CN102292431A - 一种新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种新型植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)及含该植物乳杆菌的组合物，所述组合物为用于治疗肠道疾病的组合物、或用于增强免疫力的组合物。

Description

一种新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物
技术领域
本发明涉及一种新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物。更具体地，涉及一种用于预防治疗肠道疾病及免疫疾病的新型植物乳杆菌及含有该植物乳杆菌的组合物。
泡菜等传统发酵食品中含有丰富的乳酸菌，所述乳酸菌在人体的消化系统中共生，具有通过分解纤维质及复合蛋白质来制备重要的营养成分的作用。将这种存活于包括人在内的动物的胃肠器官内，改善宿主的肠道微生物环境，从而对宿主的健康有利的微生物统称为益生菌。为了使益生菌具有效果，需要经口摄取到达小肠，附着于肠表面并维持这种附着状态，因此至少需要具有优异的耐酸性、耐胆汁酸性，以及附着于肠上皮细胞上的附着力。
在泡菜等传统发酵食品中所发现的具有代表性的益生菌有乳杆菌属(Lactobacillus sp.)乳酸菌。乳杆菌属微生物作为同型或异型发酵的乳酸杆菌，常见于包括人在内的动物的肠道及乳制品或蔬菜的发酵过程中。乳杆菌属微生物将肠内pH值维持在酸性，从而抑制大肠杆菌(E.coli)或梭菌(Clostridium)等有害菌的繁殖，不仅能够改善腹泻和便秘，而且已知的作用还有合成维生素、抗癌、降低血清胆固醇等。已知由乳酸杆菌产生的乳酸杆菌素(acidophillin)具有抑制痢疾杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、大肠杆菌等生长的作用。并且能够抑制引起腹泻的菌繁殖，使得肠道菌群正常，从而具有治疗腹泻的作用。(Michael和Philippe，益生菌与益生元：对腹泻的影响，营养学杂志，第137卷，2007年3月，第803-811页；Roberfroid，益生元与益生菌：它们是功能性食品吗？美国临床营养学杂志，第71卷，2000年6月，第1682-1687页)(Michael and Philippe，Probiotics andprebiotics：Effects on diarrhea，The journal of nutrition，Volume 137，March 2007，pages 803S-811S；Roberfroid，Prebiotics and probiotics：Are they functional foods？，American journal of clinical nutrition，Volume 71，June 2000，pages 1682S-1687S)。
利用乳杆菌属微生物的上述特性来开发益生菌剂和家畜饲料的研究正在活跃地展开。家畜的细菌性腹泻病会降低增重率，导致动物死亡。因此，为了预防上述情况的发生，提高家畜产量，一般一直采用的方法是在饲料中添加抗生素。但是，由于对抗生素的耐药菌的出现和畜产内残留抗生素等问题，因此目前趋势是限制在饲料中使用抗生素，强调有机的家畜饲养方法(韩国公开专利1998-78358)(McEwen和Fedorka-Cray，在动物体内使用抗菌药物以及耐药性，临床传染病杂志，第34卷，2002年6月，第93-106页)(McEwen and Fedorka-Cray，Antimicrobial use and resistance in animals，Clinical infectious Diseases，Volume34，June 2002，pages S93-S106)。
并且，乳杆菌属微生物等乳酸菌还具有增强免疫力的效果。最近，在世界范围内由于环境污染和速食食品摄入的增加，使得与免疫调节异常有关的过敏性反应疾病和特异性反应疾病正在急剧增加，在韩国这种疾病也同样呈增加趋势。最近在欧洲，作为微生物治疗(bacteriotheraphy)的一个环节，通过口服乳酸菌来治疗疾病，正在努力实现用乳酸菌来缓解或改善病症。将鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG)对儿童给药时发生特异性反应疾病的概率减少到一半(
Figure BPA00001385454400021
等，益生菌在遗传性过敏性反应疾病中的主要预防：一种随机安慰剂对照实验，柳叶刀杂志，第357卷，2001年4月，第1076-1079页)(
Figure BPA00001385454400022
et.al.，Probiotics in primaryprevention of atopic disease：a randomized placebo-controlled trial，Lancet，Volume 357，April 2001，pages 1076-1079)。有报道指出对已经发生特异性反应湿疹的幼儿用鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)和罗伊氏乳杆菌(L reuteri)进行给药时，湿疹部位会变小及湿疹症状会减轻(Rosenfeldt等，益生菌乳酸菌菌株对儿童的遗传过敏性皮炎、皮肤病以及眼部疾病的影响，第111卷，2003年2月，第389-395页)(Rosenfeldt et.al.，Effect of probiotic Lactobacillusstrains in children with atopic dermatitis，Dermatologic and oculardiseases，Volume 111，February 2003，pages 389-395)。
对这种乳酸菌的增强免疫效果的原理(mechanism)方面的研究还在进行，虽然对具体的原理还不明确，但是大体上已知通过经口摄入，并且在肠内栖息，从而影响肠道的免疫系统。例如，已知通过酸奶的方式来摄取乳酸菌能够增强集合淋巴小结(Peyer’s patch)淋巴细胞的抗菌活性，根据以实验动物和人为对象实施的部分研究，已知乳酸菌能够强化IgA反应。此外，乳酸菌对先天免疫及适应性免疫都有影响。已知在肠道免疫系统的先天免疫反应(innate immunity)中通过吞噬病原菌来消灭病原菌，从而抗感染，起到维持健康的作用。已知适应性免疫(adaptive immunity)是通过活化巨噬细胞来增加多种细胞因子的产生，特别是增加白介素IL-12、IL-18的产生，这是由于乳酸菌细胞壁的构成成分中的部分成分激活巨噬细胞中的NF-κB、STAT信号通路，因此增加细胞因子的生成。所述巨噬细胞起到分解抗原，从而提示给T淋巴细胞的作用。并且，已知的还有乳酸菌作为专门的抗原呈递细胞，其不仅在淋巴结、消化系统中的粘膜上较多存在的树突细胞(dendritic cell)中增加IL-12、IL-18、TNF-α的产生，而且其还具有增加表面分子表达的作用，所述表面分子与MHC classII，以及B7-2一样具有活化T淋巴细胞的作用(Cross等，发酵食品的抗过敏性，乳酸菌的一个重要免疫调节机制，国际免疫药理学杂志，第1卷，2001年5月，第891-901页)(Cross et.al.，Anti-allergy propertiesof fermented foods：an important immunoregulatory mechanism of lacticacid bacteria？，International Immunopharmacology，Volume 1，May2001，pages 891-901)。
