CN102241717A - 一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 - Google Patents
一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102241717A CN102241717A CN2011101175813A CN201110117581A CN102241717A CN 102241717 A CN102241717 A CN 102241717A CN 2011101175813 A CN2011101175813 A CN 2011101175813A CN 201110117581 A CN201110117581 A CN 201110117581A CN 102241717 A CN102241717 A CN 102241717A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- typhaneoside
- extraction
- silica gel
- separation
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/54—Improvements relating to the production of bulk chemicals using solvents, e.g. supercritical solvents or ionic liquids
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺，它是经超临界CO2萃取得黄酮类物质、溶剂萃取、硅胶柱色谱分离和富集得香蒲新苷粗品、再利用制备型反相高效液相色谱分离、纯化得到香蒲新苷晶体。本发明不仅可连续提出蒲黄中黄酮类化合物，而且能够制备出高纯度的香蒲新苷单体。
Description
技术领域：
本发明属于中药有效成分提取技术领域，涉及一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺。
背景技术：
香蒲属植物长于池沼、水边或浅沼泽中，世界共有18个种，我国约有10个种，资源极其丰富。蒲黄，别名蒲棒花粉、蒲草黄系香蒲科(Typhaceae)植物水烛香蒲(Typha angustifoliaL.)、东方香蒲(Typha orientalis Presl.)或同属植物的干燥花粉，具有止血、化瘀、通淋的功能，用于吐血、崩漏、外伤出血，经闭痛经，血淋涩痛。蒲黄主要含有甾类、黄酮类、长链脂肪烃类化合物、酸性成分、氨基酸、无机成分等。其中黄酮类成分具有改善微循环、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、促凝血、抗炎、引产、降低血脂及抗动脉粥样硬化等作用。
香蒲新苷(Typhaneoside)是蒲黄中的主要黄酮成分之一，分子式C34H42O20，分子量770.70，结构式如下：
马红飞等通过将香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷分别在不同温度下加热不同时间，对各样品进行HPLC分析，发现香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷在加热过程中，生成一系列分解产物，其中异鼠李素为二者所共有，140℃加热3h或160℃加热1h，香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷无明显变化；180℃加热10min，可检出分解产物，加热3h后仍能检测到香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及其分解产物；200℃或220℃加热1h，香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及其分解产物均不能被检测，因此在烘制蒲黄炭时，烘制温度宜控制在160～180℃(170℃)，而加热时间也应相应控制在3～1h(2h)。郭淑贞等通过药理实验发现香蒲新苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，且其有效剂量范围较广。
目前从蒲黄中提取蒲黄黄酮方法主要采用乙醇提取和大孔树脂分离。中国专利申请号200410101783.9，蒲黄中香蒲新苷的提取分离方法，采用醇提、二次硅胶柱层析、葡聚糖凝胶分离纯化得到香蒲新苷纯品。李维维等采用70％醇提、经AB-8大孔吸附树脂柱、聚酰胺色谱柱、Sephadex LH-20色谱柱等，分离得到香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、柚皮素和异鼠李素四个黄酮对照品。上述方法均反复使用柱层析，生产周期长、成本高。
发明内容：
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺，其特征在于它是经超临界CO2萃取得黄酮类物质、溶剂萃取、硅胶柱色谱分离和富集得香蒲新苷粗品、再利用制备型反相高效液相色谱分离、纯化得到香蒲新苷晶体，具体包括以下步骤：
A.超临界CO2萃取：取蒲黄装入萃取釜在加入丙酮携带剂条件下进行，萃取工艺条件：温度保持在30-55℃，压力为20-40MPa；解析釜温度为40-65℃，压力为4-10MPa；CO2流量为20-30L/h；携带剂丙酮体积百分比为60-90％，加入量是萃取物料量的20％-35％；经过1.5-5h的循环萃取，从解析釜中得到含蒲黄黄酮化合物的萃取物；
B.溶剂萃取：用正丁醇萃取含蒲黄黄酮化合物的萃取物，减压浓缩得浸膏；
C.正相硅胶柱层析分离、富集：以浸膏∶硅胶＝1∶2-6的量加入硅胶，搅拌均匀后低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，以有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱后的溶液，合并含有香蒲新苷的洗脱液，减压浓缩，得香蒲新苷粗品；
D.制备液相分离、纯化：将粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，真空冷冻干燥得到香蒲新苷。
所述的制备高效液相色谱的流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32的混合液(体积比)，流速为5-25ml/min。
本发明采用超临界CO2萃取和制备液相色谱结合对中药进行分离纯化，简便、快速，克服了传统制备方法操作繁琐、分离周期长、环境污染严重等缺点，具有制备量大、产品纯度好、简单易行等优点。
本发明不仅可以连续提取蒲黄黄酮类化合物，而且还能够制备出高纯度的香蒲新苷单体，既适合小型试验，也可放大产业化生产。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明进行说明。
实施例1：
