CN102230939B - 一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 - Google Patents
一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102230939B CN102230939B CN 201110077420 CN201110077420A CN102230939B CN 102230939 B CN102230939 B CN 102230939B CN 201110077420 CN201110077420 CN 201110077420 CN 201110077420 A CN201110077420 A CN 201110077420A CN 102230939 B CN102230939 B CN 102230939B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- electrode
- galvanochemistry
- proteins
- electrochemical
- different
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Abstract
本发明涉及免疫学领域，公开了一种同时检测样品中多种蛋白含量的电化学免疫分析方法，包含使包裹不同电化学分子的脂质体与不同待测蛋白的抗体形成共偶合物的步骤，每种待测蛋白对应唯一一种电化学分子；向固载了多种待测蛋白的抗体的微孔板中加入待测蛋白标准溶液或待测样品，充分反应后，洗涤，封闭非特异结合位点；再加入共耦合物，充分反应后，加入表面活性剂使脂质体破乳；线性扫描伏安法检测不同电化学分子的电流信号强度，根据标准溶液浓度及电流信号强度绘制标准曲线，根据标准曲线得到待测样品中不同蛋白的浓度。本发明所述方法可同时检测同一样品中不同蛋白浓度，具有灵敏度高，检测快速的特点。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学领域，具体涉及一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法，特别涉及一种可同时检测胃泌素前体释放肽和神经化烯醇酶的电化学免疫分析方法。
背景技术
肺癌的发病率和死亡率一直位居全球首位，并呈逐年增多的趋势。目前用于肺癌辅助诊断的血清肿瘤标志物的检测由于取样简单、易于接受等特点，在肿瘤筛查、诊断、评价治疗疗效等方面具有较大的实用价值。
胃泌素前体释放肽(ProGRP)和神经化烯醇酶(NSE)是提示小细胞肺癌(SCLC)的血清肿瘤标志物，ProGRP是烯醇化酶同功酶，烯醇化酶同功酶根据α，β，γ三个亚基的不同，可分为αα，ββ，γγ，αβ和αγ五种二聚体同功酶。α亚基主要存在于肝，肾等组织；β亚基主要存在于骨骼肌和心肌；γ亚基主要存在于神经组织。γγ亚基组成的同功酶属神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶，此酶在正常人脑组织中含量最高，起源于神经内分泌细胞的肿瘤组织也有异常表达，NSE分子量为87000，pH4.7，是一种酸性蛋白酶，参与糖酵解，主要作用是催化2-磷酸-甘油变成烯醇式磷酸丙酮酸。癌组织糖酵解作用加强，细胞增殖周期加快，细胞内的NSE释放进入血液增多，导致此酶在血清内含量增高。适用于SCLC的早期诊断，以及与NSCLC的鉴别诊断。
胃泌素前体释放肽(ProGRP)是NSE胃泌素释放肽(GRP)相对稳定的前体，是近年来发现的一种新的SCLC肿瘤标志物，它不仅可用于SCLC的早期发现，还有助于判断疗效及肿瘤复发。而ProGRP位于胃泌素释放肽的前端，由27个氨基酸组成，在血液中较为稳定。是测定小细胞肺癌的良好标志物。有助于SCLC的分期和评估化疗效果。
将ProGRP和NSE联合检测，优势互补，能显著提高SCLC的诊断敏感度，特异度和准确率，在SCLC诊断和治疗中有重要的临床应用价值。
发明内容
本发明的目的在于利用电化学的基本原理，提供一种可同时检测多种蛋白如检测胃泌素前体释放肽和神经化烯醇酶的电化学免疫方法。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种同时检测样品中多种蛋白含量的电化学免疫分析方法，包含以下步骤：
步骤1：使包裹不同电化学分子的脂质体与不同待测蛋白的抗体形成共偶合物，每种待测蛋白对应唯一一种电化学分子；
步骤2：向固载了多种待测蛋白的抗体的微孔板中加入待测蛋白标准溶液或待测样品，充分反应后，洗涤，封闭非特异结合位点；再向微孔板中加入步骤1制备的共耦合物，充分反应后，除去非特异性吸附的脂质体，加入表面活性剂使脂质体破乳；
步骤3：线性扫描伏安法检测不同电化学分子的电流信号强度，根据标准溶液浓度及电流信号强度绘制标准曲线，根据标准曲线得到待测样品中不同蛋白的浓度。
作为优选，所述蛋白种类为两种。
作为优选，所述蛋白为胃泌素前体释放肽和神经化烯醇酶。
作为优选，所述电化学分子种类为两种。
作为优选，所述电化学分子为尿酸和抗坏血酸。尿酸UA、抗坏血酸AA是具有电化学活性的芳香族双质子分子，在一定的电压下能够发生氧化还原反应，可以作为电化学免疫传感器的氧化还原探针分子。利用脂质体的空腔结构包埋电活性小分子如铁氰化钾，二茂铁、光化学活性分子、核酸、酶等，可以用于构建高灵敏免疫传感器。
