CN102257123A - 悬滴板 - Google Patents

悬滴板 Download PDF

Info

Publication number
CN102257123A
CN102257123A CN2008801320673A CN200880132067A CN102257123A CN 102257123 A CN102257123 A CN 102257123A CN 2008801320673 A CN2008801320673 A CN 2008801320673A CN 200880132067 A CN200880132067 A CN 200880132067A CN 102257123 A CN102257123 A CN 102257123A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hanging
drop
liquid
plates
pipeline
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2008801320673A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102257123B (zh
Inventor
沃尔夫冈.莫里茨
詹斯.凯尔姆
皮埃尔-阿兰.克拉维恩
西蒙.P.霍尔斯特鲁普
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universitaet Zuerich
Original Assignee
Universitaet Zuerich
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universitaet Zuerich filed Critical Universitaet Zuerich
Publication of CN102257123A publication Critical patent/CN102257123A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102257123B publication Critical patent/CN102257123B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/01—Drops
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0829—Multi-well plates; Microtitration plates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0848—Specific forms of parts of containers
    • B01L2300/0858—Side walls

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及悬滴板(1)及在至少一个液体量(6)内培养细胞或产生分子聚集体的方法，液体量附于悬滴板(1)的液滴接触区域(5)。悬滴板(1)包括具有第一表面(3)和与第一表面基本共平面的第二表面(4)的体部(2)。第二表面(4)包括粘附地接受用于培养细胞或产生分子聚集体的液体量(6)的至少一个液滴接触区域(5)。至少一个液滴接触区域(5)借助凸出结构(8)与周围区域(7)进行区分，凸出结构防止液体量(6)在体部(2)的第二表面(4)上的扩散。其特征在于体部(2)还包括至少一个管道(9)，其从体部(2)的第一表面(3)的方向开口入至少一个液滴接触区域(5)。在本发明的方法中，液体量(6)通过管道(9)施加于液滴接触区域(5)，管道从体部(2)的第一表面(3)的方向开口入至少一个液滴接触区域(5)。细胞和/或分子可被引入到该液体量(6)内，且部分的液体量(6)可经由悬滴板(1)的用于液滴接触区域(5)的相应管道(9)替换。

