CN102228653A

CN102228653A - 红豆蔻醇提物及其医药用途

Info

Publication number: CN102228653A
Application number: CN2011101656620A
Authority: CN
Inventors: 王滔; 魏晨; 宗伟英; 肖功胜; 苏凡
Original assignee: Huzhou R&D Center for Nutrition and Health of SIBS
Current assignee: Huzhou Zhongke nutrition and health innovation center; Shanghai Institute of Nutrition and Health of CAS
Priority date: 2011-06-20
Filing date: 2011-06-20
Publication date: 2011-11-02
Anticipated expiration: 2031-06-20
Also published as: CN102228653B

Abstract

本发明涉及医药学领域，特别是涉及一种红豆蔻提取物及其医药用途。本发明的红豆蔻提取物可用于治疗痛风性关节炎等炎性病症。

Description

红豆蔻醇提物及其医药用途

技术领域

本发明涉及医药学领域，特别是涉及一种红豆蔻提取物及其医药用途。

背景技术

红豆蔻为姜科植物大高良姜Alpinia galangal Willd.的果实，其性温味辛，归脾胃经，具有散寒燥湿，醒脾消食之功效。主产于广东、广西、云南等地。常用于腹脘冷痛，食积胀满，呕吐泄泻，饮酒过多等症。(国家药典委员会，中华人民共和国药典2010年版一部，142页)

炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。“炎性病症”是指一组存在炎症反应病理变化的病症。

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，内毒素(LPS)是TNFα的诱导剂。TNFα具有多种生物学效应：1)能杀伤和抑制肿瘤细胞的细胞因子；2)促进中性粒细胞吞噬；3)抗感染；4)促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化；5)作为重要的炎症介质，参与某些自身免疫病的病理损伤等。

据文献报道，TNFα表达抑制剂可用于治疗痛风性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、青少年慢性关节炎、强直性脊柱炎、脊椎关节病、成人斯蒂尔病、风湿性多肌病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病、结节病、移植物抗宿主病、哮喘、牙周病、葡萄膜炎、癌症、魏格纳肉芽肿、贝切特病、AA淀粉样变性、坏疽性脓皮症、慢性脱髓鞘多发性神经炎、眼色素层炎、肉状瘤病、舍格伦综合症、SAPHO综合症或TNF受体相关性周期性综合症^[1-21](1.Catrina AI，Trollmo C，af Klint E，et al.Arthritis Rheum.2005；52：61-72；2.Komatsu M，Kobayashi D，Saito K，et al.Clin Chem.2001；47：1297-1301.；3.Van denBrande JM，Braat H，van den Brink GR，et al.Gastroenterology.2003；124：1774-1785.；4.Maini R，St Clair EW，Breedveld F，Furst D，Kalden J，WeismanM，Smolen J，Emery P，Harriman G，Feldman.Lipsky P.ATTRACT Study Group.Lancet 1999；354：1932.；5.Rutgeerts P，D′Haens G，Targan S，Vasiliauskas E，Hanauer SB，Present DH，Mayer L，Van Hogezand RA，Braakman T，De Woody KL，Schaible TF，Van Deventer SJ.Gastroenterology 1999；117：761.；6.Breban M，VignonE，Claudepierre P，Devauchelle V，Wendling D，Lespessailles E，Euller-Ziegler L，Sibilia J，Perdriger A，Mezieres M，Alexandre C，Dougados M.Rheumatology 2002；41：1280.；7.Breban M，Vignon E，Claudepierre P，Devauchelle V，Wendling D，Lespessailles E，Euller-Ziegler L，Sibilia J，Perdriger A，Mezieres M，Alexandre C，Dougados M.Rheumatology 2002；41：1280.；8.Mease PJ.Skin Therapy Letter 2003；8：1.；9.Lamprecht P，Voswinkel J，Lilienthal T，Nolle B，Heller M，Gross WL，Gause A.Rheumatology 2002；41：1303.；10.Sfikakis PP.Ann.Rheum.Dis.2002；61 Suppl2：1151.；11.Gottenberg JE，Merle-Vincent F，Bentaberry F，Allanore Y，Berenbaum F，Fautrel B，Combe B，Durbach A，Sibilia J，Dougados M，Mariette X.Arthritis&Rheumatism 2003；48：2019.；12.Mimouni D，Anbalt GJ，Kouba DJ，Nousari HC.British Journal of Dermatology 2003；148：813.；13.Slavering C，Cantina F，Nicola L，Catalos MG，Machine P，Pulsate L，Paula A，Olivier I，Board L.J.Rheumatol.2003；30：760.；14.Reiff A.Arthritis&Rheumatism 2003；48：2079.；15.Kohn A，Prantera C，Pera A，Cosintino R，Sostegni R，Daperno M.Digestive&Liver Disease 2002；34：626.；16.Wagner AD，Andresen J，Jendro MC，Hulsemann JL，Zeidler H.Arthritis&Rheumatism 2002；46：1965.；17.Aeberli D，Oertle S，Mauron H，Reichenbach S，Jordi B，Villiger PM.Swiss Medical Weekly 2002；132：414.；18.Chin RL，ShermanWH，Sander HW，Hays AP，Alto N.Journal of the Neurological Sciences 2003；210：19.；19.Tsimberidou AM et al Expert Rev Anticancer Ther.2002Jun；2(3)：277-86.20.Hessel，E.M，et al.(1995)Eur.J.Pharmacol.293：401；21.Daphne，T.，et al.(2001)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.25：751)。

