CN102260246B - 低毒性cb1受体抑制剂、其制备方法及其在制备戒毒、减肥或治疗糖尿病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
低毒性CB1受体抑制剂、其制备方法及其在制备戒毒、减肥或治疗糖尿病药物中的应用。结构式为：R1为1，5-双取代苯基-4-R7-吡唑-3-基，如(II)：A2、A4为氯；B4为氯或溴；A3、A5、A6为氢；B2、B3、B5、B6为氢，R7为甲基或乙基。A2-A6；B2-B6为H，F，Cl，Br或I、C1-C3烷基，C1-C3烷氧基、三氟甲基或硝基；B4或是苯基；吡唑环3位酰胺部分为氨基酸；R7为氢或C1－C5烷基；R2是H或烷基；R4、R5是H或烷基；本发明具有与利莫那般相当的体外活性，而毒性比利莫那般明显降低，有望克服其它CB1受体抑制剂所表现出的毒性和副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种低毒性的CB1受体抑制剂、这种低毒性的CB1受体抑制剂的制备方法、以及这种低毒性的CB1受体抑制剂在制备戒毒药物中的应用、在制备减肥药物中的应用，以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。
背景技术
大麻素受体抑制剂的医疗作用涉及多个领域，诸如免疫系统、中枢神经系统、心血管系统、胃肠道系统和内分泌系统。本世纪初，关于CB受体(cannabinoid receptor)抑制剂的研究广泛开展并获得可喜的成果，发现吡唑-3-羧酸的酰胺衍生物对于CB1受体具有很高的选择性抑制活性。2006年6月法国Sonofi-Aventis公司的产品利莫那般(Rimonabant)正式上市，引起药学界和药物市场的轰动[1，2]。它可被用于治疗涉及大麻酯受体的各种疾患，诸如糖尿病、肥胖，烟瘾或药物依赖(毒瘾)。但不久即发现它的毒性太强，主要是导致抑郁，终于在2008年10月从欧盟下市。
除利莫那般外，美国、法国、印度、韩国、匈牙利等多家企业发现了总共10个以上的高活性化合物，Sonofi-Aventis公司有溴乙那班(Surinabant)和Drinabant，辉瑞的奥特那班(Otenabant)和默克公司的它拉那班(Taranabant)甚至进入过三期临床。但由于遭遇到利莫那班同样的困扰，这些研究大多于2008年下半年中断。国内的“魔力克”公司以吡啶亚甲基或其N-氧化物代替利莫那班的哌啶环，发明了“魔力那般”(MJ15)。它对CB1受体的抑制活性IC50与利莫那班(6nM)相当，正处于临床前试验阶段。但从结构看，因其芳性增加，作者担心其毒性可能甚至比利莫那班更强。
总体而言，由于毒性问题难以解决，当前世界各国对于CB1受体抑制剂的研究趋於沉寂。
参考文献：
[1]Pyrazole derivatives，method of preparing them and pharmaceutical compositions inwhich they are present；Francis Barth；Pierre Casellas，et al；Sanofi，Paris，France；
USP 5,624,941.
[2]Pyrazole-3-carboxamide derivatives，process for their preparation and pharmaceuticalcompositions in which they are present；Francis Barth；Pierre Casellas，et al，Sanofi，Paris，France；USP 5,462,960.
发明内容
本发明的目的是提供一种新的低毒性的CB1受体抑制剂，以及这种低毒性的CB1受体抑制剂在制备戒毒药物中的应用、在制备减肥药物中的应用，以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。本发明的CB1受体抑制剂可用于戒毒、减肥及糖尿病治疗，具有与利莫那般相当的体外活性，而毒性比利莫那般明显降低，有望克服其它CB1受体抑制剂所表现出的毒性和副作用。
该低毒性的CB1受体抑制剂的结构式如下：
结构式(I)
其中，R1为1，5-双取代苯基-4-R7-吡唑-3-基，如结构式(II)所示：
结构式(II)
在结构式(II)中：
A2，A3，A4，A5，A6；B2，B3，B4，B5，B6彼此相同或不同，为H，F，Cl，Br，或者I原子、C1-C3烷基，C1-C3烷氧基、三氟甲基或硝基；B4也可以是苯基；
在结构式(II)中，A2，A3，A4，A5，A6；B2，B3，B4，B5，B6这些取代基中，至少有一个是氯原子或者甲基；B4尤其是氯或者溴；A2和A4尤其是氯。
该抑制剂吡唑环3位的酰胺部分为氨基酸，或是氨基酸羧基的不同形式的酯、酰胺、或杂环形式的隐性羧基；
结构式(I)中吡唑环4位上的取代基R7为氢或C1-C5烷基，尤其是甲基或乙基；烷基可以是直链或支链；
在结构式(I)中，R2是H、C1-C5直链或支链的烷基；
在结构式(I)中，R3可以是，但不仅限于H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2SH、CH(OH)CH3、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2C6H5、CH2C6H4(2-Cl)、CH2C6H4(3-Cl)、CH2C6H4(4-Cl)、CH2C6H3(2，4-二Cl)、CH2C6H3(3，4-二Cl)、CH2C6H4(4-OH)、CH2C6H4(2-OCH3)、CH2C6H4(4-OCH3)、CH2C6H3(2，4-二OCH3)、CH(CH3)CH2CH3、CH2CH2CH2CH2NHCOR1、CH2CH(CH3)2、CH2CH2SCH3、CH2CONH2、CH2CH2CONH2，或是
R4和R5是H或者C1至C10直链或支链的烷基；烷基中的任何一个碳上的氫可以被取代，取代的基团可以是卤素、羟基、巯基或者磺酸基；R4与R5可以彼此相同或不同。
在结构式(I)中，当R3不等于H时，酰胺部分的氨基酸的绝对构型可以是R，可以是S，也可以是此二者的外消旋混合物。
在结构式(I)中，n可以等于0(零)、1、2、3、4或5；
在结构式(I)中，R6是OR8或者NR9R10。R8可以是H、(C1-C16)直链、支链或环状的烷基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基；在NR9R10中，R9与R10可以是H、C1-C6直链、支链或环状的烷基。在同一分子内，R9与R10可以相同或不同。
其中，当R6等于OR8，而R8等于H时，本发明包括可能作为药用的，由该酸与正离子反应而产生的盐，诸如钠、钾、镁、钙，或各种季铵正离子所形成的盐。
在结构式(I)中， 也可以是由羧酸衍生出的杂环，包括 式中的R11为氢或C1-C6直链、支链或环状的烷基。
本申请所述的化合物(I)还包括其他各种可能的盐类，所述的其他可能的盐类包括，但不限于盐酸盐、溴氢酸盐、硫酸盐、硫氢酸盐、二氢磷酸盐、甲磺酸盐、硫酸单甲酯盐、顺式丁烯二酸盐、反式丁烯二酸盐、草酸盐、萘-2-磺酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、羟乙基磺酸盐、对甲苯磺酸盐，或3，5-二甲基-苄基磺酸盐、以及与卤烷，特别是C1-C10烷基的氯化物、溴化物、或碘化物形成的季铵盐。
结构式(I)所代表的CB1受体抑制剂还包括：将其中的某种酯与其相应的游离酸或者酸的盐所组成的复合物，或者与符合结构式(I)的其它游离酸或者酸的盐所组成的复合物，用于治疗与CB1受体相关的疾患。酯与游离酸或者酸的盐二者的比率，根据治疗的重点可予调整。
总之，与世界各国现已发表的各种CB1受体抑制剂相比，作为分子的一部分，本发明的结构中具有通过酯化、酰胺化或其它方式引入的、天然的或合成的氨基酸基元。
本发明所述的低毒性的CB1受体抑制剂，除要求结构式(I)所表示的化合物本身而外，还要求它们的溶剂化物。
本申请推荐的优化方案，即应该优先考虑的是：A2，A4，和B4这三个取代基为氯原子或溴原子的化合物。
完成本申请第2个发明任务的方案是：上述低毒性的CB1受体抑制剂的制备方法：
