CN102240344A - 一种治疗脑缺血的芪草胶囊 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗脑缺血的芪草胶囊，可有效解决脑缺血治疗的问题，其解决的技术方案是，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为3-7∶7-3，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得，本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗前列腺增生方面有显著效果，是治疗前列腺增生的创新，具有巨大的经济和社会效益。

Description

一种治疗脑缺血的芪草胶囊

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种治疗脑缺血的芪草胶囊。

背景技术

脑缺血损伤是临床常见的危害人类健康的常见疾病，其患病率、致残率和病死率都很高，给社会和家庭带来严重的经济和精神负担。脑缺血损伤后，由于脑部血液供应障碍，缺血缺氧引起脑组织坏死，临床表现主要是脑组织缺血、进而导致脑髓神经受损，出现半身不遂、言语謇涩或不语、口舌歪斜、偏身麻木等临床症状，甚至出现神志障碍。由于脑缺血性疾病的高发性及危害性，已受到了社会的广泛关注。缺血导致的缺血性脑损伤是导致中枢神经受损的重要原因，因此防治脑缺血已成为当前研究脑血管疾病的热点之一。常见的缺血性脑血管病有：短暂性脑缺血发作、脑梗塞及脑出血等，具有多发病率、多致残率、多复发率的特点。随着我国人口老龄化的进程加快，预计脑血管病的发病率在今后将会继续升高，其危害将会越来越严重。在脑缺血发展的前期，主要是由于供血障碍，造成血液粘度偏高、血流速度缓慢、红细胞比积增大、进而导致缺氧、血栓的形成、ATP耗竭，乳酸大量堆积，ATP酶活性下降，红细胞变形能力降低，凝血活性及血小板聚集性增强，继而造成脑部微循环障碍，加重脑组织缺血缺氧。

西药治疗脑缺血疾病疗效确切，可以呈现较好的脑缺血或脑缺血再灌注损伤的防治作用，但往往有的药物不良反应、价格较贵给药方式受限、不能广泛和反复应用等受到一定限制。

传统医学认为，脑缺血属于“缺血中风”的范围。中医认为缺血中风的发生主要与风、火、痰、瘀、虚等因素有关，而与瘀关系最为密切。因此，长期以来都主张使用以“活血化瘀”为主的治则来治疗本病。目前，现代医学认为脑缺血的病因和发病机理倾向于微血栓和血液动力学、血液流变性障碍，这与中医的“血瘀”观是一致的。血瘀是脑缺血的病理基础，血瘀导致了血栓形成。同时中医又认为气血相关，气行则血行，气虚则其血非瘀即阻。气虚致血瘀，血瘀日久又可耗气而致气虚，二者互为因果，因此气虚血瘀是脑缺血的主要病机。近年来，“毒邪致中风”理论在中风发病中的作用越来越受到重视，认为火热内灼、痰瘀交阻、成毒犯脑、发为卒中是中风病发生的主导病机。毒生痰饮是中风的基础，毒邪易煎熬津液而生痰，造成脏腑的功能障碍，津液不得正常输布代谢，滞留体内，凝聚成为痰饮，形成中风病发病基础。热毒内蕴，煎液成痰，痰阻经络，脉络不畅，即可发为中风。同时，痰毒又能相互交结，而使病情进一步加重，一旦损伤脑络、闭塞清窍，即可导致昏仆跌倒；若毒壅气机，络气阻遏，血脉凝滞，即致脉络不利，发为中风。此外，有研究发现，中风病的发生发展与免疫炎症机制息息相关。

为了更好发挥中药的抗脑缺血损伤作用，在临床上，常将活血化瘀的中药与清热解毒的中药配伍应用，以提高中药临床疗效。活血化瘀偏重改善脑部血流量，清热解毒偏重减轻严重反应。清热解毒合并活血化瘀法治疗脑缺血疾病既解决了“活血化瘀法”治疗脑缺血肢体废用状况不能控制和改善的不足之处，又兼并了近代“解毒通络法”治疗脑缺血的新思想。中医利用活血化瘀，清热解毒，益气通络的方药治疗脑缺血，其作用与现代医学的扩血管抗凝，改善局部血液循环及局部细胞代谢功能是一致的。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明的目的就在于提供一种治疗脑缺血的芪草胶囊，可有效解决脑缺血治疗的问题。

