CN102283116A - 铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法 - Google Patents

铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法。包括以下步骤：按常规方法进行铁皮石斛杂交授粉；对铁皮石斛种子进行非共生萌发培养；种子类原球茎(PLBs)在1/2MS培养基上进行诱导分化；将分化的类原球茎接种在PP塑料袋内，进行成苗分化培养；培养3-4个月后即可进行成苗移栽。本发明为一般农村塑料大棚，设施农业生产增加一种新品种。铁皮石斛种苗实现了工厂化批量生产。靠自然加温和光照，不旦减少了碳排放，而且不会二次感染。塑料袋悬挂在温室内，充分利用了有效空间，每亩温室大棚可生产铁皮石斛种苗在百万级以上，具有十分可观的经济效益和社会效益。

Description

铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)又称黑节草，是一种附生、多年生草本兰科植物。主要分布在我国云南、贵州、广西、台湾等地。年平均气温12-18度，相对湿度60-75％，林间透光度60％左右，年降雨量1100-1500mm。生长在常绿阔叶林中，附生于树干上或石灰岩上。野生铁皮石斛种子成活率极低，生长缓慢，从种子萌发到进入商品阶段需5-7年才能采收，造成其产量很少。近年，由于市埸供不应求，人们过度采挖，再加上环境恶化，铁皮石斛自然资源已日趋枯竭。于是应用组织培养技术来生产铁皮石斛，成为新热点。铁皮石斛，加工后俗称铁皮枫斗，为传统名贵中药材，具有增强免疫力、抗肿瘤、滋阴养胃，清热生津、润肺止咳之功效。近代药理药化研究表明，铁皮石斛药物化学成分主要是多糖类、生物碱和抗肿瘤活性物质。多糖含量达18.2％-22.27％，这些多糖类是免疫增强剂，具有增强T细胞及巨噬细胞免疫活性作用。铁皮石斛还含有两种抗癌菲类化合物，具有对肝癌和艾氏腹水癌细胞的抑制作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法，可以克服一般组织培养的困难，特别是为一般农村塑料大棚，设施农业生产增加一种新品种。它是采用铁皮石斛种子非共生萌发培养，在种子类原球茎(PLBs)诱导分化后，将成苗分化的原球茎从培养瓶中转移到PP塑料袋中，塑料袋封口后，悬挂在温室大棚内，靠自然加温和光照，不旦减少了碳排放，而且不会二次感染(塑料袋是封口的)。塑料袋悬挂在温室内，充分利用了有效空间，实现了铁皮石斛种苗批量化生产，每亩温室大棚可生产铁皮石斛种苗在百万级以上。
本发明提供的一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法包括以下步骤：
按常规方法进行铁皮石斛杂交授粉；对铁皮石斛种子进行非共生萌发培养；种子类原球茎(PLBs)在1/2MS培养基上进行诱导分化；将分化的类原球茎接种在PP塑料袋内，进行成苗分化培养；培养3-4个月后即可进行成苗移栽。
本发明提供的一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法包括以下步骤：
1)在铁皮石斛开花(每年3-4月份)按常规方法进行人工杂交授粉(自花或同株异花)，授粉后的铁皮石斛要加强管理，注意通风，半透光，保持30-50％的湿度，温度控制在15-35℃，防止落花落果。
2)铁皮石斛种子非共生萌发培养，取授粉后6-8个月的铁皮石斛蒴果，在超净工作台内用75％酒精消毒1分钟，再用0.1％升汞消毒10分钟，无菌水冲洗5遍，用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，将种子接种在1/2MS液体培养基中，25℃条件下间歇振荡培养，进行种子非共生萌发培养。
3)铁皮石斛种子进行非共生萌发培养30天后，将萌发的铁皮石斛种子转入1/2MS固体培养基上，在光周期14小时/天，光强度3000Lux，室温25℃条件下继续培养，进行原球茎诱导与分化培养。
4)当铁皮石斛种子类原球茎(PLBs)分化后，在超净工作台内转接至PP塑料袋内，用封口机将袋口封死，严防漏气。每袋装入20-25毫升1/2MS固定培养基，接种10-15棵幼苗，将接种好的塑料袋悬挂在温室内，在光周期14小时/天，光照强度3000Lux，室温25℃条件下，继续培养，至铁皮石斛成苗形成。
5)成苗移栽，待铁皮石斛种苗在塑料袋内生长3-4个月，生长出4-6片叶，新根旺盛时，即可将塑料袋剪开，用清水轻轻地洗净培养基，将苗略吹干后，移栽在重量比为1∶1∶1的兰花土、火烧土和椰糠基质上，放在阴凉、通风处，按常规铁皮石斛栽培条件，进行精心管理，特别要注意病虫害的防御。
本发明提供了一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法可以克服一般组织培养的困难，特别是为一般农村塑料大棚，设施农业生产增加一种新品种。它是将铁皮石斛成苗分化的原球茎从培养瓶中转移到PP塑料袋中，塑料袋封口后，悬挂在温室大棚内，靠自然加温和光照，不旦减少了碳排放，而且不会二次感染(塑料袋是封口的)。塑料袋悬挂在温室内，充分利用了有效空间，实现了铁皮石斛种苗批量化生产，每亩温室大棚可生产铁皮石斛种苗在百万级以上，具有十分可观的经济效益和社会效益。
附图说明
图1：铁皮石斛花。
图2：铁皮石斛蒴果。
图3：铁皮石斛种子非共生萌发培养。
图4：铁皮石斛种子原球茎诱导。
图5：成苗分化培养。
图6：塑料袋悬挂式种苗培养。
图7：塑料袋悬挂式种苗培养。
图8：塑料袋中的铁皮石斛种苗，10-15棵/袋。
图9：塑料袋培养的铁皮石斛种苗移栽在苗床上后的生长情况。
具体实施方式
本发明突出的特点和显著进步可以从下述实例中得以体现，但不会对本发明作任何限制。
实施例
2005年4月从云南省文山引入二倍体铁皮石斛(2n＝38)，如图1，于当年5月20日进行同株异花人工授粉，授粉后的铁皮石斛在25℃，50％自然光照条件下，至2005年11月22日，如图2，剪下蒴果，在超净工作台内，先用75％酒精消毒1分钟，再用0.1％升汞消毒10分钟，无菌水冲洗5遍，用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向切开，将铁皮石斛种子接种在1/2MS液体培养基中，25℃条件下振荡培养，约20天后，种子全部萌发，如图3。然后转入1/2MS固体培养基上进行原球茎诱导培养，如图4。图5显示，当种子类原球茎分化后，将其转接种在PP塑料袋中，每袋接种10-15棵苗，如图8，用封口机将袋口封死，严防漏气。然后，将接种好的塑料袋分层悬挂在温室空间内，如图6-7。至2006年5月，接种在PP塑料袋内的铁皮石斛种苗，生长良好，可进行室外移栽。上述在PP塑料袋中生产的铁皮石斛种苗，移栽在苗床上以后，苗生长健壮，整齐一致，如图9所示。
本发明以普通塑料大棚温室为生产厂房，靠自然加温，室温保持在15-35℃，以遮阴网控制50％光照。铁皮石斛种苗接种在PP塑料袋内，每袋接种10-15棵苗。每立方米(m3)可悬挂80袋，每亩温室大棚以50％可利用面积，2米高可利用空间计算，即有667m3，可悬挂667×80袋/m3＝53360袋，可生产533600-800400棵/亩铁皮石斛种苗。