首先将氨基酸通过氯化亚砜和甲醇甲酯化，得到氨基酸甲酯的盐酸盐，再与5-(4-卤代苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-烷基-1H-吡唑-3-羧酸酰氯(II)缩合，即获得产物甲酯(III)；酯经过碱水解得到相应的游离酸(IV)。在EDC.HCl、HOBT的催化下，该酸与醇反应得到酯(V)；或与胺反应则得到酰胺(VI)。如反应式1所示：
反应式1：产物甲酯、游离酸、其他形式的酯类以及酰胺的制备
为了制备其它形式的酯(V)，也可以首先将氨基酸与相应的醇反应转化为所期待的氨基酸酯(VII)，然后与上述酰氯(II)缩合，如反应式2所示。中间体(VII)的制备方法可以与甲酯相同；可以在酸(如对甲苯磺酸水合物)催化下将氨基酸与相应的醇利用分水器加热回 流，脱水酯化。也可以从N-Boc氨基酸出发，在EDC盐酸盐、HOBT、DMAP的催化下与醇缩合后再脱去保护基Boc。
反应式2：制备酯类的其它方法
如将前述的氨基酸甲酯(I)加以氨解，所产生的氨基酸酰胺(VIII)与酰氯(II)缩合，则得到氮上无取代基的酰胺(IX)，如反应式3：
反应式3：制备氮上无取代基的酰胺。 将得到的酰胺以三氯氧磷处理就产生腈，再与叠氮化钠在溴化锌的存在下反应，得到羧酸的四氮唑衍生物；用碘甲烷甲基化，引入甲基，如反应式4：
反应式4：从酰胺制备杂环衍生物
完成本申请第3个发明任务的方案是：以上所述的低毒性的CB1受体抑制剂在制备戒毒药物中的应用。
完成本申请第4个发明任务的方案是：以上所述的低毒性的CB1受体抑制剂在在制备减肥药物中的应用。
完成本申请第5个发明任务的方案是：以上所述的低毒性的CB1受体抑制剂在制备治疗糖尿病药物中的应用。
本发明的作用原理是：
鉴于现有的CB1受体抑制剂因毒性过高而被淘汰的现实，本发明的战略，是寻求此类药物的药效与其毒性的分离；以最高的成药性，而非最高的活性为追求目标；甚至可以容忍药效在一定程度上的牺牲。为此，发明者将各种氨基酸以酯的形式引入分子，水解成游离羧酸后，再从羧酸衍生出不同形式的酯、酰胺、或杂环形式的隐性羧基，由此提高化合 物的亲水性，同时增加氢键的供体和/或受体数。一般说来，亲水基团本身就可能使药物毒性下降；它又必然降低分子的血脑屏障通透率，使药物较少进入中枢神经系统。这些因素应可弱化引起抑郁的副作用。再则，因为抑制剂对于外周神经和中枢神经系统中CB1受体的药理作用并不完全相同，本发明的化合物可能更多地作用于外周和胃肠道神经系统，将显示某种特色，首先就是可能表现出更好的减肥效果。
将血脑屏障通透率较高的酯与血脑屏障通透率较低的游离酸按不同的比例复合使用，则有可能选择性地重点作用于中枢系统或者外周神经系统，从而产生不同的药理效果。
在多数情况下，引入氨基酸的同时也就引入了不对称中心。发明者认为，既然生命本身就是手性的，具有手性的分子将更加可能拥有选择性的药效。
纵观迄今所发现的高活性CB1受体抑制剂，可以看出此类分子中的任何一个部位——它们可以被置换或修饰——都并不具备很强的专属性，此类分子的共同特征正在于紧密的分子本身。通过引入不同的氨基酸，作者对分子的“紧密度”予以调节，作者期待这也将有助于促成药效与毒副作用的分离。
氨基酸的引入还可能提高化合物的生物利用度。
生物活性
本发明合成了5-(4-卤代苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-烷基-1H-吡唑-3-羧酸或其酰氯与天然或合成氨基酸的缩合物以及这些缩合物的羧酸衍生物，包括甲酯、其它形式的酯、酰胺、游离酸、以及杂环形式的隐性羧基化合物。经“国家新药筛选中心”和美国相关机构测定，多数活性极高。
不仅活性高，这些化合物的毒性也非常低。以上述表列化合物中的ZH-303SM为例，当以5,000mg/Kg、1,670mg/Kg、557mg/Kg剂量对小鼠作急性毒性试验时，即使在最高剂量(5,000mg/Kg，极限剂量)下，也无小鼠死亡。而作为对照的利莫那般组，在上述高剂量下，小鼠于5天内全部死亡，在中等剂量下部分死亡。
附图说明
图1为化合物在CB1受体上对CP55940的反应率。
具体实施方式
实施例1：2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-4-甲巯基丁酸甲酯(ZH-301SM)及其相应的酸(ZH-301SA)。
A)L-蛋氨酸甲酯盐酸盐
在冰-盐浴冷却下，将新蒸馏的SOCl2 7.2ml(98.7mmol)缓慢滴加到100ml CH3OH中，温度控制在-10℃以下，滴加完毕后继续搅拌1小时；向其中加入L-蛋氨酸8.19g(54.9mmol)，升温回流1小时；减压蒸除溶剂至干；再加入50ml 2M HCl的CH3OH溶液，回流1小时后，减压浓缩、真空干燥，得8.5g白色固体。收率77.6％，mp，147.9～148.2℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δ：2.05(s，3H)；2.2(m，2H)；2.62(m，2H)；3.80(s，3H)；4.25(dd，1H)。
B)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-4-甲巯基丁酸甲酯(ZH-301SM)
在氮气保护下，将5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸酰氯(2.0g，5mmol，1eq.)溶于20mlCH2Cl2，冷却至0℃；向其中缓慢滴加L-蛋氨酸甲酯盐酸盐(1.20g，6mmol)和Et 3N(1.52g，15mmol)在20mlCH2Cl2中的溶液，控制反应温度在0℃左右。滴加完毕即结束反应；依次用水和饱和NaCl溶液洗涤；以无水Na2SO4干燥，减压浓缩至油状，真空干燥。经柱层析纯化(洗脱剂：EA∶Hex＝1∶4)得2.11g固体，收率80.2％，mp，79.1～81.0℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.10(m，1H)；2.13(s，3H)；2.28(m，1H)；2.38(s，3H)；2.62(m，2H)；3.80(s，3H)；4.95(m，1H)；7.07-7.46(m，7H)。
C)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-4-甲巯基丁酸(ZH-301SA)
将2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-4-甲巯基丁酸甲酯(ZH-301SM)(1.35g，2.6mmol)和2M的KOH甲醇溶液(3.9ml，7.8mmol)加入 到50mlCH3OH中，室温下搅拌2小时后，减压蒸除溶剂。向剩余物中加入40mlH2O，用2×40mlEtOAc洗涤，水相用6M HCl酸化至PH2；室温下搅拌2小时，然后用5×10mlEA提取，提取液经无水Na2SO4干燥、减压浓缩至油状；真空干燥得固体1.13g，收率86.26％，mp，103.1～104.6℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.15(s，3H)；2.16(m，1H)；2.32(m，1H)；2.35(s，3H)；2.66(m，2H)；4.91(m，1H)；7.07-7.51(m，8H)。
实施例2：2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-4-甲巯基丁酸甲酯(ZH-301RM)及其相应的酸(ZH-301RA)。
制备方法同实施例1，以D-蛋氨酸为原料。
实施例3：2-(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯(ZH-302SM)及其相应的酸(ZH-302SA)。
A)L-酪氨酸甲酯盐酸盐
方法同例1A，不同之处是以L-酪氨酸代替L-蛋氨酸，收率79.9％，mp，188.6～189.0℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δppm：3.13(dm，2H)；3.75(s，3H)；4.3(dd，1H)；6.70(d，2H)；7.10(d，2H).