本发明解决的技术方案是，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为3-7∶7-3，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量≤益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置过夜(10-12小时)，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上，本品为深黄色的粉末，味苦；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率2.5-3.5％，本品为淡黄色的粉末，味微苦。

黄芪总皂苷：将黄芪提取物用分光光度法(中国药典2005年版一部附录V)测定，本品含黄芪总皂苷以黄芪甲苷计不少于75.0％。

黄芪甲苷：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(35∶65)；蒸发光散射检测器。理论塔板数按黄芪甲苷色谱峰计，不低于4000。

本发明为胶囊剂，内容物为淡黄色至黄棕色颗粒，气微，味微苦，破瘀行气，补益脾肺。用于前列腺增生的治疗，治疗时，口服本发明，一次2粒，一日3次。

本发明制备方法简单，配伍得当，疗效好，无毒副作用，在治疗前列腺增生方面有显著效果，是治疗前列腺增生的创新，具有巨大的经济和社会效益。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1

本发明在具体实施时，可由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为3∶7，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置10小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率2.5％。

实施例2

本发明还可由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为7∶3，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的9％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置11小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液20℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率3％。

实施例3

本发明也可由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为5∶5，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的8％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置12小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率3.5％。

上述药物的有效组合，并经科学制备，具有活血化瘀，清热解毒，益气通络，扩血管抗凝，改善局部血液循环及局部细胞代谢之功能，有效用于治疗脑缺血症，并经试验得到了充分的证明。有关试验资料如下：

一、对小鼠脑缺血再灌注模型的影响

1实验材料

1.1药物试剂

芪草胶囊，由河南中医学院提供；华佗再造丸，由广州奇星药业有限公司生产；尼莫地平，由山东新华制药股份有限公司生产；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产；甲醛溶液，由莱阳市双双有限公司生产；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；ATP检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；LD检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产。

1.3仪器

UV-2000分光光度计，由尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；FA(N)/JA(N)系列电子天平，由上海民桥精密仪器有限公司生产；TGL-16G高速冷冻离心机，由上海安亭科学仪器厂生产；DZKW-4型电子恒温水浴锅，由北京市永光明医疗仪器厂生产；可调式移液器，由上海雷勃分析仪器有限公司生产。

1.4动物

小鼠：KM，清洁级。体重18～20g；由河北省实验动物中心提供。

2实验方法

动物分组及给药方式：取体重为18～20g左右小鼠70只，雄性，随机均匀分为7组，其中6组造脑缺血再灌注模型，另设1组假手术组。造模型6组分别灌芪草胶囊大、中、小剂量(300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，药液浓度分别为150mg/ml、10mg/ml、50mg/ml，给药体积0.2ml/10g)，尼莫地平(20mg/kg，1mg/ml，0.2ml/10g)和华佗再造丸组(2.67g/kg，0.134g/ml，0.2ml/10g)，模型组(灌同体积的生理盐水)，空白对照组作为假手术组。每天给药1次，连续给药10天。