Description

悬滴板
技术领域
根据独立权利要求1的一般部分，本发明涉及悬滴板。该悬滴板包括具有第一表面和与第一表面基本共平面的第二表面的体部。第二表面包括粘附地接收液体量的至少一个液滴接触区域。在该液体量内，可培养细胞或产生分子聚集体。该液滴接触区域借助凸出结构与周围区域进行区分，该凸出结构防止液体量在悬滴板体部的第二表面上扩散。
背景技术
通常认为以3D构造培养的细胞比典型的单层细胞培养中的细胞(参见，例如Yamada and Cukiermann，Cell，2007；Pamploni et al.Nature ReviewsMolecular Cell Biology，2007)在生理方面更适合。将细胞诱导(coaxing)成第三维是精密设计问题。目前的技术大部分基于支架(scaffold)材料的使用或用于使细胞定形的单层的叠层。可是，尽管有生物利益，但由于细胞培养过程更复杂，耗时以及需要附加生物材料，因而目前技术发展水平的工艺不是实验室例行程序或已适于应用，如药物研发或毒性分析的工业规模进行使用。细胞的再聚集是将细胞诱导(coax)成第三维的一个可选择的方法。但是，当前的再聚集技术已经主要利用瘤细胞线被证实，并且缺少受控的共培养的可能性。悬滴(HD-)技术已经表现为能够利用瘤细胞以及原细胞进行3D细胞培养的普遍方法(参见Kelm and Fussenegger，2004，Trends inBiotechnology Vol.22，No.4：195-202)。具有悬浮细胞的细胞培养介质的液滴被放在细胞培养表面上，并且翻转板。因为不存在其上能够粘附细胞的可获得的基质，细胞在液滴的底部聚集并形成微组织。
在悬垂于表面上的液滴中培养细胞对于本领域技术人员是公知的。例如根据DE10362002 B4，知晓营养介质中细胞悬浮物滴借助吸液管沉积在陪替氏培养皿盖内表面上的常规方法。陪替氏培养皿盖随后必须被翻转并放置在适当的陪替氏培养皿基板上。在如此闭合的陪替氏培养皿内，液滴从盖表面悬垂。陪替氏培养皿通常包含用于为悬滴提供防止悬滴变干的湿气的滤纸。该常规悬滴技术的最关键步骤之一是使附着有液滴的板翻转；由此，该关键步骤通常由具有经验的科学家手动实行。
根据WO03/078700 A1，知晓悬滴技术的应用用于培养干细胞和蛋白质晶体的产生。悬滴技术的优点包括这样的事实：在调查研究中，基质完全由营养介质所围绕，营养介质提供需要的所有因子，如离子，分化因子，有毒基质等。另外，细胞(例如干细胞)的聚集被促进的原因在于细胞落到了液滴顶点，在此细胞相遇并形成群(例如，胚体)而没有接触固体表面。液滴的表面张力防止细胞以及细胞聚集体穿过小滴表面。可是，利用吸液管施加的液滴可仅包括少量，只要液滴在翻转表面过程中可在表面上移动用以提供适当的位置以便建立悬滴。为了提供相同尺寸的较大液滴并由此能够实现相同培培养或反应环境，提出在特殊表面上限定液滴接触区域的尖缘的凸出结构。
更近地(参见，例如Kelm et al.2004 or Khademhosseini et al.2006，PNASMol.103，No.8：2480-2487)，悬滴中细胞培养已经被称作使用重力细胞结集的微尺寸组织工程。由此，Khademhosseini等人支持在聚乙烯乙二醇(PEG)微井(microwell)中使用重力细胞结集的微尺寸组织工程；Kelm和Fussenegger在微井的井中或Terasaki板中应用悬滴技术。
发明内容
所有这些文献报道了翻转液滴粘附的基板以便将其适当地提供为悬滴的必要性。在翻转之后，基板被报道以水平放置或包括关于水平方向的最多90°角(参见WO03/078700 A1)。上述翻转对于手动处理是困难的并且甚至对于机器人执行也是困难的。因此，板的所需手动翻转阻止了大量生产和自动操作的兼容性。因此，本发明的一个目的是提供一种悬滴板，其提供液滴粘附的基板的任何非必要翻转。本发明的另一目的是在吸取和/或释放微组织的最小危险情况下能够以可反复的方式实行介质交换。
这些目的能够借助根据独立权利要求1特征的悬滴板实现。在开始介绍并根据本发明的该悬滴板的特征在于体部进一步包括至少一个管道，其从体部的第一表面方向进入至少一个液滴接触区域。其它的本发明和优选特征从从属权利要求中获得。
根据本发明的悬滴板和悬滴技术的优点包括：
-不存在所需的支架；
-可应用于小的液体量和细胞数量；
-提供细胞聚集体的尺寸控制；
-可适用于宽范围的细胞/组织类型，如肝的微组织(例如HepG2)，心肌扁球体，和微软骨；
-能够提供限定的多细胞类型系统，诸如例如包围纤维原细胞的芯的外层内皮细胞层；
-能够以短的生产时间产生所需的细胞聚集体；
-提供使3D细胞培养技术和目前2D细胞培养技术一样方便的平台技术；
-系统包括HD-板形式，其为多井板装配例如96或384个井；
-通过顶加载利用例如自动多通道吸液的机器人产生悬滴；
-细胞播种和/或介质交换可借助自动吸液管实行。
附图说明
现基于在示意性附图中描述的选定的、示例性实施例更详细地描述本发明的悬滴板，所述附图将说明优选实施例而不划定本发明的范围。其中：
图1是根据第一实施例的具有呈圆柱形/截头圆锥形的管道的悬滴板的单位单元的前视图和顶视图以及3D展示；
图2是根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元的前视图和顶视图以及3D展示；
图3是根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元的线性阵列的前视图和顶视图；
图4是根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元的二维阵列的前视图、侧视图和顶视图以及3D展示；
图5是根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道、结合顶和底盖板的悬滴板的单位单元的二维阵列的前视图和侧视图；
图6是图5的盖板的前视图、侧视图和顶视图以及3D展示；
图7是根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的液滴接触区域处悬垂的培养介质液滴的摄影影像；管道基本被填充以培养介质；
图8是图7中摄影影像的示意性截面图；
图9是悬滴板的第一和第二实施例的可选择变型，其中
图9A示出了防止液体量在体部的第二表面上扩散的两种可选择凸出结构；
图9B示出了防止液体量在体部的第二表面上扩散的两种不同表面处理；
图9C示出了另外提供最小和最大化液滴容量的两种可选择凸出结构；
图10是具有体部的悬滴板的示意性截面图，体部包括彼此连在一起的上部分和下部分，其中