B)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯(ZH-302SM)
方法同例1B，不同之处在于L-酪氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率78.6％；mp，121.1～122.1oC；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.38(s，3H)；3.15(m，2H)；3.75(s，3H)；5.03(m，1H)；5.50(bs，0H)；6.73(d，2H)；7.05(m，3H)；7.30(m，4H)；7.45(m，2H)。
C)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)丙酸(ZH-302SA)
方法同例1C，不同之处在于用ZH-302SM代替ZH-301SM，收率74.10％，mp，146.4～147.9℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.33(s，3H)；3.12(m，2H)；4.99(bs，0H)；6.70(d，2H)；7.05(m，3H)；7.3(m，4H)；7.40(s，1H)；7.50(m，1H)。
实施例4：2-(R)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]--3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯(ZH-302RM)及其相应的酸(ZH-302RA)。
制备方法同实施例3，以D-酪氨酸为原料。
实施例5：2-(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸甲酯(ZH-303SM)及其相应的酸(ZH-303SA)。
A)L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-苯丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率87.9％，mp，159.0～160.2℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δppm：3.20(dm，2H)；3.78(s，3H)；4.36(m，1H)；7.2-7.4(m，5H)。
B)2-(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸甲酯(ZH-303SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率82.4％；mp，112.2.～116.1℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.38(s，3H)；3.25(m，2H)；3.75(s，3H)；5.10(m，1H)；7.05-7.5(m，12H)。
C).2-(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸(ZH-303SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-303SM代替ZH-301SM，收率80.6％，mp，135.4～139.3℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.36(s，3H)；3.27(dm，2H)；5.04(m，1H)；7.05-7.45(m，12H)。
实施例6：2-(R)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]--3-苯基丙酸甲酯(ZH-303RM)及其相应的酸(ZH-303RA)。
以D-苯丙氨酸为原料，按照与实施例5完全相同的程序制备。
实施例7：2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸甲酯(ZH-304SM)及其相应的酸(ZH-304SA)。
A)L-色氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-色氨酸代替L-蛋氨酸，收率79.7％，mp，206.0℃～206.2℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δppm：3.30(m，2H)，3.69(s，3H)，4.30(bs，1H)，7.06-7.47(m，5H)。
B)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸甲酯(ZH-304SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-色氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率64.9％，mp，167.1～168.4℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.38(s，3H)；3.42(d，2H)；3.69(s，3H)；5.13(m，1H)；7.05-7.63(m，12H)；8.08(s，1H)。
C)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸(ZH-304-SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-304SM代替ZH-301SM收率71.8％，mp，205.9～207.1℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.37(s，3H)；3.44(m，2H)；5.08(dd，1H)；7.04-7.65(m，12H)；8.17(s，1H)。
实施例8：2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸甲酯(ZH-304RM)及其相应的酸(ZH-304RA)。
从D-色氨酸出发，按照与实施例7完全相同的程序制备。
实施例9：2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸甲酯(ZH-305SM)及其相应的酸(ZH-305SA)。
A)L-组氨酸甲酯双盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-组氨酸代替L-蛋氨酸，收率92.5％，mp，204.3～204.9℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δppm：3.39(m，2H)；3.75(s，3H)；4.42(dd，1H)；7.36(s，1H)；8.62(s，1H)。
B)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸甲酯(ZH-305SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-组氨酸甲酯双盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯双盐酸盐，收率72.6％，mp，143.2～145.3℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.36(s，1H)；3.23(d，2H)；3.75(s，3H)；5.04(m，1H)；6.83-7.50(m，9H)；7.88(d，1H)。
C)2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸(ZH-305SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-305SM代替ZH-301SM，收率70.67％，mp：167.9～169.3℃，1H-NMR(400MHz，CD3OD)δppm：2.29(s，1H)；3.50(m，2H)；4.98(bs，1H)；7.19-7.61(m，9H)；8.84(s，1H)。
实施例10：2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸甲酯(ZH-305RM)及其相应的酸(ZH-305RA)。
从D-组氨酸出发，按照与实施例9完全相同的程序制备。
实施例11：2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-巯基丙酸甲酯(ZH-306RM)及其相应的酸(ZH-306RA)。
A)L-半胱氨酸甲酯盐酸盐
在室温下，将30％HCl的CH3OH溶液30g(250mmol)和L-半胱氨酸12.1g(100mmol)投入150mlCH3OH中，升温回流4小时。减压浓缩，真空干燥，得白色固体15.2g，收率88.4％，mp，142.8～144.4℃。1H-NMR(400MHz，D2O)δppm：3.07(m，2H)；3.79(s，3H)；4.36(m，1H)。
B)2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-巯基丙酸甲酯(ZH-306RM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-半胱氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率73.4％，mp：94.3～98.1℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.38(s，3H)；3.12(m，2H)；3.83(s，3H)；5.09(m，1H)；7.07-7.44(m，7H)；7.72(d，1H)。
C)2-(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-巯基丙酸(ZH-306RA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-306SM代替ZH-301SM，收率71％。mp，137.6～139.0℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：2.34(s，3H)；3.19(m，2H)；5.03(m，1H)；7.05-7.40(m，7H)；7.81(d，1H)。
实施例12：2-(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-巯基丙酸甲酯(ZH-306SM)及其相应的酸(ZH-306SA)。
从D-半胱氨酸出发，制备程序同实施例11。
实施例13：(S)-2，6-双[5-(4-氯苯基)-1-(2-4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-己酸甲酯(ZH-307SM)及其相应的酸(ZH-307SA)
A)(S)-2，6-二氨基己酸甲酯双盐酸盐
从L-赖氨酸出发，制备程序同实施例1A，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：1.38-1.62(m，2H)；1.64-1.70(m，2H)；1.85-2.01(m，2H)；2.95(m，2H)；4.11(t，1H)。
B)(S)-2，6-双[5-(4-氯苯基)-1-(2-4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-己酸甲酯(ZH-307SM)
在氮气保护下，将5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸酰氯(4.0g，10mmol，2eq.)溶于40mlCH2Cl2，冷却至0℃；向其中缓慢滴加L-赖氨酸甲酯双盐酸盐(1.17g，5mmol，1eq)和Et3N(3.04g，30mmol)在50ml CH2Cl2中的溶液，控制反应温度在0℃左右。滴加完毕后升至室温，继续搅拌1小时。依次用水和饱和NaCl溶液洗涤；以无水Mg2SO4干燥，减压浓缩至油状，真空干燥。经柱层析纯化(洗脱液：EA∶Hex＝1∶3)得3.81g固体，收率85.8％，mp：119.1～123.5℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm：1.55(bs，2H)；1.70(bs，2H)；1.85(m，1H)；2.02(m，1H)；2.366(s，3H)；2.376(s，3H)；3.45(m，2H)；3.77(s，3H)；4.80(m，1H)；7.1-7.5(m，14H)。
