CN102247352A - 槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法及其在制备抗血栓药物和保健品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于一种槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法及其在制备抗血栓药物和保健品中的应用。槲皮素-7-硫酸酯钠盐在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用，或作为抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分，或利用槲皮素-7-硫酸酯钠盐作为抗血小板聚集、抗血栓药物前体改造。这种人工半合成的槲皮素-7-硫酸酯钠盐，能够显著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，具有很好的抗血小板聚集和抗血栓形成的作用。

Description

槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法及其在制备抗血栓药物和保健品中的应用

技术领域

本发明属于一种槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法及其在制备抗血栓药物和保健品中的应用。 

背景技术

血栓性疾病是一种常见病，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死和静脉血栓塞。调查发现，血栓性疾病是造成老年人死亡的首要原因，严重威胁人类的健康。目前，临床上主要使用抗凝血药、抗血小板聚集药和纤维蛋白溶解药这三类预防和治疗血栓栓塞性疾病。抗血小板类药物具有抑制血小板的粘附、聚集和释放功能，从而防止血栓形成。抗血小板药物可以有效地防止心血管疾病的发生，并可延长患者的生存期，抗血小板药物在临床应用日益广泛。但是，目前临床上使用的抗血栓药物长期使用都存在各种副作用。因此，研制出一种安全有效并适合长期服用的，甚至是终身服用抗血栓药就显得格外重要。 

长期以来人们不断寻找可以降低副作用的药物来预防血栓性疾病，我国中医药研究表明，大量植物来源的单体化合物具有确切的抗血栓作用，与目前已经上市的抗血栓西药和生物技术产品相比，天然中草药安全性好，口服有效。因此，采用现代科学技术寻找具有抗血栓作用的天然、安全、可药食两用的天然药物，让其充分发挥天然的化合物的优势和特点，这是今后新型抗血栓药研究的发展方向。 

槲皮素是天然的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗菌、清除体内自由基、抑制恶性肿瘤生长和转移等多方面的药理作用。是近年来国内外学者研究热门课题。但是，由于槲皮素不溶于水，生物利用度低，因此限制了其在临床上的应用。国内外学者不断尝试增加槲皮素在水中的溶解度。槲皮素的生物活性与其黄酮结构和环上的羟基位置有关，理论上，在力求保持其活性 结构5-羟基和4’-羟基的情况下，将槲皮素改造成水溶性衍生物，可望开发成为一种水溶性的药物。 

我们用槲皮素作为母体分子，采用化学合成法合成出槲皮素水溶性衍生物，并用胶束纸色谱来分离和鉴别，其结构经FAB-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR确定为槲皮素-7-硫酸酯钠盐(sodium quercetin-7-sulfate，SQMS)。我们发现SQMS具有抗血栓形成和抗全血血小板聚集的作用。经检索发现，目前暂无文献报道SQMS抗血栓的功能，在国内外均未发现用SQMS作为抗血栓药物或保健品使用的报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)的用途：抗血小板聚集和抗血栓形成。槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)抑制血小板聚集，防止血栓形成。 

本发明的另一目的是提供一种槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)的制备方法。 

为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是：槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法，由以下原料制成(槲皮素采用重量比，其余采用体积比为单位)： 

槲皮素0.5～3      浓硫酸2～12    饱和NaCl溶液0.5～3 

无水乙醇25～150   浓度30～80％乙醇溶液80～420  水20～120 

制备工艺步骤如下： 

(1)槲皮素在冰浴搅拌下缓慢加入浓硫酸，搅拌反应2～5小时后，在搅拌下小心滴加饱和NaCl溶液，抽滤； 

(2)用饱和NaCl溶液洗涤滤饼至近黄色，滤饼溶于40～60℃热水中，趁热过滤，滤液冷冻，抽滤； 

(3)滤饼真空干燥后用无水乙醇抽提5次，抽提液合并浓缩至干，加入浓度为30％乙醇溶液溶解，冷却至常温，Sephadex LH-20柱(20×300mm)层析，浓度30％、50％、80％乙醇溶液梯度淋洗，按5ml/5分钟，收集淋洗液； 

(4)经纸上电泳监测出组分，将其收集并减压浓缩，浓缩液真空冷冻干燥得淡黄色无定形粉末；黄色粉末经FAB-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR确定为槲皮素-7-硫酸酯钠盐。 

槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用，或作为抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分，或利用槲皮素-7- 硫酸酯钠盐(SQMS)作为抗血小板聚集、抗血栓药物前体改造。 

槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)具有很好的抗血栓形成和抗血小板聚集的作用，本发明可以用于涉及利用该成分制备抗血栓的药物或药物组分或药物前体。 