现代药理学研究表明：红豆蔻种子的甲醇提取物中分离出的成分腹腔注射能明显抑制大鼠溃疡；其根茎的挥发油显示抗微生物活性，能抗革兰氏阳性菌、酵母菌及一些皮肤真菌，具有细胞毒和抗真菌活性：其果实的甲醇提取物中分离的成分具有抗肿瘤作用(《中华本草》第八卷，上海科学技术出版社，1999)。但迄今尚未见有关红豆蔻提取物抑制TNFα表达活性的报道。

发明内容

本发明的目的旨在提供红豆蔻提取物的一种新的医药用途。

本发明的第一方面是提供了红豆蔻提取物用于制备TNFα表达抑制剂的用途。

在另一优选例中，所述红豆蔻提取物可由如下方法制得：红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

在另一优选例中，所述TNFα表达抑制剂可用于预防或者治疗炎性病症。

在另一优选例中，所述炎性病症为痛风性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、青少年慢性关节炎、强直性脊柱炎、脊椎关节病、成人斯蒂尔病、风湿性多肌病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病、结节病、移植物抗宿主病、哮喘、牙周病、葡萄膜炎、癌症、魏格纳肉芽肿、贝切特病、AA淀粉样变性、坏疽性脓皮症、慢性脱髓鞘多发性神经炎、眼色素层炎、肉状瘤病、舍格伦综合症、SAPHO综合症或TNF受体相关性周期性综合症。

本发明的第二方面是提供了红豆蔻提取物用于制备预防或者治疗痛风性关节炎的药物的用途。

本发明的第三方面是提供一种红豆蔻提取物，其可由如下方法制得：红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

本发明的第四方面是提供一种制备所述红豆蔻提取物的方法，包括将红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

本发明的第五方面是提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的所述红豆蔻提取物和可药用载体。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1在正常人外周血单核细胞中红豆蔻提取物剂量依赖性抑制内毒素诱导的炎症因子TNFα的表达；

图2红豆蔻提取物对大鼠痛风性关节炎模型关节肿胀的影响。

具体实施方式

本发明的问世部分是基于这样一个意外发现：红豆蔻提取物在体外可显著抑制炎症因子TNFα的表达。因此，红豆蔻提取物可用于制备TNFα表达抑制剂。

进而，本发明提供了一种红豆蔻提取物用于制备TNFα表达抑制剂的用途。其中，所述红豆蔻提取物可由如下方法制得：红豆蔻用用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

本发明的另一方面是提供了一种红豆蔻提取物用于制备预防或者治疗痛风性关节炎的药物的用途。

本发明的另一方面是提供一种红豆蔻提取物，其可由如下方法制得：红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

本发明的另一方面是提供一种制备所述红豆蔻提取物的方法，包括将红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

本发明还提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的所述红豆蔻提取物和可药用载体。“治疗有效量”是指能够达到治疗效果的提取物的量。本领域的专业人员能够理解“治疗有效量”可以随着给药的方式、载体的使用以及可能和其他治疗剂合用等而有所不同。

本发明的红豆蔻提取物可用本领域的常规方法制得，例如可将红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥制得。