T淋巴细胞是适应性免疫(adaptive immunity)的核心细胞，适应性免疫可分为细胞性免疫的Th1反应和抗体性免疫的Th2反应。在Th1及Th2各自反应中抗原呈递细胞(Antigen Presenting Cell)所产生的细胞因子相互不同，在Th1反应中IL-12、IL-18以及干扰素(IFN)的产生占优势，而在Th2反应中PGE2、IL-4、IL-10的产生占优势。这种Th1反应以及Th2反应要形成适当的均衡，当均衡被破坏的情况下，会发生各种免疫疾病。Th1细胞主要与感染病症作斗争，而与此相反，Th2细胞主要与过敏性反应疾病和炎性反应相关。当它们正常发挥作用时，Th2细胞防止灰尘及其它不需要的物质侵入身体，从而保护身体，但是如果这些细胞显示出过度的活性的情况下，会增加IgE抗体的产生，从而使原本对人体没有威胁的蛋白质(例如：花粉、食物等)诱发人体过敏反应。并且，Th1反应和Th2反应必须要维持平衡，如果其中的一种过剩或另一种不足，就会诱发疾病。并且，由于持续的压力，进而不断分离皮质醇，就会使得Th1反应低下，Th2反应增加，从而诱发癌症、特异性反应疾病、过敏性反应疾病、以及自身免疫疾病(Elenkov和Chrousos，应激激素，Th1/Th2型模型，促炎/抗炎细胞因子和遗传易感性疾病，内分泌与新陈代谢趋势，第10卷，1999年11月，第359-368页)(Elenkov and Chrousos，Stresshormones，Th1/Th2 patterns，pro/anti-inflammatory cytokines andsusceptibility to disease，Trends in Endocrinology and Metabolism，Volume 10，November 1999，pages 359-368)。
通过体内(In vivo)实验可知，在T淋巴细胞中乳酸菌能够增加作为Th1细胞因子的IFN-γ的生成，并且能够抑制作为Th2细胞因子的IL-4、IL-5的生成(Matsuzaki等，口服干酪乳杆菌Shirota对生成小鼠的免疫球蛋白E的作用，奶制品科学日报，第81卷，1998年1月，第48-53页)(Matsuzaki et.al.，The effect of oral feeding ofLactobacillus casei strain Shirota on immunoglobulin E production inmice，Journal of Dairy Science，Volume 81，January 1998，pages 48-53)。并且，在其它实验中，用乳酸菌对偏向于Th2反应的小鼠(ovalbumin-primed mice)进行经口给药时，脾细胞(splenocyte)中的INF-γ增加，IL-4、IL-5以及IgE减少，所述偏向于Th2反应的小鼠为用作为Th2反应动物模型的卵清蛋白进行给药的小鼠。并且已知用卵清蛋白给药后，将由偏向于Th2反应的小鼠中提取的脾细胞和乳酸菌一起进行培养时，细胞因子以及IgE的变化与经口给药的实验相同。但是，仅将T淋巴细胞与乳酸菌进行培养时，IFN-γ的生成没有明显增加，因此可以认为在T淋巴细胞的IFN-γ生成中巨噬细胞、树突细胞等抗原呈递细胞是必需的(Kato等，乳酸菌通过小鼠脾细胞诱导白介素12和γ-干扰素的产生，国际免疫药理学杂志，第21卷，1999年2月，第121-131页)(Kato et.al.，Lactic acid bacterium potentlyinduces the production of interleukin-12 and interferon-gamma by mousesplenocytes，International Journal of Immunopharmacology，Volume 21，February 1999，pages 121-131)。另一方面，IL-12以及IL-18是将Th0淋巴细胞分化为Th1淋巴细胞的重要细胞因子，其在巨噬细胞或树突细胞中生成，已知在培养脾细胞或巨噬细胞时，采用乳酸菌进行处理，随着浓度的增加，IL-12、IL-18以及IFN-α等的生成会增加。由此可知乳酸菌在巨噬细胞中会增加IL-12、IL-18以及IFN-α等的生成，因此会促进向Th1细胞分化，并且诱导IFN-γ的生成，因此在Th2占优势的情况下能够起到调节Th1/Th2平衡的作用(Cross等，抗过敏性发酵食品：一个重要的乳酸菌免疫机制，国际免疫药理学，第1卷，2001年5月，第891-901页)(Cross et.al.，Anti-allergy properties offermented foods：an important immunoregulatory mechanism of lacticacid bacteria？，International Immunopharmacology，Volume 1，May2001，pages 891-901)。并且，已知乳酸菌对预防和治疗由Th2反应过剩导致的Th1/Th2失衡而诱发的癌症、特异性反应疾病、过敏性反应疾病以及自身免疫疾病有帮助。
发明内容
本发明要解决的技术问题
本发明的发明人研究开发出一种在调节由Th2反应过剩引起Th1/Th2失衡方面效果优于现有乳酸菌的新型乳酸菌。研究结果为从传统的发酵食品中分离并鉴定了一种新型乳杆菌属乳酸菌菌株，从而完成了本发明。
本发明的目的在于，提供一种新型乳杆菌属乳酸菌菌株，其不仅具有优异的作为益生菌基本性质的耐酸性、耐胆汁酸性、以及肠上皮细胞上的附着力，而且增强免疫效果也优异，特别是调节由Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡的效果优异。
本发明的另一目的在于，提供一种含有上述新型乳杆菌属乳酸菌菌株的用于预防或治疗肠道疾病的组合物。
本发明的又另一目的在于，提供一种含有上述新型乳杆菌属乳酸菌菌株的用于增强免疫力的组合物。
技术方案
为了实现上述目的，本发明提供植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarum CJLP56)(保藏单位：生命工学研究院基因银行，保藏日期：2008.10.16，保藏编号：KCTC11402BP)。
并且，本发明提供一种含有上述植物乳杆菌CJLP56的用于预防和治疗肠道疾病的组合物。
并且，本发明提供一种含有植物乳杆菌CJLP56的用于增强免疫力的组合物。
下面，进一步详细说明本发明。