造模方法及取材：于第10天给药后1h，禁食后12h，4％水合氯醛0.1ml/10g腹腔注射麻醉(小鼠的翻正反射消失)，然后用剪刀剪取颈部的毛，用酒精擦拭干净颈部，用手术刀作颈部正中切口，逐渐分离周围肌肉，直到见到双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA，每个动脉下各置一条5cm长度的手术线，把直径约为0.3mm的针灸针与血管一起结扎，然后松开小鼠的四条腿的绳子，使其斜躺在笼子里，此过程注意其保温，室温保持在25℃。10min后轻轻抽出针灸针，完成再灌注，其中空白组作假手术处理，即除了不结扎CCA外，其它操作同造模各组。再灌15min后快速断头取脑，即在冰盘中分离脑，把脑从矢状线分开成对称的脑，一半取出海马区，迅速放于倒有10％福尔马林溶液中的瓶子中浸泡固定；另外一半放在滤纸上吸干净上面的血迹，然后用天平称量其重量，根据此重计算该加入的冰冷的生理盐水量，以脑组织(g)∶生理盐水(ml)＝1∶9的比例在盛有冰块的玻璃匀浆机中匀浆。4℃，3000r/min离心20min。取上清液于-20℃以下低温保存。制成10％的脑匀浆按测试盒说明操作，分别测定Na⁺-K⁺-ATPase和Ca⁺⁺-Mg⁺⁺-ATPase活力，TXB₂、6-Keto-PGF₁α水平。结果见表1、表2、表3。

表1  芪草胶囊对小鼠脑缺血再灌注模型脑匀浆能量代谢的影响

注：与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

从上表可看出：与假手术组(空白组)比较，模型组小鼠脑匀浆中ATP酶活力显著降低(P＜0.01)，说明细胞膜的Na⁺-K⁺-ATP、Ca⁺⁺-Mg⁺⁺-ATP酶活性降低，ATP耗竭，脑细胞能量代谢严重障碍，损伤机体脑功能；与模型组比，大、中剂量芪草胶囊组、华佗再造丸组和尼莫地平组Na⁺-K⁺-ATP酶活力显著升高(P＜0.01)，大、中剂量芪草胶囊组的Ca⁺⁺-Mg⁺⁺-ATP酶活力和Ca⁺⁺-Mg⁺⁺-ATP酶活力显著升高(P＜0.01)。表明芪草胶囊对小鼠脑缺血再灌注模型的Na⁺-K⁺-ATP、Ca⁺⁺-Mg⁺⁺-ATP活力有升高作用。

表2  芪草胶囊对小鼠脑缺血再灌注模型脑皮层匀浆TXB₂、6-Keto-PGF₁α水平的影响

注：与与模型组比较^**P＜0.01，^*P＜0.05

从上表可看出，与假手术组比，模型组TXB₂水平显著升高(P＜0.01)、6-Keto-PGF1α显著降低(P＜0.01)，说明造脑缺血模型成功。与模型组比，大、中剂量芪草胶囊组、尼莫地平组和华佗再造丸组可显著性降低TXB₂水平(P＜0.01)，可显著升高6-Keto-PGF1α水平(P＜0.01)，小剂量芪草胶囊组、可明显降低TXB₂水平(P＜0.05).

对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑部海马区组织形态学观察的结果：假手术组(空白对照组)小鼠脑神经细胞均正常，神经细胞胞浆丰富，核及核仁均清晰可见；模型组动物脑神经细胞大部分呈萎缩改变，细胞体积缩小，胞浆明显减少，核明显固缩等病理改变，少部分神经细胞出现水肿病理改变，细胞胞浆增多而透明；大剂量芪草胶囊组动物脑神经细胞大部分细胞胞浆丰富，明显恢复，而小部分细胞仍然呈萎缩状态，核固缩；中剂量芪草胶囊组部分动物脑神经细胞得到明显的恢复，细胞体积增大，胞浆丰富。部分动物的脑神经细胞仍然呈萎缩状态，核固缩；小剂量芪草胶囊组的大部分动物的脑神经细胞呈现不同程度的萎缩现象，胞浆不同程度的减少，细胞核固缩。华佗再造丸组动物脑神经细胞部分细胞胞浆丰富，部分细胞发生萎缩现象，细胞体积缩小，核固缩病理改变；尼莫地平组动物脑神经细胞大部分细胞体积明显缩小，核固缩。小部分细胞胞浆丰富，体积改变不大，细胞核均正常。

表3  实验各组动物脑神经病理改变测得结果    单位：只

“-”动物脑神经细胞均正常，细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见；“+”动物脑神经细胞20％呈现萎缩现象，其它80％细胞正常；“++”动物脑神经细胞50％呈萎缩现象，其它细胞呈不同程度的恢复；“+++”动物脑神经细胞80％呈现萎缩现象，其它细胞得到不同程度的恢复。根据半定量指标对实验各组动物脑神经细胞进行测定。

