CN102228498A - 一种菊花茎叶总黄酮的制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种菊花茎叶总黄酮的制备方法及其用途。它是将菊花茎叶经含水乙醇提取,再经大孔树脂富集得到菊花茎叶总黄酮。本发明提供的菊花茎叶总黄酮质量百分比含量不低于50%,其中蒙花苷的质量百分比含量不低于1.0%,木犀草素的质量百分比含量不低于1.0%。本发明提供的菊花茎叶总黄酮可以与不同药用赋形剂制成固体制剂及液体制剂。本发明提供的菊花茎叶总黄酮具有抗氧化、增加冠脉流量、抗血栓等作用,以菊花茎叶总黄酮为原料,添加不同药用赋形剂制备的制剂可以作为治疗冠心病的药物。本发明提供的菊花茎叶总黄酮以药食同源的药材菊花茎叶为原料经无毒害处理精制而成,具有疗效明确、药用物质基础清楚、毒副作用低等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种菊花茎叶总黄酮的制备方法及其用途。
背景技术
菊花是著名的浙八味”药材之一,药食兼用,除了传统的菊花花序入药具有散风清热、平肝明目的功效之外,菊花茎叶也具有不同的药效。如《中药大词典》记载:菊花苗能清肝,明目,用于治疗头风眩晕,目翳;菊花叶能清肺,平肝胆,用于治疗五疔、疳疔毒、痈疽、恶疮等。现代化学成分研究表明,菊花茎叶主要含有挥发油、黄酮类成分等,其中,黄酮类成分为其主要的化学成分类型。前期药理学实验表明,本发明制备的菊花茎叶总黄酮具有良好的抗氧化、增加冠脉流量、抗血栓等作用。本发明首次提供了采用乙醇提取、树脂富集菊花茎叶总黄酮的方法,通过该方法制备的菊花茎叶总黄酮质量百分比含量不低于50%,其中蒙花苷的质量百分比含量不低于1%,木犀草素的质量百分比含量不低于1%。对比专利《菊花茎叶提取物及其制备方法和用途》(200910184716.0)所采用的方法,本发明提供的方法采用乙醇/水作为提取溶媒,由于黄酮类成分极性较低,更易溶于乙醇中,采用乙醇/水作为提取溶媒提取效率更高;其次,本发明首次对菊花茎叶总黄酮中的指标性成分蒙花苷、木犀草素的含量进行了限定;采用本方法制备菊花茎叶总黄酮还具有黄酮回收率高的优点;此外,本发明首次提供了采用本方法制备的菊花茎叶总黄酮在治疗冠心病方面的应用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种菊花茎叶总黄酮的制备方法及其用途。
菊花茎叶总黄酮的制备方法的步骤如下:
1)菊花茎叶采用体积百比浓度10~95%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的6~15倍重量,加热回流提取1~5次,提取时间为1~3小时,提取液过滤,提取液浓缩至0.25~1.0 g生药/mL,得菊花茎叶提取液;
2)将菊花茎叶提取液,经大孔树脂进行吸附,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:1~1:5,上柱流速1~4BV/h,树脂柱径高比为1:3~1:9;吸附后先用水洗涤树脂3~8BV,洗脱流速为2~4BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为20~95%乙醇/水洗脱3~8BV,流速为2~4BV/h,收集乙醇/水洗脱液,浓缩,干燥,即得菊花茎叶总黄酮。
所述的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量不低于50%。所述的菊花茎叶总黄酮含有芹菜素、木犀草素、蒙花苷、橙皮苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷黄酮类成分,其中,蒙花苷的质量百分比含量不低于1%,木犀草素的质量百分比含量不低于1%。所述的菊花茎叶为滁菊茎叶、贡菊茎叶、亳菊茎叶或杭菊茎叶。所述的菊花茎叶为杭菊茎叶。所述的步骤1)采用体积百比浓度50~80%乙醇/水进行提取。所述的步骤2) 用体积百分比浓度为50~75%乙醇/水洗脱3~8BV。所述的大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂,如D101、AB-8、HPD100、LX60。
菊花茎叶总黄酮用于制备治疗冠心病药物。所述的疗冠心病药物具有抗氧化、增加冠脉流量、抗血栓作用。
本发明通过菊花茎叶总黄酮工艺研究,采用优选乙醇提取、大孔树脂富集的制备方法获得菊花茎叶总黄酮质量百分比含量不低于50%,蒙花苷质量百分比含量不低于1%,木犀草素质量百分比含量不低于1%,该制备工艺制备的菊花茎叶总黄酮药效物质基础基本清楚,指标性成分含量稳定,实现了中药药物质量的可控性。
具体实施方式
菊花茎叶总黄酮的制备方法的步骤如下:
1)菊花茎叶采用体积百比浓度10~95%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的6~15倍重量,加热回流提取1~5次,提取时间为1~3小时,提取液过滤,提取液浓缩至0.25~1.0 g生药/mL,得菊花茎叶提取液;
