CN102216318A - 抗氧化剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种高安全性的抗氧化剂，其可以抑制生物组份的氧化、特别是脂质的氧化，其可用作药物、食品、饮料、食品添加剂、皮肤外用制剂等。该抗氧化剂包含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

Description

抗氧化剂

技术领域

本发明涉及一种抗氧化剂，其可用作药物、食品或者饮料、食品添加剂、皮肤外用制剂等。

发明背景

“氧化压力”(Oxidative stress)的定义是活体生物内活性氧物质(ROS)的产生和抗氧化防御机制之间的不平衡导致的生物体氧化趋势的状态。也就是说，过量产生ROS或者抗氧化能力降低导致氧化压力。

ROS氧化脂质、特别是磷脂的低密度脂蛋白(LDL)，形成脂质过氧化物和氧化LDL，并且ROS氧化变性并失活蛋白质，从而造成DNA氧化性损伤。因此，一般认为，氧化压力通过损伤细胞和组织以及损伤重要的功能参与许多疾病的发生发展，例如动脉硬化、癌症、不同生活方式相关性疾病、老年性痴呆和帕金森氏病以及促进衰老(例如参见非专利文献1)。

另外，皮肤处于受环境因素如紫外线刺激很容易产生ROS的状态。皮肤里的ROS能造成机体组织如胶原的损伤，从而损伤细胞，导致皮肤症状，例如皱纹、弹性降低、炎症和色素沉着。此外，已知ROS通过氧化头皮蛋白和脂质造成脱发(例如参见专利文献1和2)。

同时，本领域已知，如果脂质过氧化物在血液中的浓度增加，脂质过氧化物本身或者其氧化分解产物可直接作用于核酸和蛋白，造成血管病、肝脏功能异常、白内障等。此外，脂质过氧化物还造成心血管上皮细胞损伤、血小板聚集提高、泡沫细胞形成等，因此脂质过氧化物也被认为是动脉硬化的原因。

例如，本领域已知动脉硬化的原发性损害是由氧化LDL造成的。最简单的检测氧化LDL的方法是检测脂质过氧化物(例如参见非专利文献2)。

已知的来自天然物质的抗氧化剂包括维生素E、维生素C、蜡菊(Helichrysum)植物提取物的中性组分(例如参见专利文献1)、伞形喜冬草提取物(Chimaphila umbellata)(例如参见专利文献2)等。

具体来说，已知的抑制活体内脂质过氧化物形成的药物等包括含芝麻素和/或细辛脂素作为活性成分的制剂(例如参见专利文献3)，特征为包含低聚果糖(fructo-oligosaccharide)的制剂(例如参见专利文献4)，包含作为活性成分的提取自番石榴(Psidium guajava L.)叶子的提取物的制剂(例如参见专利文献5)，可抑制脂质过氧化物的形成、特征为包含原产地为墨西哥的科学名为Gnaphalium semiamlexicaule的植物的提取物的制剂(例如参见专利文献6)，包含虾青素和/或其酯的制剂(例如参见专利文献7)和包含罗布麻(Apocynum venetum L.)提取物和维生素C化合物的制剂(例如参见专利文献8)。

另外，专利文献9公开了一种抑制脂质过氧化物形成的、作为皮肤外用制剂的制剂，其包含有类固醇糖苷和/或三萜类糖苷和鞘糖脂质。

此外，抗氧化剂如3，5-叔-丁基-4-羟基甲苯(BHT)和2，3-叔-丁基-羟基茴香醚(2，3-tert-butyl-hydroxyanisole，BHA)已经开发用于抑制脂质或类似物的氧化。但是，这样的抗氧化剂可能会致癌(例如参见非专利文献3)，因此难以安全使用。

此种情况下，业界一直希望开发新的能安全使用且没有副作用的抗氧化物质。

注意，已知用来改善高血糖症的制剂、改善胰腺功能的制剂、改善胰岛素抵抗的制剂、抑制内脏脂肪积累的制剂，所述每种制剂都含有作为活性成分的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇(分别参见专利文献10，11，12，13)。

现有技术文献

专利文献

【专利文献1】JP-A-2007-016077

【专利文献2】JP-A-2004-149729

【专利文献3】JP-A-5-51388

【专利文献4】JP-A-8-325157

【专利文献5】JP 11-75770

【专利文献6】JP-A-2000-198726

【专利文献7】JP-A-2006-8719

【专利文献8】JP-A-2006-160668

【专利文献9】JP-B-2886306

【专利文献10】WO2005/095436

【专利文献11】WO2006/123464

【专利文献12】WO2007/043302

【专利文献13】WO2007/034851

非专利文献

【非专利文献1】YAKUGAKU ZASSHI，127(12)2007，1997-2014

【非专利文献2】“Oxidative Stress Navigator，”Masahiko Kurabayashi，Ed.，Medical Review Co.，Ltd.，2005，192-193