由上表可看出：经Ridit检验，假手术组与模型组比较有显著的统计意义，假手术组脑神经细胞均正常；模型组脑神经细胞大部分呈萎缩改变，细胞体积缩小，胞浆明显减少，核明显固缩，说明造模小鼠出现脑神经细胞的损伤。与模型组比较，大、中芪草胶囊剂量组和尼莫地平组可显著减轻脑缺血再灌注所致的脑细胞损伤，使大部分脑神经细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见；小剂量芪草胶囊组和华佗再造丸组可明显减轻脑缺血所致的脑细胞损伤，对部分脑神经细胞有明显的改善作用。

二、对大鼠血瘀合并脑缺血模型的影响

1实验材料

1.1药物

芪草胶囊，由河南中医学院提供；华佗再造丸，由广州奇星药业有限公司生产；尼莫地平，由山东新华制药股份有限公司生产，用于缺血性脑血管病；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产；甲醛溶液，由莱阳市双双有限公司生产；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；ATP检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；LD检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；LDH检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；MDA检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；肝素钠，由上海生物化学试剂公司生产；地塞米松磷酸钠注射液(DEX)，由江苏涟水制药厂生产。

1.2仪器

UV-2000分光光度计，由尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；FA(N)/JA(N)系列电子天平，由上海民桥精密仪器有限公司生产；TGL-16G高速冷冻离心机，由上海安亭科学仪器厂生产；DZKW-4型电子恒温水浴锅，由北京市永光明医疗仪器厂生产；可调式移液器，由上海雷勃分析仪器有限公司生产；LBY-NJ血液凝聚仪，由北京普利生科贸集团公司生产；匀浆机，由宁波新芝生物科技股份有限公司生产。

1.4动物

大鼠：Wistar，雄性，清洁级，体重160～180g；由河北省实验动物中心提供，合格证编号：907048。

2实验方法

动物分组与给药方法：取Wistar大鼠80只，雄性，体重160～180g，随机均匀分为8组，其中6组造血瘀合并脑缺血模型，分别灌芪草胶囊大、中、小剂量(200mg/kg、140mg/kg、80g/kg，100mg/ml、70mg/ml、40mg/ml，2ml/100g)、尼莫地平(20mg/kg，1mg/ml，2ml/100g)、华佗再造丸(2.67g/kg，0.134g/ml，2ml/100g)及同体积(2ml/100g)的生理盐水三组(为三组：非血瘀假手术为不造血瘀模型不做手术组；血瘀假手术组为造血瘀模型不做手术组；模型组为造血瘀模型又做手术组)，每天给药1次，同时每天大腿内侧肌肉注射DEX 0.25mg/kg(0.2ml/100g，非血瘀假手术组每天注射同体积的生理盐水)，连续注射9天。

造模方法及取材：于第10天灌药后1h，禁食后12h，10％水合氯醛0.35ml/100g腹腔注射麻醉，大鼠板固定，用剪刀剪取颈部的毛，用酒精擦拭干净颈部，用手术刀作颈部正中切口，然后逐渐分离周围肌肉，直到见到双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA，分别拨开两个颈总动脉，每个动脉下各置一条5cm长度的手术线，把直径约为0.3mm的两根针灸针与血管一起结扎，然后松开大鼠的四条腿的绳子，使其斜躺在笼子里，此过程注意其保温，室温保持在25℃。其中假手术组除了不结扎双侧颈总动脉外，其它操作同造模各组。30min后断头取血3ml(塑料试管事先用肝素抗凝)测全血粘度；立即在冰盘中剥离全脑，分离脑，把脑从矢状线分开成对称的脑，一半取出海马区，迅速放于倒有10％福尔马林溶液中的瓶子中浸泡固定；另外一半放入滤纸上吸干净上面的血迹，根据重量计算该加入的冰冷的生理盐水量，进行脑匀浆以脑组织(g)∶生理盐水(ml)＝1∶9的比例在盛有冰块的匀浆机中匀浆，然后把匀浆液倒入一次性塑料试管中，低温静置1小时。4℃，4000rpm离心20min。取上清液于-20℃以下低温保存。按测试盒说明操作分别测LD、LDH、MDA含量。结果见表4、表5、表6、表7、表8、表9。