研究证实，TNFα表达抑制剂可用于预防或者治疗多种“炎性病症”。所述“炎性病症”是指一组存在炎症反应病理变化的病症，包括但不限于：痛风性关节炎(gouty arthritis)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、银屑病关节炎(Psoriatic arthritis)、青少年慢性关节炎(Juvenile chronic arthritis)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis)、脊椎关节病(Spondyloarthropathy)、成人斯蒂尔病(Adult onset Still’s disease)、风湿性多肌病(Polymyalgia rheumatica)、克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis)、牛皮癣(Psoriasis)、硬皮病(scleroderma)、结节病(sarcoidosis)、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease)、哮喘(asthma)、牙周病(periodontal disease)、葡萄膜炎(uveitis)、癌症(cancer)、魏格纳肉芽肿(Wegener’s granulomatosis)、贝切特病(Behcet’s)、AA淀粉样变性(AAamyloidosis)、坏疽性脓皮症(Pyoderma gangrenosum)、慢性脱髓鞘多发性神经炎(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy)、眼色素层炎(Uveitis)、肉状瘤病(Sarcoidosis)、舍格伦综合症(Sjogren’s syndrome)、SAPHO综合症(SAPHOsyndrome)以及TNF受体相关性周期性综合症(TNF receptor associated periodicsyndrome)等。

可以理解，本发明的红豆蔻提取物可用于制备预防或者治疗上述炎性病症的药物。本领域的专业人员能够理解，所述炎性病症或许会在今后被证实具有其他的、未必与TNFα的表达密切相关的发病机理，但这并不影响本发明的红豆蔻提取物用于制备治疗上述炎性病症的药物。

本发明的红豆蔻提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的红豆蔻提取物及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1％-99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的红豆蔻提取物。“可药用载体”不会破坏本发明的红豆蔻提取物的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。

所述可药用载体包括但不限于：软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。

其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。

本发明的红豆蔻提取物以及药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括片剂、颗粒剂、悬浮液、胶囊、溶液等，非肠道给药制剂包括注射液。局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。

本发明的红豆蔻提取物以及药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉、尿道、阴道等。

本发明的红豆蔻提取物及药物组合物的用量可根据给药途径、患者的年龄和体重、病症严重程度的不同而不同，其日剂量可以是0.001～1000mg/kg，可以一次或多次给药。

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但并不意味着本发明仅限于此。

实施例1制备红豆蔻提取物

100g红豆蔻粗粉用90％乙醇回流提取两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻干燥至干。得2.8g红豆蔻提取物。

实施例2红豆蔻提取物抑制肿瘤坏死因子(TNFα)实验研究

实验材料：

细胞：正常人外周血单核细胞(PBMC)

受试药物：红豆蔻提取物(按实施例1方法制备)，溶解于DMSO中，制备得60mg/mL母液。

阳性对照：IKK-2 inhibitor(德国默克公司产品)

试剂：Ficoll-Paque Plus(Amersham Bioscience)；内毒素(LPS，lipopolysaccharide)为德国默克公司产品；TNFαELISA试剂盒为美国R&DSystem公司产品；二甲基亚砜(DMSO)为上海展云化工有限公司产品；细胞培养基及胎牛血清为Gibco公司产品

方法与结果：

新鲜血液以EDTA为抗凝剂，Ficoll分离血细胞，重悬细胞于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，向96孔板中加入100uL密度为2×10⁵细胞/mL新分离的细胞，每孔细胞总数为2×10⁴个，每个样品做2个孔。在细胞中加入指定浓度的供试样品(终浓度分别为1.1、3.3、10、30ug/mL，加样量为10uL)和阳性对照(IKK-2inhibitor，终浓度为10uM)。置于37℃含5％CO2的培养箱中孵育30分钟；

加入10uL浓度为10ug/mL的LPS(终浓度为1ug/mL)，置于37℃含5％CO₂的培养箱中孵育16小时；

于700rpm离心10分钟，将上清转入96孔酶标板中，应用TNFαELISA试剂盒测定TNFα浓度。

通过XLfit软件计算红豆蔻提取物抑制PBMC中TNFα的IC50。

实验结果：

表1.红豆蔻提取物抑制TNFα表达

表2.红豆蔻提取物抑制TNFα表达呈剂量依赖关系

以上实验表明，在正常人外周血单核细胞中红豆蔻提取物明显抑制内毒素诱导的前体炎症因子TNFα的表达，且红豆蔻提取物对TNFα的抑制呈剂量依赖关系。

实施例3红豆蔻提取物对大鼠痛风性关节炎模型的作用

实验材料

1.药物

(1)受试样品名称：红豆蔻提取物(按实施例1方法制备)

