CN102258633B - 黄荆子提取物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域。类风湿性关节炎(RA)是当前危害人类健康的最重要疾病之一，寻求高效低毒的防治RA的药物仍是世界医学界面临的一项艰巨任务和难题。本发明提供一种黄荆子提取物，是将黄荆子用含水乙醇热提，提取液浓缩后上样大孔吸附树脂，经含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥得黄荆子提取物。经药效学研究表明，本发明的黄荆子提取物可用于制备抗类风湿性关节炎药物或食品。本发明为寻求新的抗类风湿性关节炎药物提供了一种新的来源。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及是黄荆子提取物及其在预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。
背景技术
类风湿性关节炎(RA)是当前危害人类健康的最重要疾病之一，被称为“不死的癌症”。RA是一种以多关节受累、滑膜炎症、骨与软骨破坏等为主要特征的慢性全身性自身免疫炎性疾病，其发病机理至今尚未完全阐明，普遍认为与遗传、感染和免疫调节等因素紊乱密切相关(Imboden JB.Theimmunopathogenesis of rheumatoid arthritis.Annu Rev Pathol Mech Dis 2009.4：417-434.)。我国RA的患病率约0.3％-0.4％，约有400万患者，病程5-10年致残率为60％，晚期90％患者丧失社会劳动力和生活自理能力，是成人劳动力丧生的主要原因之一(Dai SM，Han XH，Zhao DB，Shi YQ，Liu Y，Meng JM.Prevalence of rheumatic symptoms，rheumatoid arthritis，ankylosing spondylitis，and gout in Shanghai，China：a COPCORD study.J Rheumatol 2003，30：2245-2251.)，因此造成了很多家庭问题以及巨大的社会负担。现行治疗类风湿性关节炎的方法主要有手术治疗、化学药物治疗和细胞因子类生物制剂的治疗。一般认为外科手术只适用于晚期畸形病例，且费用昂贵，对机体创伤较大；化学药物如非甾体抗炎药、抗风湿药和糖皮质激素等的长期应用会引起胃肠道不适、骨髓抑制、肝损伤、高血压等严重的不良反应；生物制剂在干预病变细胞的同时，对正常细胞也同样会产生一定的作用，干扰机体的固有免疫和适应性免疫，从而产生较大的毒性和破坏机体防御作用的风险(1.张义浜，刘志敏，熊凌霜.类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展.细胞与分子免疫学杂志，2005，21(增刊)：88-94.2.Doan T，Massarotti E.Rheumatoid Arthritis：An Overview of New and Emerging Therapies.J ClinPharmacol 2005，45：751-762.)。因此，寻求高效低毒的防治RA的药物仍是世界医学界面临的一项艰巨任务和难题。
黄荆子为马鞭草科牡荆属植物黄荆Vitex negundo L.的干燥成熟果实，产于我国20余省市，资源极为丰富。性温，味辛、苦；归肺、胃、肝经；具有祛风除湿和行气止痛的功效，用于治疗风痹、哮喘等(江苏新医学院.中药大辞典.上海科学技术出版社，1986：2057.)。清代《草木便方》亦记载(刘善述(清代)原著，赵素云整理.草木便方(精装本).重庆出版社，1988.)黄荆子可用于“养肝剧窍，坚齿，疗风痹”。在我国少数民族的瑶族医药中，黄荆子又名五指风，分属瑶医“老班药”下的“七十二风”药，具祛风止痛，散寒除湿，通经活络之功效(戴斌，丘翠嫦，李剑东，周丽娜，陈少峰.瑶医用药品种调查报告.中草药，1997，(12)：746-749.)，常与枫荷叶、解毒藤等“风药”组成瑶浴药方，用于风湿骨痛等(王政，龙运光，袁涛忠，徐德群，袁永沛.瑶族药浴治疗风湿痹病临床观察.中国民族医药杂志，2000，6(2)：13-14.)。黄荆子的化学成分主要含有木脂素类、萜类、黄酮类以及甾体类(李春正，苏艳芳，靳先军.牡荆属植物化学成分及生物活性研究进展.