在具体实施例中，本发明采用超声降解法，分别制备包裹具有电化学分子活性的尿酸和抗坏血酸的脂质体，以此作为信号放大的载体，利用免疫反应的高特异性，结合电化学的高灵敏性。
当固载的抗体与待测蛋白发生特异性结合后，再用表面固定了可与待测蛋白特异性结合的检测抗体的内部包埋了不同电化学分子的脂质体进行检测，形成“三明治”夹心形式，用表面活性剂破乳，释放出电化学分子，借助不同电活性分子在不同电位下具有特征的伏安峰的特性，利用修饰电极通过检测不同电化学分子的线性扫描伏安(LSV)峰电流信号强度，根据标准曲线来检测样品中对应的待测蛋白的浓度，电流响应值与待测蛋白浓度成正比。
在本发明的具体实施例中，包裹在脂质体内的电化学分子为尿酸和抗坏血酸，所检测的蛋白为胃泌素前体释放肽和神经化烯醇酶。所述表面活性剂为Triton-100。
在本发明的具体实施例中，步骤3所述检测具体为：以MWNT修饰玻碳电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极作为参比电极，检测电化学分子的峰电流强度。
所述MWNT修饰玻碳电极为浓度为1.0mg/mL、充分分散的MWNT的5％DMF溶液滴涂的玻碳电极。
与现有技术相比，本发明所述方法具有如下优点：
1、可同时对同一样品的不同蛋白含量进行检测；
2、灵敏度高；
3、检测快速；
4、特异性好。
附图说明
图1为实施例4检测ProGRP标准品绘制的标准曲线；
图2为实施例4检测NSE标准品绘制的标准曲线；
图3为对含有不同浓度的ProGRP和NSE的标准溶液响应的线性
扫描伏安图；
图4为本发明所述方法对人体血清中ProGRP含量的检测及ELISA验证结果；
图5为本发明所述方法对人体血清中NSE含量的检测及ELISA验证结果。
具体实施方式
本发明公开了一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：包埋尿酸或抗坏血酸的脂质体的制备
采用标准的超声降解法制备小单层脂质体颗粒，具体方法如下：在一个5mL的圆底烧瓶中加入总质量为1mg，摩尔比为3∶1的DPPC与PE的混合物。再加入体积比为6∶1的氯仿、甲醇混合溶液来溶解磷脂混合物，短时超声，形成稳定的W/O乳剂。充分溶解混匀后，通过减压旋转蒸发除去有机溶媒，圆底烧瓶内壁上形成了一层薄薄的磷脂膜。再向其加入2mL含有UA的磷酸缓冲溶液后，把烧瓶放到50℃的水浴中溶胀1小时，溶胀后剧烈混匀得到多层的脂质体囊泡。这些多层的脂质体囊泡用探头超声仪超声后得到体积均匀的包含了UA的单层脂质体。制得的脂质体溶液离心分离15分钟，除去可能残留的多层脂质体或团聚的脂质体。离心沉淀物分散于PBS中在4℃下储存备用。
参照上述方法，制备内部包埋抗坏血酸的脂质体。
实施例2：脂质体与检测抗体共耦合物的制备
采用戊二醛共价交联法分别将不同的检测抗体标记到实施例1制备的内部包裹了不同电活性分子的脂质体表面。具体操作过程如下：首先将0.5mL 2.5％的戊二醛溶液中逐滴加入包裹了UA的脂质体溶液中，在室温下搅拌反应1小时，使脂质体表面充分醛基化。将反应后的溶液置于透析袋中，置于磷酸缓冲液中在4℃下透析12小时以除去过量的戊二醛分子。取100μL的NSE抗体溶液，缓慢加入到200μL表面醛基化的脂质体溶液中，充分混匀后在25℃下持续搅拌反应1.5小时。最后加入60μL 0.25％的牛血清白蛋白溶液以封闭脂质体表面未反应的醛基，并在25℃下温育反应1.5小时，制得内部包裹了UA的脂质体与NSE抗体的共耦合物，所得产物保存于4℃。
参照上述方法，制备内部包裹了AA的脂质体与ProGRP抗体的共耦合物。
实施例3：测试电极的制备
玻碳电极(Φ＝4mm)依次经1.0，0.3和0.05μm的Al2O3糊抛光后用蒸馏水冲洗干净，再分别在蒸馏水、丙酮、蒸馏水中超声洗涤，清洗后的电极置于室温下晾干，备用。多壁碳纳米管(MWNT)使用前，用浓硝酸∶浓硫酸(1∶1)80℃5h处理，水洗后真空干燥。取5.0mg处理后的MWNT分散于5mL 5％的DMF溶液中，超声30min使其充分分散。取6μL超声充分分散的MWNT溶液滴加在预处理的玻碳电极表面，即制得测试电极，于室温下放置晾干，置于4℃的冰箱中保存待用。
实施例4：本发明所述方法的检测限
采用本发明所述方法对ProGRP和NSE的标准溶液进行检测，绘制标准曲线
分别配制四份不同的标准溶液，其ProGRP和NSE的含量分别为：
(1)100pg/mL ProGRP和5ng/mL NSE；
(2)250pg/mL ProGRP和10ng/mL NSE；
(3)500pg/mL ProGRP和25ng/mL NSE；
(4)1000pg/mL ProGRP和50ng/mL NSE。
具体步骤如下：
向固载了NSE抗体(或ProGRP抗体)的微孔板中加入100μL的NSE标准溶液(或ProGRP标准溶液)，于37℃反应1小时，再加入100μL 0.25％BSA溶液以封闭非特异性异常结合位点。反应完成后用PBS冲洗去掉未结合的样品蛋白和BSA。
向微孔板中加入100μL内部包裹了UA(或AA)的脂质体与NSE抗体(或ProGRP抗体)的共耦合溶液，在37℃下反应1小时。用PBS溶液洗3次，以除去非特异性吸咐的脂质体。