2)将菊花茎叶提取液,经大孔树脂进行吸附,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:1~1:5,上柱流速1~4BV/h,树脂柱径高比为1:3~1:9;吸附后先用水洗涤树脂3~8BV,洗脱流速为2~4BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为20%~95%乙醇/水洗脱3~8BV,流速为2~4BV/h,收集乙醇/水洗脱液,浓缩,干燥,即得菊花茎叶总黄酮。
所述的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量不低于50%。所述的菊花茎叶总黄酮含有芹菜素、木犀草素、蒙花苷、橙皮苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷黄酮类成分,其中,蒙花苷的质量百分比含量不低于1%,木犀草素的质量百分比含量不低于1%。所述的菊花茎叶为滁菊茎叶、贡菊茎叶、亳菊茎叶或杭菊茎叶。所述的菊花茎叶为杭菊茎叶。所述的步骤1)采用体积百比浓度50~80%乙醇/水进行提取。所述的步骤2) 用体积百分比浓度为50~75%乙醇/水洗脱3~8BV。
菊花茎叶总黄酮用于制备治疗冠心病药物。所述的疗冠心病药物具有抗氧化、增加冠脉流量、抗血栓作用。
本发明同时对菊花茎叶总黄酮治疗冠心病的作用进行了考察。研究结果:1)菊花茎叶总黄酮能增加小鼠血液中过氧化物歧化酶(SOD)的活性,提高其抗氧化能力;2)不同剂量的菊花茎叶总黄酮均可增加豚鼠离体心脏的冠脉流量;3)菊花茎叶总黄酮能够明显延长大鼠体内血栓形成时间,降低大鼠的全血黏度。
下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实施例1:菊花茎叶采用体积百比浓度10%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的6倍重量,加热回流提取1次,提取时间为1小时,提取液过滤,合并,浓缩至0.25g生药/mL,过滤或离心分离后通过大孔树脂D101大孔树脂柱,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:1,上柱流速1BV/h,树脂柱径高比为1:3;用水洗涤树脂3BV,洗脱流速为2BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为20%乙醇/水洗脱3BV,流速为2BV/h,收集乙醇/水洗脱液;乙醇液减压浓缩,减压或喷雾干燥,粉碎,即得菊花茎叶总黄酮。
所制备的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量为55%,蒙花苷的质量百分比含量为1%,木犀草素的质量百分比含量为1%。
实施例2:菊花茎叶采用体积百比浓度95%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的15倍重量,加热回流提取5次,提取时间为3小时,提取液过滤,合并,浓缩至1.0 g生药/mL,过滤或离心分离后通过大孔树脂HPD100大孔树脂柱,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:5,上柱流速4BV/h,树脂柱径高比为1:9;用水洗涤树脂8BV,洗脱流速为4BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为95%乙醇/水洗脱8BV,流速为4BV/h,收集乙醇/水洗脱液;乙醇液减压浓缩,减压或喷雾干燥,粉碎,即得菊花茎叶总黄酮。
所制备的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量为65%,蒙花苷的质量百分比含量为3%,木犀草素的质量百分比含量为5%。
实施例3:菊花茎叶采用体积百比浓度70%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的10倍重量,加热回流提取3次,提取时间为2小时,提取液过滤,合并,浓缩至0.5 g生药/mL,过滤或离心分离后通过大孔树脂AB-8大孔树脂柱,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:3,上柱流速2BV/h,树脂柱径高比为1:5;用水洗涤树脂4BV,洗脱流速为3BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为70%乙醇/水洗脱5BV,流速为3BV/h,收集乙醇/水洗脱液;乙醇液减压浓缩,减压或喷雾干燥,粉碎,即得菊花茎叶总黄酮。
所制备的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量为60.5%,蒙花苷的质量百分比含量为2%,木犀草素的含量为2.5%。
实施例4:菊花茎叶总黄酮药效学试验
通过对菊花茎叶总黄酮开展的一系列药理试验证明,菊花茎叶总黄酮具有良好的抗氧化的作用,同时,能有效增加冠脉流量、延缓血栓形成和降低血黏度,具有治疗冠心病的功效。
1、抗氧化作用
取昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重(20±2)g,随即分为4组:阴性对照组、菊花茎叶总黄酮高剂量组、菊花茎叶总黄酮低剂量组、银杏叶提取物组(EGb),每天给药1次,连续给药1周后,腹主静脉取血1mL,离心分离出血清,测定MDA、NO及SOD含量。结果见表1。
