CN102247413B - 续断总皂苷及木通皂苷d的降血脂作用 - Google Patents

Abstract

续断总皂苷及木通皂苷D的降血脂用途，可与药学上可接受载体混合。

Description

续断总皂苷及木通皂苷D的降血脂作用

技术领域

本发明的涉及续断总皂苷及木通皂苷D的降血脂用途。

背景技术

高脂血症(hyperlipidemias)主要是以血浆中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)升高，高密度脂蛋白(HDL-C)降低为表现的一种血脂代谢紊乱状态，它是动脉粥样硬化(AS)和冠心病(CHD)等心脑血管疾病发生的重要危险因素。降低血脂可以延缓AS的进展，进而降低心脑血管疾病的发生率和死亡率。降低胆固醇(TC)可使冠心病的危险性相应降低。目前虽多种化学药物有明确的降脂作用，但长期应用多有不同程度的副作用。如他汀类药物长期用药，极易造成肝损伤，故研究开发疗效肯定毒副作用低的中药新药具有重要意义。

而中医认为，高血脂症主要是由气滞血瘀和气滞痰浊造成的，临床上常通过通气化瘀，降浊化痰进行辨证施治。在用药上，中医常采用天然药食两用药材，因其具有降脂作用确切，毒副作用小，材料容易获得且价格便宜等优势，逐渐受到人们重视。然而，治疗高血脂症的中药常常是药味众多的汤药，服用携带均不方便。大量源于汤药的中成药也因为药味众多而难以控制质量。因此，人们期望通过对中医药的研究，从植物中找出单一的安全有效的活性部位或活性单体，用于高血脂症的治疗。

续断为川续断科川续断属植物川续断(Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai.)的干燥根。始载于《神农本草经》，列为上品。味辛，性微温。有补肝肾，续折伤，止崩漏功能。主治腰膝酸软，风湿痹痛，崩漏经多，胎漏下血及铁打损伤等症，临床应用十分广泛。广泛分布于四川、湖北、湖南、云南、西藏等地，药用资源极为丰富。川续断的道地药材主产于湖北和四川，其中以湖北产量恩施州的产量大，质量优。主含三萜皂苷类、挥发油类、生物碱成分、环烯醚苷类、等化学成分。已有报道治疗骨质疏松症、促进骨损伤愈合、镇痛、兴奋子宫、炎作用、抗氧化、抗衰老等药理活性。木通皂苷D是续断总皂苷中的主要成分。

本发明要解决的技术问题是研究续断总皂苷及木通皂苷D的降血脂用途。为解决上述问题，提供技术方案如下。

续断总皂苷及木通皂苷D在降血脂方面的运用。

所述的续断总皂苷中木通皂苷D含量不低于50％。

所述的木通皂苷D的纯度不低于90％。

所述降血脂方面的运用包括对高血脂症及相关疾病的预防和治疗。

所述组合物包括续断总皂苷及木通皂苷D与药学上可接受的载体或者常规食用辅料。

本发明对高血脂实验动物的TG、TC和LDL-C有显著的降低作用，对HDL-C有显著的升高作用。本发明包括用续断总皂苷及木通皂苷D与药学上可接受载体混合。

药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该组合物可以是口服制剂或注射用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。所用辅料包括：淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明组合物口服给药的剂量为2-3次/天，0.25～0.50g/次。

本发明续断总皂苷提取物和木通皂苷D是从天然的中药续断中提取得到的，续断是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性作用记载。

续断总皂苷及木通皂苷D具有确切的降低高血脂实验动物TG、TC和LDL-C的显著性作用，具有升高HDL-C的显著性作用，且不具有肝毒性，较之辛伐他定相对安全。因此，续断总皂苷及木通皂苷D有开发成降脂药物的前景。

实施例一

续断总皂苷的制备

续断总皂苷的制备一法：取续断粗粉，加入10倍量的90％乙醇，浸泡2小时，回流提取2小时，滤过，得滤液。药渣再用10倍量的90％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇，浓缩至体积适量，得总提取液。将总提取液用石油醚萃取多次，直至石油醚无色。将石油醚萃取后的水液，用水饱和过的正丁醇萃取多次，得正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，得固形物，经65℃减压干燥，得续断总皂苷。