关于本发明的植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)的特征在于，是一种从传统发酵食品中分离并鉴定的植物乳杆菌的新型菌株。所述传统发酵食品有泡菜、蔬菜发酵物、大酱、酱油、清麹酱或盐渍海鲜等，但并不限于此。
为了对微生物进行鉴定和分类，对本发明的植物乳杆菌CJLP56进行了有关16S rRNA碱基序列分析，结果为：与植物乳杆菌标准菌株(Lactobacillus plantarum NBRC 15891T，GenBank accession numberAB326351)显示出了最高的同源性(99.9％)，显示出了与植物乳杆菌最高的分子系统学上的亲缘关系。并且，将上述微生物鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，并命名为植物乳杆菌CJLP56，于2008年10月16日保藏于生命工学研究院基因银行(保藏编号为KCTC11402BP)。植物乳杆菌CJLP56的16SrRNA基因的碱基序列如本说明书附件中的碱基序列表SEQ ID NO.1所示。
本发明的植物乳杆菌CJLP56为革兰氏阳性杆菌，是在有氧条件和厌氧条件下均能够生长的兼性厌氧菌(facultive anaerobe)，并且不形成孢子，无运动性，细胞形态为杆菌。采用本技术领域常规方法对植物乳杆菌CJLP56的更加具体的形态以及生理学特性进行分析的结果如下表1所示。
表1
  形态及生理、生物化学特性   结果
  形态(Morphology)   杆菌(Rod)
  运动性(Motility)   -
  孢子(Spore)   -
  过氧化氢酶   -
  同型与异型发酵   兼性异型发酵
  15℃下的繁殖   +
  45℃下的繁殖   -
  在3％NaCl中的繁殖   +
  厌氧性繁殖   +
  利用葡萄糖生成CO2   -
  糖发酵特性
  丙三醇   -
  赤藓糖醇   -
  D-阿拉伯糖   -
  L-阿拉伯糖  +
  核糖  +
  D-木糖  -
  L-木糖  -
  戊五醇  -
  木糖苷  -
  半乳糖  +
  D-葡萄糖  +
  D-果糖  +
  D-甘露糖  +
  L-山梨糖  -
  鼠李糖  +
  半乳糖醇  -
  肌醇  -
  甘露醇  +
  山梨醇  +
  D-甘露糖苷  +
  D-葡萄糖苷  -
  葡萄糖胺  +
  苦杏仁苷  +
  熊果苷  +
  七叶苷  +
  水杨苷  +
  纤维二糖  +
  麦芽糖  +
  乳糖  +
  蜜二糖  +
  蔗糖  +
  海藻糖  +
  菊糖  +
  松三糖(melizitose)  +
  D-蜜三糖  +
  美沙酮(amidon)  -
  糖原  -
  木糖醇  -
  龙胆二糖  +
  D-松二糖  +
  D-来苏糖  -
  D-塔格糖  -
  D-岩藻糖  -
  L-岩藻糖  -
  D-阿拉伯糖醇  -
  L-阿拉伯糖醇 -
  葡萄糖酸盐 -
  2-葡萄糖糖酸盐 -
  5-葡萄糖酸盐 -
+：阳性反应
-：阴性反应
为了长时间稳定地保存本发明的植物乳杆菌CJLP56，优选在水中混合有一定量的丙三醇的保存溶液，使菌体散开，于-70℃下保存，或者将其悬浮在灭菌的10％脱脂乳中进行冷冻干燥。
此外，本发明的植物乳杆菌CJLP56作为益生菌，具有乳酸菌一般具有的整肠效果及增强免疫效果。
本发明中的益生菌(probiotics)理解为存活于包括人在内的动物的胃肠器官内，改善宿主的肠内微生物环境，从而对宿主的健康有利的微生物。益生菌是一种具有益生菌活性的活的微生物，其具有单一或复合菌株形态，当以干燥的细胞形态或发酵产物形态用于人或动物的情况下，能够对宿主的肠道菌群产生有利的影响。为了确认是否为这种益生菌的微生物，首先，需要确认其是否能够受胃液和胆汁的影响较小且经过胃并存活于肠中，确认其是否能够停留在肠中并且存活于肠道中，需要其能够对宿主的肠道菌群形成有利影响。并且还要具有对胃酸的耐酸性，对胆汁酸的耐胆汁酸性，以及对肠上皮细胞的附着性。第二点，为了确认是否为益生菌的微生物，需要所述微生物在安全性方面没有问题，与此相关，一般进行明胶液化反应检测、苯丙氨酸脱胺生成检测、氨生成检测、溶血性实验检测等。本发明的植物乳杆菌CJLP56不仅具有优异的耐酸性、对胆汁酸的耐胆汁酸性、以及对肠上皮细胞的附着性，而且在明胶液化反应检测、苯丙氨酸脱胺生成检测、氨生成检测中显示出了阴性，在溶血性实验检测中确认为与病原性无关的α-溶血，从而显示是安全的。
本发明的植物乳杆菌CJLP56的耐酸性、耐胆汁酸性、以及肠上皮细胞的附着性非常优异，因此能够预测出具有整肠效果。并且，从另一个侧面来说，本发明提供一种含有植物乳杆菌CJLP56的用于预防或治疗肠道疾病的组合物。
上述含有本发明微生物的用于治疗肠道疾病的组合物能够用于预防或治疗包括人在内的哺乳动物的肠道疾病，优选为包括牛、马、猪等家畜。肠道危害细菌感染、以及炎症性肠道疾病等都包括在上述“肠道疾病”中，例如，包括由病原性微生物(大肠杆菌、沙门氏菌、梭菌等)引起的感染性腹泻、肠胃炎、炎症性肠道疾病、神经性肠炎综合症、小肠细菌过度生长、急性腹泻等，但是并不限于这些。上述用于治疗肠道疾病的组合物中含有的植物乳杆菌CJLP56能够以活菌体或死菌体方式存在，但是优选为以活菌体方式存在。一般活菌体具有治疗并改善由肠道菌群的异常发酵而引起的诸多症状的效果，用于人以及动物时，能够密集、停留在肠内的消化管道壁上，从而起到使有害菌不能够停留的作用，并且产生乳酸来降低肠内的pH值，抑制有害细菌的繁殖。并且，所用的活菌体生成细菌素(bacteriocin)和过氧化物，从而能够抑制病原菌的繁殖，对负责吸收营养成分的肠绒毛的活动起到帮助作用。此外，能够生成帮助吸收、利用营养素的物质，对于动物来说改善其饲料转化率，还能够产生一种能够中和病原菌产生的毒性物质的物质。
对于上述本发明的用于预防或治疗肠道疾病的组合物的给药方式没有特别限定，但是优选为经口给药。虽然给药量根据肠道疾病的种类、疾病程度、年龄、性别、人种、治疗或预防目的等有所不同，但是一般情况下以成人为基准，一天可以给药1千万-1000亿个。
并且，除了具有整肠效果之外，本发明的植物乳杆菌CJLP56与现有的乳酸菌相比，还具有显著增强免疫力的效果。植物乳杆菌CJLP56在脾细胞(splenocyte)中能够增加诱导Th1反应的IL-12的生成，抑制诱导Th2反应的IL-4的生成。并且，所述植物乳杆菌CJLP56通过刺激作为抗原呈递细胞调节T细胞免疫反应的巨噬细胞，以及树突细胞等与调节免疫相关的细胞，从而促进由Th0淋巴细胞向Th1淋巴细胞分化的细胞因子的生成，进而确认为其具有免疫调节能力，能够调节由Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡。对植物乳杆菌CJLP56的增强免疫效果的具体说明如下。
