CN108379311A - 一种西伯利亚白刺叶子提取物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种西伯利亚白刺叶子提取物制备方法及其应用，该方法是将西伯利亚白刺叶子，通过乙醇‑水体系提取，过滤，浓缩滤液，减压回收乙醇，再将浓缩液用大孔树脂进行纯化，真空干燥，得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物含有生物碱类化合物，芬酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10%‑20%。通过本发明所述的方法获得的西伯利亚白刺叶子提取物进行了大鼠体内降压实验及降压机制研究和体外抗氧化活性研究，结果表明：该提取物具有降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血和抗氧化活性，可以用于降血压，抗氧化功能的保健食品、药品、化妆品和固体添加原料。该方法简单易行，生产周期短，质量稳定可控，易于批量制备和工业化生产。

Description

一种西伯利亚白刺叶子提取物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种西伯利亚白刺叶子提取物的制备及其应用。
背景技术
白刺属(Nitraria L.)是蒺藜科(Zygophyllaceae)的一个古老小属，属旱生或超旱生灌木，是中亚大陆荒漠地带的典型景观植物，凭借各种形式的旱生生理机能与旱生结构，以多种形式与环境相适应，顽强的繁衍、生存，起着很好的固沙作用。白刺属全世界共有12种，分布于亚洲、欧洲、非洲和澳大利亚的荒漠，横跨欧亚大陆。其中西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)生于盐碱化低地及干旱低山坡，主要分布于我国新疆、哈萨克斯坦、吉尔吉斯坦、塔吉克斯坦、乌兹别克斯坦等中亚地区。西伯利亚白刺是维吾尔医药中的一味常用药材，根据《维吾尔药志》记载白刺可用于治疗食欲不振，消化不良，胃寒作痛，月经不调，来经腹痛，其作为治疗高血压、头晕、头痛复方的主要组方药材。此外，白刺也是中药、蒙药、藏药中的常用药材。之前的药理学研究证明了白刺属植物诸多的药理作用，从1968年至2018年间被Science Direct，Springer，PubMed，EMBASE和CNKI等数据库收录的有关文献中得知，从不同品种的白刺中分离得到几十种生物碱类化合物及黄酮类化合物，并且白刺属植物的提取物具有抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、抗突变、抗菌、降压、保肝、降血脂和降血糖作用。
高血压是人类最常见的慢性病，也是心脑血管疾病的主要危险因素，有脑卒中、心肌梗死、心力衰竭，肾功能衰竭等并发症，致残、致死率高。据统计全世界有约十亿人患有高血压。我国高血压发病率近年来迅速攀升并且发病人群较西方国家更加年轻化。一项群组研究结果表明，中国高血压患者已突破3.3亿。高血压是一种终身疾病，一旦确诊就得终身服药。高血压讲究个体化治疗，不同的患者治疗方法各不相同，没有一个固定的模式，必须根据个体情况选择一种或几种药物合用进行治疗，才能取得良好的治疗效果。尽管目前治疗高血压药物的种类很多且具有显效快、疗效明确的特点，但仍然存在着明显的不良反应，而且停药后血压回升很快，难以达到长期治疗和预防的目的。天然植物类降压药因具有标本兼治、多途径、不良反应小等独特的优势逐渐发展为众多降压药物中占比重最大的一类，如钩藤、天麻、夏菇草、罗布麻、葛根、黄芪、三七、山楂、银杏叶等。尽管这些天然药物降压不如西药速度快，但是在降血压的同时具有改善微循环、降血脂、抗氧化、保护内皮、调节血管活性等作用。
专利申请号201710346366.8一种西伯利亚白刺果实总黄酮的制备方法是本发明的前期工作，通过该方法获得的西伯利亚白刺果实总黄酮具有保肝、降血脂、抗衰老、保护胃黏膜、抗菌消炎的功能，在此基础上，通过大量的试验研究了西伯利亚白刺叶子提取物的制备方法，所获得西伯利亚白刺叶提取物具有显著降血压作用，初步化学成分分离和降压活性研究，分离得到30多个化合物。在降血压活性研究中，通过小鼠体内实验确定了白刺叶的降压作用。本发明通过溶剂提取的方法对白刺叶子进行提取，再通过大孔树脂对其进行纯化，并通过动物体内实验证实了其降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血，抗氧化等活性。
发明内容
本发明目的在于，提供一种西伯利亚白刺叶子提取物的制备方法及其应用，该方法是将西伯利亚白刺叶子，通过乙醇-水体系提取，过滤，浓缩滤液，减压回收乙醇，再将浓缩液用大孔树脂进行纯化，真空干燥，得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物含有生物碱类化合物，芬酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10％-20％。通过本发明所述的方法获得的西伯利亚白刺叶子提取物进行了大鼠体内降压实验及降压机制研究和体外抗氧化活性研究，结果表明：西伯利亚白刺叶提取物具有降血压，扩血管，改善微循环，软化血管，保护心肌细胞，保护肾脏，保护内皮和抗氧化活性，可以用于降血压，抗氧化功能的保健食品、药品、化妆品和固体添加原料。该方法简单易行，生产周期短，质量稳定可控，易于规范化批量制备和工业化生产。同时，本发明所用方法重现性好，树脂可以重复利用。
本发明所述的一种西伯利亚白刺叶提取物的制备方法，按下列步骤进行：
a.将原料西伯利亚白刺叶子，用质量体积比1:8-15倍量的浓度为50-70％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为40-80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.10-0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD100、HPD101、HPD300、HPD450、HPD-500、HPD600、HPD750、AB-8进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度为30-50％乙醇洗脱3BV，再用浓度为70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10-20％。
所述方法获得的提取物在制备治疗降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血，抗氧化的药品中的用途。
所述方法获得的提取物在制备降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血，抗氧化的保健食品中的用途。
所述方法获得的提取物在制备抗氧化中的化妆品的用途。
本发明所述的一种西伯利亚白叶提取物的制备方法，该方法包括对不同型号的大孔树脂对提取物中总生物碱含量的影响；上样液浓度对提取物中总生物碱吸附的影响；上样液pH对提取物中总生物碱吸附的影响；上样液流速对提取物中总生物碱吸附的影响；树脂与柱子径高比例对提取物中总生物碱吸附的影响；除杂用水量对提取物中总生物碱吸附的影响；洗脱乙醇浓度对提取物中总生物碱吸附的影响；
大孔树脂吸附及解吸测试如下：
8种大孔树脂对西伯利亚白刺叶提取物的静态吸附与解吸试验：
准确称取3.0g不同型号的树脂，分别置于锥形瓶中，加入白刺叶提取液50mL，在摇床中，以100r/min转速振摇10h，使树脂充分吸附，吸附后抽滤，用紫外分光光度计测定415nm波长处的吸光度。计算滤液中总生物碱含量以及各种树脂的吸附量(Q)和吸附率(E)；
Q＝(C0V0-C1V1)/m，E＝(C0V0-C1V1)/C0V0；
C0为样品溶液中总生物碱的质量浓度，V0为样品液体积，C1吸附后溶液中总生物碱的质量浓度，V1为吸附后溶液体积，m为吸附后溶液的质量；
将吸附饱和的大孔树脂，用去离子水洗至无浑浊，在洗后树脂上加解吸液50mL，震摇130r/min，静态解析数小时，使其充分解吸后的溶液抽滤，蒸干，用50m L的蒸馏水溶解残留物，测定该溶液在415nm的吸光度，计算生物碱含量以及各树脂的解析率；
解析率＝解析液中总生物碱的质量/树脂吸附的总生物碱质量×100％，结果见表1；
表1八种树脂静态吸附-解析的测定
上样液浓度的选择：
取提取液浓度分别为1.33mg/mL，0.88mg/mL，0.66mg/mL和0.44mg/mL的溶液，缓慢加入处理好的树脂柱(2.3*32cm)柱体积为50mL，均以流速为2BV/h进行吸附，收集流出液，静止2h，4BV水洗，流速为5BV/h，收集流水洗液，定溶，测定含量，计算吸附率和吸附量，当浓度为0.88mg/m L时，总生物碱吸附率和吸附量最大；见表2；
表2上样液浓度对动态吸附的影响
上样液pH的选择：
分别取白刺叶提取液4份，用浓度为2％硫酸和无水碳酸钠调节上样液pH值分别为2，4，6和8，以2BV/h的流速上样，进行吸附，收集流出液，5BV水洗，收集流出液，计算吸附率和吸附量，见表3；
表3上样液pH对吸附的影响
从表3可以看出，在pH值为4.0-6.0之间时，总生物碱的吸附量和吸附率均最大，因此，确定上样液的pH值为4.0-6.0；
上样液流速的选择：
分别取白刺叶提取液60mL，共4份，分别以1BV/h，2BV/h，3BV/h和4BV/h的流速上样，进行吸附，收集流出液，计算吸附率，见表4；
表4上样液流速的考察
从表4可以看出：选择的上样流速范围内随着上样流速的变快，总生物碱的吸附率没有显著的变化。在树脂处理过程中能保证装好的树脂中间没有气泡，装的均匀，上样流速对总生物碱的吸附没有显著的影响，根据实验室条件，可选择2BV/h进行吸附；
径高比的考察：
选取不同信号即粗细不同的四个柱子，径高比分别为1:4，1:6，1:8和1:10，柱体积是一样的，共四分，分别上白刺叶提取液，上样流速为2BV/h进行吸附。4BV水洗，流速为2BV/h，收集洗脱液，计算总生物碱吸附率和吸附量，见表5；
表5径高比对动态吸附的影响
由表5可以看出，当径高比为1:8时，HPD-450树脂对总生物碱的吸附能力最好，因此最佳径高比确定为1:8。泄漏曲线
按上述所确定的实验吸附条件，准确称取处理好的HPD-450大孔树脂(径高比为1:8)湿法上柱，进行动态吸附实验。按照每次1BV收集流出液，共收集20份。以测定白刺总生物碱质量浓度为考察指标，绘制泄漏曲线，结果见图1和表6；
表6HPD－450树脂对白刺总生物碱的动态吸附
从表6可以看出：当上样量200mL时，即上样体积到达5BV后，流出液总生物碱浓度为0.078mg/mL，达到了泄漏点质量浓度，继续增加上样量，流出液中总生物碱大量泄漏，为了避免上样液过多泄漏，确定最大上样量为5BV的样品溶液；
除杂用水量的考察：
根据上述最佳实验条件，将吸附饱和的树脂柱用蒸馏水，以5BV/h的流速洗脱树脂之间未被吸附的上样液即杂质，按照柱体积的整倍数收集流出液，测定洗脱液中总生物碱含量。如图2可知，随着用水量的增多，洗脱液中总生物碱含量明显减少，当水洗体积增大到5BV开始，总生物碱含量变化很少，且流出液接近无色。因此，除杂用水量选择5BV；
洗脱乙醇浓度的选择：
取白刺叶提取液5BV,上样流速为2BV/h进行吸附，静止2h，以流速2BV/h水洗5BV。先后用30％，50％和70％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，测定总生物碱含量，计算解析率。由图3可知，随着乙醇用量不断增多，洗脱液中总生物碱的含量不断减少，当三组乙醇用量为5BV内解析的总生物碱含量较多，再增加洗脱剂的用量，总生物碱成分的流出很少。其中30％乙醇洗脱下来的流份中总生物碱的含量最高，总生物碱百分含量达16.94，其次50％乙醇洗脱的流份，其百分含量为12.33。70％乙醇洗脱下来的总生物碱含量最少，其百分含量为9.44。其他乙醇洗脱部位中几乎没有总生物碱成分。
本发明所述的一种西伯利亚白刺叶提取物的制备方法，该方法具有以下优点：
在整个实验方法中，以食用乙醇和水作为溶剂，价格低廉、无毒，乙醇可回收再利用；采用的大孔树脂为目前国内医药行业常用的大孔树脂，安全性较高，价格较低，且可重复利用。通过本发明所述方法获得的西伯利亚白刺叶提取物由生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物组成，提取物用紫外分光光度法测定总生物碱含量，含量可达到10-20％。
附图说明
图1为本发明使用HPD-450大孔树脂吸附泄露曲线图；
图2为本发明使用HPD-450大孔树脂除杂用水量考察图；
图3为本发明使用HPD-450大孔树脂洗脱乙醇浓度选择考察图；
图4为本发明西伯利亚白刺叶子提取物对大鼠血压降压效果图。
具体实施方式
实施例1
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为70℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-450进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量20％。
实施例2
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:15倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.10g/ml的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-450进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度50％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量18％。
实施例3
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为70％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为60℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.10g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-450进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量16％。
实施例4
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为60％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为70℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-450进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量15％。
实施例5
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:8倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为40℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-450进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10％。
实施例6
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为70℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-100进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量15％。
实施例7
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD101进行纯化，上样流速为3BV/h，上样5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量12％。
实施例8
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为60％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-300进行纯化，上样流速为3BV/h，上样5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量17％。
实施例9
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为50℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-500进行纯化，上样流速为3BV/h，上样5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量15％。
实施例10
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为70％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD-600进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4-5BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中生物碱含量14％。
实施例11
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为70℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD750进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量12％。
实施例12
a.将原料西伯利亚白刺叶子50g，用质量体积比1:10倍量的浓度为50％乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为60℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b.将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为AB-8进行纯化，上样流速为3BV/h，上样4BV，依次用1BV水洗，用浓度30％乙醇洗脱3BV，再用浓度70％乙醇洗1BV；
c.收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10％。
实施例13
将实施例1-12获得的西伯利亚白刺叶提取物采用清除DPPH的实验，测定各个提取物和阳性对照维生素C清除DPPH的能力，计算IC50值，IC50值越小，清除能力越强，结果见表7；
表7纯化部位的抗氧化活性
实施例14
实施例1得到的西伯利亚白刺叶提取物进行药物用途测定：
将西伯利亚白刺叶提取物灌胃给药大鼠10周，大鼠分为正常对照组(WKY)，自发性高血压组(SHR)，卡托普利(阳性药)组和白刺叶子提取物(给药)组，每组10只大鼠，采用无创尾套法每周连续测定尾动脉收缩压，最后处死前颈动脉插管测定收缩压，结果见图4；与对正常照组比较，自发性高血压组收缩压均明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；各给药组与自发性高血压组比较，阳性药卡托普利组从给药第1周开始收缩压均明显下降，白刺叶子提取物给药组差异有统计学意义(P＜0.05)，且随着给药时间的延长，其下降趋势更为明显；
各组大鼠给药10周之后，用2％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉，剪除大鼠心前区毛，进行常规二维超声心动图检查，实验结果见表8；
表8超声心动图检查结果
注：*P<0.05vs WKY；#P<0.01vs SHR；
与正常组比较，自发性高血压组左心室舒张末期内径指数(LVIDdI)、左心室收缩末期内径指数(LVIDsI)、室间隔厚度指数(IVSTI)、左心室后壁舒张末期厚度指数(LVPWDI)明显增大(P＜0.01)，心室内径缩短率(FS)、左心室射血分数(LVEF)减小(P＜0.01)，左心室质量(LVW)、左心室质量指数(LVWI)、左心室质量/体质量(LVW/BW)均增大(P＜0.01)；与自发性高血压组比较，白刺叶子提取物组左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPWD)、左心室舒张末期内径指数(LVIDdI)有不同程度降低(P＜0.05，P＜0.01)，室间隔厚度指数(IVSTI)、左心室质量指数(LVWI)、左心室质量/体质量(LVW/BW)均明显减小(P＜0.05，P＜0.01)，心室内径缩短率(FS)、左心室射血分数(LVEF)增大(P＜0.05，P＜0.01)。与自发性高血压组相比卡托普利组,白刺叶子提取物组左心室舒张末期内径指数(LVIDdI)、左心室收缩末期内径指数(LVIDsI)、室间隔厚度指数(IVSTI)、左心室后壁舒张末期厚度指数(LVPWDI)均明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，左心室质量(LVW)、左心室质量指数(LVWI)、左心室质量/体质量(LVW/BW)均明显减小(P＜0.01)，心室内径缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)增大(P＜0.05，P＜0.01)；卡托普利组与白刺叶子提取物组之间大部分指标有差别，但未见明显差异(P＞0.05)。结果表明：自发性高血压组左心室舒张末期内径指数(LVIDdI)、左心室收缩末期内径指数(LVIDsI)、室间隔厚度指数(IVSTI)、左心室后壁舒张末期厚度指数(LVPWDI)、左心室质量(LVW)、左心室质量指数(LVWI)、左心室质量/体质量(LVW/BW)均明显增大，说明此时自发性高血压大鼠左心室构型属于向心性肥厚。心室内径缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)降低，表明自发性高血压大鼠心肌收缩力减弱，射血能力降低。给药组左心室后壁舒张末期厚度(LVPWD)、左心室舒张末期内径指数(LVIDdI)、室间隔厚度指数(IVSTI)、左心室质量指数(LVWI)、左心室质量/体质量(LVW/BW)均明显减小，心室内径缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)F增大，说明西伯利亚白刺叶子提取物可抑制高血压心肌肥厚，加强心肌收缩力，增强心室射血能力；进行血流动力学测定，结果见表9；
表9白刺叶提取物对SHR心脏流动力学的影响
注：*P<0.05vs WKY；#P<0.01vs SHR；
室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)和左心室收缩压(LVSP)常用于评价心脏的收缩功能，而室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)和左心室收缩压(LVSP)常用于评价心脏的舒张功能；实验结果显示：自发性高血压大鼠心率(BPM)、舒张压(DBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)、室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)明显增大，说明此时自发性高血压大鼠心功能处于血压升高引起的高动力血流状态；左心室舒张末期压(LVEDP)升高而舒张时间(DD)缩短，说明自发性高血压组大鼠的舒张功能受损，舒张时间缩短，心脏血液灌注时间缩短，心肌供血减少；西伯利亚白刺叶提取物给药后收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)、LV-dp/dtmax均减小，而舒张时间(DD)延长，说明白刺叶提取物可以降低自发性高血压大鼠高动力血流状态，并改善心脏收缩和舒张功能，改善心肌血供；
西伯利亚白刺叶提取物对自发性高血压大鼠心脏指数和胸主动脉长度指数的影响实验，结果见表10；
表10白刺提物对自发性高血压大鼠心脏指数和胸主动脉长度指数的影响
从结果可以看出：与正常组比较，自发性高血压组心脏指数明显大；与自发性高血压组比较卡托普利及白刺叶子提取物组的心脏指数明显变小(P＜0.05)；与正常组比较，自发性高血压组胸主动脉长度指数明显变小；与自发性高血压组比较卡托普利及白刺叶子提取物组的胸主动脉长度指数明显变大(P＜0.01)；卡托普利和白刺提取物减轻肾脏肥大和胸主动脉收缩变小而改善自发性高血压大鼠心脏和血管病变；
大鼠禁食12h后，用代谢笼收集24h尿液，计算大鼠尿量，结果见表11；
表11各组大鼠给药24h内的排尿量
注：*P<0.05vs WKY；#P<0.01vs SHR；
从表11尿量检测实验结果可以看出：与正常组比较，自发性高血压组尿量明显减少(P＜0.01)；与自发性高血压组比较，卡托普利及白刺叶子提取物组尿量不同程度增多(P＜0.01)，其中白刺叶提取物组尿量增多特别明显，(P＜0.01)；结果表明：西伯利亚白刺叶子提取物对高血压大鼠肾脏有保护作用并促进尿量来降低自发性高血压大鼠的血压；
经过10周灌胃后大鼠处死取血浆，测血浆中AngⅡ含量，结果见表12；
表12血管紧张素II水平变化
注：*P<0.05vs WKY；#P<0.01vs SHR；
从表12结果可以看出：与正常组相比自发性高血压组血浆血管紧张素Ⅱ含量明显升高，与自发性高血压组比较卡托普利组和白刺叶提取物组血管紧张素Ⅱ水平不同程度下降，并有显著性差异(P＜0.05)。

Claims (4)

1.一种西伯利亚白刺叶提取物的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：
a. 将原料西伯利亚白刺叶子，用质量体积比1:8-15倍量的浓度为50-70%乙醇水浴加热回流提取，水浴温度为40-80℃，提取3次，每次提取时间2h，收集提取液，减压回收乙醇，得到提取液；
b. 将步骤a得到的提取液用真空旋转蒸发仪在温度45℃浓缩至质量浓度为0.10-0.12g/mL的浓缩液，再将浓缩液用大孔树脂型号为HPD100、HPD101、HPD300、HPD450、HPD-500、HPD600、HPD750、AB-8进行纯化，上样流速为3 BV/h，上样4-5 BV，依次用1 BV水洗，用浓度为30-50%乙醇洗脱3 BV，再用浓度为70%乙醇洗1 BV；
c. 收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥，即可得到西伯利亚白刺叶提取物，该提取物中含有生物碱类化合物，酚酸类化合物和黄酮类化合物，其中总生物碱含量10-20%。
2.根据权利要求1所述方法获得的提取物在制备治疗降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血，抗氧化的药物中的用途。
3.根据权利要求1所述方法获得的提取物在制备降血压，扩血管，保护心肌细胞，保护肾脏，改善心肌和血管病变，强心，改善心肌供血，抗氧化的保健食品中的用途。
4.根据权利要求1所述方法获得的提取物在制备抗氧化中的化妆品的用途。
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