C)(S)-2，6-双[5-(4-氯苯基)-1-(2-4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-己酸(ZH-307SA)
水解程序同实施例1C，收率78％；mp：128.1～129.5℃，1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.55(bs，2H)；1.70(bs，2H)；1.90(m，1H)；2.1(m，1H)；2.37(s，6H)；3.45(m，2H)；4.78(m，1H)；7.1-7.5(m，14H)。
实施例14：(R)-2，6-双[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-己酸甲酯(ZH-307RM)及其相应的酸(ZH-307RA)。
从D-赖氨酸出发，制备程序同实施例13。
实施例15：(S)-3-(2-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-308SM)及其相应的酸(ZH-308SA)。
A)L-2-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-2-氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率87.8％，mp：149.2～150.6℃。
B)(S)-3-(2-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-308SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-2-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，粗品收率103.9％，经柱层析纯化收率67.4％，mp：73.1-76.4℃；[α]D 25，-47.5°(EtOAc，C＝1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.24(s，3H)；3.24(m，1H)；3.48(m，1H)；3.75(s，3H)；5.02(dd，1H)；7.19-7.61(m，11H)。
C)(S)-3-(2-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-308SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-308SM代替ZH-301SM，收率81.0％。mp，114.5-115.9℃。[α]D 25，-24.0°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.24(s，3H)；3.18(m，1H)；3.53(m，1H)；5.00(bs，1H)；7.19-7.61(m，11H)；8.21(d，1H)。
实施例16：(R)-3-(2-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-308RM)及其相应的酸(ZH-308RA)。
A)D-2-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用D-2-氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率88.25％。
B)(R)-3-(2-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-308RM)
方法同实施例1B，不同之处在于用D-2-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替D-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率85.57％，mp：118.1-120.8℃；[α]25 D，+48.0°(EtOAc，c＝1)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.24(s，3H)；3.25(m，1H)；3.49(m，1H)；3.75(s，3H)；5.00(dd，1H)；7.19-7.62(m，11H)。
C)(R)-3-(2-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-308RA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-308RM代替ZH-301SM，收率81.2％。mp，124.1～127.9℃。[α]D 25，+25.5°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.25(s，3H)；3.19(m，1H)；3.55(m，1H)；5.02(bs，1H)；7.19-7.63(m，11H)；8.20(d，1H)。
实施例17：(S)-3-(3-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-309SM)及其相应的酸(ZH-309SA)。
A)L-3-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-3-氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率87.8％。
B)(S)-3-(3-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-309SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-3-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，粗品收率97.9％，经柱层析纯化收率82.5％，mp：118.0-119.7℃；[α]D 25，-46.0°(EtOAc，C＝1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.37(s，3H)；3.16(m，2H)；3.76(s，3H)；5.06(dd，1H)；7.07-7.45(m，11H)。
C)(S)-3-(3-氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-309SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-309SM代替ZH-301SM，收率78.9％。mp，197.3-202.1℃。[α]D 25，-13.0°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.36(s，3H)；3.21(m，2H)；5.00(bs，1H)；7.07-7.45(m，11H)。
实施例18：(R)-3-(3-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-309RM)及其相应的酸(ZH-309RA)。
从(R)-3-氯苯基丙氨酸出发，合成路线和制备程序同实施例16。
实施例19：(S)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-310SM)及其相应的酸(ZH-310SA)。
A)L-4-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-4-氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率94.87％。mp，200.3～201.0℃
B)(S)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-310SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-4-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率76.8％，mp，153.1-153.7℃；[α]25 D＝-24.5°(EtOAc，c＝1)；1H-NMR (400MHz，CDCl3)δ：2.27(s，3H)；3.15(m，1H)；3.26(m，1H)；3.76(s，3H)；4.90(m，1H)；7.20-7.61(m，11H)。
C)(S)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-310SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-310SM代替ZH-301SM，收率65.7％。mp，144.0～146.6℃。[α]D 25＝-5.5°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.28(s，3H)；3.16(m，1H)；3.51(m，1H)；4.88(bs，1H)；7.20-7.61(m，11H)；8.10(d，1H)。
实施例20：(R)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-310RM)及其相应的酸(ZH-310RA)。
A)D-4-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用D-4-氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率82.68％，mp，195.6～196.8℃。
B)(R)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-310RM)
方法同实施例1B，不同之处在于用D-4-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率87.76％，mp，149.4～151.4℃；[α]25 D＝+25.0°(EtOAc，C＝1)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.29(s，3H)；3.18(m，1H)；3.28(m，1H)；3.77(s，3H)；4.91(m，1H)；7.21-7.62(m，11H)。
C)(R)-3-(4-氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-310RA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-310RM代替ZH-301SM，收率65.7％。mp，124.1～127.9℃。[α]D 25＝+6.0°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.29(s，3H)；3.17(m，1H)；3.52(m，1H)；4.89(bs，1H)；7.21-7.62(m，11H)；8.10(d，1H)。
实施例21：(S)-3-(2，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-311SM)及其相应的酸(ZH-311SA)。
A)L-2，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-2，4-二氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率88.8％，mp，174.0～175.4℃。