图10A示出了用于将液体线固定到管道的侧入口的变型；
图10B示出了具有流体地与两个或多个管道相连用以维384个液滴阵列提供从96个顶分配器头分配的液体的敞开的顶入口隔间的变型；
图11是利用根据图7的悬滴板产生的新生鼠心肌细胞的微观图像；
图12是人类肝癌细胞的微观图像，其中
图12A示出了100细胞/滴，和
图12B示出了250细胞/滴；
图13是鼠胰岛细胞在播种之后不同时间点的微观图像，其中
图13A示出了3小时潜伏期之后的细胞；
图13B示出了24小时潜伏期之后的细胞；和
图13C示出了96小时潜伏期之后的微组织。
具体实施方式
图1示出了根据第一实施例的具有呈圆柱形/截头圆锥形(包括第一截圆锥，圆柱体，和第二截圆锥)的管道的悬滴板的单位单元的前视图和顶视图以及3D展示。悬滴板1包括具有第一表面3和基本与第一表面3共平面的第二表面4的体部2。第二表面4包括用于粘附地接收液体量6的至少一个液滴接触区域5(参见图7和8)以便在其中培养细胞或产生分子聚集体。至少一个液滴接触区域5借助防止液体量6在体部2的第二表面4上扩散的凸出结构8与周围区域7进行区分。体部2进一步包括至少一个管道9，其根据体部2的第一表面3的方向开口入至少一个液滴接触区域5内。
这种情况中的凸出结构8被实现为圆环边缘(circular rim)，管道9从第一表面3到第二表面4沿基本垂直的方向穿过整个体部2。管道9包括入口隔间12，其定位为靠近体部2的第一表面3。在此，入口隔间12被实现为体部2内部的管道9的加宽部分13，其被实现为一个整体元件。管道9包括培养隔间17，其定位为靠近体部2的第二表面4并包括至少一部分的液滴接触区域5。在该实施例中，培养隔间17被实现为具有直壁的漏斗形凹陷。管道9包括毛细管部分1，其直径为至少10μm，优选在10μm和500μm之间，最优选在50μm和200μm之间。管道9的圆柱形毛细管部分18的长度为在0.1mm和30mm之间，优选在0.5mm和2mm之间。从图1中可以看出，管道9实现为无支路的通道，其基本垂直地延伸到第一和第二表面3、4，并且管道9的所有部分都是同轴对齐的。
图2示出了根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元的前视图和顶视图以及3D展示。已经关于第一实施例说明的大部分部件也在此应用。可是，在该实施例中，培养隔间17被实现为具有弯曲壁的漏斗形凹陷。管道9包括毛细管部分18，其直径为至少10μm，优选在10μm和500μm之间，最优选在50μm和200μm之间。管道9的圆柱形毛细管部分18的长度在此为0mm，管道9再次被实现为无支路的通道，其基本垂直地延伸到第一和第二表面3、4，并且管道9的所有部分都是同轴对齐的。从图2的展示可以得出，管道9的圆柱形毛细管部分18也可增至30mm。
图3示出了根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元(参见图2)的线性阵列的前视图和顶视图。单位单元的轴被分开以重复的轴距23，其优选是根据具有24、96或384个壁的已知标准微板的轴距18mm、9mm或4.5mm(参见published standard dimensions of microplatesAmerican National Standards Institute/Society for BiomolecularSciences：ANSI/SBS 1-2004，ANSI/SBS 2-2004，ANSI/SBS 3-2004，ANSI/SBS4-2004)。
图4示出了根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道的悬滴板的单位单元的二维阵列的两个前视图和顶视图以及3D展示。优选尺寸被指出并且非常接近标准微板的尺寸。实际上，在此描绘了384个液滴接触区域5和管道9的二维阵列。因此，轴距优选是4.5mm以便满足ANSI/SBS标准并能够合并悬滴板1中384个液滴接触区域5和管道9的阵列，所述悬滴板具有至少大约是标准微板的尺寸。然而，悬滴板1的单位单元优选彼此紧密接触(类似还在图3中所示)，这些单位单元的阵列优选地由水平板24围绕。水平板24本身优选地由垂直边缘25围绕，垂直边缘表现出下网26和上凹陷27。网26和凹陷27具有这样尺寸：它们用作适于紧密地叠置悬滴板1和将叠置的板保持在适当位置的叠置装置。从图4中可以看出，网26和凹陷27的高度在所有情况下是大约2mm。
脱离图4的显示，网26和凹陷27的位置在不失去用作叠置装置的功能的情况下可互换。同样，水平板24和垂直边缘25的尺寸在不脱离本发明的精神的情况下可改变。可是，优选地，在任意情况中，垂直边缘25凸出超过第一边缘3以及悬滴板1的第二表面4的下方。特别优选地(参见图4)，垂直边缘25还凸出于悬滴板1的第二表面4的凸出结构8的下方。上述凸出的垂直边缘25另外地确保悬滴板1的第一和第二表面3、4不被损害或接触。这两个表面的污染危险同样通过垂直边缘25被大大降低。
图5示出了根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道、结合顶和底盖板的悬滴板的单位单元的二维阵列的前视图和侧视图。如图4中所示，在此描绘了384个液滴接触区域5和管道9的二维阵列。再次地，这些单位单元的阵列优选地由水平板24围绕，水平板优选由表现出下网26和上凹陷27的垂直边缘25围绕。网26和凹陷27具有这样尺寸：它们用作适于紧密地叠置悬滴板1和将叠置的板保持在适当位置的叠置装置。特别优选地，盖板22还表现出与悬滴板1相对应的下网26和上凹陷27。特别优选的是盖板22被实现用以根据情况用作底和/或顶盖板。这是有利的，相同的盖板22能够用作悬滴板1下方的壳或其顶部上的罩。
特别是在培养或在至少一个液体量6中培养细胞或产生分子聚集体的过程中的孵育过程中，液体量粘附于悬滴板1的液滴接触区域5，优选地在顶侧和底侧上覆盖悬滴板1以便避免液体量6或管道9中液体的不可接受的蒸发。优选地，在第一悬滴板1的底部，盖板22被放置作为底部壳板。该第一悬滴板1可由现在用作罩的第二盖板22覆盖。两个盖板22和位于之间的一个悬滴板1的上述夹层结构是优选形成为适于存储，培养或孵育以及悬滴板的安全运输的最小单位，无论其是否装载有液体量和细胞和/或分子(参见图5)。
对于利用温度控制进行的装置内的孵育或培养，几个悬滴板1可直接叠置在彼此的顶部上并仅在最上和最下的悬滴板1的顶端和底部覆盖盖板22。这在叠层的所有悬滴板都装载相同的样品以便不必担心交叉污染时尤其是优选的。可是，如果装载不同的样品(在叠层的相同或不同悬滴板1内)，优选在每个悬滴板1之间用中间放置的盖板22分开悬滴板1。