抗血栓实验过程简介： 

1.SQMS对大鼠颈总动脉血栓形成的影响 

用10％水合氯醛4.5ml/kg腹腔注射将大鼠麻醉，分离一侧颈总动脉和静脉，经静脉注射药物后，用YLS-14B小动物血栓生成仪刺激颈总动脉(电流1mA，刺激时间为5分钟)，观察颈总动脉血栓阻塞情况，对实验数据采用SPSS10.0统计分析软件，采用q检验法，P＜0.01认为有统计学意义。数据结果如下： 

表1.SQMS对大鼠颈总动脉血栓形成的影响(n＝6)

与生理盐水组比较：^*P＜0.01 

2SQMS对胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠血栓形成的影响 

小鼠经腹腔注射药物，30min后尾静脉注入血栓形成诱导剂(胶原蛋白480g/只，肾上腺素16μg/只)，注入诱导剂15min后观察动物的瘫痪或死亡数，对实验数据进行x²检验。P＜0.05认为有统计学意义。数据结果如下： 

表2.SQMS对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓形成的影响(n＝10) 

与生理盐水组比较：^*P＜0.05 

3.SQMS对全血血小板聚集的影响 

兔血用塑料管收集和用ACD(86mmol/L柠檬酸钠，111mmol/L葡萄糖，53mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，取全血0.5ml和生理盐水0.5ml与药物孵育5分钟，然后用凝血酶(500U/L)或20μmol/L腺苷二磷酸(ADP)处理，用全血血小板聚集仪记录聚集情况，记录数据。实验数据进行t检验。 

表3.SQMS对凝血酶和ADP诱导的兔全血血小板聚集的影响(n＝4)

^*P＞0.05，^**P＜0.05，^***P＜0.01 

SQMS的性能： 

抑制血小板聚集，抑制血栓形成。 

SQMS的用途： 

SQMS用于制备抗血栓药物和保健品，用于防止血栓造成的心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞等， 

具体的使用形式： 

1.可制成粉剂，用生理盐水溶解口服。 

2.可制成注射针剂，按注射针剂要求使用。 

3.可制添加糖饮料，制成口服液产品。 

用法： 

1.可单一使用。 

2.可作为抗血栓药物或保健品其中一个组份使用。 

使用的条件： 

使用条件无特殊要求，可在室温条件下使用，剂量为：10-40mg/kg/每天，按中药类食品或药物的条件使用，同时参照目前市面的抗血栓药物和保健品的适用范围。 

具体实施方式

槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法，其工艺步骤如下： 

2g槲皮素在冰浴搅拌下缓慢加入8mL浓硫酸，搅拌反应3小时后，在搅拌下小心滴加100ml饱和NaCl溶液，抽滤，用50ml饱和NaCl溶液洗涤滤饼至近黄色，滤饼溶于40ml 50℃热水中，趁热过滤，滤液冷冻，抽滤，滤饼真空干燥后，用100ml无水乙醇抽提5次，抽提液合并浓缩至干，加入20ml浓度30％乙醇溶液溶解，常温冷却，Sephadex LH-20柱(20×300mm)层析，浓度30％、50％、80％乙醇溶液梯度淋洗，按5ml/5分钟，收集淋洗液，经纸上电泳监测出组分，将其收集并减压浓缩，浓缩液真空冷冻干燥得淡黄色无定形粉末。黄色粉末经FAB-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR确定为槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)。 

Claims (4)

1.槲皮素-7-硫酸酯钠盐在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品中的应用。

2.槲皮素-7-硫酸酯钠盐在制备抗血小板聚集、抗血栓药物和保健品组分的应用。

3.槲皮素-7-硫酸酯钠盐在作为抗血小板聚集、抗血栓药物的前体改造中的应用。

4.一种槲皮素-7-硫酸酯钠盐的制备方法，其特征在于：由以下原料制成，槲皮素采用重量比，其余采用体积比为单位：

槲皮素0.5～3       浓硫酸2～12        饱和NaCl溶液0.5～3

无水乙醇25～150    浓度30～80％乙醇溶液80～420  水20～120

制备工艺步骤如下：

(1)槲皮素在冰浴搅拌下缓慢加入浓硫酸，搅拌反应2～5小时后，在搅拌下小心滴加饱和NaCl溶液，抽滤；

(2)用饱和NaCl溶液洗涤滤饼至近黄色，滤饼溶于40～60℃热水中，趁热过滤，滤液冷冻，抽滤；

(3)滤饼真空干燥后用无水乙醇抽提5次，抽提液合并浓缩至干，加入浓度30％乙醇溶液在溶解，冷却至常温，Sephadex LH-20柱(20×300mm)层析，浓度30％、50％、80％乙醇溶液梯度淋洗，按5ml/5分钟，收集淋洗液；

(4)经纸上电泳监测出组分，将其收集并减压浓缩，浓缩液真空冷冻干燥得淡黄色无定形粉末；黄色粉末经FAB-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR确定为槲皮素-7-硫酸酯钠盐。