表1 菊花茎叶总黄酮对小鼠血清MDA、NO、SOD含量的影响( )
剂量 | n | MDA(nmol/L) | NO(umol/L) | SOD(OD值) |
生理盐水 | 10 | 2.46±0.51 | 43.34±19.6 | 0.072±0.009 |
100 mg/kg | 10 | 2.03±0.23* | 60.88±20.5* | 0.080±0.014* |
400 mg/kg | 10 | 1.78±0.21** | 72.12±23.4** | 0.083±0.003** |
EGb100 mg组 | 10 | 1.91±0.33* | 69.76±19.1* | 0.081±0.004* |
注:与生理盐水比较,*P<0.05, **P<0.01
试验证明,本品能使小鼠血清中SOD含量升高,具有清除氧自由基和抗氧化的能力。
2、豚鼠离体心脏冠脉流量试验
取豚鼠25只,每组5只,随即分为5组:分别为阴性对照组、菊花茎叶总黄酮高剂量组、菊花茎叶总黄酮低剂量组、银杏叶提取物组(EGb)。击头致昏,迅速取心脏,在4℃任洛氏液中清洗,排除积血。将主动脉套入灌流装置的套管上,并结扎固定,以纯氧饱和的任洛氏液(Ringer-Locke’s)恒速灌流。灌流平衡10min后,连续测定3min的每分冠脉流量,以其平均值作为药前值。加药后,记录1~3min的每分冠脉流量,取极值,作为药后值,比较前后变化。结果见表2。
表2 菊花茎叶总黄酮对豚鼠离体心脏冠脉流量的影响
注:与对照组相比:*P<0.05, **P<0.01; 与药前相比:#P<0.05, # #P<0.01
试验证明,不同剂量的菊花茎叶总黄酮均可增加豚鼠离体心脏的冠脉流量。
3、对大鼠体内血检形成的影响
取大鼠40只,雌雄各半,随即分成5组:分别为生理盐水组、菊花茎叶总黄酮高剂量组、菊花茎叶总黄酮低剂量组、银杏叶提取物组(EGb),脑血栓片对照组,各组连续灌胃7d,于末次给药后1h进行体内血栓形成实验(戊巴比妥钠40 mg/kg ip麻醉大鼠,切开颈部皮肤,分离右侧颈动脉,在动脉近心端下放置刺激电极,远心端下放连接仪器的温度探头,开通体内血栓形成测定仪,通过刺激电极给予1 .5 mV直流电刺激7 min,以损伤动脉内皮细胞,随着动脉管腔内血栓逐渐形成,血流逐渐被阻断,温度突降,仪器报警,记录堵塞形成时间。)最后将各组动物颈总动脉采血,肝素抗凝,测定血液黏度参数。结果见表3。
与对照组相比:*P<0.05, **P<0.01
试验说明菊花茎叶总黄酮能够明显延长大鼠体内血栓形成时间,同时各给药组动物的全血黏度均有不同程度的降低,说明菊花茎叶总黄酮具有较好的抗血栓和改善血液流变学的作用。
Claims (9)
1.一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于它的步骤如下:
1)菊花茎叶采用体积百比浓度10~95%乙醇/水进行提取,乙醇/水是菊花茎叶的6~15倍重量,加热回流提取1~5次,提取时间为1~3小时,提取液过滤,提取液浓缩至0.25~1.0 g生药/mL,得菊花茎叶提取液;
2)将菊花茎叶提取液,经大孔树脂进行吸附,菊花茎叶与大孔树脂的重量比为1:1~1:5,上柱流速1~4BV/h,树脂柱径高比为1:3~1:9;吸附后先用水洗涤树脂3~8BV,洗脱流速为2~4BV/h,水洗脱液弃去;用体积百分比浓度为20~95%乙醇/水洗脱3~8BV,流速为2~4BV/h,收集乙醇/水洗脱液,浓缩,干燥,即得菊花茎叶总黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的菊花茎叶总黄酮的质量百分比含量不低于50%。
3.根据权利要求1或2所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的菊花茎叶总黄酮含有芹菜素、木犀草素、蒙花苷、橙皮苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷黄酮类成分,其中,蒙花苷的质量百分比含量不低于1%,木犀草素的质量百分比含量不低于1%。
4.根据权利要求1所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的菊花茎叶为滁菊茎叶、贡菊茎叶、亳菊茎叶或杭菊茎叶。
5.根据权利要求4所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的菊花茎叶为杭菊茎叶。
6.根据权利要求1所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的步骤1)采用体积百比浓度50~80%乙醇/水进行提取。
7.根据权利要求1所述的一种菊花茎叶总黄酮的制备方法,其特征在于所述的步骤2) 用体积百分比浓度为50~75%乙醇/水洗脱3~8BV。
8.一种如权利要求1所述方法制备的菊花茎叶总黄酮的用途,其特征在于用于制备治疗冠心病药物。
9.根据权利要求8所述的一种菊花茎叶总黄酮的用途,特征在于所述的疗冠心病药物具有抗氧化、增加冠脉流量、抗血栓作用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111102 |