当然，能够生产单独的悬滴板1(参见图4)和分开的盖板22(参见图6)；优选地在所有情况下具有相同尺寸的下网26和上凹陷27。可是，对于培养细胞或生产分子聚集体的最优选组合优选地包括一个悬滴板1和两个盖板22。
图7示出了根据第二实施例的具有呈双曲线形状的管道9的悬滴板1的液滴接触区域5处悬垂的培养介质液滴的摄影影像。明显地，管道9基本被填充以培养介质。这将液滴(例如液体量6)保持在液滴接触区域5是由于不同元件的组合作用：
a)管道9的毛细管力抵抗重力和管道9中吸引液滴的静水压力起作用。
b)液滴接触区域5中最终存在的选择的亲水涂层支持液体量6的液体量6的粘附并抵抗静水压力和重力起作用。
c)凸出结构8(在此实现为边缘)稳定液体量6并支持液体量6的实际容量的确定。
d)液滴的表面张力另外地稳定液体量6。
e)施加到悬滴板1的周围区域7的选择的亲水涂层21另外地可稳定液体量6。
实际上，从根据第二实施例的悬滴板1(参见图2和3)的单位单元的线性阵列的原型获取图像，悬滴板具有呈双曲线形状的管道。为了将原型放置在用作底壳的陪替氏培养皿，原型已经配有水平板24、垂直边缘25以及全部围绕悬滴板1的单位单元的台板28。因此，在单位单元之间，原型悬滴板1的水平板24和垂直边缘25以及陪替氏培养皿(在此看不到)下方，形成实际封闭的空间，这允许饱和的湿润大气被保持围绕位于各个液滴接触区域5的液体量6。
为了支持图像的理解，图8示出了图7中摄影图像的示意性截面图。如所有图中所示，相同参考标记指示相同或相似特征，即使在各种情况中未被详细讨论。
图9示出了悬滴板的第一和第二实施例的可选择变型。悬滴板1的设计是根据图7和8中所示的原型。可是，具有与标准微板相似的形状和尺寸的单一单位单元或整个悬滴板1也能示出根据在此所示变型的单位单元。
图9A示出了防止根据本发明的悬滴板1的体部2的第二表面4上液体量6扩散的两个可选择的凸出结构8。凸出结构8(取代于边缘)可实现为环状凹陷(参见左侧)或环状隆起(参见右侧)。无论如何，凸出结构8外形上方向的重大改变安全地限定了液体量6或液滴的边界。
图9B示出了防止根据本发明的悬滴板1的体部2的第二表面4上液体量6扩散的两种不同表面处理。在左侧，液滴接触区域5选择地覆盖有生物活性化合物，其从包括多肽(抗体，增长因子，酶)和多聚核苷酸(RNA，DNA单或双链)。在右侧，周围区域7选择地覆盖有亲水涂层21。这两种处理的组合也是特别优选的。亲水涂层21的使用甚至可免除合并第二表面4上附加边缘或凹陷形式的凸出结构的必要性。因此，在此所示的边缘29足以用作凸出结构8。
图9C示出了另外提供最小化和最大化液体量的两种可选择凸出结构。在左侧，形成具有边缘29的凹陷。在此，液体量是最大的。在右侧，形成具有边缘29的隆起；因此，最小化液滴容量。另外，在此示出了悬滴板1，其管道9包括定位为与体部2的第一表面3接近的入口隔间12。优选地，入口隔间12被实现为体部2内部管道9的加宽部分13(参见例如图9A和9B)或在此描述的体部2的第一表面3上的杯部14。上述加宽部分13和杯部14的组合也是可行的(未示出)。
在此请注意，很重要地是，附图示出和/或说明书中描述的特征的任意组合能够被使用以及由本发明的精神所包含。
图10示出了具有体部2的悬滴板1的示意性截面图，体部包括彼此连在一起的上部分15和下部分16。该两部分结构极大地促进了可选择悬滴板1的生产，悬滴板所具有的管道9沿基本垂直方向部分地在至少一个液滴接触面积5内穿过体部2，并且部分地基本平行于悬滴板1的第二表面4延伸。
图10A示出了具有用于将液体线固定于于管道的侧入口的变型。在此，管道9包括位于体部2的侧前部11的入口连接部10。不同于图1至8中所示的实施例，其中液体借助一个或多个吸液管或吸液机器人被分配到悬滴板1的管道9，线30可直接与悬滴板1相连。通过上述线30，液体以及细胞或分子能够在任何时间被分配给悬滴板1的液体量6。因此，促进了液体的交换，如液体量6中缓冲剂或洗液。
图10B示出了具有敞开的顶部入口隔间的变型，隔间与两个或多个管道流体相连以便为384个液滴阵列提供从96个顶部分配头分配的液体。在此，管道9另外地沿基本垂直的方向穿过体部2的第一表面3并且管道9被实现为有支路的通道，其包括基本垂直于第一和第二表面3、4的通道部分19以及基本平行于第二表面4延伸的支路部分20。然而，液滴接触区域5可分开以4.5mm的轴距23，敞开的顶部入口隔间12随后优选地分开以9mm或双倍轴距23。在线性阵列的悬滴板1(相比于图3)中，两个支路部分20连接共同通道部分19。在2D阵列悬滴板1(相比于图4)，四个支路部分20连接公共通道部分19。因此，借助包括96个顶部分配头的机器人，具有384个液滴阵列的悬滴板1可被立刻施加以液体和/或细胞或分子。
液滴形状和位置的补充控制可通过培养隔间17、脊18和周围板7的内表面的选择涂层予以获得以实现亲水和疏水区域。同样，隔间12、17和管道9的内表面都被涂敷有防止细胞粘附在表面上的表面薄膜。可选择地，表面可利用微米和纳米机械加工技术直接进行构图以便防止粘附。
悬滴板1优选是与高生产量系统兼容的标准外尺寸(ANSI/SBS 1-2004)的组织培养板。如图所示，悬滴板1组优选由两个元件构成：
a)包含悬滴壁或液滴接触区域5的悬滴板1；和
b)支撑悬滴板1的盖22。
两个元件(悬滴板1和盖22)由生物塑料材料(例如，聚碳酸酯、聚乙烯、聚苯乙烯或聚丙烯)制造或在其各个表面至少包括该生物塑料材料。两个元件(悬滴板1和盖22)都与光度读取器(从顶部和底部读取，优选是底部读取)相兼容。悬滴板1优选包含96或384个单位的悬滴井。悬滴板1优选配有用于独立盖自动处理的垂直边缘25。盖22为悬滴板1的每个单独单元内液滴形成提供足够的空间。悬滴板1被设计成叠置在彼此上方。盖22配有允许填充以水/盐水的窄通道系统或沿着基底内侧的槽以便最小化液滴蒸发。盖22可用于悬滴板1的下和上壳，以便最小化蒸发并保护防止污染。
悬滴可借助通过标准单通道或多通道吸液管进入入口隔间12的液体的顶加载以手动或自动方式予以产生。悬滴井的设计允许通过入口隔间12的重复液体交换。
本发明提供用于诱导和培养细胞成为第三维而没有人造基质细胞交互作用。装置包括具有两个隔间(入口隔间12和培养隔间17)的微流体系统。入口隔间12的容积优选在5μl和50μl之间，最优选在10μl和30μl之间。培养隔间17的容积优选在10μl和100μl之间，最优选在10μl和50μl之间。入口隔间12和培养隔间17的形状可以是圆柱形、圆锥形或双曲线形。单个单位的每个培养容积优选与从培养隔间底部凸出的环8相连，以便稳定和分开单独的液滴。脊形式的液滴分离环或凸出结构8的高度优选在0.1mm和5mm之间，最优选在1和2mm之间。
