CN102309622B - 马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用，可有效解决制备防治脑缺血药物的问题，其解决的技术方案是，将马鞭草药材粉碎，加乙醇，浸泡，回流提取，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加水，静置过夜，过滤，调节pH值，滤液低温减压浓缩，得马鞭草提取浓缩液；大孔吸附树脂湿法装柱，吸附12h，所用柱径高比为1∶8，先用水洗脱杂质，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷，该马鞭草总苷可有效解决制备治疗脑缺血的药物，实现对脑缺血的防治问题，本发明制备方法简单，原材料丰富，应用效果好，有效解决了脑缺血治疗的用药问题，是中药上的创新。

Description

马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用。

背景技术

脑缺血是缺血性脑血管病，是由脑局部供血不足或中断引起的脑局灶性功能障碍，是目前临床常见多发病症。缺血导致的缺血性脑损伤是导致中枢神经受损的重要原因，因此防治脑缺血已成为当前研究脑血管疾病的热点之一。常见的缺血性脑血管病有：短暂性脑缺血发作、脑梗塞及脑出血等，具有多发病率、多致残率、多复发率的特点。随着我国人口老龄化的进程加快，脑血管病的发病率在今后将会继续升高，其危害将会越来越严重。

西药治疗脑缺血疾病疗效确切，可以呈现较好的脑缺血再灌注损伤的防治作用，但因药物价格较贵、给药方式受限、不良反应而、不宜长期应用等，受到一定限制。再者也缺少即可很好改善供血、又可减轻炎症发生的防治脑缺血及灌注损伤药物。

传统医学认为，脑缺血属于“缺血中风”的范围。中医认为缺血中风的发生主要与风、火、痰、瘀、虚等因素有关，而与瘀关系最为密切。因此，长期以来都主张使用以“活血化瘀”为主的治则来治疗本病。随着近年来中西医学的互相渗透，中医对本病的病因病机逐渐有了更深的理解。目前，现代医学认为脑缺血的病因和发病机理倾向于微血栓和血液动力学、血液流变性障碍，这与中医的“血瘀”观是一致的。血瘀是脑缺血的病理基础，血瘀导致了血栓形成。传统治疗上常采用活血化瘀，使瘀阻得通，风火得清，痰饮得平，而肿毒得消，并可逐步改善脑部的炎症、损伤、微循环障碍等病理状态，使脑脉通畅，血供恢复，减轻或改善缺血性中风的各种临床症状。活血化瘀类中药主要通过以下机制治疗脑缺血损伤：改善脑循环，增加脑血流量并能改善脑细胞能量代谢，主要通过保护血管内皮，减轻脑水肿，调节血管舒张功能，改善脑部血液循环；减轻神经细胞的神经学损伤，保护神经细胞；抗氧化和清除自由基；拮抗神经毒性作用。此外，活血化瘀类药物也可通过调节神经递质或介质紊乱、拮抗神经毒性作用、减轻炎症反应及免疫损伤、抑制神经细胞凋亡等机制治疗脑缺血损伤。

近年来，“毒邪致中风”理论在中风发病中的作用越来越受到重视，认为火热内灼、痰瘀交阻、成毒犯脑、发为卒中是中风病发生的主导病机。毒生痰饮是中风的基础，毒邪易煎熬津液而生痰，造成脏腑的功能障碍，津液不得正常输布代谢，滞留体内，凝聚成为痰饮，形成中风病发病基础。热毒内蕴，煎液成痰，痰阻经络，脉络不畅，即可发为中风。同时，痰毒又能相互交结，而使病情进一步加重，一旦损伤脑络、闭塞清窍，即可导致昏仆跌倒；若毒壅气机，络气阻遏，血脉凝滞，即致脉络不利，发为中风。以清热解毒之法治疗脑缺血损伤也有良效，不少清热解毒中药也具有改善脑缺血作用。清热解毒类中药主要通过减轻炎症反应，减少脑缺血的继发反应，清除自由基达到抗脑缺血损伤的作用。

活血化瘀偏重改善脑部血流量，清热解毒偏重减轻炎症反应。清热解毒合并活血化瘀法治疗脑缺血疾病既解决了“活血化瘀法”治疗脑缺血肢体废用状况不能控制和改善的不足之处，又兼并了近代“解毒通络法”治疗脑缺血的新思想。