【非专利文献3】Cancer Research，44，1984，1604-1610

发明概述

本发明的一个目的是提供一种高度安全的抗氧化剂，其抑制生物组分、特别是脂质的氧化，其可用作药物、食品或者饮料、食品添加剂、皮肤外用制剂等。具体来说，本发明的一个目的是提供一种用于抑制脂质过氧化物形成的药物、食物或者饮料等，其有效抑制血液内的脂质过氧化物的形成。

解决上述问题的第一个发明是一种抗氧化剂，其包含作为活性成分的以下化学式(1)代表的化合物(下文统一为“本发明的抗氧化剂”)，其包括以下优选实施方案(1)到(6)：

(1)含有浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物；

(2)用于抑制脂质的氧化；

(3)用于抑制脂质过氧化物的形成；

(4)用于皮肤外用制剂；

(5)包括含化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料；和

(6)含有乳化剂。

解决上述技术问题的第二个发明是制备抗氧化剂的方法，其包括混合作为活性成分的化学式(1)代表的化合物。

第一个发明包括用于抑制脂质过氧化物形成的药物的实施方案，该药物包含作为活性成分的化学式(1)代表的化合物。该实施方案包括如下优选的实施方案(7)：

(7)包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物。

第二个发明包含用于抑制脂质过氧化物形成的药物的制备方法的实施方案，该方法包括混合作为活性成分的化学式(1)代表的化合物。

第一个发明包括用于抑制脂质过氧化物的形成的食品或者饮料的实施方案，该食品或者饮料包含化学式(1)代表的化合物作为活性成分。该实施方案包括如下的优选实施方案(8)到(11)：

(8)含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物；

(9)进一步包含了乳化剂；

(10)包含脂肪和油；和

(11)是一种功能性饮料或食品。

第二个发明包含制备用于抑制脂质过氧化物形成的食品或饮料的方法的实施方案，所述方法包括混合作为活性成分的化学式(1)代表的化合物。

第一个发明包括用于抑制脂质过氧化物形成的食品添加剂的实施方案，该添加剂包含化学式(1)代表的化合物作为活性成分。该实施方案包括了如下优选实施方案(12)和(13)；

(12)进一步包含乳化剂；和

(13)含浓度至少为0.001％(质量)的化学式(1)代表的化合物；

第二个发明包含制备用于抑制脂质过氧化物的形成的食品添加剂的方法的实施方案，该方法包括混合作为活性成分的化学式(1)代表的化合物。还优选混合乳化剂的实施方案。

解决上述技术问题的第三个发明是使用化学式(1)代表的化合物制备抗氧化剂。

另外，第三个发明包括如下的实施方案：

(14)包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物的组合物在制备抗氧化剂中的用途。

第三个发明包含使用化学式(1)代表的化合物制备用于抑制脂质过氧化物形成的药物的实施方案。

另外，该实施方案包含了如下的实施方案：

(15)使用包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物的组合物制备用于抑制脂质过氧化物形成的药物。

第三个发明包括使用化学式(1)代表的化合物制备用于抑制脂质过氧化物形成的食品或者饮料的实施方案。

另外，该实施方案包含了如下的实施方案：

(16)使用包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物的组合物制备用于抑制脂质过氧化物形成的食品或者饮料。

第三个发明也包括这样的实施方案：使用化学式(1)代表的化合物制备用来抑制脂质过氧化物形成的食品添加剂。

另外，该实施方案包括了如下的实施方案：

(17)使用包含浓度至少为0.001％(质量)化学式(1)代表的化合物的组合物制备用于抑制脂质过氧化物形成的食品添加剂。

解决上述问题的第四个发明是一种用于抗氧化的化学式(1)代表的化合物。另外，该化合物优选用于抑制脂质氧化，并且优选用于抑制脂质过氧化物的形成。

第四个发明包括用于抗氧化的包含化学式(1)代表的化合物的组合物的实施方案。该组合物包括如下优选实施方案：

(18)包含化学式(1)代表的化合物和乳化剂的组合物；和

(19)包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物的组合物。

另外，解决上述问题的第五个发明是一种治疗或预防氧化引起的疾病或症状的方法，该方法包括对需要抗氧化的个体给予含化学式(1)代表的化合物。

另外，第五个发明包括下述优选实施方案(20)：

(20)给予包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物的组合物。

另外，解决上述问题的第六个发明是一种赋予食品或者饮料抗氧化活性的方法，该方法包括向食品或者饮料中添加化学式(1)代表的化合物，使该化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)。

