ohio-Nuclear，USA)显像大鼠(体重200g，雄性，Sprague-Dawley)中99mTc标记药物的淋巴结吸收。将500μCi/10μL的按照比较例1、3和4制备的各99mTc标记药物注射到大鼠足垫中。在1小时后使用γ照相机得到影像。将如实施例4制备的68Ga-NOTA-MSA(500μCi/10μL)注射到小鼠(体重20g，雄性，ICR)足垫中，并在1小时后使用动物PET扫描仪(GE Healthcare，Princeton，USA)得到影像。结果显示在图5和图6中。
按照常规技术，使用比较例1、3和4的99mTc标记药物仅能够得到γ照相机影像。然而，根据本发明实施例4制备的68Ga-NOTA-MSA使得能够得到更高级的PET影像(图6)。
实验例3.在小鼠中静脉注射后在免疫细胞中分布的确认
将如实施例4制备的68Ga-NOTA-MSA(1μCi)通过尾静脉注射到小鼠(体重20g，雄性，ICR)中。在注射后10分钟、30分钟、1小时和2小时时处死小鼠并取得器官。使用天平和γ闪烁计数器(Cobra III，Packard，USA)测量每个器官的重量和放射性。从获得的数值中导出作为单位组织重量的注射剂量百分比(％ID/g)的生物分布数据。结果显示在表2中。
表2.尾静脉注射后68Ga-NOTA-MSA在小鼠中的生物分布
  10分钟   30分钟   1小时   2小时
  血液   0.38±0.19   0.13±0.01   0.15±0.02   0.1±0.06
  肌肉   0.41±0.05   0.32±0.05   0.32±0.1   0.28±0.08
  心脏   1.39±0.17   1.13±0.28   1.34±0.23   0.89±0.23
  肺   2.52±0.17   2.86±0.42   3.21±0.37   2.04±0.38
  肝   61.1±3.65   58.6±2.55   60.87±4.75   59.51±5.43
  脾   19.94±2.62   18.57±2.04   20.88±2.54   16.82±0.97
  胃   0.2±0.04   0.25±0.11   0.24±0.03   0.26±0.12
  肠   0.26±0.04   0.28±0.04   0.36±0.02   0.54±0.14
  肾   3.6±0.24   3.25±0.39   3.98±0.17   3.74±0.26
  骨   4.43±1.22   4.19±0.45   4.21±0.61   4.33±0.61
在所有的时间点都是肝吸收最高(58.6-61.1％ID/g)，脾吸收(16.8-20.1％ID/g)第二。骨吸收(4.2-4.4％ID/g)第三。我们推定68Ga-NOTA-MSA被含有网状内皮系统的组织吸收，所述网状内皮系统含有免疫细胞。
实验例4.在向小鼠静脉注射后的PET显像
将各2mCi的如实施例4制备的68Ga-NOTA-MSA通过尾静脉注射到每只小鼠中。在注射后1小时和2小时时获取PET影像。肝是表现出最高吸收的主要器官，而脾看起来较弱(图7)。上述结果表明本发明的68Ga-NOTA-MSA被网状内皮系统吸收，并且可以应用于免疫细胞显像。

Claims (11)