B)(S)-3-(2，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-311SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-2，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，收率87.8％，mp，107.3-108.6℃；[α]25 D＝-111.6°(EtOAc，c＝1)；1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：2.24(s，3H)；3.19(m，1H)；3.50(m，1H)；3.77(s，3H)；4.99(m，1H)；7.19-7.61(m，10H)。
C)(S)-3-(2，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-311SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-311SM代替ZH-301SM，收率75.5％，mp，122.7-124.8℃；[α]25 D＝-59.0°(EtOAc；C＝1)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：2.24(s，3H)；3.18(m，1H)；3.52(m，1H)；5.03(bs，1H)；7.19-7.56(m，11H)；8.27(d，1H)。
实施例22：(R)-3-(2，4-二氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-311RM)及其相应的酸(ZH-311RA)。
A)D-2，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用D-2，4-二氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率94.86％。mp，174.0～175.4℃。
B)(R)-3-(2，4-二氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-311RM)
方法同实施例1B，不同之处在于用D-2，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐收率77.14％，mp，115.3～118.1℃；[α]25 D＝+111.7°(EtOAc，c＝1)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.25(s，3H)；3.21(m，1H)；3.51(m，1H)；3.78(s，3H)；5.00(m，1H)；7.20-7.63(m，10H)。
C)(R)-3-(2，4-二氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-311RA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-311RM代替ZH-301SM，收率81.08％，mp，109.8～114.8℃。[α]25 D＝+59.5°(EtOAc；C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.26(s，3H)；3.20(m，1H)；3.54(m，1H)；5.05(bs，1H)；7.21-7.58(m，11H)；8.29(d，1H)。
实施例23：(S)-3-(3，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]丙酸甲酯(ZH-312SM)及其相应的酸(ZH-312SA)。
A)L-3，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
方法同实施例1A，不同之处在于用L-3，4-二氯-苯基丙氨酸代替L-蛋氨酸，收率81.8％。
B)(S)-3-(3，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-312SM)
方法同实施例1B，不同之处在于用L-3，4-二氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-蛋氨酸甲酯盐酸盐，粗品收率91.6％，经柱层析纯化收率80.6％，mp：96.2-98.3℃；[α]D 25，-17.0°(EtOAc，C＝1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.37(s，3H)；3.21(m，2H)；3.74(s，3H)；5.07(dd，1H)；7.07-7.44(m，10H)。
C)(S)-3-(3，4-二氯苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-312SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-312SM代替ZH-301SM，收率78.3％。mp，186.3-191.8℃。[α]D 25，-9.0°(EtOAc，C＝1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.37(s，3H)；3.26(m，2H)；5.01(bs，1H)；7.06-7.45(m，10H)。
实施例24：(R)-3-(3，4-二氯苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]丙酸甲酯(ZH-312RM)及其相应的酸(ZH-312RA)。
从R-3，4-二氯-苯基丙氨酸出发，制备程序同实施例22。
实施例25(S)-3-(4-甲氧苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-313SM)及其相应的酸(ZH-313SA)。
A)(S)-3-(4-甲氧苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-313SM)
将(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羰基]-氨基}-3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯(ZH-302SM)1.008g(1.8mmol)溶于30ml二氯甲烷，加入2g硅胶，在室温和搅拌下，向其中滴加过量的重氮甲烷，至溶液而且不再消退为止；搅拌过夜；减压除去溶剂，残留物于60℃下真空干燥0.5小时；研碎，经柱层析纯化，得到所期待的产物(ZH-313SM)0.712g，收率68.9％，mp，153.0～158.3℃；[α]20 D＝+6.77°(CH2Cl2，C＝2.01)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.37(s，3H)；3.17(m，2H)；3.73(s，3H)；3.79(s，3H)；5.01(m，1H)；6.82-7.40(m，12H)。
B)(S)-3-(4-甲氧苯基)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸(ZH-313SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-313SM代替ZH-301SM，收率78.63％，mp，116.8～120.8℃；[α]D＝+9.07°(EtOAc，C，1.20)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.36(s，3H)；3.14-3.29(dm，2H)；3.79(s，3H)；4.97(m，1H)；6.82-7.45(m，12H)。
实施例26(R)-3-(4-甲氧苯基)2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-丙酸甲酯(ZH-313RM)及其相应的酸(ZH-313RA)。
制备程序同实施例25，以(R)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯(ZH-302RM)为原料。
实施例27：：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸](1-甲酰胺基-2-苯基-乙基)酰胺(ZH-303-SAA-1)。
A)L-苯丙氨酰胺
将L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐溶于水中，以NaHCO3水溶液中和。再用EtOAc提取。提取液经水洗、干燥后蒸干，得L-苯丙氨酸甲酯。取该甲酯0.18克(1mmol)，溶于15ml甲苯，向其中加入28％氨水4ml；室温下剧烈搅拌16小时，减压浓缩得白色固体。然后加入30ml 乙酸乙酯，加热回流半小时，趁热过滤，滤液浓缩得到0.127g。收率77.4％，mp：90.5℃-92℃。
B)(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸](1-甲酰胺基-2-苯基-乙基)酰胺(ZH-303-SAA-1)
将上述L-苯丙氨酸酰胺0.115g(0.7mmol)溶于10ml二氯甲烷，加入三乙胺0.2ml(1.5mmol)，分批缓慢加入1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(4-氯苯基)-1H-3-吡唑甲酰氯0.28g(0.7mmol)；继续搅拌1小时，浓缩得到粗产物，经柱层析纯化后得0.341g；收率92.3％，mp，158.5-161.3℃；1H-NMR(丙酮-d6)δ：2.31(s，3H)；3.19(m，2H)；4.90(dd，1H)；6.54(bs，1H)；7.08(bs，1H)；7.20-7.64(m，13H)。
实施例28：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸]-1-[(N-甲基甲酰胺基)-2-苯基-乙基]酰胺(ZH-303-SAA-2)。
将2-(S)-{[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羰基]-氨基}-3-苯基丙酸(ZH-303SA)0.528g(1.0mmol)溶于5mlDMF，向其中加入EDC.HCl 0.29g(1.5mmol)，HOBt 0.21g(1.5mmol)和三乙胺0.3ml(2.2mmol)；再加入甲胺盐酸盐0.1g(1.5mmol)和0.2g碳酸钠。室温下搅拌过夜；倒入15ml冰水中，过滤析出的白色固体，水洗、干燥后得到很纯的产物0.493克，收率：91.1％；mp，212.1-215.9℃；[α]D 25：-9.5°(CH2Cl2，C，1.0)；1H-NMR(CD3COCD3)：δ：2.30(s，3H)；2.71(s，3H)；3.18(m，2H)；4.83(m，1H)；7.20-7.70(m，14H)。
实施例29：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸](1-环丙胺酰基-2-苯基-乙基)酰胺(ZH-303-SAA-4)。
方法同实施例28，不同之处在于用环丙胺代替甲胺盐酸盐，未添加碳酸钠，收率，93.8％；mp，102.5-105.5℃；1H-NMR(Cd3COCd3)：δ：0.39(s，2H)；0.63(d，2H)；2.31(s，3H)；2.68(m，1H)；3.13(m，2H)；4.77(m，1H)；7.21-7.68(m，14H)。
实施例30：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基]-N-[(1-氧-3-苯基-1-(哌啶-1-氨基)丙基]-2-1H-吡唑-3-羧酸酰胺(ZH-303-SAA-6)。
方法同实施例28，不同之处在于用1-氨基哌啶盐酸盐代替甲胺盐酸盐，收率：37.6％；mp，102.3-107.4℃；1H-NMR(Cd3COCd3)：1.35(bs，6H)；1.71(bs，2H)；2.07(bs，2H)；2.37(s，3H)；3.10(m，2H)；5.20(m，1H)；7.26-7.72(m，13H)；9.63(bs，1H)。