马鞭草（Herba Verbenae）为马鞭草属植物马鞭草（Verbena officinalis L.）的地上部分。植物资源丰富，分布于全国各地。味苦性凉，入肝、脾、肾经，具有清热解毒、凉血散瘀、利水消肿的功效；传统用于疟疾、湿热痢疾泄泻，痈疮肿毒，牙龈肿痛，喉痹肿痛，血滞经闭腹痛、症瘕积聚，水肿腹胀等症。而马鞭草至今未见有用于治疗脑缺血方面的公开报导。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用，可有效解决制备防治脑缺血药物的问题。

本发明解决的技术方案是，将马鞭草药材粉碎，加乙醇，浸泡，回流提取，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加水，静置过夜，过滤，调节pH值，滤液低温减压浓缩，得马鞭草提取浓缩液；大孔吸附树脂湿法装柱，吸附12h，所用柱径高比为1∶8，先用水洗脱杂质，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷，该马鞭草总苷可有效解决制备治疗脑缺血的药物，实现对脑缺血的防治问题。

本发明制备方法简单，原材料丰富，应用效果好，有效解决了脑缺血治疗的用药问题，是中药上的创新。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，将马鞭草药材粉碎，加入10倍量质量浓度为60%的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h,第二次1h。合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20(60℃)，加6倍量水，静置10-12小时过夜，过滤，以盐酸调节pH3.0，滤液在18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，即得马鞭草提取液；AB-8型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后，大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12h，所用柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积的质量浓度为50%的乙醇洗脱，收集50%的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷提取物，所得马鞭草总苷提取物中总环烯醚萜苷含量为60%以上，该马鞭草总苷可有效解决制备治疗脑缺血的药物，实现对脑缺血的防治问题。

上述提取物具有活血化瘀、解毒通络之功效，可有效用于制备防治脑缺血症的药物，用于治疗脑缺血症，实现马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用，并经试验得到了充分的证明，有关试验资料如下：

实验1马鞭草苷对小鼠脑缺血再灌注模型的影响

实验材料

1.1试剂药品

马鞭草总苷含量为60%，有河南中医学院分析化学实验室提供；银杏叶提取物片（金纳多），德国威玛舒培博士药厂生产；尼莫地平，山东新华制药股份有限公司生产；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产；羧甲基纤维素钠，天津市福晨化学试剂厂生产；甲醛溶液，天津市科密欧化学试剂有限公司生产；考马斯亮兰检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；ATP（Adenosine-triphosphate）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；NO（Nitric oxide）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；NOS（Nitric oxide synthetase）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产。

1.2实验动物

昆明种小鼠，雄性，体重28～32g，河北省实验动物中心提供。

2实验方法

造模与给药：取体重为28～32g的昆明种小鼠119只，雄性，随即均匀分为10组，即：假手术组，模型组，尼莫地平组，金纳多组，马鞭草总苷大、中、小剂量组，每组17只。除假手术组外，其余9组造小鼠短暂脑缺血再灌注模型。大、中、小剂量马鞭草总苷（300mg/kg、150mg/kg、75mg/kg，30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml，0.1ml/10g）、金纳多组（40mg/kg，4mg/ml、0.1ml/10g）、尼莫地平组（40mg/kg，4mg/ml、0.1ml/10g）、模型组（灌服同体积0.1%CMC），每天给药1次，连续给药10天。于第10天（禁食12h）给药后1h，10%水合氯醛0.03ml/10g腹腔注射麻醉（小鼠的翻正反射消失），然后用剪刀剪取颈部的毛，用酒精颈部消毒，用手术刀作颈部正中切口，逐渐分离周围肌肉，直到见到双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA，每个动脉用直径约为0.3mm的针灸针钩起来，使成约90度，缺血10min，恢复灌流10min，再缺血10min，恢复供血，缝合小鼠。其假手术组作假手术处理，即除了不阻断CCA外，其它操作同造模各组。实验最初纳入小鼠119只，死亡34只（第二次缺血和手术完成后10h内死亡较多），最终有85只大鼠进入结果分析。

观察指标：所有小鼠再灌注24h后，眼眶取血测血液流变学，然后脱颈椎处死，迅速取脑，矢状切取4%多聚甲醛0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)固定一周，石蜡包埋，行HE染色。另一半在滤纸上吸干净上面的血迹，准确称量其重量，根据此重计算该加入的冰冷的生理盐水量，以脑组织(g)：生理盐水(ml)=1∶9的比例制成10%的脑匀浆，4℃，3000r/min离心10min，取上清液于-20℃以下低温保存。分别测定NO、NOS酶、Na⁺K⁺-ATP酶、Mg⁺⁺-ATP酶及Ca⁺⁺-ATP酶。结果见表1、表2、表3、表4、表5。