与阴性对照组相比，用植物乳杆菌CJLP56对加入卵清蛋白(OVA)而偏向于TH2反应的小鼠脾细胞(splenocyte)进行处理时，产生了5.8-8.4倍的诱导Th1反应的细胞因子IL-12，并且将诱导Th2反应的细胞因子IL-4的生成抑制到10.7～12.9％，能够确认这显著优异于其它典型乳酸菌，如鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)、干酪乳杆菌(KCTC3109)、沙克乳杆菌CJLS118(KCTC13416)。并且植物乳杆菌CJLP56能够抑制Th2反应，并且促进Th1反应，因此具有能够调节由Th2反应的过剩引起的Th1/Th2失衡的免疫调节能力。
并且，用植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)对巨噬细胞株RAW264.7、以及树突细胞株JAWSII进行处理的结果，说明随着乳酸菌数量的增加，刺激巨噬细胞株，从而增强免疫反应。用植物乳杆菌CJLP56对巨噬细胞株RAW264.7、以及树突细胞株JAWSII进行处理的结果，能够促进诱导Th1分化的细胞因子IL-12、IL-18的生成，并且抑制Th1分化的细胞因子IL-10比IL-12的生成量相对少，因此说明植物乳杆菌CJLP56能够促进诱导Th1的分化。并且，由该结果可知植物乳杆菌CJLP56能够抑制Th2反应，促进Th1反应，从而具有能够调节由Th2反应的过剩引起的Th1/Th2失衡的免疫调节能力。
IL-4来源于Th2细胞，特别起到细胞免疫反应的核心作用，抑制作为Th1细胞的细胞因子IL-12的产生，从而具有抗炎性细胞因子(anti-inflammatory cytokine)的功能。最近发现，在过敏性皮炎患者的外周血液或皮肤病变处，主要产生IL-4、IL-5等的Th2细胞相对增加了(Miraglia等，异位性皮炎的免疫调节，过敏性反应疾病与哮喘会议录，第27卷，2006年11月-12月，第451-455页)(Miraglia et.al，Immune dysregulation in atopic dermatitis，Allergy and AsthmaProceedings，Volume 27，November-December 2006，pages 451-455)。并且由于Th2反应的过剩引起的Th1/Th2失衡会诱发特异性反应疾病等疾病。并且，如前面所述，已知当Th1反应和Th2反应中只要一种过剩、或一种不足就会引起疾病，当Th1反应低下，Th2反应增加时，会引起癌症、特异性反应疾病、过敏性反应疾病、以及自身免疫疾病(Elenkov和Chrousos，应激激素，Th1/Th2模式，促炎/抗炎细胞因子和疾病的易感性，内分泌学和新陈代谢的趋势，第10卷，1999年11月，第359-368页)(Elenkov and Chrousos，Stress hormones，Th1/Th2 patterns，pro/anti-inflammatory cytokines and susceptibility todisease，Trends in Endocrinology and Metabolism，Volume 10，November1999，pages 359-368)。并且，本发明的植物乳杆菌CJLP56通过调节与免疫调节有关的产生Th1细胞、Th2细胞、巨噬细胞、以及树突细胞的细胞因子，从而调节由Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡，因此其有望不仅对特异性反应疾病、过敏性反应疾病等疾病起到有效作用，而且还对预防和治疗癌症，以及自身免疫疾病也具有效果。
并且，本发明在另外一个侧面，提供一种含有植物乳杆菌CJLP56的用于增强免疫力的组合物。本发明的用于增强免疫力的组合物中的植物乳杆菌CJLP56作为乳酸菌，由于其具有上述现有技术中说明的一般的乳酸菌所具有的增强免疫力的作用，因此具有增强免疫力的效果。特别地，如下述实施例的例证，由于本发明的上述用于增强免疫力的组合物中的植物乳杆菌CJLP56具有促进Th1反应的效果，并且具有调节由于Th2反应的过剩引起的Th1/Th2失衡的效果，因此对预防和治疗由于Th2反应的过剩引起的Th1/Th2失衡而诱发的疾病具有效果。并且，本发明的上述用于增强免疫力的组合物也能够有效地用于预防或治疗特异性反应疾病、过敏性反应疾病、癌症、以及自身免疫疾病。上述自身免疫疾病包括哮喘、枯草热等，但并不限于这些。
对于上述本发明的用于增强免疫力的组合物的给药方式没有特别限定，优选为经口给药。给药量根据增强免疫所需的疾病种类、疾病程度、年龄、性别、人种、治疗或预防目的等有所不同，但是一般情况下以成人为基准，一天可以给药1千万-1000亿个。
由于含有上述本发明的植物乳杆菌CJLP56的用于预防或治疗肠道疾病的组合物、以及用于增强免疫力的组合物中含有安全性得到认可的乳酸菌，因此不会有副作用等的顾虑，可以作为药品、食品、化妆品、饲料或饲料添加剂来使用。
上述本发明的组合物作为药品使用的情况下，可以制备成现有技术中公知的常规药剂学剂型。上述药品优选为经口给药剂型。例如有液体剂、悬浮剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或浸膏剂。
制备成上述各个剂型时，可以加入各个剂型的制备所需的并在药剂学可接受的载体或添加剂来制备。制备成具有典型的用于经口给药的剂型时，上述载体可以使用选自稀释剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂、甜味剂、稳定剂以及防腐剂中的一种或多种，作为添加剂可以使用选自香料、维生素类以及抗氧化剂中的一种或多种。
上述载体以及添加剂只要是药剂学上允许使用的均可，优选地，作为稀释剂具体有乳糖、玉米淀粉、大豆油、微晶纤维素或甘露醇等，作为润滑剂有硬脂酸镁或滑石粉，作为粘合剂有聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素。此外，优选地，作为崩解剂有羧甲基纤维素钙、羧基乙酸淀粉钠、波拉克林钾或交联聚维酮，作为甜味剂有白糖、果糖、山梨醇或阿斯巴甜，作为稳定剂有羧甲基纤维素钠、环糊精、白蜡或黄原胶，作为防腐剂有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸钾。
此外，为了增加口感，除了上述成分之外，作为公知的添加剂，还可以混合使用梅花香、柠檬香、菠萝香、香草香等天然香料；天然果汁、叶绿酸、类黄酮等天然色素；果糖、蜂蜜、糖醇、白糖等甜味成分；或柠檬酸、柠檬酸钠等酸味剂。
关于这种制剂化方法以及制剂化时所需的载体以及添加剂在《雷明顿的制药科学》(Remington′s Pharmaceutical Sciences)(第19版，1995)中有详细记载。
上述本发明的组合物可以作为食品使用。上述食品不仅是保健功能性食品，还包括人们每日经常摄取的一般的食品。用于保健功能性食品的情况下，可以和食品学上允许的载体或添加剂一起制备成本技术领域公知的常规保健功能性食品的剂型，作为所述保健功能性食品例如可以制备成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂、液体剂、浸膏、茶、果冻或饮料等。上述食品学允许使用的载体或添加剂，根据需要制备的剂型可以选择使用在本技术领域允许使用的公知的任一载体或添加剂。