续断总皂苷的制备二法：或者将上述制备一法的总提取液用石油醚萃取(萃取多次，直至石油醚无色)后的水溶液，直接室温放置12小时以上，滤过，得固形物，经65℃减压干燥，既得续断总皂苷。

续断总皂苷的制备三法：或者将上述制备一法的总提取液加水稀释到药材∶药液＝1∶10的浓度(稀释至药液浓度为0.1g药材/ml)，上2.5倍药材重的已经处理过的HPD-722树脂(径高比1∶6-1∶8)，流速为1bv/h，上样结束后，静置1h。之后4倍柱体积水至洗脱液无色，流速为2bv/h。50％乙醇8倍柱体积洗脱，流速为2bv/h，收集洗脱液，回收乙醇，得沉淀物，经65℃减压干燥，得续断总皂苷。

上述三种方法制备的续断总皂苷，木通皂苷D含量均可达到≥50％。

实施例二

木通皂苷D的制备

木通皂苷D的制备一法：将上述的续断总皂苷用适量体积的热水溶解或混悬，用经水饱和过的正丁醇萃取精制，经反复精制，可得木通皂苷D。

木通皂苷D的制备二法：将续断总皂苷经硅胶柱层析分离精制，用氯仿-甲醇系统洗脱，在氯仿-甲醇的10∶0.1至7∶3段，可得木通皂苷D。

木通皂苷D的制备三法：将续断总皂苷经ODS柱层析分离精制，用甲醇-水系统洗脱，在甲醇-水的4∶6至8∶2段，可得木通皂苷D。

木通皂苷D的制备四法：将续断总皂苷配制成药液浓度为0.1g药材/ml的溶液，或者将“续断总皂苷的制备三法”中HPD-722树脂柱中50％乙醇的洗脱液加压回收乙醇，用水稀释至药液浓度为0.1g药材/ml。上已处理好的ADS-7树脂，先蒸馏水洗至无色，20％乙醇洗脱至无色，再用90％乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，回收乙醇至无醇味，减压干燥24h。即得木通皂苷D。

上述四种方法制备的木通皂苷D，其纯度可达到≥90％。

实施例三

续断总皂苷及木通皂苷D的降血脂实验

1.实验材料

1.1药物及试剂：0.5％CMC-Na溶液，小鼠灌胃针管，离心管，新鲜鸡蛋若干只，辛伐他汀片(上海信谊万象药业股份有限公司，批号：090801)，血脂康胶襄(北京北大维信生物科技有限公司，批号：20090708)，甘油三酯测定试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20090810)，总胆固醇试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20090810)，低密度脂蛋白测定试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司，批号：20090710)。木通皂苷D(纯度为90％)、主含木通皂苷D的续断总皂苷(木通皂苷D含量为50％)为本实验室自制。

1.2实验主要仪器：TDL80-2B型低速离心机，酶标仪，TGL-16高速台式冷冻离心机。

1.3实验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g。

2.试验样品液的配制

2.175％蛋黄乳溶液制备：取新鲜鸡蛋若干只，底部开一小口空出蛋清，蛋黄2轻放于空烧杯中.将针管探入蛋黄薄膜内，吸取蛋黄液，置100ml的量筒中，量取75ml蛋黄液，以生理盐水稀释至刻度，用磁力搅拌器搅拌蛋黄乳溶液10分钟，使蛋黄乳溶液均匀，减小误差，造模时临时配制。

2.2各供试样品液的配制：

2.2-1.CMC-Na溶液的配制：精密称取5gCMC-Na，1000mL蒸馏水，配制成浓度为0.5％的CMC-Na溶液。

2.2-2.血脂康药液的配制：精密称取5g内容物，以0.5％CMC-Na混悬，定容至100ml，配制成浓度为0.05g/ml的药液样品。

2.2-3.辛伐他汀药液的配制：精密称取14g辛伐他汀片(含辛伐他汀70mg)，100ml0.5％CMC-Na混悬，配成浓度为0.0007g/ml药液样品。

2.2-4.高剂量木通皂苷D药液的配制：精密称取0.75g木通皂苷D。100ml 0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.0075g/ml的药液样品。

2.2-5.低剂量木通皂苷D药液的配制：精密称取0.375g木通皂苷D，100ml0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.00375g/ml的药液样品。