中草药[J]，2005，36(6)：930-938.)。目前，对于黄荆子的药理学研究多数集中于镇痛(Zheng CJ，Tang WZ，Huang BK，Han T，Zhang QY，Zhang H，Qin LP.Bioactivity-guided fractionation for analgesicproperties and constituents of Vitex negundo L.seeds.Phytomedicine 2009，16：560-567.)、抗氧化(郑公铭，罗宗铭，陈达美.黄荆籽抗氧化成分研究.广东工业大学学报，1999，16(2)：41-46.)、调节激素水平(Bhargava SK，et al.Antifertility effects of the flavonoids(VI-VII)of Vitex negundo L.seeds in dogs.Plant Med Phytother，1986，20(2)：188-198.)、抗肿瘤(Zhou Y，Liu YE，Cao J，Zeng G，Shen C，Li Y，Zhou M，Chen Y，Pu W，Potters L，Shi YE.Vitexins，nature-derived lignan compounds，induce apoptosis and suppress tumor growth.Clin Cancer Res 2009，15(16)：5161-5169.)、保肝(Avadhoot Y，Rana AC.Hepatoprotective effect of Vitex negundo agamst carbon tetrachloride-induced liverdamage.Arch Phar Res 1991，14(1)：96-98.)等生物活性，但至今未见有关黄荆子及其提取物用于抗类风湿性关节炎方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供黄荆子及其提取物新的医药用途。
本发明提供了一种黄荆子提取物该提取物是将黄荆子原料粉碎，用含水乙醇提取，减压浓缩至干，得黄荆子提取物。本发明还提供了上述黄荆子提取物在抗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。
本发明提供的一种黄荆子提取物，其制备方法为：
将黄荆子粉碎后，投入提取罐，用40～90％的乙醇热提2～3次，每次溶媒用量约为生药量的8～10倍，每次提取时间为1～2小时，合并提取液后浓缩至干，得黄荆子总浸膏，将总浸膏溶于水后上样大孔吸附树脂，收集60～80％乙醇洗脱部分，浓缩干燥得黄荆子提取物。
所述的大孔吸附树脂是AB-8、D-101、ZTC-1、HPD-100或DA201。
原料也可选用黄荆子的茎、叶等。
本发明还提供了上述黄荆子提取物在预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。
本发明采用类风湿性关节炎动物模型(Trentham DE，Townes AS，Kang AH.Autoimmunity to type II collagen an experimental model of arthritis.J Exp Med1977，146：857-868；Viji V，Kavitha SK，Helen A.Bacopa monniera(L.)Wettstinhibits type II collagen-induced arthritis in rats.Phytother Res 2010，24：1377-1383)，观察本发明提供的黄荆子提取物灌胃给药的治疗作用。实验结果显示，黄荆子提取物5g/kg(生药量)灌胃给药后，对大鼠正常生理情况基本没影响，从而保证了用药安全；空白组大鼠左后足趾无改变，模型组有明显的肿大，与空白组存在显著性差异，造模成功；而黄荆子组大鼠左后足趾未见明显的肿大，与模型组相比存在显著性差异，表明黄荆子提取物对类风湿性关节炎模型有较好的治疗作用；黄荆子提取物还能显著降低类风湿性关节炎动物模型血清中TNF-α和IL-1的含量，说明黄荆子提取物具有很好的防治类风湿性关节炎效果。
本发明寻找到了高效低毒的防治RA的药物。
附图说明
图1是动物体重随时间变化图
图2是黄荆子提取物对CⅡ诱导RA模型大鼠足肿胀的抑制作用(mean±SD，n＝8)，其中*vs模型组，P＜0.05