表1马鞭草总苷对小鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆一氧化氮水平的影响

与模型组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可看出，与假手术组相比，模型组小鼠脑组织NO的含量显著升高（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大剂量马鞭草总苷组和金纳多组能显著降低NO含量（P<0.01）、中剂量马鞭草总苷组能明显著低NO含量（P<0.05）、。

从各组小鼠死亡情况可以看出，模型组死亡率高于用药各组，且大、中剂量组马鞭草总苷的死亡率最低，说明用药各组对缺血再灌注小鼠有一定的保护作用。

表2马鞭草总苷对小鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆中一氧化氮合酶活力的影响

与模型组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可看出，与假手术组比较，模型组小鼠脑组织中的tNOS、iNOS活力显著升高（P<0.01）；说明造模成功。与模型组比，大剂量马鞭草总苷组、金纳多组、尼莫地平组能显著降低tNOS、iNOS活力（P<0.01），中剂量马鞭草总苷组可明显降低iNOS活力（P<0.05）、显著降低tNOS活力（P<0.01）。

表3马鞭草总苷对小鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆中ATP酶活力的影响

与模型组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可以看出，与假手术组相比，模型组小鼠脑组织中Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca⁺⁺-ATP酶及Mg⁺⁺-ATP酶活力显著降低（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大剂量马鞭草总苷组、尼莫地平组和金纳多组可显著升高Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca⁺⁺-ATP酶及Mg⁺⁺-ATP酶活力（P<0.01）；中剂量马鞭草总苷组可显著升高Ca⁺⁺-ATP酶及Mg⁺⁺-ATP酶活力（P<0.01）、明显升高Na⁺-K⁺-ATP酶活力（P<0.05）。

表4马鞭草总苷对脑缺血再灌注模型小鼠大脑海马区神经细胞病理变化的影响

“-”神经细胞基本正常；“+”少数神经细胞出现轻度萎缩；“++”部分神经细胞出现中度萎缩伴少数细胞轻度水肿；“+++”全部神经细胞出现重度萎缩或伴部分细胞中度水肿

经Ridit检验，与假手术组比，模型组小鼠大脑海马区神经细胞出现显著病理变化（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大、中剂量马鞭草总苷组、金纳多组和尼莫地平组均可显著减轻小鼠大脑海马区神经细胞出现的病理变化（P<0.01），小剂量马鞭草总苷组组可明显减轻小鼠大脑海马区神经细胞出现的病理变化（P<0.05）。

表5马鞭草总苷对脑缺血再灌注模型小鼠大脑海马区神经细胞病理变化的影响

“-”神经细胞基本正常；“+”少数神经细胞出现轻度萎缩；“++”部分神经细胞出现中度萎缩伴少数细胞轻度水肿；“+++”全部神经细胞出现重度萎缩或伴部分细胞中度水肿

皮质区病理观察结果显示：假手术组大脑海马及皮层神经细胞未见异常病理改变均正常；模型组大脑海马区脑神经细胞出现明显的萎缩或消失，大脑皮层神经细胞出现明显的水肿病理改变；金纳多组，尼莫地平组，大、中剂量马鞭草总苷组大脑皮层的少数神经细胞轻度水肿，细胞核较清晰，胶质细胞基本正常；小剂量马鞭草总苷组大脑大脑皮层少部分神经细胞病理改变明显得到恢复，大部分得到一定的恢复。

经Ridit检验，与假手术组比，模型组小鼠大脑皮质区神经细胞出现显著病理变化（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大、中剂量组马鞭草总苷组、尼莫地平组和金纳多组均可显著减轻神经细胞的损伤（P<0.01）。小剂量马鞭草总苷对小鼠大脑皮质区神经细胞没有明显的改善作用（P<0.05）。

5小结

小鼠脑缺血再灌注模型复制成功，毛冬青总黄酮可明显或显著降低脑匀浆中的NO、NOS，升高脑匀浆中ATP酶活力，减轻脑组织海马区和皮质区神经细胞的损伤。

实验2马鞭草总苷对小鼠血瘀合并脑缺血再灌注模型的影响

1实验材料

1.1实验药物

马鞭草总苷含量为60%，有河南中医学院分析化学实验室提供；银杏叶提取物片（金纳多），德国威玛舒培博士药厂生产；尼莫地平，山东新华制药股份有限公司生产；地塞米松磷酸钠注射液，江苏涟水制药有限公司生产；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产；羧甲基纤维素钠，天津市福晨化学试剂厂生产；甲醛溶液，天津市科密欧化学试剂有限公司生产；考马斯亮兰检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；ATP（Adenosine-triphosphate）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；NO（Nitric oxide）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；NOS（Nitricoxide synthetase）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；肝素抗凝管，山东奥赛特。