2.2-6.高剂量续断总皂苷药液的配制：精密称取1.5g续断总皂苷。100ml 0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.0015g/ml的药液样品。

2.2-7.低剂量续断总皂苷药液的配制：精密称取0.75g续断总皂苷，100ml0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.0075g/ml的药液样品。

3.实验方法

昆明种小鼠96只，18-22g，雌雄各半，随机分成8组，每组12只。分为正常空白对照组、高脂模型组、辛伐他汀阳性对照组、血脂康阳性对照组、木通皂苷D高剂量组、木通皂苷D低剂量组、续断总皂苷高剂量组、续断总皂苷低剂量组。灌胃给药。正常对照组和高脂模型组每日按0.2ml/10g灌胃0.5％CMCNa，给药组每日灌胃给予0.2ml/10g体积的相应药物，给药剂量分别为：血脂康对照组为1g/kg、辛伐他汀对照组为0.014g/kg、木通皂苷D高剂量组为0.15g/kg、木通皂苷D低剂量组为0.075g/kg、续断总皂苷高剂量组为0.3g/kg、续断总皂苷低剂量组为0.15g/kg。共给药14天。最后一次给药2小时后，各组均腹腔注射75％蛋黄乳生理盐水溶液0.2ml/10g造成实验性高脂血症。小鼠造模20小时后，采用摘眼球采血法，离心分离血清，按照总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白，高密度脂蛋白试剂盒说明书操作，分别测定TC、TG、LDL-C和HDL-C的含量。实验结果如下表1-4所示。

表1.木通皂苷D和续断总皂苷对TG影响的实验结果(X±SD)

注：^*表示模型与空白相比有显著性差异，^**表示模型与空白相比有极显著性差异。^▲表示各给药组与模型组相比有显著性差异，^▲▲表示各给药组与模型组相比有极显著性差异。下同。

表2.木通皂苷D和续断总皂苷对TC影响的实验结果(X±SD)

表3.木通皂苷D和续断总皂苷对LDL-C影响的实验结果(X±SD)

表4.木通皂苷D和续断总皂苷对HDL-C影响的实验结果(X±SD)

4.结果与讨论

模型与空白组相比，TG、TC、LDL-C的浓度均有极显著性升高(p＜0.01)，HDL-C浓度有显著性降低(p＜0.05)，结果表明实验动物造模成功。在TG的浓度变化方面，与模型组相比，血脂康组、辛伐他汀组、木通皂苷D和续断总皂苷的高、低剂量组，均有极显著性降低作用(p＜0.01)。在TC的浓度变化方面，与模型组相比，辛伐他汀组、木通皂苷D高剂量组、续断总皂苷的高、低剂量组，均有极显著性降低作用(p＜0.01)；而血脂康组、木通皂苷D低剂量组，具有显著性降低作用(p＜0.05)。在LDL-C的浓度变化方面，与模型组相比，辛伐他汀组、木通皂苷D高剂量组、续断总皂苷高剂量组，均有极显著性降低作用(p＜0.01)，血脂康组、木通皂苷D低剂量组、续断总皂苷低剂量组具有显著性降低作用(p＜0.05)。在HDL-C的浓度变化方面，与模型组相比，辛伐他汀组、木通皂苷D高剂量组、续断总皂苷高剂量组，具有显著性升高作用(p＜0.05)；血脂康组、木通皂苷D低剂量组、续断总皂苷低剂量组不具有显著性升高作用(p＞0.05)。

实验结果显示，木通皂苷、续断总皂苷具有确切的降低高血脂实验动物TG、TC和LDL-C的显著性作用，具有升高高血脂实验动物HDL-C的显著性作用。

实施例四

续断总皂苷及木通皂苷D与辛伐他汀致肝损伤毒副作用比较

1.实验材料

1.1药品试剂

辛伐他汀片(上海信谊万象药业股份有限公司，批号：080201)，谷丙转氨酶(ALT)临床诊断试剂盒(上海科欣生物技术研究所，批号20090401)，谷草转氨酶(AST)临床诊断试剂盒(上海科欣生物技术研究所，批号20090301)，木通皂苷D(纯度为90％)，主含木通皂苷D的续断总皂苷(木通皂苷D含量为50％)为本实验室自制。