图3是黄荆子提取物对CⅡ诱导RA模型大鼠血清中TNF-α水平的影响(mean±SD，n＝8)，其中*vs模型组，P＜0.05
图4是黄荆子提取物对CⅡ诱导RA模型大鼠血清中IL-1水平的影响(mean±SD，n＝8)，其中*vs模型组，P＜0.05
具体实施方式
现结合实施例和附图对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
实施例1：黄荆子提取物的制备
将黄荆子全草粉碎后，投入提取罐，用80％的乙醇热提3次，每次溶媒用量约为生药量的10倍，每次提取时间为2小时，合并提取液后浓缩至干，并进一步干燥，得黄荆子总浸膏，将总浸膏溶于水后上样AB-8大孔吸附树脂，收集60～80％乙醇洗脱部分，浓缩干燥得本发明的黄荆子提取物。
实施例2：黄荆子提取物的抗类风湿性关节炎药效学实验
2.1实验材料
成年雄性180～220g Wistar大鼠(第二军医大学实验动物中心提供)24只，大鼠血清TNF-α、IL-1的ELISA试剂盒(美国Sigma公司)。主要仪器：足趾容积测量仪(YLS-7A，山东省医学科学院设备站)、酶标仪(BIO-RAD550)、离心机(Labofuge 400R，Heraeus公司)、电子天平(FA 110A型，上海精密科学仪器有限公司)。
2.2实验造模及给药
实验前将24只大鼠称重，按体质量随机分为3组，每组8只，自由饮食、进水。分为空白组、模型组、黄荆子组三组。空白组：不予任何处理；模型组：将牛II型胶原蛋白醋酸溶液与等容量的弗氏不完全佐剂混合，充分乳化。第0天，SD大鼠尾根进行皮内注射(1mg/ml)，每只0.1ml；7日后，加强免疫，大鼠尾根用0.1ml/只溶液注射作为激发注射，第15日左右造成RA动物模型；黄荆子组：自造模成功之日起，给予大鼠黄荆子提取物，灌胃给药，每日一次，剂量为5g/kg(生药量)，连续给药20d。
2.3观察指标
(1)记录各组大鼠体质量变化情况，每5天称重一次。
(2)用足趾容积测量仪测量实验开始和实验结束次日各组大鼠双足趾肿胀程度。
(3)在实验结束次日，大鼠尾部静脉取血，置冰浴30min后，以2000r/min离心15min，取上清，用ELISA法测定两组大鼠血清中TNF-α和IL-1水平，按试剂盒说明书进行操作。
2.4实验结果
采用SPSS13.0对两组数据进行两样本t检验统计学分析，P＜0.05时认为差异有统计学意义。
(1)通过对大鼠体质量的观察，空白组大鼠体重逐渐升高；在造模期间，模型组大鼠体重下降明显，与空白组大鼠比较，具有统计学意义(P＜0.05)。黄荆子组大鼠体重基本平稳，和空白组比较有所下降，但没显著性差异，说明黄荆子提取物对大鼠正常生理情况基本没影响，从而保证了用药安全，如图1所示。
(2)大鼠足趾肿胀率
如图2所示，空白组大鼠左后足趾无明显改变，模型组有明显的肿胀，与空白组存在显著性差异，提示造模成功；黄荆子组大鼠左后足趾肿胀程度较轻，与模型组相比存在显著性差异，表明黄荆子提取物对大鼠类风湿性关节炎模型有较好的抗炎作用。
(3)血清学指标
如图3、图4所示，黄荆子组与模型组相比P＜0.05，黄荆子组能显著降低血清中TNF-α和IL-1的含量，与空白组相比，无显著性差异，说明黄荆子提取物5g/kg(生药量)灌胃给药能显著降低类风湿性关节炎动物模型血清中的关键促炎细胞因子水平。
鉴于上述药效实验结果，本发明的黄荆子提取物具有显著抗类风湿性关节炎活性，因此可用于制备抗类风湿性关节炎药物或食品。
Claims (2)
1.一种黄荆子提取物在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用，所述的黄荆子提取物，其制备方法为：
将黄荆子粉碎后，投入提取罐，用40～90％的乙醇热提2～3次，每次溶媒用量约为生药量的8～10倍，每次提取时间为1～2小时，合并提取液后浓缩至干，得黄荆子总浸膏，将总浸膏溶于水后上样大孔吸附树脂，收集60～80％乙醇洗脱部分，浓缩干燥得黄荆子提取物。
2.根据权利要求1所述的黄荆子提取物在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用，其特征在于所述的大孔吸附树脂是AB-8、D-101、ZTC-1、HPD-100或DA201。
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