根据本发明的悬滴板1可通过注入模制直接或复制模制横向制成。可选择的生产方法包括微研磨技术和/或将悬滴板1的各部分粘合或焊接到一起。
以下，简要描述在使用根据本发明的悬滴板1的原型时的材料和方法以及获得的结果。
适于悬滴培养的生产的典型方案如下：
a)借助标准胰蛋白酶作用由常规2D培养获得的收获细胞。
b)利用常规细胞培养介质洗涤细胞。
c)拿取具有对应100至10000细胞/3Dμl液滴的3333至333333细胞/ml密度的常规细胞培养介质的适当容量或分别根据实验需求的液体量6的细胞。
d)柔和涡旋包含细胞的烧瓶，并借助顶加载将细胞悬浮液的30μl液滴分配到悬滴板1的入口隔间12。
e)将悬滴板1放入常规细胞培养恒温箱内湿润相内。
f)根据细胞的类型，细胞将聚集并在1-3天内形成微组织。
g)长期氟化或实验方案最终需要介质的改变。这通过简单地从悬滴板1顶侧的入口隔间12吸取至25μl的陈旧介质以及通过替换被吸入至入口隔间12的相似容量的新鲜介质予以实行。
h)通过用传递到悬滴板1顶侧上的入口隔间12的50至100μl介质冲洗液滴接触区域5，以及从而通过将微组织冲洗到收集装置(即有盖培养皿或具有96或384井的微板)，收获微组织。
例I
从新生鼠中新鲜分离的心肌细胞根据上述方案产生，该方案不包括从2D培养收获的细胞(来自方案的点a)。从10000细胞/每滴产生的所得到的微组织相应于直径大约250μm的微组织尺寸。这在图11中得到证明，图11示出了利用根据图7的悬滴板产生的鼠心肌细胞组成的微组织的显微镜像。
例II
人肝瘤细胞(HepG2)根据上述方案处理。图12示出了在每滴播种100个细胞(图12A)和每滴播种250个细胞(图12B)的多个小时后，人肝瘤微组织48的显微镜像。
例III
鼠胰岛细胞(每滴250个细胞)根据上述方案处理，如在图13中证明，图13示出了播种后在不同时间点处的鼠胰岛细胞的显微镜像。鼠胰岛微组织的形成可以如下形成：在潜伏的3个小时后，特别地，仅单个细胞存在(见图13A)。在潜伏的24个小时后，特别地，所有细胞聚集(见图13B)。在潜伏的96个小时后，直径大约100μm的球形鼠胰岛微组织已经形成(见图13C)。
因此，本发明包括一种在粘附到基于图1至10所述的悬滴板1的液滴接触区域5的至少一个液体量6中培养细胞或产生分子聚集体的方法。悬滴板1包括体部2，其具有第一表面3和基本上与第一表面3共平面的第二表面4，该第二表面包括在其中粘附地接收至少一个液体量6的至少一个液滴接触区域5。至少一个液滴接触区域5通过凸出结构8区别于周围区域7，该凸出结构防止液体量6在体部2的第二表面4上扩散。根据本发明的方法的特征在于液体量6通过管道9施加于液滴接触区域5，该管道从体部2的第一表面3的方向开口入液滴接触区域5。
当进行培养细胞的方法时，优选地，许多细胞或至少一种细胞类型的细胞微聚集体是
-在液体中悬浮，
-与液体量6一起移动通过悬滴板1的管道9，
-在液体量6中培养；和
微组织在液体量6中从所培养的细胞形成。
可替换地，当进行培养细胞的方法时，许多细胞或至少一种细胞类型的细胞微聚集体是
-通过悬滴板1的管道9移动入液体量6，
-在液体量6中培养；和
微组织在液体量6中从所培养的细胞形成。
当进行产生分子聚集体的方法时，优选地，许多分子或分子微聚集体是
-在液体中悬浮，
-与液体量6一起移动通过悬滴板1的管道9，
-在液体量6中孵育；和
分子聚集体在液体量6中从所孵育的分子或分子微聚集体形成。
优选地，当进行培养细胞或产生分子聚集体的方法时，液体量6中的一部分液体通过专用于液滴接触区域5的悬滴板1的相应管道9撤回。在随后，优选用通过专用于液滴接触区域5的悬滴板1的相应管道9传递的液体替换至少一部分撤回的液体。
具有特别兴趣的是根据本发明的悬滴板1在下面领域中的使用：
a)药物筛选和开发：悬滴板提供用于具有改进的组织特殊功能的仿生3D细胞聚集体即微组织的手动(低容量)或自动(高容量)产生的平台。对于自动液体处理系统的完全兼容性将使得对于继再次聚集过程之后的引导识别和引导最佳化的高生产量化合物筛选能够实现，而不要求另外的细胞传代培养。基于微组织的分析可以与具有端点确定的常规基于2D细胞的分析一样以常规方式，通过显微镜、光度计、荧光计和/或发光测量(底部读取)和/或另外的下游组织处理(组织学分析)来进行。
b)基于细胞的毒性测试(ADME/毒药)：悬滴板提供用于具有改进的组织特殊功能的3D细胞聚集体即微组织的手动或自动产生的平台。对于自动液体处理系统的完全兼容性将使得包含吸附、新陈代谢、分泌和毒理方面的潜在药物候选的高生产量测试能够实现。基于微组织的分析可以与具有端点确定的常规基于2D细胞的分析一样以常规方式，通过显微镜、光度计、荧光计和/或发光测量(底部读取)和/或另外的下游组织处理(组织学分析)来进行。
c)基于细胞的治疗：与单细胞处理相比，微组织对于基于细胞的治疗显示多个优点，包括：(i)更高的功能性；(ii)预成型的细胞外基质，(iii)促进血管新生因子例如血管内皮生长因子的分泌和作为单细胞的低运动性。因此，微组织对于组织再生/修复具有更高的潜力以处理多种器质性障碍，例如心肌梗塞或心肌糖尿病。大量生产是它们用于基于细胞的治疗的必不可少的前提。通过如之前概述的下述特征，悬滴板提供大量生产兼容性：
1.要求低培养量；
2.通过具有多至384通道的分配器同时顶加载或撤回；
3.流体连接到两个或多个管道的入口隔间，为每个分配器通道供应两个或多个液滴；
4.悬滴板的可堆叠性。
悬滴板进一步有助于复杂步骤的应用，该复杂步骤例如膨胀和随后的时间相关分化方案，包含对于多能前体细胞转换为具有组织特殊功能的高分化细胞聚集体的重复介质改变。
d)蛋白质结晶化：为了研究蛋白质功能，理解3维结构是强制的。蛋白质晶体通过在经由蒸发过程的特定液体的悬滴中缓慢增加蛋白质浓度而产生。悬滴板使得蛋白质/分子晶体的自动兼容播种，生长和收获能够实现。
参考标记
1    悬滴板
2    体部
3    第一表面
4    第二表面
5    液滴接触区域
6    液体量
7    周围区域
8    凸出结构
9    管道
10   入口连接部
11   2的侧前部
12   入口隔间
13   加宽部分
14   罩
15   2的上部分
16   2的下部分
17   培养隔间
18   毛细管部分
19   通道部分
20   支路部分
21   亲水涂层
22   盖板
23   轴距
24   水平板
25   垂直边缘
26   下网
27   上凹陷
28   台板
29   边缘
30   线