1.2实验动物

昆明种小鼠，雄性，体重28～32g，河北省实验动物中心提供。

2实验方法

给药与造模：取体重为28～32g的昆明种小鼠216只，雄性，随即均匀分为12组，即：假手术组，血瘀模型组，手术模型组，血瘀加手术模型组，尼莫地平组，华佗再造丸组，马鞭草总苷大、中、小剂量组，每组24只。除假手术组和血瘀模型组外，其余10组造小鼠脑缺血再灌注模型。造模其中8组分别灌服大、中、小剂量马鞭草总苷（300mg/kg、150mg/kg、75mg/kg，30mg/ml、15mg/kg、7.5mg/kg、0.1ml/10g）、华佗再造丸组（1330mg/kg，133mg/ml，0.1ml/10g）、尼莫地平组（40mg/kg，4mg/ml，0.1ml/10g）、假手术组，血瘀模型组，手术模型组，血瘀加手术模型组（灌服同体积0.1%CMC），每天给药1次，连续给药16天。在第1天给药同时，造血瘀模型的10组均每天肌肉注射地塞米松0.8mg/kg（不造血瘀模型的2组注射等体积生理盐水），连续15d。

于第16天（禁食12h后）给药后1h，10%水合氯醛0.03ml/10g腹腔注射麻醉（小鼠的翻正反射消失），然后用剪刀剪取颈部的毛，用酒精颈部消毒，用手术刀作颈部正中切口，逐渐分离周围肌肉，直到见到双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA，每个动脉用直径约为0.3mm的针灸针钩起来，使成约90度，缺血10min。恢复灌流10min，再缺血10min，恢复供血，缝合小鼠。其假手术组作假手术处理，即除了不阻断CCA外，其它操作同造模各组。实验最初纳入小鼠216只，死亡62只（第2次缺血和手术完成后10h内死亡较多），最终有154只大鼠进入结果分析。

3实验结果

3.1对小鼠血瘀合并脑缺血再灌注损伤全血粘度的影响

表6马鞭草总苷、总黄酮对小鼠血瘀合并脑缺血再灌注损伤全血黏度的影响（

mP·S）

与假手术组比较*P<0.05，**P<0.01；与血瘀加手术组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可以看出：与假手术组相比，血瘀组、手术组、血瘀加手术组的全血黏度显著升高（P<0.01），说明造模成功，实验小鼠有明显的血瘀证。与血瘀加手术组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷组、金纳多组和尼莫地平组的全血黏度均显著降低（P<0.01）。

表7马鞭草总苷对小鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆一氧化氮影响

与假手术组比较*P<0.05**P<0.01；与血瘀加手术模型组比较^▲P<0.05^▲▲P<0.01

由上表可看出：与假手术组相比，手术组、血瘀加手术组一氧化氮含量显著升高（P<0.01），说明造模成功，实验小鼠有明显的血瘀证和缺血再灌注手术成功，即血瘀合并脑缺血再灌注模型成功。与血瘀加手术组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷、金纳多组和尼莫地平组的一氧化氮含量均显著降低（P<0.01）。

从各组小鼠死亡情况可以看出，血瘀加手术模型组死亡率高于用药各组，单独手术组死亡率低于血瘀加手术模型组，且大剂量组马鞭草总苷的死亡率最低，说明用药各组对缺血再灌注小鼠有一定的保护作用。

表8马鞭草总苷对小鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆中一样化氮合酶的影响

与假手术组比较*P<0.05，**P<0.01；与血瘀加手术模型组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可以看出：与假手术组相比，手术组、血瘀加手术组一氧化氮合酶活力显著升高（P<0.01），说明造模成功，实验小鼠缺血再灌注手术造模成功，由血液流变指标结果可知，血瘀合并脑缺血再灌注模型成功。与血瘀加手术组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷组、金纳多组和尼莫地平组的一氧化氮合酶活力显著降低（P<0.01）。