实施例31：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸][1-(N-甲基甲酰胺基)-2-(2-氯-苯基)-乙基]酰胺(ZH-308-SAA-2)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-308SA代替ZH-303SA，收率63％。mp，161.5-165.7℃；1H-NMR(CD3COCD3)：δ：2.27(s，3H)；2.72(s，3H)；3.32(dm，2H)；4.92(m，1H)；7.25-7.78(m，12H)。
实施例32：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸][1-环丙胺酰基-2-(2-氯苯基)-乙基]酰胺(ZH-308-SAA-4)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-308SA代替ZH-303SA，环丙胺代替甲胺盐酸盐，未添加碳酸钠，收率63％。mp：216.5-221.4℃，1H-NMR(CD3COCD3)：δ：0.40(s，2H)；0.63(d，2H)；2.28(s，3H)；2.70(m，1H)；3.28(m，2H)；4.88(m，1H)；7.25-7.74(m，13H)。
实施例33：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸][1-(N-甲基甲酰胺基)-2-(4-甲氧苯基)-乙基]酰胺(ZH-313-SAA-2)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-313SA代替ZH-303SA，收率＝71.0％；mp，230.7～231.1℃；1H-NMR(CD3COCD3)δ：2.31(s，3H)；2.71(s，3H)；3.10(m，2H)；3.76(s，3H)；4.75(m，1H)；6.82-7.65(m，12H)。
实施例34：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸][1-(N，N-二甲基甲酰胺基)-2-(4-甲氧苯基)-乙基]酰胺(ZH-313-SAA-3)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-313SA代替ZH-303SA，二甲胺盐酸盐代替甲胺盐酸盐，收率71.3％；mp：71.9～74.3℃；1H-NMR(CDCl3)δ：2.37(s，3H)；2.67(s，3H)；2.88(s，3H)；3.11(m，2H)；3.80(s，3H)；5.31(q，1H)；6.83-7.74(m，12H)。
实施例35：(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸][1-(哌啶-1)-胺酰基-2-(4-甲氧苯基)-乙基]酰胺(ZH-313-SAA-6)。
方法同实施例30，不同之处在于用ZH-313SA代替ZH-303SA，以DMF和NMP混合溶剂代替DMF。收率＝51.0％。mp，105.1～108.6℃；1H-NMR(CDCl3)δ：1.28-1.70(m，10H)；2.36(s，3H)；3.05(m，2H)；3.79(s，3H)；5.13(m，1H)；6.82-7.57(m，12H)。
实施例36：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环己酯(ZH-302-SAE-4)。
A)L-酪氨酸环己酯盐酸盐
将L-酪氨酸4.2691g(23.6mmol)和环己醇50ml加入于100ml三口烧瓶中，升温至100℃，缓慢滴加SOCl2 8.3516g(70.8mmol)，滴加完毕后继续搅拌2小时。冷却、过滤，滤饼用3×50mlEtOAc洗涤，干燥，得产物6.18g；收率，87.5％；mp，209.4～216.7℃；NMR(D2O)：δ：1.14-1.68(m，10H)；3.11(d，2H)；4.22(t，1H)；4.78(bs，1H)；6.79(d，2H)；7.06(d，2H)。
B)(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环己酯(ZH-302-SAE-4)
方法同实施例1B，收率，77.4％；mp，89.5～99.5℃；1H-NMR(CDCl3)：δ：1.24-1.81(m，10H)；2.36(s，3H)；3.11(m，2H)；4.81(bs，1H)；5.01(dd，1H)；6.69-7.47(11H)。
实施例37：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基-丙酸环戊酯(ZH-303-SAE-3)。
A)L-苯丙氨酸环戊酯
将N-Boc-L-苯丙氨酸2.5g(9.4mmol)溶于40ml二氯甲烷，冰浴冷却至0℃，向其中加入环戊醇1ml(11mmol)、EDC.HCl 4.17g(21.8mmol)和DMAP130mg(1.1mmol)，再加入三乙胺5ml(36mmol)。让反应液缓慢升至室温并继续搅拌12小时；反应完毕后加入50ml二氯甲烷稀释，然后顺次用适量1M HCl、1M NaHCO3和饱和食盐水洗涤。有机层经无水硫酸镁干燥；浓缩所得粗产物快速过柱纯化，得2.3g油状的N-Boc-L-苯丙氨酸环戊酯，收率73％。
将该环戊酯2.3g(6.9mmol)溶于TFA/DCM(v/v＝1/1)30ml中，室温搅拌24小时，减压浓缩后得到氨基酸环戊酯的三氟乙酸盐；将该盐在50ml乙酸乙酯与50ml1M碳酸钠的二相体系间进行分配；分取有机相，有机相用1M碳酸钠和饱和食盐水洗涤，再以无水硫酸镁干燥。
B)(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环戊酯(ZH-303-SAE-3)：
取前述经过干燥的乙酸乙酯溶液12ml(大约总体积的1/5，约1.4mmol)，加入三乙胺2ml(14mmol)，再加入5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸酰氯0.48g(1.2mmol)；室温下搅拌半小时，TLC显示反应完毕；减压浓缩后，经柱层析纯化，得0.596g；收率对酰氯而言83.2％；mp，79-81.1℃；1H-NMR：(丙酮-d6)δ：1.58-1.83(m，8H)；2.31(s，3H)；3.24(d，2H)；4.89(dd，1H)；5.17(bs，1H)；7.24-7.67(m，13H)。
实施例38：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基-丙酸环己酯(ZH-303-SAE-4)。
A)L-苯丙氨酸环己酯：从L-苯丙氨酸1.06g(6.0mmol)按实施例36A制得L-苯丙氨酸环己酯盐酸盐。产物以Na2CO3水溶液处理，EtOAc提取；提取液经干燥浓缩，得到油状的L-苯丙氨酸环己酯1.18g，收率76％。
B)(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基-丙酸环己酯(ZH-303-SAE-4)
将上述油状物取一半(2，28mmol)溶于10mlDMF，向此溶液内加入5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸0.692g(1.82mmol)，EDC盐酸盐0.54g(2.8mmol)，HOBT 0.46g(3.4mmol)和三乙胺1ml(7.5mmol)，室温下搅拌过夜。将反应液倾入40ml冰水，过滤析出的白色固体，用冰水多次洗涤，干燥后得0.586g产物，收率对羧酸计52.9％；mp，74.5-75.4℃；1H-NMR(Cd3COCd3)δ：1.29-1.77(m，10H)；2.31，(s，3H)；3.26(m，2H)；4.78(bs，1H)；4.94(dd，1H)；7.24-7.66(13H)。
实施例39：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基-丙酸叔丁酯(ZH-303-SAE-5)。
A)L-苯丙氨酸特丁酯
将BOC-L苯丙氨酸2.65g(10mmol)和DMAP 0.122g(1mmol)加入20ml特丁醇中，缓慢加入2.83g(BOC)2O在5ml特丁醇中的溶液，室温搅拌12小时，减压浓缩，得白色固体，通过层析柱纯化得3.17g黄色油状物，收率：98.8％；
取上述BOC-L-苯丙氨酸特丁酯2.57g(8.0mmol)，加入3ml乙醚中，启动搅拌并冷却至0℃；缓慢滴加对甲苯磺酸1.55g(9.0mmol)在乙醇10ml中的溶液；加完后保温半小时，再逐渐升温到室温，搅拌24小时；减压浓缩得到L-苯丙氨酸特丁酯的对甲苯磺酸盐；将此盐用弱碱性阴离子交换树脂处理得到1.47gL-苯丙氨酸特丁酯，收率：83.2％；B)(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基-丙酸叔丁酯(ZH-303-SAE-5)
取上述L-苯丙氨酸特丁酯0.221g(1mmol)溶于5ml二氯甲烷中，加入三乙胺0.5ml(3.6mmol)，室温下搅拌，缓慢加入1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(4-氯苯基)-1H-3-吡唑甲酰氯0.4g(1mmol)，继续搅拌半小时后减压浓缩，通过层析柱纯化，得0.476克产物，收率81.3％；mp，98.8-103.4℃；1H-NMR(Cd3COCd3)δ：1.40(s，9H)；2.31(s，3H)；3.23(m，2H)；4.96(dd，1H)；7.08-7.64(m，13H)。
实施例40：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-氯-苯基)-丙酸环己酯(ZH-310-SAE-4)。
A)L-4-氯苯丙氨酸环己酯
方法同实施例36A，不同之处在于用4-氯苯基丙氨酸代替L-酪氨酸，粗品收率80％。
B)(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-氯-苯基)-丙酸环己酯(ZH-310-SAE-4)
方法同实施例36B，不同之处在于用L-4-氯苯丙氨酸环己酯代替L-酪氨酸环己酯，收率73.6％。mp，124.2-128.6℃；1H-NMR(CDCl3)δ：1.34-1.80(m，10H)；2.37(s，3H)；3.20(m，2H)；4.81(bs，1H)；5.03(dd，1H)；7.07-7.45(11H)。
实施例41：(S)-2-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(4-甲氧-苯基)-丙酸环己酯(ZH-313-SAE-4)。
将ZH-302-SAE-4 2.1g(3.35mmol)溶于50ml CH2Cl2，加入5g硅胶，室温搅拌下，滴加过量CH2N2的乙醚溶液，直至溶液呈淡黄色且不再消褪。继续搅拌3小时，浓缩、干燥，通过层析柱纯化，得产物1.78g。收率82.8％；mp，59.7～63.9℃；1H-NMR(CDCl3)：δ：1.28-1.80(m，10H)；2.37(s，3H)；3.17(m，2H)；3.79(s，3H)；4.80(bs，1H)；5.00(dd，1H)；6.81-7.44(11H)。
实施例42：(S)-5-(4-氯苯基)-N-(1-腈基-2-苯基-乙基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(ZH-303-SAC-1)
将(S)-[5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸](1-甲酰胺基-2-苯基-乙基)酰胺(ZH-303-SAA-1)0.528g(1mmol)加入吡啶1.25ml和二氯甲烷0.25ml中，冷却到-10℃，缓慢加入三氯氧磷0.13ml(1.38mmol)，在此温度下继续搅拌-小时；然后将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取；有机层经无水硫酸钠干燥后浓缩，过柱纯化得到 0.4g所期待的产物，收率78.5％，mp：82.5℃-84.3℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，2.31(s，3H)；3.41(d，2H)；5.32(dd，1H)；7.28-7.70(m，12H)；8.35(d，1H).