表4  芪草胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型全血粘度的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与假手术非血瘀组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

由上表5可以看出：与假手术非血瘀组比，假手术血瘀组的全血粘度(1^-1s、5^-1s、30^-1s、200^-1s)明显升高(P＜0.05)，说明该剂量地塞米松所造的血瘀模型是成功的。模型组全血粘度(1^-1s、5^-1s、30^-1s、200^-1s)显著升高(P＜0.01)，说明手术对其刺激可使血瘀程度进一步加重。与模型组比，大、中剂量芪草胶囊和华佗再造丸组可显著降低全血粘度(1^-1s、5^-1s、30^-1s、200^-1s)，改善该模型的血液流变学(P＜0.01)；尼莫地平组可明显降低全血粘度(1^-1s、5^-1s、30^-1s、200^-1s)(P＜0.05)。

表5  芪草胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型全血低切、高切的影响

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与假手术非血瘀组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

由上表可以看出：与假手术非血瘀组比，假手术血瘀组的低切、高切明显升高(P＜0.05)，提示血瘀模型成功；模型组的低切、高切显著增加(P＜0.01)，说明手术对其血瘀模型有一定的刺激作用。大、中剂量芪草胶囊组、华佗再造丸组可显著降低切和高切(P＜0.01)；尼莫地平组可明显降低切和高切(P＜0.05)

表6  芪草胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型血浆粘度和红细胞压积的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与假手术非血瘀组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

由上表可以看出：与假手术非血瘀组比，假手术血瘀组的血浆粘度和红细胞压积均显著性升高(P＜0.01)，说明造血瘀模型是成功的，手术刺激可使血瘀程度更一步加重；与模型组比，大、中剂量芪草胶囊组和华佗再造丸组可显著降低血浆粘度显著降低(P＜0.01)、显著降低红细胞压积(P＜0.01)；尼莫地平组可明显降低血浆粘度显著降低(P＜0.05)、明显降低红细胞压积(P＜0.05).

表7  芪草胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆中乳酸和乳酸脱氢酶含量的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与假手术非血瘀组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

由上表可以看出：与假手术非血瘀组比，模型组乳酸含量显著增高(P＜0.01)，乳酸脱氢酶显著降低(P＜0.01)，说明脑缺血使糖无氧代谢产生的乳酸增多，可引起酸中毒，乳酸脱氢酶活力显著降低。大、中剂量芪草胶囊组河华佗再造丸组可显著降低乳酸含量(P＜0.01)，显著提高乳酸脱氢酶活性(P＜0.01)；小剂量芪草胶囊中剂量组可明显提高乳酸脱氢酶活性(P＜0.05)；尼莫地平可显著降低乳酸的含量(P＜0.01)、可明显提高乳酸脱氢酶活性(P＜0.05)。

表8  芪草胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆中丙二醛含量的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与假手术非血瘀组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

由上表可以看出：与假手术非血瘀组比，模型组丙二醛含量显著增加(P＜0.01)，说明该模型使细胞受自由基攻击的严重程度比较大，引起了膜损伤。芪草胶囊大、中、小剂量，尼莫地平和华佗再造丸组均能显著降低丙二醛的含量(P＜0.01)。