表9马鞭草总苷对小鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆ATP酶活力的影响

与假手术组比较*P<0.05，**P<0.01；与血瘀加手术模型组比较^▲P<0.05，^▲▲P<0.01

由上表可看出：与假手术组相比，手术组、血瘀加手术组小鼠脑组织中的Ca⁺⁺-ATP酶、Mg⁺⁺-ATP酶、Na⁺K⁺-ATP酶活力均显著降低（P<0.01），说明缺血再灌注手术造模成功，有血瘀指标结果可知血瘀合并脑缺血再灌注模型成功。与血瘀加手术组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷组、金纳多组和尼莫地平组小鼠脑组织中Ca⁺⁺-ATP酶、Mg⁺⁺-ATP酶、Na⁺K⁺-ATP酶活力显著升高（P<0.01）。

表10马鞭草总苷对脑缺血再灌注模型小鼠大脑海马神经细胞病理变化的影响

“-”神经细胞基本正常；“+”少数神经细胞出现轻度萎缩；“++”部分神经细胞出现中度萎缩伴少数细胞轻度水肿；“+++”全部神经细胞出现重度萎缩或伴部分细胞中度水肿，根据半定量的标准对实验各组动物脑神经病理改变进行测定。

海马区病理观察结果显示：假手术组大脑海马及皮层神经细胞未见异常病理改变均正常；模型组脑神经细胞主要病理改变以细胞萎缩和还有不同程度的水肿，神经细胞主要以萎缩为主；大、中、小剂量马鞭草总苷组、尼莫地平、金纳多组对脑组织神经细胞均有保护作用。

经Ridit检验，与假手术组比，手术模型组、血瘀加手术模型组小鼠大脑海马区神经细胞出现显著病理变化（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷组和尼莫地平、金纳多组小鼠海马区神经细胞病理变化显著减轻（P<0.01）。

表11马鞭草总苷对脑缺血再灌注模型小鼠大脑皮层神经细胞病理变化的影响

“-”神经细胞基本正常；“+”少数神经细胞出现轻度萎缩；“++”部分神经细胞出现中度萎缩伴少数细胞轻度水肿；“+++”全部神经细胞出现重度萎缩或伴部分细胞中度水肿，根据半定量的标准对实验各组动物脑神经病理改变进行测定。

皮质区病理观察结果显示：假手术组小鼠脑神经细胞均正常，血瘀模型组脑神经细胞基本正常，神经细胞胞浆丰富，核及核仁均清析可见；手术模型组、血瘀加手术组小鼠大部分脑神经细胞明显萎缩，胞浆明显减少，细胞核模糊不清或消失；大、中、小剂量马鞭草总苷组、尼莫地平组、金纳多组大部分脑神经细胞、胞浆、细胞核均正常，个别脑神经细胞萎缩，体积缩小，胞浆减少、细胞核及核仁模糊不清。

经Ridit检验，与假手术组比，手术模型组、血瘀加手术模型组小鼠大脑皮质区神经细胞出现显著病理变化（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，大、中、小剂量马鞭草总苷组和尼莫地平、金纳多组小鼠皮质区神经细胞病理变化显著减轻（P<0.01）。

5小结

小鼠血瘀模型，小鼠血瘀合并脑缺血再灌注模型均复制成功，马鞭草总苷可显著降低小鼠全血粘度，可明显或显著降低脑匀浆中的NO、NOS，升高脑匀浆中ATP酶活力，减轻脑组织海马区和皮质区神经细胞的损伤。

Claims (1)

1.一种马鞭草总苷在制备防治脑缺血药物中的应用，所述的马鞭草总苷是，将马鞭草药材粉碎，每次加入10倍量质量浓度为60%的乙醇，浸泡半小时，回流提取两次，第一次1.5h,第二次1h；合并两次提取液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，浸膏加6倍量水，静置10-12小时过夜，过滤，用盐酸调节pH3.0，滤液在18-25℃的低温下减压浓缩至0.6g/mL的溶液，得马鞭草提取液；AB-8型大孔吸附树脂先用乙醇浸泡2小时，用蒸馏水洗涤至无醇后，大孔吸附树脂湿法装柱，将马鞭草提取液以1.5mL/min流速通过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时间为12 h，大孔吸附树脂柱径高比为1∶8，先用4倍树脂体积的水洗脱杂质，再用6倍树脂体积的质量浓度为50%的乙醇洗脱，收集50%的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥粉碎，得马鞭草总苷，所得马鞭草总苷中总环烯醚萜苷含量为60%以上。