由于上述本发明的组合物具有预防或治疗特异性反应疾病的效果，因此可以用于化妆品上。当将上述本发明的组合物用于化妆品的情况下，可以制备成该化妆品领域公知的普通剂型的多种化妆品。制备成上述各种剂型时，可以添加各个剂型制备所需的制备化妆品时允许使用的载体或添加剂来制备。
上述本发明的组合物还可以作为饲料添加剂或饲料来使用。
作为饲料添加剂使用的情况下，可以将上述组合物制备成20-90％的高浓缩液或粉末、或者是颗粒形态。上述饲料添加剂还可以使用包括选自柠檬酸、富马酸、己二酸、乳酸、苹果酸等有机酸；或膦酸钠、磷酸钾、酸性焦磷酸盐、聚磷酸盐(聚合磷酸盐)等磷酸盐；或多元酚、儿茶酸、α-生育酚、迷迭香提取物、维生素C、绿茶提取物、甘草提取物、壳聚糖、鞣酸、植酸等天然抗氧化剂中的一种或多种。作为饲料使用的情况下，可以将上述组合物制备成常规饲料形态，可以包括常规饲料成分。
所述饲料添加剂以及饲料还可以包括谷类，例如有粉碎或破碎的小麦、燕麦、大麦、玉米以及大米；植物性蛋白饲料，例如有以油菜、大豆以及葵花籽为主要成分的饲料；动物性蛋白饲料，例如有血粉、肉粉、骨粉以及海鲜粉；糖分以及乳制品，例如有各种奶粉以及乳清粉的干燥成分，除此之外，还可以包括营养补充剂、消化吸收提高剂以及生长促进剂等。
上述饲料添加剂可以对动物单独喂养，或者是在和食用载体中的其它饲料添加剂组合喂养。并且，上述饲料添加剂可以以追肥的方式，或者是和这些动物饲料直接混合，或者是不与饲料一起，而另外制备成经口喂养剂型的方式容易地对动物进行喂养。将上述饲料添加剂不与动物饲料一起喂养而制备成经口喂养剂型来喂养的情况下，可以和本技术领域已知的药剂学领域允许使用的食用载体组合使用，制备成能够立刻放出或释放型剂型。这些食用载体可以是固体或液体，例如有玉米淀粉、乳糖、蔗糖、大豆碎片、花生油、橄榄油、芝麻油、以及丙二醇。当使用固体载体的情况下，作为饲料添加剂可以是片剂、胶囊剂、散剂、糖锭剂或含糖片剂或微粉散状形态的追肥。当使用液体载体的情况下，饲料添加剂可以是明胶软胶囊剂、糖浆剂、悬浮液、乳液剂、或溶液剂等剂型。
上述饲料中可以包括任意一种满足动物食物需求的通常使用的含有蛋白质的有机谷粉。这种含有蛋白质的谷粉通常由玉米、大豆谷粉、或玉米/大豆谷粉混合物构成。
此外，上述饲料添加剂以及饲料还含有辅助剂，例如有保存剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂，溶液促进剂等。上述饲料添加剂可以以浸透、喷雾或混合的方式来添加到动物饲料中使用。
本发明的饲料或饲料添加剂可以应用在包括哺乳类、家禽、以及鱼类的多数动物的食物中。作为上述哺乳类，不仅可以用于猪、牛、羊、奶牛、实验用啮齿动物，还可以用于宠物(例如狗、猫)等。作为上述家禽类，可以用于鸡、火鸡、鸭、鹅、雉、以及鹌鹑等，作为上述鱼类可以用于鳟鱼等，但并不限于这些。
有益效果
如上面所述，本发明的新型植物乳杆菌CJLP56作为益生菌，其耐酸性、耐胆汁酸性，以及肠上皮细胞附着性非常优异，从而具有整肠效果，并且具有促进Th1反应的效果，具有调节由于Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡的效果。并且，本发明新型乳酸菌植物乳杆菌CJLP56可以用在用于预防或治疗肠道疾病的组合物，以及用于增强免疫力的组合物中，特别是对预防或治疗由于Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡而诱发的肠道疾病方面具有效果。
附图说明
图1为示出植物乳杆菌CJLP56的耐酸性实验结果的图表。
图2为示出植物乳杆菌CJLP56的耐胆汁酸性实验结果的图表。
图3为示出植物乳杆菌CJLP56的肠上皮细胞附着力实验结果的图表。
图4为将植物乳杆菌CJLP56菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理，然后对作为诱导Th1反应的细胞因子IL-12的浓度进行测定的结果和其它乳酸菌进行比较而示出的图表。
图5为将植物乳杆菌CJLP56菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理，然后对作为诱导Th2反应的细胞因子IL-4的浓度进行测定的结果和其它乳酸菌进行比较而示出的图表。
图6为将植物乳杆菌CJLP56菌株对巨噬细胞株RAW264.7进行处理后，用ELISA对IL-12以及IL-10的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
图7为将植物乳杆菌CJLP56菌株对树突细胞株JAWSII进行处理后，用ELISA法对IL-12以及IL-10的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
图8为将植物乳杆菌CJLP56菌株对巨噬细胞株RAW264.7进行处理后，用RT-PCR法对IL-12p40及IL-18mRNA的表达进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
图9为将植物乳杆菌CJLP56菌株对树突细胞株JAWSII进行处理后，用RT-PCR法对IL-12p40及IL-18mRNA的表达进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
具体实施方式
下面根据下述实施例更具体说明。但是，这些实施例只是为了有助于本发明的理解，本发明的范围并不能以任何方式由这些实施例来限定。
实施例1：微生物植物乳杆菌CJLP56菌株的分离及鉴定
将由泡菜中分离的植物乳杆菌CJLP56菌株涂布在含有1.5％琼脂(agar)的MRS固体培养基(Difco，USA)上，于37℃下培养24小时后，用接种环(loop)挑取已经被确认为是纯粹分离的菌落，将其在MRS液体培养基(Difco，USA)中，于37℃下培养18-24小时。
然后，对CJLP56菌株的形态，以及生理学特性采用Kim等(Kim等，Leuconostoc inhae sp.nov，一种由泡菜中分离出的乳酸菌，国际系统进化微生物学杂志，第53卷，2003年7月，第1123-1126页)(Kim et.al.，Leuconostoc inhae sp.nov，a lactic acid bacterium isolatedfrom kimchi，International Journal of Systematic and EvolutionalMicrobiology，Volume53，July 2003，pages 1123-1126)的方法，并且使用API50CH以及API50CHL装置(生物梅里埃公司产品)来进行了鉴定。将最后鉴定的CJLP56菌株的形态及生理学特性整理在上述表1中。