实施例43：(S)-5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-N-[2-苯基-1-(2-H-四氮唑-5-基)乙基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(ZH-303-SAH-1)
将(S)-5-(4-氯苯基)-N-(1-腈基-2-苯基-乙基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(ZH-303-SAC-1)0.25g(0.5mmol)加入12.5ml异丙醇中溶解，然后加入6.25ml水，搅拌下加入叠氮钠203mg，溴化锌203mg；加热回流反应16小时，逐渐析出白色固体。反应完毕后冷却到室温，在0℃下加入3M盐酸2.1ml，再用乙酸乙酯萃取三次，每次10ml；萃取液干燥后浓缩，过柱纯化，得到0.267g，收率98.4％，mp：147.8-148.5℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，2.27(s，3H)；3.57(m，2H)；5.86(dd，1H)；7.20-7.65(m，12H)；8.21(d，1H).
实施例44：(S)-5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-N-[1-(2-甲基-2-H-四氮唑-5-基)-2-苯基-乙基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(303-SAH-2)
将(S)-5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-N-[2-苯基-1-(2-H-四氮唑-5-基)乙基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(303-SAH-1)200mg(0.36mmol)加入1ml甲醇中，然后冷却到-25℃，加入氢氧化钾95mg(1.7mmol)；再加入155mg碘甲烷(1.09mmol)；升温到20℃，再加热回流反应1小时，浓缩后过柱纯化，得到产物43mg，回收未反应的原料(ZH-303-SAH-1)112mg；收率47.7％，mp：84.8-88.5℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，2.29(s，3H)；3.49(m，2H)；4.35(s，3H)；5.75(dd，1H)；7.2-7.67(m，12H)；8.09(d，1H).
实施例45：2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸甲酯(ZH-403SM)及其相应的酸(ZH-403SA)。
A)L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐
参见实施例5A
B)2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸甲酯(ZH-403SM)
方法实施例5B，不同之处在于用5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰氯代替5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸酰氯，收率 59.39％。mp，57.8-60.8℃；1H-NMR(CDCl3)δ：1.20(t，3H)；2.78(q，2H)；3.21(m，2H)；3.73(s，3H)；5.07(dd，1H)；7.01-7.48(13H)。
C)2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸(ZH-403-SA)
方法同实施例5C，不同之处在于用ZH-403SM代替ZH-303SM，收率82.3％。mp，102.3-105.6℃。1H-NMR(CDCl3)δ：1.21(t，3H)；2.77(q，2H)；3.23(m，2H)；5.02(dd，1H)；7.00-7.48(13H)。
实施例46：2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(3-氯-苯基)-丙酸甲酯(ZH-409SM)及其相应的酸(ZH-409SA)。
A)L-3-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
参见实施例17A，收率92％。
B)2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(3-氯-苯基)-丙酸甲酯(ZH-409SM)
方法同实施例42B，不同之处在于用L-3-氯-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐代替L-苯丙氨酸盐酸盐，收率66.2％。mp，78.3-81.1℃；1H-NMR(CDCl3)δ：1.20(t，3H)；2.78(q，2H)；3.19(m，2H)；3.75(s，3H)；5.07(dd，1H)；7.02-7.48(12H)。
C)2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-(3-氯-苯基)-丙酸(ZH-409SA)
方法同实施例1C，不同之处在于用ZH-409SM代替ZH-301SM，收率79.0％，mp，100.1-105.2℃；1H-NMR(CDCl3)δ：1.22(t，3H)；2.77(q，2H)；3.21(m，2H)；5.01(dd，1H)；7.01-7.49(12H)。
实施例47：(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-羧酸]-[1-甲酰胺基-2-苯基-乙基]酰胺(ZH-403-SAA-1)
方法同实施例27B，不同之处在于用1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-5-(4-溴苯基)-1H-吡唑-3-甲酰氯代替1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(4-氯苯基)-1H-3-吡唑甲酰氯，收率90.4％，mp：118.4～120.3℃；1H-NMR(丙酮-d6)δ：1.21(s，3H)；2.78(q，2H)；3.21(m，2H)；4.98(dd，1H)；6.50(bs，1H)；7.00(bs，1H)；7.11-7.65(m，13H)
实施例48：(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-羧酸]-[1-(N-甲基)酰胺基-2-苯基-乙基]酰胺(ZH-403-SAA-2)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-403-SA代替ZH-303-SA，收率71.8％。mp，80.4-81.6℃，1H-NMR(CDCl3)δ：1.19(t，3H)；2.74(s，3H)；2.78(m，2H)；3.21(m，2H)；4.79(m，1H)；5.86(bs，1H)；7.01-7.48(14H)。
实施例49：(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-羧酸]-[1-(N，N-二甲基)酰胺基-2-苯基-乙基]酰胺(ZH-403-SAA-3)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-403-SA代替ZH-303-SA，二甲胺盐酸盐代替甲胺盐酸盐，收率77.6％。mp，89.6-93.5℃，1H-NMR(CDCl3)δ：1.29(t，3H)；2.72(q，2H)；2.78(s，3H)；2.87(s，3H)；3.10(m，2H)；5.37(q，1H)；7.02-7.78(m，14H)。
实施例50：(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-羧酸]-[1-环丙胺酰基-2-苯基-乙基]酰胺(ZH-403-SAA-4)。
方法同实施例28，不同之处在于用ZH-403-SA代替ZH-303-SA，环丙胺代替甲胺盐酸盐，未添加碳酸钠，收率78％。mp，125.4-129.8℃。1H-NMR(CDCl3)δ：0.34(s，2H)；0.70(d，2H)；1.20(t，3H)；2.62(bs，1H)；2.77(q，2H)；3.18(m，2H)；4.71(q，1H)；5.85(bs，1H)；7.01-7.52(m，14H)。
实施例51：(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基]-N-[(1-氧-3-苯基-1-(哌啶-1-氨基)丙基]-2-1H-吡唑-3-羧酸酰胺(ZH-403-SAA-6)。
方法同实施例30，不同之处在于用ZH-403-SA代替ZH-303-SA，收率62.4％。mp，128.8-131.3℃。1H-NMR(CDCl3)δ：1.12-1.69(m，6H)；1.35(t，3H)；1.55(bs，2H)；2.53(bs，2H)；2.77(m，2H)；3.11(m，2H)；5.16(m，1H)；7.01-7.62(m，13H)。
实施例52：2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸环戊酯(ZH-403-SAE-3)。
方法同实施例37，不同之处在于用ZH-403-SA代替ZH-303-SA，收率91.1％；mp，54-56.8℃；1H-NMR：(丙酮-d6)δ：1.14(s，3H)；1.58-1.83(m，8H)；2.74(q，2H)；3.24(d，2H)；4.91(dd，1H)；5.17(bs，1H)；7.24-7.67(m，13H)。
实施例53：2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸环己酯(ZH-403-SAE-4)。
A)L-苯丙氨酸环己酯
将L-苯丙氨酸5g(30.5mmol)和150ml环己烷加入带分水器的反应瓶中，启动搅拌；一次性加入环己醇32ml(305mmol)和对甲苯磺酸一水合物6.33g(33.3mmol)；油浴加热，维持浴温135℃反应12小时；再冷却至室温，析出白色固体；过滤，用乙酸乙酯洗滤饼，真空干燥至恒重，得L-苯丙氨酸环己酯对甲苯磺酸盐12.1g，收率：94.5％；
将L-苯丙氨酸环己酯对甲苯磺酸盐2.52g(6mmol)投入乙酸乙酯100ml和1M碳酸钠水溶液100ml中剧烈搅拌，待全溶后静置分层，再用1M碳酸钠50ml，饱和食盐水50ml依次洗涤有机相，干燥，蒸干，得1.36g，收率92％；
B)2-(S)-[5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-酰胺基]-3-苯基丙酸环己酯(ZH-403-SAE-4)
将L-苯丙氨酸环己酯0.247g(1mmol)溶于5ml二氯甲烷，加入三乙胺0.5ml(3.6mmol)，室温下搅拌，缓慢加入1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-5-(4-溴-苯基)-3-吡唑甲酰氯0.46g(1mmol)，继续搅拌半小时后减压浓缩，柱层析纯化，得0.613克产物，收率91.6％；mp，64.6-65.7℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ：1.14(s，3H)；1.35-1.80(m，10H)；2.74(q，2H)；3.26(m，2H)；4.79(bs，1H)；4.95(dd，1H)；7.24-7.66(13H)。
实施例54：
(S)-5-(4-溴苯基)-N-(1-腈基-2-苯基-乙基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺(ZH-403-SAC-1)
方法同实施例42(ZH-303-SAC-1)之制备，不同之处在于用ZH-403-SAA-1代替ZH-303-SAA-1，mp，68.5-72.3℃；收率75.6％；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，1.14(s，3H)；2.73(q，2H)；3.41(d，2H)；5.34(dd，1H)；7.24-7.70(m，12H)；8.36(d，1H).