将蒲黄2kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为28MPa，温度为45℃，萃取时间3小时，CO2流量为25L/h，待提取罐内环境稳定后，加入65％丙酮携带剂(药材量的20％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为55℃，压力为8MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得244g浸膏。取50g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶3)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，取粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品264mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为5ml/min，检测波长为254nm。
实施例2：
将蒲黄5kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为33MPa，温度为32℃，萃取时间1.5小时，CO2流量为28L/h，待提取罐内环境稳定后，加入70％丙酮携带剂(药材量的22％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为40℃，压力为4MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得595g浸膏。取50g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶4)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品253mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为15ml/min，检测波长为254nm。
实施例3：
将蒲黄8kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为38MPa，温度为43℃，萃取时间2小时，CO2流量为30L/h，待提取罐内环境稳定后，加入90％丙酮携带剂(药材量的23％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为47℃，压力为10MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得1kg浸膏。取50g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶2)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为150ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品237mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为20ml/min，检测波长为254nm。
实施例4：
将蒲黄10kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为40MPa，温度为37℃，萃取时间5小时，CO2流量为20L/h，待提取罐内环境稳定后，加入85％丙酮携带剂(药材量的21％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为52℃，压力为6MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得1.2kg浸膏。取100g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶5)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品524mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为25ml/min，检测波长为254nm。
实施例5：
将蒲黄15kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为22MPa，温度为52℃，萃取时间4小时，CO2流量为22L/h，待提取罐内环境稳定后，加入75％丙酮携带剂(药材量的20％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为60℃，压力为5MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得1.8kg浸膏。取100g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶3)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品533mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为10ml/min，检测波长为254nm。
实施例6：
将蒲黄20kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为20MPa，温度为30℃，萃取时间3.5小时，CO2流量为26L/h，待提取罐内环境稳定后，加入80％丙酮携带剂(药材量的25％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为43℃，压力为7MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得2.5kg浸膏。取100g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶6)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品528mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为12ml/min，检测波长为254nm。
实施例7：
将蒲黄25kg装入超临界萃取装置的萃取釜中，以超临界CO2为溶剂，进行蒲黄的超临界萃取，萃取压力为26MPa，温度为55℃，萃取时间2.5小时，CO2流量为27L/h，待提取罐内环境稳定后，加入70％丙酮携带剂(药材量的22％)至携带剂储罐中，调节解析斧温度为65℃，压力为8MPa，收集从解析釜出料口放出的萃取物。用正丁醇萃取萃取物，减压浓缩得3kg浸膏。取100g浸膏加硅胶(浸膏∶硅胶＝1∶4)搅拌均匀，低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，氯仿-乙醇混合溶液按体积比9∶1、7∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2进行梯度洗脱，每个梯度洗脱剂用量为200ml，洗脱流速为4ml/min，收集各部分洗脱液，TLC跟踪监测，收集香蒲新苷流分，减压浓缩得到香蒲新苷粗品，将粗品用甲醇配制成10mg/ml浓度的溶液，用制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，得到香蒲新苷纯品541mg。
上述的制备高效液相色谱仪的条件如下：制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为室温，流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32(体积比)，流速为18ml/min，检测波长为254nm。
Claims (3)
1.一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺，其特征在于它是经超临界CO2萃取得黄酮类物质、溶剂萃取、硅胶柱色谱分离和富集得香蒲新苷粗品、再利用制备型反相高效液相色谱分离、纯化得到香蒲新苷晶体。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺，其特征在于具体包括以下步骤：
A.超临界CO2萃取：取蒲黄装入萃取釜在加入丙酮携带剂条件下进行，萃取工艺条件：温度保持在30-55℃，压力为20-40MPa；解析釜温度为40-65℃，压力为4-10MPa；CO2流量为20-30L/h；携带剂丙酮体积百分比为60-90％，加入量是萃取物料量的20％-35％；经过1.5-5h的循环萃取，从解析釜中得到含蒲黄黄酮化合物的萃取物；
B.溶剂萃取：用正丁醇萃取含蒲黄黄酮化合物的萃取物，减压浓缩得浸膏；
C.正相硅胶柱层析分离、富集：以浸膏∶硅胶＝1∶2-6的量加入硅胶，搅拌均匀后低温烘干，再用新硅胶装柱，拌样硅胶上柱，以有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱后的溶液，合并含有香蒲新苷的洗脱液，减压浓缩，得香蒲新苷粗品；
D.制备液相分离、纯化：将粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱仪纯化，收集主成分峰，真空冷冻干燥得到香蒲新苷。
3.根据权利要求1、2所述的一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺，其特征在于所述的制备高效液相色谱的流动相为甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝18∶32的混合液(体积比)，流速为5-25ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011101175813A CN102241717A (zh) | 2011-05-06 | 2011-05-06 | 一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011101175813A CN102241717A (zh) | 2011-05-06 | 2011-05-06 | 一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102241717A true CN102241717A (zh) | 2011-11-16 |
Family
ID=44959989
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011101175813A Pending CN102241717A (zh) | 2011-05-06 | 2011-05-06 | 一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102241717A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108101923A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-01 | 中山大学 | 一种光甘草定单体的分离提纯方法 |
-
2011
- 2011-05-06 CN CN2011101175813A patent/CN102241717A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108101923A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-01 | 中山大学 | 一种光甘草定单体的分离提纯方法 |
| CN108101923B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-07-31 | 中山大学 | 一种光甘草定单体的分离提纯方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102976909B (zh) | 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法 | |
| CN101220062A (zh) | 一种同时制备甜菊苷和莱鲍迪苷a的方法 | |
| CN103408602B (zh) | 一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法 | |
| CN102786563A (zh) | 从大黄中分离三种二苯乙烯苷类单体化合物的制备方法 | |
| CN103833803A (zh) | 超声波提取和树脂纯化多穗柯叶中甜味剂的方法 | |
| CN102219813A (zh) | 一种从连翘叶中提取连翘苷和连翘酯苷的方法 | |
| CN104725450A (zh) | 一种从素馨花中提取高纯度橄榄苦苷的方法 | |
| CN105311075B (zh) | 一种刺五加提取物的制备方法 | |
| US20130231469A1 (en) | Method for preparing albiflorin and paeoniflorin | |
| CN104610401B (zh) | 一种从黄芩中同时提取黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的方法 | |
| CN109879919B (zh) | 一种从酸枣仁中分离制备三种黄酮苷的方法 | |
| CN103142685B (zh) | 一种山核桃叶中总黄酮苷元的提取方法 | |
| CN102250164A (zh) | 一种天麻素的提纯方法 | |
| CN101234147A (zh) | 注射用金莲花总黄酮的制备方法 | |
| CN107722080A (zh) | 一种从岩白菜叶中提取熊果苷的方法 | |
| CN105175426B (zh) | 一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法 | |
| CN102702289A (zh) | 应用高速逆流色谱法从大叶白麻中纯化三种黄酮苷的方法 | |
| CN103304562A (zh) | 一种黄柏碱单体及其盐的制备方法 | |
| CN108042618B (zh) | 一种利用亚临界水提取芍药总苷的方法 | |
| CN102241717A (zh) | 一种高纯度香蒲新苷的分离制备工艺 | |
| CN105434539A (zh) | 一种荷叶黄酮的组合物 | |
| CN105273015B (zh) | 一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法 | |
| CN102268052A (zh) | 一种山茶苷a的制备方法 | |
| CN102093210A (zh) | 6种银杏酸单体的纯化制备方法 | |
| CN102702216A (zh) | 一种高纯度次野鸢尾黄素的分离制备工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111116 |