Claims (7)

1.一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法，其特征在于包括以下步骤：
按常规方法进行铁皮石斛杂交授粉；对铁皮石斛种子进行非共生萌发培养；种子类原球茎在1/2MS培养基上进行诱导分化；将分化的类原球茎接种在PP塑料袋内，进行成苗分化培养；培养3-4个月后进行成苗移栽。
2.一种铁皮石斛种苗简易化工厂生产方法，其特征在于包括以下步骤：
1)在铁皮石斛开花按常规方法进行铁皮石斛人工杂交授粉，授粉后的铁皮石斛要加强管理；
2)铁皮石斛种子非共生萌发培养，取授粉后6-8个月的铁皮石斛蒴果，在超净工作台内用75％酒精消毒1分钟，再用0.1％升汞消毒10分钟，无菌水冲洗5遍，用无菌解剖刀沿蒴果纵轴方向将蒴果切开，将种子接种在1/2MS液体培养基中，25℃条件下间歇振荡培养，进行种子非共生萌发培养；
3)铁皮石斛种子进行非共生萌发培养30天后，将铁皮石斛种子转入1/2MS固体培养基上继续培养，直至成苗形成；
4)当铁皮石斛种子类原球茎(PLBs)分化后，在超净工作台内转接至PP塑料袋内，将袋口封死，每袋装入20-25毫升1/2MS固定培养基，接种10-15棵幼苗，将接种好的塑料袋悬挂在温室内继续培养。直至成苗移栽；
5)成苗移栽，待铁皮石斛种苗在塑料袋内生长3-4个月，生长出4-6片叶，新根旺盛时，将塑料袋剪开，用清水轻轻地洗净培养基，将苗略吹干后，移栽，放在阴凉、通风处，按常规铁皮石斛栽培条件，进行精心管理。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤1)所述的杂交授粉是自花或同株异花授粉。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤1)所述的管理条件为：通风，半透光，保持30-50％的湿度，温度控制在15-35℃，防止落花落果。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤3)所述的继续培养条件为：在光周期14小时/天，光强度3000Lux，室温25℃。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤4)所述的继续培养条件为：在50％自然光照，温度15-35℃条。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤5)所述的移栽是移栽在重量比为1∶1∶1的兰花土、火烧土和椰糠基质上。
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