加入100μL，1.2mM的TritonX-100溶液在室温下培育20分钟使脂质体破乳。然后，分别从将固载了NSE抗体和ProGRP抗体的两个微孔板中各取100μL所得溶液并转移到电化学测试池中。采用线性扫描伏安法(扫描范围-0.2～0.8V，扫速为50mV/s)，以三电极系统，即制备好的MWNT修饰玻碳电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极(SCE)作为参比电极，检测AA和UA的峰电流强度，平行检测三次，绘制标准曲线，见图1和图2。
ProGRP的线性范围为100-1000pg/mL，回归方程：为ipc(μA)＝0.118×C[ProGRP](pg/mL)+113.5，检测限为10pg/mL(见图1)。
NSE的线性范围为5-50ng/mL，回归方程：为ipc(μA)＝6.108×C[NSE](pg/mL)+85.31，检测限为0.08ng/mL(见图2)。
实施例5：本发明所述方法的特异性
我们考察本发明所述免疫检测方法的非特异吸附情况，图3为修饰电极对含有不同浓度的ProGRP和NSE的标准溶液响应的线性扫描伏安图；其中a-e曲线代表的检测物浓度分别为：
(a)0pg/mL ProGRP+0ng/mL NSE；
(b)100pg/mL ProGRP+5ng/mL NSE；
(c)250pg/mL ProGRP+10ng/mL NSE；
(d)500pg/mL ProGRP+25ng/mL NSE；
(e)1000pg/mL ProGRP+50ng/mL NSE。其中曲线a为控制其他反应条件一致的情况下，以10ng/mL牛血清白蛋白溶液作为空白试样，得到的线性扫描伏安曲线。由曲线a可见在0V和0.4V附近均未见明显的伏安峰，说明本发明所述免疫检测方法可有效降低非特异吸附。
实施例6：人体血清样品的检测
使用本发明所述方法对人体血清样品进行了检测，并将其结果和标准的ELISA方法检测的结果进行了对照。
具体步骤如下：
向固载了NSE抗体(或ProGRP抗体)的微孔板中各加入100μL的人体血清样品溶液，于37℃反应1小时，再加入100μL 0.25％BSA溶液以封闭非特异性异常结合位点。反应完成后用PBS冲洗去掉未结合的样品蛋白和BSA。
向微孔板中加入100μL内部包裹了UA(或AA)的脂质体与NSE抗体(或ProGRP抗体)的共耦合溶液，在37℃下反应1小时。用PBS溶液洗3次，以除去非特异性吸咐的脂质体。
加入100μL，1.2mM的TritonX-100溶液在室温下培育20分钟使脂质体破乳。然后，分别从将固载了NSE抗体和ProGRP抗体的两个微孔板中各取100μL所得溶液并转移到电化学测试池中。采用线性扫描伏安法(扫描范围-0.2～0.8V，扫速为50mV/s)，以三电极系统，即制备好的MWNT修饰玻碳电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极(SCE)作为参比电极，通过检测AA和UA的峰电流强度，平行检测三次。计算得到的AA和UA的峰电流强度的平均值，并与实施例4绘制的标准曲线比较，得到对应的血清样品中ProGRP和NSE的浓度，并与标准的ELISA方法检测的结果比较，见图4和图5，结果显示，两者相关性良好，结果表明该方法可较好的应用于人血清中ProGRP和NSE的同时检测。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种同时检测样品中多种蛋白含量的电化学免疫分析方法，包含以下步骤：
步骤1：使包裹不同电化学分子的脂质体与不同待测蛋白的抗体形成共耦合物，每种待测蛋白对应唯一一种电化学分子；所述蛋白为胃泌素前体释放肽和神经化烯醇酶；
步骤2：向固载了多种待测蛋白的抗体的微孔板中加入待测蛋白标准溶液或待测样品，充分反应后，洗涤，封闭非特异结合位点；再向微孔板中加入步骤1制备的共耦合物，充分反应后，除去非特异性吸附的脂质体，加入表面活性剂使脂质体破乳；
步骤3：线性扫描伏安法检测不同电化学分子的电流信号强度，根据标准溶液浓度及电流信号强度绘制标准曲线，根据标准曲线得到待测样品中不同蛋白的浓度，所述检测具体为：以MWNT修饰玻碳电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，饱和甘汞电极作为参比电极，检测电化学分子的峰电流强度。
2.根据权利要求1所述的电化学免疫分析方法，其特征在于，所述电化学分子种类为两种。
3.根据权利要求2所述的电化学免疫分析方法，其特征在于，所述电化学分子为尿酸和抗坏血酸。
4.权利要求1所述的电化学免疫分析方法，其特征在于，所述MWNT修饰玻碳电极为浓度为1.0mg/mL、充分分散的MWNT的5%DMF溶液滴涂的玻碳电极。
5.根据权利要求1所述的电化学免疫分析方法，其特征在于，所述表面活性剂为Triton-100。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110077420 CN102230939B (zh) | 2011-03-29 | 2011-03-29 | 一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110077420 CN102230939B (zh) | 2011-03-29 | 2011-03-29 | 一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102230939A CN102230939A (zh) | 2011-11-02 |