对大鼠血瘀合并脑缺血模型脑部海马区组织的病理观察结果：假手术非血瘀组实验动物脑神经细胞均正常，细胞体积大，胞浆丰富，核及核仁清晰可见；模型组的实验动物脑神经细胞体积缩小，细胞胞浆与细胞核已分界模糊不清，呈现明显的萎缩和自溶现象；大剂量芪草胶囊组的实验动物脑神经细胞大部分得到明显的恢复，细胞体积增大，胞浆丰富；中剂量芪草胶囊组的动物部分脑神经细胞得到不同程度的恢复，但一部分脑神经细胞仍然呈萎缩状态，细胞体积缩小，胞浆明显减少，核均模糊不清；小剂量芪草胶囊组的动物大部分脑神经细胞仍然呈萎缩及水肿状态，细胞体积明显缩小，细胞核模糊不清，有的核出现自溶的现象。华佗再造丸组部分脑神经细胞得到一定的恢复，而部分脑神经细胞仍然呈萎缩状态，细胞体积缩小，胞浆明显减少，核固缩或缩小；尼莫地平组的实验动物大部分脑神经细胞呈萎缩状态，细胞体积明显缩小，有的核固缩，有的核模糊不清.

表9  实验各组动物脑神经病理改变测得结果    单位：只

“-”动物脑神经细胞均正常，细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见。“+”动物脑神经细胞20％出现萎缩现象，细胞胞浆减少，体积缩小，核固缩或自溶，核模糊不清。“++”动物脑神经细胞50％出现萎缩现象，细胞胞浆减少，体积缩小，核固缩或自溶，核模糊不清。“+++”动物脑神经细胞80％出现萎缩现象，细胞胞浆减少，体积缩小，核固缩或自溶现象，核模糊不清，有的出现水肿，核消失。根据半定量的标准对实验各组动物脑神经病理改变进行测定。

经Ridit检验，假手术非血瘀组与模型组有显著的统计意义，模型组脑神经细胞体积缩小，细胞胞浆与细胞核已分界模糊不清，呈现明显的萎缩和自溶现象，说明造模大鼠出现脑神经细胞的损伤。与模型组比较，大、中剂量芪草胶囊组和华佗再造丸组可显著减轻脑缺血所致损伤，部分脑神经细胞大部分得到明显的恢复，细胞体积增大，胞浆丰富；小剂量芪草胶囊和尼莫地平组有减轻脑缺血所致脑损伤的趋势，但是对部分脑神经细胞也有明显恢复作用。

三、对小鼠脑缺血模型脑部血流灌注量的影响

1.实验材料

1.1药品试剂：芪草胶囊，由河南中医学院提供；华佗再造丸，由广州奇星药业有限公司生产；尼莫地平，由山东新华制药股份有限公司生产，用于缺血性脑血管病；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产。

1.2实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g  由河北动物实验中心提供。

1.3实验仪器：激光散斑血流监测视频系统，瑞典帕瑞医学(中国)公司生产。

2.实验方法

取20-22g雄性小鼠，实验室正常饲养5天后开始实验。将小鼠随机分为7组：空白组、模型组、大、中、小剂量芪草胶囊组、尼莫地平组和华佗再造丸组。分别灌服大、中、小剂量芪草胶囊混悬液(400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，200mg/ml、100mg/ml、50mg/ml，0.2ml/10g)、尼莫地平混悬液(200mg/kg，100mg/ml，0.2ml/10g)，和华佗再造丸组(2.67g/kg，0.134g/ml，0.2ml/10g)，空白组和模型组灌服同体积生理盐水。连续给药7天。第7天灌胃后1h开始试验。首先启动计算机和其它外周设备，然后启动Perimed仪器，预热5分钟，当仪器的LED灯停止闪烁时可以开始监测，双击桌面上的PIMsoft软件，选择PeriCam PSI系统。点击工具，进入项目编辑器，设置操作距离为10cm、监测面积的宽度和高度均为2cm、步长设为中、采样频率为23图片/s、持续时间设为直至停止，然后点击应用---OK键。与此同时，小鼠用5％水合氯醛麻醉(0.06ml/10g)，俯卧位固定，将颅骨正中皮肤矢状切开，用止血钳将两侧皮肤拉开，用蘸有过氧化氢溶液的棉球轻轻擦拭颅骨，除去颅骨表面的肌肉组织，用标记笔在小鼠脑部矢状缝与冠状风交叉处作一标记，将小鼠置于仪器的推荐距离范围内，并使仪器与监测部位平行，光束照在标记处，并与检测部位垂直，调整仪器距离与设定距离相一致，圈定扫描面积点击记录按钮开始记录，记录小鼠平静后2分钟内血流灌注量。松开小鼠，仰卧位固定，结扎双侧颈总动脉(假手术组只分离双侧颈总动脉，不做结扎处理)，然后松开小鼠，并俯卧位固定，记录小鼠平静后2分钟内血流灌注量。取截扎前1分50秒--2分钟的血流灌注量平均值作为截扎前的平均灌注量，取3分50秒--4分钟的血流灌注量平均值作为截扎后的平均灌注量，导出报告，并进行分析。结果见表10。