Claims (30)

1.一种悬滴板(1)，包括具有第一表面(3)和与第一表面(3)基本共平面的第二表面(4)的体部(2)，第二表面(4)包括用于粘附地接收用于在其中培养细胞或产生分子聚集体的液体量(6)的至少一个液滴接触区域(5)，该至少一个液滴接触区域(5)借助凸出结构(8)与周围区域(7)进行区分，该凸出结构防止液体量(6)在体部(2)的第二表面(4)上的扩散，其特征在于：体部(2)进一步包括至少一个管道(9)，所述管道从体部(2)的第一表面(3)的方向开口入所述至少一个液滴接触区域(5)。
2.根据权利要求1的悬滴板(1)，其特征在于：所述凸出结构(8)选自包括边缘、凸起、凹陷、高地和其任何组合的组中，并定位在第二表面(4)中或其上。
3.根据权利要求1或2的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)从第一表面(3)至第二表面(4)以基本上垂直的方向穿过整个体部(2)。
4.根据权利要求1或2的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)在所述至少一个液滴接触区域(5)的区域中以基本上垂直的方向部分地穿过体部(2)并基本上平行于第二表面(4)部分地延伸。
5.根据权利要求4的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)包括入口连接部(10)，该入口连接部位于体部(2)的侧前部(11)。
6.根据权利要求4的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)另外以基本上垂直的方向穿过体部(2)的第一表面(3)。
7.根据权利要求1-3和6中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)包括入口隔间(12)，该入口隔间定位为靠近所述体部(2)的第一表面(3)。
8.根据权利要求7的悬滴板(1)，其特征在于：所述入口隔间(12)实现为所述体部(2)内部的所述管道(9)的加宽部分(13)，所述体部(2)的第一表面(3)上的杯部(14)，或上述加宽部分(13)和上述杯部(14)的组合。
9.根据权利要求4至6中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述体部(2)包括彼此连接的上部分(15)和下部分(16)。
10.根据在前权利要求中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)包括培养隔间(13)，该培养隔间定位为靠近所述体部(2)的第一表面(3)并包括所述液滴接触区域(5)的至少一部分。
11.根据权利要求8的悬滴板(1)，其特征在于：所述培养隔间(17)是具有笔直或弯曲壁的漏斗状凹陷。
12.根据在前权利要求中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)具有圆柱/截头圆锥或双曲线形状。
13.根据权利要求12的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)包括毛细管部分(18)，该毛细管部分的直径为至少10μm，优选在10μm和500μm之间，更优选在50μm和200μm之间。
14.根据权利要求13的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)的圆柱或双曲线毛细管部分(18)的长度为在0mm和30mm之间，优选在0.5mm和2mm之间。
15.根据权利要求10-14中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)实现为无支路通道，该无支路通道基本上垂直于第一和第二表面(3、4)延伸，其中无支路通道管道(9)的所有部分同轴对齐。
16.根据权利要求10-14中任一项的的悬滴板(1)，其特征在于：所述管道(9)实现为支路通道，该支路通道包括基本上垂直于第一和第二表面(3、4)延伸的通道部分(19)和基本上平行于第二表面(4)延伸的支路部分(20)。
17.根据在前权利要求中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述液滴接触区域(5)选择性涂敷有亲水涂层。
18.根据权利要求1-16中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：所述液滴接触区域(5)选择性涂敷有生物活性化合物，所述生物活性化合物选自包括多肽和多核苷酸的组中。
19.根据权利要求17或18的悬滴板(1)，其特征在于：所述周围区域(7)选择性涂敷有疏水涂层(21)。
20.根据在前权利要求中任一项的悬滴板(1)，其特征在于：该悬滴板至少基本上具有标准微板的形状，液滴接触区域(5)以阵列布置，优选为4×6，8×12，或16×24液滴接触区域(5)。
21.一种培养细胞或产生分子聚集体的装置，该装置包括根据在前权利要求中任一项的一个悬滴板(1)和两个盖板(22)，这两个盖板实现为用作底部和/或顶部盖板。
22.一种在至少一个液体量(6)内培养细胞或产生分子聚集体的方法，该液体量附在根据权利要求1的悬滴板(1)的液滴接触区域(5)，其特征在于：液体量(6)通过管道(9)施加于液滴接触区域(5)，该管道从体部(2)的第一表面(3)的方向开口入液滴接触区域(5)。
23.根据权利要求22的培养细胞的方法，其特征在于：许多细胞或至少一种细胞类型的细胞微聚集体是
-在液体中悬浮，
-与液体量(6)一起移动通过悬滴板(1)的管道(9)，
-在液体量(6)中培养；和
微组织在液体量(6)中从所培养的细胞形成。
24.根据权利要求22的培养细胞的方法，其特征在于：许多细胞或至少一种细胞类型的细胞微聚集体是
-通过悬滴板(1)的管道(9)移动入液体量(6)，
-在液体量(6)中培养；和
微组织在液体量(6)中从所培养的细胞形成。
25.根据权利要求22的产生分子聚集体的方法，其特征在于：许多分子或分子微聚集体是
-在液体中悬浮，
-与液体量(6)一起移动通过悬滴板(1)的管道(9)，
-在液体量(6)中孵育；和
分子聚集体在液体量(6)中从所孵育的分子或分子微聚集体形成。
26.根据权利要求22至25中任一项的培养细胞或产生分子聚集体的方法，其特征在于：液体量(6)中的一部分液体通过专用于液滴接触区域(5)的悬滴板(1)的相应管道(9)撤回。
27.根据权利要求26的培养细胞或产生分子聚集体的方法，其特征在于：所撤回液体的至少一部分用通过专用于液滴接触区域(5)的悬滴板(1)的相应管道(9)传递的液体替换。
28.根据权利要求1至20中任一项的悬滴板(1)在药物系统的筛选中的应用。
29.根据权利要求1至20中任一项的悬滴板(1)在基于细胞的毒性测试中的应用。
30.根据权利要求1至20中任一项的悬滴板(1)在细胞再聚焦体或蛋白质晶体的大量生产中的应用。
CN200880132067.3A 2008-09-22 2008-09-22 悬滴板 Active CN102257123B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CH2008/000391 WO2010031194A1 (en) 2008-09-22 2008-09-22 Hanging drop plate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102257123A true CN102257123A (zh) 2011-11-23
CN102257123B CN102257123B (zh) 2014-03-26