| CN102230939B true CN102230939B (zh) | 2013-08-28 |
Family
ID=44843526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110077420 Expired - Fee Related CN102230939B (zh) | 2011-03-29 | 2011-03-29 | 一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102230939B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4173616A1 (en) * | 2021-10-29 | 2023-05-03 | Hospital Clínic de Barcelona | Uric acid liposomes |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102778571B (zh) * | 2012-08-13 | 2014-10-29 | 中国人民解放军第三军医大学第三附属医院 | 一种离子液体-石墨烯纳米复合物、其制备方法及电化学免疫检测方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5789154A (en) * | 1993-10-12 | 1998-08-04 | Cornell Research Foundation, Inc. | Liposome-enhanced immunoassay and test device |
| CN1350638A (zh) * | 1999-05-05 | 2002-05-22 | 英特克科学公司 | 用于电化学定量分析固相内被分析物的系统 |
| CN101368966A (zh) * | 2008-04-29 | 2009-02-18 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫分析测定试剂盒 |
| CN101915792A (zh) * | 2010-08-13 | 2010-12-15 | 上海交通大学 | 用于快速检测沙丁胺醇的电化学免疫传感器的制备方法 |
-
2011
- 2011-03-29 CN CN 201110077420 patent/CN102230939B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5789154A (en) * | 1993-10-12 | 1998-08-04 | Cornell Research Foundation, Inc. | Liposome-enhanced immunoassay and test device |
| CN1350638A (zh) * | 1999-05-05 | 2002-05-22 | 英特克科学公司 | 用于电化学定量分析固相内被分析物的系统 |
| CN101368966A (zh) * | 2008-04-29 | 2009-02-18 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫分析测定试剂盒 |
| CN101915792A (zh) * | 2010-08-13 | 2010-12-15 | 上海交通大学 | 用于快速检测沙丁胺醇的电化学免疫传感器的制备方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Electrochemical Immunosensor for Cholera Toxin Using Liposomes and Poly(3,4-ethylenedioxythiophene)-Coated Carbon Nanotubes;Subramanian Viswanathan et al.;《Analytical Chemistry》;20060215;第78卷(第4期);第1115-1121页 * |
| SubramanianViswanathanetal..ElectrochemicalImmunosensorforCholeraToxinUsingLiposomesandPoly(3 4-ethylenedioxythiophene)-Coated Carbon Nanotubes.《Analytical Chemistry》.2006 |
| 单分子层γ-氨基丁酸共价修饰玻碳电极同时测定多巴胺、尿酸和抗坏血酸;张雷等;《高等学校化学学报》;20030430;第24卷(第4期);第591-594页 * |
| 张雷等.单分子层γ-氨基丁酸共价修饰玻碳电极同时测定多巴胺、尿酸和抗坏血酸.《高等学校化学学报》.2003,第24卷(第4期),第591-594页. |
| 李庭等.脂质体免疫传感器的研究进展.《分析化学》.2008,第36卷(第1期),第122-126页. |