1.由下式1表示的双功能螯合剂(BCA)与甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的结合物：
(Man-L1)n-A-(L2-BCA)m
[式1]
其中，Man是甘露糖基；
L1和L2独立地是一个或多个连接基或直接结合；
A是人血清白蛋白；
BCA是双功能螯合剂1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)；并且
m和n独立地是1至58的整数。
2.权利要求1的结合物，其中L1和L2独立地是直接结合或一个或多个连接基，所述连接基包含一个或多个选自C1-C10烷基、C4-C10芳基、硫脲、三唑、单肽、二肽、三肽、C4-C10环烷基、苄基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、肼、酰肼、戊糖基和己糖基的残基。
3.权利要求1的结合物，其中L1和L2独立地选自下式：
其中，Man是甘露糖基；并且HSA是人血清白蛋白。
4.权利要求1的结合物，其中甘露糖的C1碳与白蛋白或连接基结合。
5.组合物，其包含权利要求1或2的双功能螯合剂(BCA)与甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的结合物，所述结合物用用于免疫系统显像的金属放射性同位素标记。
6.权利要求5的组合物，其中免疫系统是淋巴系统或网状内皮系统。
7.权利要求5的组合物，其中金属放射性同位素选自67Ga、68Ga、111In、99mTc、186Re、60Cu、61Cu、62Cu、64Cu、67Cu、212Pb、212Bi或109Pd。
8.权利要求5的组合物，其中金属放射性同位素是68Ga。
9.用于制备用金属放射性同位素标记的药物组合物的液体状态、冷冻状态或冻干状态的无菌且无热原的药盒，其包含10ng-100mg的权利要求1的结合物。
10.权利要求9的药盒，其还包含0.01mL-10mL的1μM-10M的缓冲液，所述缓冲液的pH为1-9。
11.权利要求10的药盒，其中所述缓冲液是选自乙酸、磷酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、碳酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡糖二酸和硼酸的酸及其钠盐或钾盐的混合物。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0922384D0 (en) * 2009-12-22 2010-02-03 Hammersmith Imanet Ltd 68GA-labled human serum albumin
ITMI20111064A1 (it) 2011-06-13 2012-12-14 Areta Internat S R L Procedimento di idrolisi regioselettiva di monosaccaridi
CN103792315B (zh) * 2014-01-23 2015-07-08 中国计量科学研究院 一种人血清蛋白无机质谱联用技术的定量方法
KR101477498B1 (ko) * 2014-02-21 2014-12-30 고려대학교 산학협력단 죽상동맥경화 영상화용 조성물 및 이를 이용한 죽상동맥경화 진단방법
KR102096469B1 (ko) * 2014-08-13 2020-04-02 주식회사 셀비온 인도시아닌그린이 결합된 만노실 혈청알부민 복합체, 이의 제조방법, 이를 포함하는 광학영상 프로브 및 키트
KR101879682B1 (ko) * 2015-03-11 2018-07-19 서울대학교산학협력단 알부민 기반 질환 추적 진단 또는 치료 나노플랫폼
EP3501554A4 (en) * 2016-08-19 2020-04-15 FUJIFILM Toyama Chemical Co., Ltd. COMPOSITION CONTAINING A BUFFER
KR101881692B1 (ko) * 2017-03-17 2018-07-25 서울대학교산학협력단 색소가 결합된 만노실 혈청 알부민 복합체 및 이를 포함하는 림프절 탐지용 조성물
US10941084B1 (en) * 2020-05-23 2021-03-09 King Saud University Fertilizers derived from date syrup

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5059413A (en) * 1988-04-18 1991-10-22 Xoma Corporation Scintigraphic monitoring of immunotoxins using radionuclides and heterobifunctional chelators

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634586A (en) * 1984-05-21 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Reagent and method for radioimaging leukocytes
WO1992019264A1 (en) * 1991-05-01 1992-11-12 University Of New Mexico Biomodulators as universal imaging agents
KR100464917B1 (ko) 2001-09-25 2005-01-06 정재민 간 기능 영상화를 위한 디설파이드 환원형 갈락토즈 결합혈청알부민 및 이를 포함한 방사성 동위원소 표지 화합물
US7563433B2 (en) * 2007-01-11 2009-07-21 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for F-18 labeling of proteins, peptides and other molecules
KR100557008B1 (ko) * 2003-05-14 2006-03-03 정재민 림프계 영상을 위한 디설파이드 환원형 만노즈결합혈청알부민 및 이를 포함한 방사성동위원소 표지 화합물
JP2005226021A (ja) * 2004-02-16 2005-08-25 Nihon Medi Physics Co Ltd マンノース受容体親和性化合物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5059413A (en) * 1988-04-18 1991-10-22 Xoma Corporation Scintigraphic monitoring of immunotoxins using radionuclides and heterobifunctional chelators

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cytochemistry》.1984,第32卷(第10期),第1091-1098页. *
ERIC J. F. FRANSSEN,et al..HEPATIC AND INTRAHEPATIC TARGETING OF AN ANTI-INFLAMMATORY AGENT WITH HUMAN SERUM ALBUMIN AND NEOGLYCOPROTEINS AS CARRIER MOLECULES.《Biochemical Pharmacology》.1993,第45卷(第6期),第1215-1226页.
Gallium-68-DOTA-albumin as a PET blood-pool marker:experimental evaluation in vivo;Johannes Hoffend, et al.;《Nuclear Medicine and Biology》;20051231;第32卷;第287-292页 *
HEPATIC AND INTRAHEPATIC TARGETING OF AN ANTI-INFLAMMATORY AGENT WITH HUMAN SERUM ALBUMIN AND NEOGLYCOPROTEINS AS CARRIER MOLECULES;ERIC J. F. FRANSSEN,et al.;《Biochemical Pharmacology》;19931231;第45卷(第6期);第1215-1226页 *
Johannes Hoffend, et al..Gallium-68-DOTA-albumin as a PET blood-pool marker:experimental evaluation in vivo.《Nuclear Medicine and Biology》.2005,第32卷第287-292页.
MIKIO KATAOKA,et al..Synthetic Neoglycoproteins:A Class of Reagents for Detection of Sugar-recognizing Substances.《Journal of Histochemistry & Cytochemistry》.1984,第32卷(第10期),第1091-1098页.
MIKIO KATAOKA,et al..Synthetic Neoglycoproteins:A Class of Reagents for Detection of Sugar-recognizing Substances.《Journal of Histochemistry &amp *

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