并且，为了对乳酸菌进行鉴定及分类，分析了16S rRNA基因的碱基序列。对16S rRNA基因的碱基序列的确定及分析采用了Kim等(Kim等，乳酸菌泡菜新品种，来源于泡菜的新品种，国际系统与进化微生物学杂志，第50卷，2000年9月，第1915-1919页)(Kim et.al.，Leuconostoc kimchii sp.nov.，a new species from kimchi.International Journal of Systematic and Evolutional Microbiology，Volume50，September 2000，pages 1915-1919)的方法。将最后鉴定的CJLP56的16SrRNA基因碱基序列记载于序列目录中(SEQ ID NO：1)。
对16SrRNA碱基序列进行分析的结果，植物乳杆菌CJLP56菌株与植物乳杆菌标准菌株(Lactobacillus plantarum NBRC15891T，GenBank accession number AB326351)显示出了最高的同源性(99.9％)，从而被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，并且将其命名为植物乳杆菌CJLP56，于2008年10月16日保藏于生命工学研究院基因银行。(保藏编号为KCTC 11402BP)
实施例2：植物乳杆菌CJLP56菌株在人工胃液中的耐酸性实验，以及在人工胆汁中的耐胆汁性实验
在人工胃液中的耐酸性实验是通过使用将Kobayashi等(Kobayashi等，乳酸菌生物学特性研究：多重抗生素耐药性菌株，干酪乳杆菌PSR3002，对人工消化液的耐受性。日本微生物学杂志，第29卷，1974年7月，第691-697页)(Kobayashi et.al.，Studies onbiological characteristics of Lactobacillus：II.Tolerance of the multipleantibiotic resistance strain，L.casei PSR3002，to artificial digestive fluids.Japan Journal of Microbiology.Volume 29，July 1974，pages 691-697)的实验进行变形后制备得到的人工胃液来进行的。具体地，人工胃液是用1N HCl将MRS液体培养基调节为pH2.5后，以1000单位/mL加入胃蛋白酶后，进行灭菌制备得到。
将上述实施例1中分离并鉴定的植物乳杆菌CJLP56在MRS液体培养基中，于37℃下进行18小时培养的菌体进行离心分离，使得乳酸菌沉淀，然后再用灭菌食盐水(0.85％NaCl)清洗2次后，将菌体悬浮液以约107cfu/mL分别接种于对照组培养基和人工胃液中，在37℃下进行培养，并且在接种后的0以及3小时后测定了活菌数。总菌数采用含有KH2PO4、Na2HPO、L-半胱氨酸、HCl、吐温80等的磷酸缓冲溶液(pH6.8)稀释10倍后进行了测定。
在人工胆汁中的耐胆汁性实验是按照Casey等(Casey等，来源于猪胃肠道的抗沙门氏乳酸菌的分离和鉴定，Letters in AppliedMicrobiology杂志，第39卷，2004年，第431-438页)(Casey et.al.，Isolation and characterization of anti-Salmonella lactic acid bacteria fromthe porcine gastrointestinal tract，Letters in Applied Microbiology.Volume 39，2004，pages 431-438)的方法进行的。在上述耐酸性评价中使用的MRS液体培养基中加入0.3％的黄牛胆汁，然后采用和上述耐酸性评价方法相同的方法，在接种乳酸菌后的0小时、12小时、24小时后测定了活菌数。
在上述耐酸性评价及耐胆汁酸性评价中，对典型的乳酸菌干酪乳杆菌(KCTC3109)、沙克乳杆菌CJLS118(KCTC13416)、以及鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)也进行了相同的比较实验。
结果在图1及图2中示出。图1为示出植物乳杆菌CJLP56的耐酸性实验结果的图表。图2为示出植物乳杆菌CJLP56的耐胆汁酸性实验结果的图表。
根据图1及图2的结果，与比较实验中的其它乳酸菌相比，植物乳杆菌CJLP56显示出了具有同等或更优异的耐酸性及耐胆汁酸性。这说明本发明的新型菌株在体内不会受到胃液的影响，能够到达肠部，并且在肠内不会受到胆汁的影响而存活。
实施例3：植物乳杆菌CJLP56菌株对于肠上皮细胞的附着力实验
作为用于肠上皮细胞试验的动物细胞HT-29来源于韩国细胞株银行(KCLB)，实验方法采用了金等(金等，由猪胃肠道分离的乳酸杆菌和双歧杆菌的益生菌特性，应用微生物学和生物技术，第74卷，2007年4月，第1103-1111页)(Kim et.al.，Probiotic properties ofLactobacillus and Bifidobacterium strains isolated from porcinegastrointestinal tract，Applied Microbiology and Biotechnology，Volume74，April 2007，pages 1103-1111)和Hirano等(Hirano等，鼠李糖乳杆菌在体外对肠道细胞中肠出血性大肠杆菌感染的影响，微生物学和免疫学，第47卷，2003年，第405-109页)(Hirano et.al.，The effectof Lactobacillus rhamnosus on enterohemorrhagic Escherichia coliinfection of human intestinal cells in vitro，Microbiology andImmunology，Volume 47，2003，pages 405-109)的方法。
在添加了热灭活的10％牛胎血清(FBS)，1％L-谷氨酸盐、青霉素G(100IU/mL)，以及链霉素(100mg/mL)的RPMI1640(Gibco，USA)培养基中，在有5％CO2的条件下，于37℃下培养HT-29细胞。为了进行附着力实验和附着抑制力实验，将HT-29细胞以每孔10×105细胞/mL的数量加入到24孔板上，然后每隔一天就更换培养基，培养至形成单层(momolaye)，并用于实验。用25℃的PBS缓冲溶液对完全形成单层的HT-29细胞清洗5次，然后加入不含抗生素的0.5mL的PPM11640培养基。
将植物乳杆菌CJLP56分别以1.0×109cfu/mL的浓度悬浮于RPMI后，然后接种到上述孔板上，然后在有5％CO2条件下，于37℃下培养2小时。培养结束后，为了去除没有附着的乳酸菌，以及为了确定该菌对清洗的附着力，在200rpm转速下搅拌3分钟，同时用PBS缓冲溶液清洗3次。清洗结束后加入0.2％胰蛋白酶-EDTA，从而除去附着的细胞，然后利用蛋白胨(peptone)水，采用连续稀释平板法涂布于MRS-琼脂(agar)上，再于37℃下培养24小时后，测定了菌数。