表10  芪草胶囊对小鼠脑缺血模型脑部血流灌注量的影响

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；

由上表可看出，结扎前各组脑膜灌注量间无明显差异，说明实验前分组均匀。加扎后，与空白对照组比，模型组脑膜灌注量显著减少(P＜0.01)，说明造脑缺血模型成功。与模型组比，大、中、小剂量芪草胶囊，尼莫地平和华佗再造丸组均能显著增加结扎后脑膜灌注量(P＜0.01)。

在上述动物试验的基础上，本发明胶囊经临床试用，取得了满意的效果，所谓脑缺血症是指脑缺血损伤后，由于脑部血液供应障碍，缺血缺氧引起脑组织坏死，临床表现主要是脑组织缺血、进而导致脑髓神经受损，出现半身不遂、言语謇涩或不语、口舌歪斜、偏身麻木等临床症状，甚至出现神志障碍，在临床中对患有脑缺血症的患者158人服本发明胶囊治疗，患者每天3次，一次2粒，每粒0.5g，每30天为一疗程，3个疗程统计疗效，脑缺血症状消失或症状明显减轻者155人，有效率98.1％，症状无明显改善者仅3人，占1.9％，而且在用药期间，无发现有不良反应，表明本发明用药安全，疗效高，是治疗脑缺血药物上的一大创新，经济和社会效益巨大。

Claims (4)

1.一种治疗脑缺血的芪草胶囊，其特征在于，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为3-7∶7-3，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量≤益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上，本品为深黄色的粉末，味苦；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率2.5-3.5％，本品为淡黄色的粉末，味微苦。

2.根据权利要求1所述的治疗脑缺血的芪草胶囊，其特征在于，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为3∶7，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的10％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置10小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率2.5％。

3.根据权利要求1所述的治疗脑缺血的芪草胶囊，其特征在于，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为7∶3，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的9％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置11小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液20℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率3％。

4.根据权利要求1所述的治疗脑缺血的芪草胶囊，其特征在于，由马鞭草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉制成，马鞭草提取物与黄芪提取物的重量比为5∶5，马鞭草提取物和黄芪提取物粉碎过100目筛，混合均匀，再加入淀粉、滑石粉混均，制粒，装入胶囊，即得；

淀粉、滑石粉加入量为益母草提取物、黄芪提取物、淀粉、滑石粉总重量和的8％，淀粉、滑石粉重量比为1∶1；

所说的马鞭草提取物是，称取粉碎后的马鞭草药材，加入10倍量质量浓度为60％的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h，第二次1h，合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，然后浸膏加6倍量水，静置12小时过夜，过滤，用盐酸调节pH值为3.0，滤液18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；

AB-型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后备用，将处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60％以上；

所说的黄芪提取物是，称取黄芪药材粗粉，用无水乙醇回流提取2次，第一次加入黄芪药材重量的12倍的无水乙醇提取1.5h，第二次加入黄芪药材重量的8倍的无水乙醇提取1h，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加6倍量水，静置，过滤，得黄芪提取液，浓度为150mg/ml，过大孔吸附树脂柱，先用4倍树脂体积的水洗脱，再用8倍树脂体积质量浓度为30％的乙醇洗去杂质，然后用8倍树脂体积质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得黄芪提取物，得率3.5％。