Family

ID=40934095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200880132067.3A Active CN102257123B (zh) 2008-09-22 2008-09-22 悬滴板

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9126199B2 (zh)
EP (1) EP2342317B1 (zh)
JP (1) JP5490803B2 (zh)
CN (1) CN102257123B (zh)
CA (1) CA2737627C (zh)
DK (1) DK2342317T3 (zh)
ES (1) ES2401640T3 (zh)
WO (1) WO2010031194A1 (zh)

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102947710A (zh) * 2010-01-28 2013-02-27 3D生物母体公司 悬滴装置、系统和/或方法
CN105324136A (zh) * 2013-06-17 2016-02-10 H·U·贝尔 用于组织工程的基质和植入物
CN106029862A (zh) * 2014-02-25 2016-10-12 株式会社可乐丽 球状体制造装置、球状体的回收方法及制造方法
CN113046244A (zh) * 2021-03-30 2021-06-29 上海睿钰生物科技有限公司 培养装置及基于培养装置的培养方法
CN113355238A (zh) * 2021-06-10 2021-09-07 上海睿钰生物科技有限公司 一种培养装置及基于培养装置的培养方法
CN114423858A (zh) * 2020-06-25 2022-04-29 株式会社下一代生物 标准型类器官的生产方法
US11345880B2 (en) 2017-07-14 2022-05-31 Corning Incorporated 3D cell culture vessels for manual or automatic media exchange
US11441121B2 (en) 2013-04-30 2022-09-13 Corning Incorporated Spheroid cell culture article and methods thereof
US11584906B2 (en) 2017-07-14 2023-02-21 Corning Incorporated Cell culture vessel for 3D culture and methods of culturing 3D cells
US11613722B2 (en) 2014-10-29 2023-03-28 Corning Incorporated Perfusion bioreactor platform
US11661574B2 (en) 2018-07-13 2023-05-30 Corning Incorporated Fluidic devices including microplates with interconnected wells
US11732227B2 (en) 2018-07-13 2023-08-22 Corning Incorporated Cell culture vessels with stabilizer devices
US11767499B2 (en) 2017-07-14 2023-09-26 Corning Incorporated Cell culture vessel
US11857970B2 (en) 2017-07-14 2024-01-02 Corning Incorporated Cell culture vessel
US11912968B2 (en) 2018-07-13 2024-02-27 Corning Incorporated Microcavity dishes with sidewall including liquid medium delivery surface
US11976263B2 (en) 2014-10-29 2024-05-07 Corning Incorporated Cell culture insert

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8980631B2 (en) * 2009-06-30 2015-03-17 University Of Virginia Patent Foundation High-throughput culture and transfer device and method
US8895048B2 (en) 2010-04-06 2014-11-25 The University Of Kansas Templated islet cells and small islet cell clusters for diabetes treatment
SG187144A1 (en) 2010-07-27 2013-02-28 Insphero Ag Compliant multi-well plate
US9267933B2 (en) 2011-03-03 2016-02-23 Hoffmann-La Roche Inc. Hanging droplet plate
WO2013049165A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 National Health Research Institutes Microfluidic hanging drop chip
CN102719361B (zh) * 2012-06-20 2013-12-18 安徽农业大学 一种组织培养器皿与组织培养方法
KR20140048733A (ko) * 2012-10-16 2014-04-24 삼성전자주식회사 다중 웰 플레이트 및 상기 다중 웰 플레이트를 이용한 표적 물질 분석 방법
WO2014131033A1 (en) 2013-02-25 2014-08-28 Genentech, Inc. Liquid culturing of epithelial stem cells
EP2796873A1 (en) 2013-04-25 2014-10-29 QGel SA Method for a cell-based drug screening assay and the use thereof
US20160115436A1 (en) * 2013-05-10 2016-04-28 The Regents Of The University Of California Digital microfluidic platform for creating, maintaining and analyzing 3-dimensional cell spheroids
DE102013011534B4 (de) 2013-07-10 2015-09-03 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Kultivierungsgefäß und Verfahren zur Kultivierung biologischer Zellen in hängenden Tropfen
US9568404B2 (en) 2014-05-16 2017-02-14 Junyu Mai Method and apparatus for biomolecule analysis
DE102015003019A1 (de) 2015-03-06 2016-09-08 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verfahren und Vorrichtung zur optischen Detektion einer Bewegung in einer biologischen Probe mit räumlicher Ausdehnung
EP3702755A1 (de) 2015-10-26 2020-09-02 FRAUNHOFER-GESELLSCHAFT zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Detektor zur erfassung optischer strahlung
WO2017085119A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Insphero Ag Method and assay for the assessment of a cholestatic risk of a compound
PL238379B1 (pl) 2016-06-10 2021-08-16 Univ Jagiellonski Urządzenie do perfuzyjnych hodowli komórkowych
BR112018075920A2 (pt) 2016-06-15 2019-03-26 Mimetas B.V. dispositivo e métodos de cultura celular
PL3606467T3 (pl) 2017-04-06 2023-12-11 Regents Of The University Of Minnesota Zastawki protetyczne i sposoby ich wytwarzania
JP2019000083A (ja) * 2017-06-20 2019-01-10 オリンパス株式会社 試料作製方法、試料作製キット、観察方法および観察装置
JP2019086375A (ja) 2017-11-07 2019-06-06 オリンパス株式会社 顕微鏡観察用サンプルの作製方法およびサンプル作製キット
JP2019090892A (ja) 2017-11-14 2019-06-13 オリンパス株式会社 試料観察方法および試料ホルダ
JP2019106962A (ja) 2017-12-20 2019-07-04 オリンパス株式会社 サンプル処理方法およびサンプル培養方法
US11845084B2 (en) 2020-05-04 2023-12-19 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Microchip high density hanging drop three-dimension culture platform
TWI760120B (zh) * 2021-02-25 2022-04-01 國立清華大學 懸滴裝置、形成懸滴之方法以及利用懸滴培養細胞之方法
NL2028424B1 (en) 2021-06-10 2022-12-20 Mimetas B V Method and apparatus for forming a microfluidic gel structure