1.2实验仪器

721分光光度计(上海菁华仪器厂)，LXJ-II离心机(上海医用分析仪器厂)，Satrious电子天平(德国)；恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)；移液枪；，低温高速离心机(天美Z323K)。

1.3实验动物

昆明种雄性小白鼠，体重18～22g，由中国药科大学动物中心提供。

2.试验样品液的配制

2.1.CMC-Na溶液的配制：精密称取5gCMC-Na，1000mL蒸馏水，配制成浓度为0.5％的CMC-Na溶液。

2.2.阳性对照药辛伐他汀药液的配制：精密称取14g辛伐他汀片(含辛伐他汀70mg)，100ml的0.5％CMC-Na混悬，配成浓度为0.0007g/ml的药液样品。

2.2各供试样品液的配制：

2.2-1.CMC-Na溶液的配制：精密称取5gCMC-Na，1000mL蒸馏水，配制成浓度为0.5％的CMC-Na溶液。

2.2-2.辛伐他汀药液的配制：精密称取14g辛伐他汀片(含辛伐他汀70mg)，100ml0.5％CMC-Na混悬，配成浓度为0.0007g/ml药液样品。

2.2-3.高剂量木通皂苷D药液的配制：精密称取0.75g木通皂苷D。100ml 0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.0075g/ml的药液样品。

2.2-4.低剂量木通皂苷D药液的配制：精密称取0.375g木通皂苷D，100ml0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.00375g/ml的药液样品。

2.2-5.高剂量续断总皂苷药液的配制：精密称取1.5g续断总皂苷。100ml 0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.015g/ml的药液样品。

2.2-6.低剂量续断总皂苷药液的配制：精密称取0.75g续断总皂苷，100ml0.5％CMC-Na混悬，配制成浓度为0.0075g/ml的药液样品。

3.实验方法

昆明种小鼠72只，18-22g，雌雄各半，随机分成8组，每组12只。分为正常空白对照组、辛伐他汀阳性对照组、木通皂苷D高剂量组、木通皂苷D低剂量组、续断总皂苷高剂量组、续断总皂苷低剂量组。灌胃给药。正常对照组和高脂模型组每日按0.2ml/10g灌胃0.5％CMCNa，给药组每日灌胃给予0.2ml/10g体积的相应药物，给药剂量分别为：辛伐他汀对照组为0.014g/kg、木通皂苷D高剂量组为0.15g/kg、木通皂苷D低剂量组为0.075g/kg、续断总皂苷高剂量组为0.3g/kg、续断总皂苷低剂量组为0.15g/kg。共给药14天。禁食16个小时后，于小鼠眼底静脉丛采血约0.5ml，分离血清(4000rp/min，10min，4℃)，利用试剂盒测定ALT、AST活力。

4.结果与讨论

表5.木通皂苷D和续断总皂苷对ALT影响的测定结果(n＝10，

)

注：^*表示与正常组相比有显著性差异，P＜0.05。下同。

表6.木通皂苷D和续断总皂苷对AST的测定结果(n＝10，

)

ALT测定结果显示，与正常组比较，辛伐他汀，P＜0.05，有显著性差异.说明辛伐他汀有显著性的肝损伤作用，而木通皂苷D和续断总皂苷给药组则没有肝损伤作用.

ASL测定结果显示，与正常组比较，辛伐他汀，P＜0.05，有显著性差异.说明辛伐他汀有显著性的肝损伤作用，而木通皂苷D和续断总皂苷给药组则没有肝损伤作用.

木通皂苷D和续断总皂苷与辛伐他汀在致肝损伤毒副作用方面，存在明显差异，辛伐他汀具有显著性地肝损伤作用，而木通皂苷D和续断总皂苷相对安全。

Claims (5)

1.续断总皂苷在制备降血脂药物中的用途。

2.权利要求1中所述的续断总皂苷中木通皂苷D含量不低于50%。

3.权利要求1中所述的用途，其特征在于主要是通过对胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白的降低作用，以及对高密度脂蛋白的升高作用达到的。

4.权利要求1中所述的用途，其特征在于续断总皂苷被用于制备包括高血脂症以及高血脂症导致的动脉粥样硬化和冠心病的预防和治疗的药物。

5.权利要求1中所述的用途，其特征在于其最终实施形式包括续断总皂苷与药学上可接受的载体或者常规食用辅料。