实施例55：(S)-5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-N-[2-苯基-1-(2-H-四氮唑-5-基)乙基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(403-SAH-1)
方法同实施例43(ZH-303-SAH-1)之制备，不同之处在于用(ZH-403-SAC-1)代替(ZH-303-SAC-1)，收率88.3％，Mp：76.7-78.6℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，1.10(s，3H)；2.71(q，2H)；3.51(d，2H)；5.88(dd，1H)；7.18-7.66(m，13H).
实施例56：(S)-5-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-乙基N-[1-(2-甲基-2-H-四氮唑-5-基)-2-苯基-乙基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(403-SAH-2)
方法同实施例44(ZH-303-SAH-2)之制备，不同之处在于用(403-SAH-1)代替(ZH-303-SAH-1)，收率51％；mp，68.5-72.4℃；1H-NMR(丙酮-d6)：δ，1.19(s，3H)；2.72(q，2H)；3.44(m，2H)；4.36(s，3H)；5.76(m，1H)；7.22-7.67(m，13H).
实施例57：生物活性测试：
A)化合物在CB1受体上对CP55940的反应率
实验步骤：
1.将稳定表达CB1受体和Gα16蛋白的CHO细胞种到96孔板上，37℃孵育过夜。
2.吸去培养基，加入40ul/孔含有2μM Fluo-4AM的HBSS，37℃温箱中孵育40分钟。
3.吸去含Fluo-4AM的HBSS，加入50μl/孔含阳性拮抗剂或待测化合物的HBSS，室温孵育10分钟。
4.设置仪器FlexStation，加入30nM激动剂CP55940(25μl/well)，测定数据。
5.数据处理，以阳性药Rimonabant(10μM)的反应率为0，DMSO(1％)为100％，使用GraphPad Prism软件进行拟合计算，得出各个化合物的反应率。
实验结果如图示。
化合物在CB1受体上对CP55940的反应率：
在第一批送筛的12个化合物中(ZH-301SM、ZH-302SM、ZH-303SM、ZH-304SM、ZH-305SM、ZH-306RM、ZH-303SA；ZH-301SA、ZH-302SA、ZH-304-SA、ZH-305-SA、ZH-306-SA)，前7个在10μM的浓度下表现出强大的CB1抑制活性。
附注：以上数据系由上海市“国家新药筛选中心”测定，谨表深切感谢。
B)活性化合物的IC50(nM)：
上列7个活性化合物(ZH-301SM、ZH-302SM、ZH-303SM、ZH-304SM、ZH-305SM、ZH-306RM、ZH-303SA)以及ZH-307-SM，由美国相关机构测定IC50(nM)。
实验步骤：首先将放射性[3H]-利莫那般溶于含有0.25％BSA(pH 7.4)的以HEPES为基础的 结合缓冲液，浓度为2-5nM；向测试板上的96个小井内放入3μg已表达CB1受体的CHO细胞膜蛋白；将样品以1∶100的比例溶于DMSO并加入于于这些小井中。让测试板在室温下孵化1.5小时；用一支Packard细胞收集器将反应混合物转入GF/B滤板使结合反应终止。洗涤滤板，板上的物质以Packard闪烁计数器(Packard TopCount Scintillation Counter)计算；加入过量1000倍的非放射性的利莫那般测定非特异连接；从总数减去非特异连接即为特异连接。基于总数和非特异连接将CPM换算为抑制百分率；用抑制数据和曲线计算IC50值。
实施例58：化合物急性毒性试验
动物：体重18～22g小鼠，雌雄各半。
方法：
1)预试验：探索0和100％死亡率的剂量范围。
取雌雄小鼠各9只，各分成3组，将ZH-303SM与1％CMC配置成5,000mg/Kg、1,670mg/Kg、557mg/Kg三种剂量(9∶3∶1)，分别给三组小鼠灌胃给药；
将利莫那班配成同样溶液，对3组小鼠作平行的对照试验。另取雌雄小鼠各3只，用1％CMC灌胃(空白组)；
饲养观察7天。ZH-303-SM组无小鼠死亡。而作为对照的利莫那般组，在5,000mg/Kg的剂量下，小鼠于5天内全部死亡，在1,670mg/Kg剂量下部分死亡。
2)极限实验
预实验中，在最大剂量5,000mg/Kg下，ZH-303-SM组无小鼠死亡，故无需测试LD50，而直接作极限实验。
取雌雄小鼠各9只，将ZH-303SM与1％CMC配置成5,000mg/Kg剂量，灌胃给药；另取取雌雄小鼠各9只用1％CMC灌胃(空白组)；
饲养观察7天，无任何小鼠死亡。
Claims (3)
1.一种低毒性的CB1受体抑制剂及其盐，其特征在于选自以下化合物及其盐：
2.根据权利要求1所述的低毒性的CB1受体抑制剂及其盐，其特征在于，该低毒性的CB1受体抑制剂包括相应的R和S对映体；以及它们的外消旋混合物。
3.根据权利要求1所述的低毒性的CB1受体抑制剂及其盐，其特征在于，所述的盐，选自：盐酸盐、溴氢酸盐、硫酸盐、硫氢酸盐、二氢磷酸盐、甲磺酸盐、硫酸单甲酯盐、顺式丁烯二酸盐、反式丁烯二酸盐、草酸盐、萘－2－磺酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、羟乙基磺酸盐、对甲苯磺酸盐，或3，5－二甲基－苄基磺酸盐。
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