(2)阳性对照药：吲哚美辛(Indomethacin)，为上海源叶生物科技有限公司产品

2.动物：SD大鼠，雄性，200±20g，由上海复旦医学院提供

3.其他试剂：尿酸钠(货号：U2875)为Sigma公司产品

实验方法

1.造模方法：大鼠右后足关节内踝关节腔注射5％的尿酸钠悬浊液50uL

2.SD大鼠分组：

1)尿酸钠造模组

2)吲哚美辛治疗对照组(5mg/kg体重)

3)受试样品小剂量组(100mg/kg体重)

4)受试样品中剂量组(300mg/kg体重)

5)受试样品大剂量组(500mg/kg体重)

每组6只大鼠，每只大鼠每次灌胃2mL。

3.给药方式：

吲哚美辛治疗组和受试样品组均提前三天给药，吲哚美辛每天给药一次，受试样品每天给药两次。造模当天第一次给药后一小时对所有组别造模。受试样品治疗组分别于造模后6、20小时关节周长测量完成后再次灌胃给药。

4.评价指标

于造模后不同时间点测量各组大鼠右后足关节周长，其中各组以造模后0小时大鼠右后足关节周长作为基准，痛风性关节炎动物关节肿胀程度以关节周长增加百分比表示。

增加百分比＝(样品组周长-基准)/基准×100％

表1.红豆蔻提取物对痛风性关节炎关节肿胀的影响

**P＜0.01，与同时间点模型组足周长增加百分比比较，n＝6。

*P＜0.05，与同时间点模型组足周长增加百分比比较，n＝6。

以上实验表明，与模型组相比，大剂量组的红豆蔻提取物能显著减轻痛风性关节炎大鼠模型的关节肿胀(P＜0.05)，其中以造模后4-6小时消肿作用最强(P＜0.01)。

实施例4片剂的制备

片剂组成：

实施例1

将红豆蔻提取物、HPMCLVIOO、乳糖混匀，以75％乙醇制软材，24目筛制粒，50℃干燥3小时，18目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，制成1000片，每片0.1g。用于患者，口服，一日3次，每次2片。

实施例5胶囊剂的制备

胶囊组成：

实施例1

将红豆蔻提取物、淀粉、硬脂酸镁混匀，装胶囊，共1000粒，每粒0.1g。用于患者，口服，一日3次，每次2粒。

实施例6注射剂的制备

注射液组成：

实施例1

红豆蔻提取物，加入10％碳酸钠调PH值至7.0～7.5，冷藏过滤，加入吐温80和尼泊金乙酯，加注射用水至1000mL，滤过，分装，灌封，100℃流通蒸汽灭菌，30min即得。

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。

Claims

1.红豆蔻提取物用于制备TNFα表达抑制剂。

2.权利要求1的用途，其中所述红豆蔻提取物可由如下方法制得：红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

3.权利要求1或2的用途，其中所述TNFα表达抑制剂可用于预防或者治疗炎性病症。

4.权利要求3的用途，其中所述炎性病症为痛风性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、青少年慢性关节炎、强直性脊柱炎、脊椎关节病、成人斯蒂尔病、风湿性多肌病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、硬皮病、结节病、移植物抗宿主病、哮喘、牙周病、葡萄膜炎、癌症、魏格纳肉芽肿、贝切特病、AA淀粉样变性、坏疽性脓皮症、慢性脱髓鞘多发性神经炎、眼色素层炎、肉状瘤病、舍格伦综合症、SAPHO综合症或TNF受体相关性周期性综合症。

5.红豆蔻提取物用于制备预防或者治疗痛风性关节炎的药物。

6.权利要求5的用途，其中所述红豆蔻提取物可由如下方法制得：红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

7.一种红豆蔻提取物，其可由如下方法制得：将红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

8.一种制备权利要求7的红豆蔻提取物的方法，包括将红豆蔻用30％-95％乙醇回流提取一至两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩流浸膏，冷冻至干燥。

9.一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求7的红豆蔻提取物和可药用载体。