| 脂质体免疫传感器的研究进展;李庭等;《分析化学》;20080131;第36卷(第1期);第122-126页 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4173616A1 (en) * | 2021-10-29 | 2023-05-03 | Hospital Clínic de Barcelona | Uric acid liposomes |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102230939A (zh) | 2011-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102778571B (zh) | 一种离子液体-石墨烯纳米复合物、其制备方法及电化学免疫检测方法 | |
| CN104267184B (zh) | 基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器及其构建与应用 | |
| Soto et al. | Peptide-based simple detection of SARS-CoV-2 with electrochemical readout | |
| WO2021087945A1 (zh) | 用于肿瘤外泌体自校准检测的双功能杂化薄膜的制备方法 | |
| Yu et al. | Facile and highly sensitive photoelectrochemical biosensing platform based on hierarchical architectured polydopamine/tungsten oxide nanocomposite film | |
| Zhong et al. | An electrochemical immunosensor for simultaneous multiplexed detection of neuron-specific enolase and pro-gastrin-releasing peptide using liposomes as enhancer | |
| CN107543851B (zh) | 一种基于草酸银桥联三联吡啶钌纳米复合物的电化学发光传感器的制备方法及应用 | |
| Gu et al. | An overview of recent analysis and detection of acetylcholine | |
| CN102352311A (zh) | 基于适体-金纳米-酶复合物的凝血酶电化学传感器检测法 | |
| EP2130045B1 (en) | A novel potentiometric cholesterol sensor for the quantitative estimation of total cholesterol in human blood serum | |
| CN104181299B (zh) | 一种铂杂化氧化铜多壁碳纳米管传感器的制备方法及应用 | |
| CN103033549A (zh) | 一种基于石墨烯的双酶葡萄糖传感器的制备方法 | |
| CN106442667B (zh) | 一种柿单宁@石墨烯@Pt-Pd无酶传感器检测血糖的方法 | |
| CN104502583A (zh) | 一种碳纳米管/纳米金复合膜电化学免疫传感器及其应用 | |
| CN105259227A (zh) | 一种分子印迹电化学传感器的凝血酶检测方法 | |
| CN105044179B (zh) | 一种检测肿瘤标志物的三维石墨烯修饰电极及其制备方法 | |
| Shi et al. | Self-powered dual-mode sensing strategy based on graphdiyne and DNA nanoring for sensitive detection of tumor biomarker | |
| Wang et al. | A bifunctional electrochemical sensor for simultaneous determination of electroactive and non-electroactive analytes: a universal yet very effective platform serving therapeutic drug monitoring | |
| CN103224925A (zh) | 二茂铁多肽纳米线-葡萄糖氧化酶复合物及其制备和应用方法 | |
| CN102230939B (zh) | 一种检测多种蛋白的电化学免疫分析方法 | |
| KR101061601B1 (ko) | 보론산이 수식된 전극을 이용한 당화단백질의 전기화학적 측정방법 | |
| CN103884707A (zh) | 一种基于鲁米诺和联吡啶钌的电位分辨电致化学发光检测方法及其应用 | |
| CN106093390A (zh) | 一种PtCu@g‑C3N4/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN106198503B (zh) | 一种电化学发光夹心生物传感器及制备与应用 | |
| CN108760861A (zh) | 一种用于检测尿酸的Ni-MOF基电化学传感器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130828 Termination date: 20160329 |