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4912057A (en) * 1989-06-13 1990-03-27 Cancer Diagnostics, Inc. Cell chamber for chemotaxis assay
US5334352A (en) * 1992-09-23 1994-08-02 Icn Biomedicals, Inc. Manifold construction
US6090251A (en) * 1997-06-06 2000-07-18 Caliper Technologies, Inc. Microfabricated structures for facilitating fluid introduction into microfluidic devices
US5882930A (en) * 1997-11-10 1999-03-16 Hyseq, Inc. Reagent transfer device
DE10210908A1 (de) * 2002-03-05 2003-12-04 Alfred Nordheim Vorrichtung zum Aufbringen von flüssigen Medien und Verfahren dazu
US20030235519A1 (en) * 2002-06-24 2003-12-25 Corning Incorporated Protein crystallography hanging drop lid that individually covers each of the wells in a microplate
US7112241B2 (en) * 2002-12-31 2006-09-26 Corning Incorporated Protein crystallography hanging drop multiwell plate
EP1735097B1 (en) 2004-03-12 2016-11-30 Life Technologies Corporation Nanoliter array loading
JP4918755B2 (ja) * 2005-05-30 2012-04-18 株式会社日立製作所 細胞培養容器，細胞培養容器の製造方法、及び培養細胞
US7556776B2 (en) * 2005-09-08 2009-07-07 President And Fellows Of Harvard College Microfluidic manipulation of fluids and reactions
JP5039715B2 (ja) * 2006-01-24 2012-10-03 ブラウン ユニバーシティ 細胞凝集及び封入デバイス及び方法
US8592209B2 (en) * 2006-01-30 2013-11-26 University Of Virginia Patent Foundation Methods of preparing and characterizing mesenchymal stem cell aggregates and uses thereof
KR100836827B1 (ko) 2007-04-09 2008-06-10 전남대학교산학협력단 배아줄기세포의 배상체 형성용 배양용기
WO2013049165A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 National Health Research Institutes Microfluidic hanging drop chip

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8906685B2 (en) 2010-01-28 2014-12-09 The Regents Of The University Of Michigan Hanging drop devices, systems and/or methods
CN102947710B (zh) * 2010-01-28 2015-01-14 3D生物母体公司 悬滴装置、系统和/或方法
CN102947710A (zh) * 2010-01-28 2013-02-27 3D生物母体公司 悬滴装置、系统和/或方法
US11441121B2 (en) 2013-04-30 2022-09-13 Corning Incorporated Spheroid cell culture article and methods thereof
CN105324136A (zh) * 2013-06-17 2016-02-10 H·U·贝尔 用于组织工程的基质和植入物
CN105324136B (zh) * 2013-06-17 2018-11-06 H·U·贝尔 用于组织工程的基质和植入物
US10683477B2 (en) 2014-02-25 2020-06-16 Corning Incorporated Spheroid-producing device, method for recovering spheroids, and method for producing spheroids
CN113046237A (zh) * 2014-02-25 2021-06-29 康宁股份有限公司 球状体制造装置、球状体的回收方法及制造方法
US11208625B2 (en) 2014-02-25 2021-12-28 Corning Incorporated Spheroid-producing device, method for recovering spheroids, and method for producing spheroids
CN106029862A (zh) * 2014-02-25 2016-10-12 株式会社可乐丽 球状体制造装置、球状体的回收方法及制造方法
US11976263B2 (en) 2014-10-29 2024-05-07 Corning Incorporated Cell culture insert
US11667874B2 (en) 2014-10-29 2023-06-06 Corning Incorporated Perfusion bioreactor platform
US11613722B2 (en) 2014-10-29 2023-03-28 Corning Incorporated Perfusion bioreactor platform
US11345880B2 (en) 2017-07-14 2022-05-31 Corning Incorporated 3D cell culture vessels for manual or automatic media exchange
US11584906B2 (en) 2017-07-14 2023-02-21 Corning Incorporated Cell culture vessel for 3D culture and methods of culturing 3D cells
US11767499B2 (en) 2017-07-14 2023-09-26 Corning Incorporated Cell culture vessel
US11857970B2 (en) 2017-07-14 2024-01-02 Corning Incorporated Cell culture vessel
US11970682B2 (en) 2017-07-14 2024-04-30 Corning Incorporated 3D cell culture vessels for manual or automatic media exchange
US11661574B2 (en) 2018-07-13 2023-05-30 Corning Incorporated Fluidic devices including microplates with interconnected wells
US11732227B2 (en) 2018-07-13 2023-08-22 Corning Incorporated Cell culture vessels with stabilizer devices
US11912968B2 (en) 2018-07-13 2024-02-27 Corning Incorporated Microcavity dishes with sidewall including liquid medium delivery surface
CN114423858A (zh) * 2020-06-25 2022-04-29 株式会社下一代生物 标准型类器官的生产方法
CN113046244A (zh) * 2021-03-30 2021-06-29 上海睿钰生物科技有限公司 培养装置及基于培养装置的培养方法
WO2022258037A1 (zh) * 2021-06-10 2022-12-15 上海睿钰生物科技有限公司 一种培养装置及基于培养装置的培养方法
WO2022257296A1 (zh) * 2021-06-10 2022-12-15 上海睿钰生物科技有限公司 一种培养装置及基于培养装置的培养方法
CN113355238A (zh) * 2021-06-10 2021-09-07 上海睿钰生物科技有限公司 一种培养装置及基于培养装置的培养方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2012502636A (ja) 2012-02-02
DK2342317T3 (da) 2013-03-18
EP2342317B1 (en) 2012-12-19
CN102257123B (zh) 2014-03-26
CA2737627C (en) 2018-10-16
US20110306122A1 (en) 2011-12-15
WO2010031194A1 (en) 2010-03-25
EP2342317A1 (en) 2011-07-13
ES2401640T3 (es) 2013-04-23
JP5490803B2 (ja) 2014-05-14
CA2737627A1 (en) 2010-03-25
US9126199B2 (en) 2015-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102257123B (zh) 悬滴板
JP7071553B2 (ja) ３ｄ細胞凝集体の生成及び培養のための装置及び方法
KR102460969B1 (ko) 세포 배양 인서트
US20190322969A1 (en) Devices and methods for generation and culture of 3d cell aggregates
US8906685B2 (en) Hanging drop devices, systems and/or methods
CA2825615C (en) Hanging droplet plate
US11390836B2 (en) Chip platforms for microarray 3D bioprinting
US20160102281A1 (en) Hanging drop plate
ES2676523T3 (es) Método y aparato para cultivar células vivas
JP6405752B2 (ja) 細胞培養容器
CN219279916U (zh) 用于类器官培养的容器
US20220290080A1 (en) Cell culture assemblies and methods of using the same
US20220282192A1 (en) Method and system for cultivating cells in media-exchanging wells
WO2021181337A1 (en) Microfluidic chip for flow-through culturing of bio-objects
CN117280020A (zh) 用于细胞培养的装置和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant