CN102241686A - 一种水黄皮素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种水黄皮素的制备方法，包括以下步骤：将水罗伞干燥药材粉碎，加入适量的蒸馏水和生物酶自然酶解，得到酶解原料，以85％乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取液浓缩至无醇味，上大孔树脂吸附，洗脱液浓缩干燥得到水黄皮素粗品，采用制备高效液相分离得到水黄皮素。本发明工艺稳定、周期短、得率高、产品质量好，纯度可达98％以上。
Description
技术领域：
本发明涉及一种从植物体内提取制备活性成分的方法，具体涉及一种水黄皮素的制备方法。
背景技术：
水黄皮素，又称水黄皮次素。针状结晶，溶于甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚，几乎不溶于石油醚、稀无机酸。水黄皮素具有抗结核杆菌的作用，可用于白癜风的治疗。
水罗伞为豆科植物干豆花的干燥根，具有散瘀消肿、止痛宁神、益智等功效，主要用于治疗跌打肿痛、肾虚腰痛、智力低下、小儿疳积、骨折、病后及产后虚弱等症。本品资源十分丰富，主产与广西、广东。其主要含有黄酮类化合物等活性成分，其中水黄皮素的含量高达0.45％。
水黄皮素提取方法公开较少，尤其高含量的水黄皮素制备方法。如中国专利(申请号为200710050173.4)“水罗伞总黄酮的提取方法”，该专利采用超临界二氧化碳流体萃取方法，乙醇作携带剂，从水罗伞药材中提取含水罗伞黄酮化合物的萃取物，再用回流提取的方法从萃取物中提取水罗伞总黄酮。该法只是得到低含量的水黄皮素。
发明内容：
本发明的目的是提供一种水黄皮素的制备方法，工艺专属性高，所得产品含量高。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种水黄皮素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将水罗伞干燥药材粉碎，加入适量蒸馏水和生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，以85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度50-75℃，提取时间为1-2h，得到提取液，浓缩至无醇味，通过大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品，采用制备高效液相色谱进行分离，以40-45％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，检测波长为260nm，收集流分浓缩干燥得到水黄皮素。
所述生物酶的用量为0.5-0.8％。
所述85％的乙醇溶液得用量与药材重量比为12-18∶1。
所述大孔树脂型号可选AB-8、LSA-21、D-101、HPD-400等。
本发明的提取工艺采用酶解法和连续逆流提取法相结合，可以破坏植物纤维，提取率高，周期短，能耗低；通过大孔树脂进行纯化，除杂效果好，且在制备高液相色谱前先用大孔树脂除杂，可延长色谱柱的使用寿命；以制备型高液相为分离手段，可以获得纯度在98％以上的水黄皮素，且单针分离时间短，非常适合大批量的制备，可实现批量制备。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
将水罗伞干燥药材粉碎，取1kg，加入适量蒸馏水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，加入12kg85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度60℃，提取时间为2h，得到提取液，提取液浓缩至无醇味，通过AB-8大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用4L 70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品；用85％乙醇溶解，配成浓度为50mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为7cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以40％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，控制流动相流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为260nm，收集含有水黄皮素的高纯度流分，浓缩至干，得含量为98.26％的水黄皮素3.2g。
实施例2：
将水罗伞干燥药材粉碎，取1kg，加入适量蒸馏水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，加入18kg85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度65℃，提取时间为1h，得到提取液，提取液浓缩至无醇味，通过LSA-21大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用7L 70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品；用85％乙醇溶解，配成浓度为80mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为7cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以40％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，控制流动相流速为100ml/min，紫外在线检测，检测波长为260nm，收集含有水黄皮素的高纯度流分，浓缩至干，得含量为98.44％的水黄皮素3.0g。
实施例3：
将水罗伞干燥药材粉碎，取1kg，加入适量蒸馏水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，加入15kg 85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度55℃，提取时间为1.5h，得到提取液，提取液浓缩至无醇味，通过D-101大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用5L 70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品；用85％乙醇溶解，配成浓度为100mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10μm，柱长为45cm、直径为12cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以45％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，控制流动相流速为150ml/min，紫外在线检测，检测波长为260nm，收集含有水黄皮素的高纯度流分，浓缩至干，得含量为98.50％的水黄皮素2.9g。
实施例4：
将水罗伞干燥药材粉碎，取1kg，加入适量蒸馏水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，加入16kg85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度50℃，提取时间为1h，得到提取液，提取液浓缩至无醇味，通过HPD-400大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用6L 70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品；用85％乙醇溶解，配成浓度为50mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10μm，柱长为25cm、直径为10cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以40％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，控制流动相流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为260nm，收集含有水黄皮素的高纯度流分，浓缩至干，得含量为98.58％的水黄皮素3.4g。
实施例5：
将水罗伞干燥药材粉碎，取1kg，加入适量蒸馏水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，加入18kg85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度75℃，提取时间为2h，得到提取液，提取液浓缩至无醇味，通过HPD-400大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用7L 70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品；用85％乙醇溶解，配成浓度为50mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，制备型高液相色谱制备柱以C18键合相为填料，粒径为10μm，柱长为55cm、直径为12cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以45％乙腈水溶液(含0.06％甲酸)为流动相，控制流动相流速为250ml/min，紫外在线检测，检测波长为260nm，收集含有水黄皮素的高纯度流分，浓缩至干，得含量为98.64％的水黄皮素3.3g。
Claims (4)
1.一种水黄皮素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将水罗伞干燥药材粉碎，加入适量蒸馏水和生物酶自然酶解，得酶解原料，将酶解原料放入提取设备中，以85％的乙醇溶液为溶媒，进行连续逆流提取，提取温度50-75℃，提取时间为1-2h，得到提取液，浓缩至无醇味，通过大孔树脂柱吸附，先用蒸馏水洗脱至下柱液无色，再用70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸干得到水黄皮素粗品，采用制备高效液相色谱分离得到水黄皮素。
2.根据权利要求1所述的一种水黄皮素的制备方法，其特征在于所述生物酶的用量为0.5-0.8％。
3.根据权利要求1所述的一种水黄皮素的制备方法，其特征在于所述85％的乙醇溶液得用量与药材重量比为12-18∶1。
4.利要求1所述的一种水黄皮素的制备方法，其特征在于所述大孔树脂型号可选AB-8、LSA-21、D-101、HPD-400等。
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| CN104248654A (zh) * | 2013-06-26 | 2014-12-31 | 深圳海王药业有限公司 | 水黄皮素或水黄皮提取物在抗流感病毒药物中的应用 |
| CN104892620A (zh) * | 2015-05-15 | 2015-09-09 | 广西壮族自治区中医药研究院 | 一种高纯度水黄皮素的制备方法 |
| CN106879472A (zh) * | 2017-04-12 | 2017-06-23 | 王英 | 一种稳定、高效的朝鲜蓟植株再生无性繁殖方法 |
| CN106902540A (zh) * | 2017-04-21 | 2017-06-30 | 浩宇康宁健康科技（湖北）有限公司 | 中药材全息生化物理耦合系统高值化提取分离方法及厚朴提取物 |
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