另外，为了确认一部分附着，在70％乙醇中浸泡1天后，将完全灭菌的盖玻片附着在陪替氏培养皿的底面，对HT-29细胞进行培养，然后加入和上述等量的乳酸菌进行了实验。将没有被清洗掉而附着于HT-29细胞上的乳酸菌株进行干燥后进行Gram染色，在光学显微镜下观察，从而测定了菌数。对沙克乳杆菌CJLS118及鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)也做了同样的比较实验。
结果如图3所示。图3为示出植物乳杆菌CJLP56的肠上皮细胞附着力实验结果的图表。
根据图3的结果，植物乳杆菌CJLP56与作为益生菌在商业上熟知的鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)和沙克乳杆菌CJLS118相比，在经过24小时后，显示出了优异的肠上皮细胞附着力，植物乳杆菌CJLP56的肠上皮细胞附着力显著高于沙克乳杆菌CJLS118。这样的结果显示出了本发明的新型菌株可以附着于肠上皮细胞上并改善肠内环境。
实施例4：植物乳杆菌CJLP56菌株的安全性评价
为了对实施例1中分离得到的菌株进行安全性评价，根据韩国生物企业协会的组合标准中提出的安全性评价试验方法进行了溶血现象检测、明胶液化反应检测、有害代谢产物(氨)生成确认、以及苯丙氨酸脱胺检测。
结果如下表2所示。
表2植物乳杆菌CJLP56的安全性评价结果
  菌株   项目
  明胶液化反应检测   苯丙氨酸脱胺   溶血性实验结果   氨生成
  CJLP56   阴性   阴性   α-溶血安全   阴性
根据上述结果，植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)对于明胶液化反应，有害代谢产物(氨)生成，苯丙氨酸脱胺的生成为阴性，对于溶血现象检测中判定为与病原性无关的α-溶血。并且还确认了植物乳杆菌CJLP56是能够用于人体的安全的菌株。
实施例5：对小鼠脾细胞进行处理后的IL-12生成促进力的评价
用植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarum CJLP56)菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理时，为了对作为诱导Th1反应的细胞因子IL-12的生成促进力进行评价，参考Fujiwara等(Fujiwara等，针对花粉过敏患者的免疫调节实施的副干酪乳杆菌KW3110双盲试验，国际变态反应学，2005年，第54卷，第143-149页)(Fujiwara et.al.A double-blind trial of Lactobacillusparacasei strain KW3110 administration for immunomodulation inpatients with pollen allergy，Allergology International，2005，volume 54，pages 143-149)和Fujiwara等(Fujiwara等，乳酸菌的抗过敏作用表现为为对双Th1/Th2细胞因子表达和平衡造成影响的菌株依赖性以及介导，国际变态反应学与免疫学文献，2004年，第135卷，第205-215页)(Fujiwara et.al.，The anti-allergic effects of lactic acid bacteria arestrain dependent and mediated by effects on both Th1/Th2 cytokineexpression and balance，International Archives of Allergy andImmunology，2004，Volume135，pages 205-215)的方法，进行了如下实验。
免疫(immunization)是购入6周龄雌性Balb/c小鼠5只，将13mg/mL的1.538mL羟化物(Sigma)溶液、10mg卵清蛋白、以及0.4615mL的PBS混合均匀后，在常温下反应20分钟，将得到的混合液按照每只小鼠0.2mL(1mg OVA+2mg alum)的用量注射到小鼠腹腔内，在第6天按照相同的用量再次进行腹腔注射以加强(boosting)。在第13天时将小鼠处死，取出脾脏，将由脾脏中得到的100μL(4×106细胞/mL)脾细胞(splenocyte)和50μL试验对象菌的死菌、以及50μL(4mg/mL)的卵清蛋白加到细胞培养孔板(cell culture well plate)上，在DMEM-10培养基中，于10％CO2培养箱中培养7天。培养7天后，取上清液用IL-12ELISA试剂盒进行了分析(Biosource)，从而确定了IL-12的浓度。
上述试验对象菌的死菌是按照下面的方法得到的。
试验对象菌是被接种到MRS液体培养基(Difco)中，于37℃下培养24小时，然后在13,000rpm转速下离心分离1分钟得到的菌体用生理盐水清洗2次后，仅取了菌体。为了进行动物细胞株接种试验，将回收的菌体放入到与原来培养液体积相同体积的灭菌蒸馏水中，于100℃下加热10分钟，在13,000rpm转速下离心分离1分钟后进行回收，然后以适当的量稀释到DMEM培养基内，从而得到以细胞株培养液体积为基准的50μg/mL和5μg/mL浓度的菌体。作为试验对象菌使用了植物乳杆菌CJLP56，对鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)，干酪乳杆菌(KCTC3109)，沙克乳杆菌CJLS118(KCTC13416)也进行了相同的实验，并且对其结果进行了比较。
利用上述IL-12ELISA试剂盒的IL-12分析是按照IL-12ELISA试剂盒所提供的提示事项进行的实验，对ELISA reader中测定的O.D.值进行测定，根据对试剂盒所提供的IL-12对照样品的校准公式(calibration equation)换算出了IL-12生成量。在图4中示出了得到的测定结果。
图4为将植物乳杆菌CJLP56菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理，然后对作为诱导Th1反应的细胞因子IL-12的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较而示出的图表。
根据图4的结果，显示出与其它乳酸菌相比，植物乳杆菌CJLP56对作为诱导Th1反应的细胞因子IL-12的生成具有显著的促进作用。并且，能够确认本发明的植物乳杆菌CJLP56在偏向于Th2反应的小鼠中，有效地诱导了Th1反应。
实施例6：对小鼠脾细胞进行处理后的IL-4的生成抑制力的评价
用植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarum CJLP56)菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理时，为了确认对作为诱导Th2反应的细胞因子IL-4的生成的抑制效果，采用上述实施例5的方法，除了用IL-4试剂盒(Biosource)代替IL-12试剂盒外，其它条件均相同的条件下进行了实验。测定的结果如图5所示。
图5为将植物乳杆菌CJLP56菌株对加入卵清蛋白而偏向于Th2反应的小鼠脾细胞进行处理，然后对作为诱导Th2反应的细胞因子IL-4的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较而示出的图表。
根据图5的结果，能够确认植物乳杆菌CJLP56通过抑制诱导Th2反应的细胞因子IL-4，从而在偏向于Th2反应的小鼠脾细胞中具有抑制Th2反应的效果。
实施例7：确认在巨噬细胞以及树突细胞中诱导Th1淋巴细胞分化的细胞因子IL-12p40以及IL-18的表达和抑制Th1淋巴细胞分化的细胞因子IL-10的表达的实验
巨噬细胞和树突细胞等抗原呈递细胞(antigen presenting cell，APC)生成IL-12以及IL-18，从而诱导Th0淋巴细胞向Th1淋巴细胞分化，另一方面，生成IL-10，从而抑制向Th1淋巴细胞分化。为了评价本发明的乳酸菌对于巨噬细胞以及树突细胞的IL-12、IL-10、IL-18生成的影响，进行了下述实验。
将试验对象菌以5×107/mL的浓度对作为巨噬细胞株的RAW264.7进行了处理，在37℃、10％CO2的条件下进行了48小时培养，然后取培养基，采用ELISA方法测定了IL-12p40以及IL-10的浓度。并且，对于树突细胞株JAWSII也采用同样的方法，接种了试验对象菌并进行了培养，然后取培养基测定了IL-12p40以及IL-10的生成量。
使用植物乳杆菌CJLP56作为上述试验对象菌，作为阳性对照组使用了脂多糖，对于鼠李糖乳杆菌GG(KCTC5033)、干酪乳杆菌(KCTC3109)、沙克乳杆菌CJLS118(KCTC13416)也进行了相同的实验，并且对其结果进行了比较。
根据上述ELISA方法的浓度测定采用了能够测定IL-12浓度的IL-12p40试剂盒(BD Biosciences，USA)、以及能够测定IL-10浓度的IL-10试剂盒(BD Biosciences，USA)进行了测定，并且是按照制造公司的指导而进行的。并且，图6和图7中分别示出了测定的结果。
图6示出了将植物乳杆菌CJLP56菌株对巨噬细胞株RAW264.7进行处理后，用ELISA法对IL-12以及IL-10的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
图7示出了将植物乳杆菌CJLP56菌株对树突细胞株JAWSII进行处理后，用ELISA对IL-12以及IL-10的浓度进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
根据图6及图7的结果可知，植物乳杆菌CJLP56生成诱导Th1分化的细胞因子IL-12，并且能够确认抑制Th1分化的细胞因子IL-10的生成与IL-12相比显著要少，与其它乳酸菌相比显著增加IL-12的生成。
并且，为了确认在基因水平(level)上的IL-12及IL-18的生成，将试验对象菌以5×107/mL的浓度对作为巨噬细胞株的RAW264.7进行了处理，在37℃、10％CO2的条件下进行了6小时培养，然后提取总的RNA，采用RT-PCR法测定了IL-12和IL-18mRNA的生成量。对作为树突细胞株的JAWSII也采用了同样的方法将试验对象菌进行接种及培养后，提取RNA，采用RT-PCR法测定了IL-12和IL-18mRNA的生成量。
然后分别在图8及图9中示出了测定的结果。
图8示出了将植物乳杆菌CJLP56菌株对巨噬细胞株RAW264.7进行处理后，用RT-PCR法对IL-12p40及IL-18mRNA的表达进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
图9示出了将植物乳杆菌CJLP56菌株对树突细胞株JAWSII进行处理后，用RT-PCR法对IL-12p40及IL-18mRNA的表达进行测定的结果与其它乳酸菌进行比较的图表。
根据图8及图9的结果，可知植物乳杆菌CJLP56会促进mRNA的生成，所述mRNA对诱导Th1分化的细胞因子IL-12及IL-18的生成进行指示，特别是证明了对于促进IL-12mRNA的表达方面，与其它乳酸菌相比效果要显著优异。
实施例8：制备含有植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)的益生菌剂
为了将上述实施例1中鉴定的益生菌植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarum CJLP56)应用于医药品、食品、饲料、添加剂或化妆品的原料中，并且大量生产，因此将其经冷冻干燥后制成了益生菌剂。
为了生成菌，使用25％NaOH溶液将MRS液体培养基(Difco)的pH值调节为6.0，并且于37℃下培养约18小时，然后进行离心分离回收了菌体。使用5％的糊精和10％的脱脂牛奶作为冷冻保护剂，将回收的菌体于-40℃下进行冷冻后，在37℃下将干燥的菌体用搅拌器研磨后将其打碎，并且将打碎的活菌配成作为目标的菌数，为了保管，将其和适量的葡萄糖、乳糖、脱脂牛奶等赋形剂进行混合放入密封的铝袋中进行了包装。
这样制备的益生菌剂可以和作为饲料原料的谷粉进行混合用作饲料用益生菌剂，或者是与载体或添加剂等混合，用作片剂、胶囊等的药品，以及用作食品用益生菌剂，或者在用于化妆品的原料中混合一定量，从而可以根据本技术领域常规方法，应用于药品、食品、饲料、化妆品等多种领域。

Claims (9)

1.植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)KCTC11402BP。
2.含有植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)KCTC11402BP的用于预防或治疗肠道疾病的组合物。
3.含有植物乳杆菌CJLP56(Lactobacillus plantarumCJLP56)KCTC11402BP的用于增强免疫力的组合物。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，其用于预防或治疗由Th2反应过剩引起的Th1/Th2失衡而诱发的免疫疾病。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述免疫疾病选自过敏性疾病、特异性反应疾病、癌症以及自身免疫疾病。
6.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其特征在于，其为药品。
7.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其特征在于，其为食品。
8.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其特征在于，其为饲料或饲料添加剂。
9.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其特征在于，其为化妆品。
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