解决上述问题的第七个发明是一种提高含化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料的抗氧化活性的方法，该方法包括添加化学式(1)代表的化合物到食品或者饮料中，使得该化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)。

本发明的抗氧化剂可以不同形式使用，包括药物、食品或者饮料、食品添加剂、皮肤外用制剂，用以抑制生物组分的氧化，特别是脂质的氧化。

本发明的药物可用于安全有效地抑制生物组分的氧化，特别是抑制血液中脂质过氧化物的形成。另外，本发明的食品或者饮料可以摄入以安全有效地抑制生物组分的氧化，特别是抑制血液中脂质过氧化物的形成。此外，本发明的食品添加剂适用于制备上述食品或饮料，或用于抑制食品或者饮料组分的氧化。另外，本发明的皮肤外用制剂可用于安全有效地抑制皮肤组分的氧化，特别是抑制皮肤脂质过氧化物的形成。

另外，本发明的抗氧化剂中的活性成分：3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇，可用化学合成的方法制备；根据本申请发明的制备方法，能够容易地制备本发明的抗氧化剂。此外，根据饮食经验，已知本发明抗氧化剂中的活性成分是安全的，它可由容易获得的百合科(Liliaceae)植物很容易地制得，例如库拉索芦荟(Aloe barbadensis Miller)。因此，本发明的抗氧化剂可简单地根据本申请发明的制备方法制得。

实施方案说明

下文将详细介绍本发明优选实施方案。但是，本发明并不限于以下优选实施方案，在本发明范围内的任何修改都是可以的。注意本说明书中，除非另有指定，所有的百分比都表示质量百分比。

本发明的抗氧化剂含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

【用作本发明活性成分的化合物】

作为本发明抗氧化剂活性成分的化合物具有以下化学式(1)代表的化合物结构，即3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。本发明化合物的结构由4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇3位的羟基和D-葡萄糖1位的羟基经脱水缩合获得。

本发明的化合物可以通过下述方法制备：例如，根据PLOS BIOLOGY，vol.2，p.e280介绍的增补信息合成4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇，然后和D-葡萄糖进行缩合反应。

另外，4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇与D-葡萄糖的缩合可例如综合使用Jikken Kagaku Kouza 26，4^th edition，1992，272、297页和342页介绍的方法进行。具体来说，缩合反应可以如下进行：完全乙酰化D-葡萄糖，将其正位异构位端基转化为α-溴，再使4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇和α-溴在二乙醚中反应得到β-糖基化物，然后在甲醇钠/甲醇中水解乙酰基。

4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇也可以从植物中提取和纯化得到。

另外，本领域已知百合科的植物含有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇(JP-B-3883563)。因此，该化合物可以通过例如有机溶剂或热水提取的方法从这些植物中提取。

通过上述方法制备的化合物的分子量和结构可以用质谱分析(MS)和核磁共振波谱法(NMR)测定或证实。

另外，3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇可以是药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括金属盐(无机盐)和有机盐。其实例包括介绍于Remington’s Pharmaceutical Sciences，17^th edition，1985，p.1418的盐。

所述盐的具体实例包括但不限于：无机酸盐，例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐和硫酸盐；有机酸盐，例如苹果酸盐、马来酸盐、延胡索酸眼、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐和硬脂酸盐。

同时，各所述盐可以是金属盐，例如钠、钾、钙、镁或铝盐，或氨基酸盐，如赖氨酸盐。另外，也可用作溶剂化物，例如上述化合物的水化物或其药学上可接受的盐。

【本发明的抗氧化剂】

本发明的抗氧化剂含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

本发明抗氧化剂中3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的浓度可依据目标疾病或投药对象作合适的选择。优选浓度至少为0.0001％(质量)，更优选浓度至少为0.001％(质量)，更优选浓度至少为0.005％(质量)，尤其优选浓度至少为0.01％(质量)。另外，本发明药物中该化合物的浓度上限没有特别限制，例如，浓度为90％(质量)以下，更优选70％(质量)以下，更优选50％(质量)以下。

本发明的抗氧化剂可用作药物、食品或者饮料、食品添加剂、皮肤外用制剂等。

(本发明的药物)

本发明用作药物的抗氧化剂(指“本发明的药物”)可以口服或者肠道外给予包括人在内的哺乳动物。

本发明的药物可用于预防和/或治疗由于生物组分的氧化，如脂质氧化，特别是脂质过氧化物形成而引起的疾病或症状。此类疾病或症状的实例包括动脉硬化、中风、心绞痛、心肌梗塞、肝脏功能异常、肝硬化、肝炎、视网膜病、白内障、老年性痴呆、帕金森氏病、过敏疾病、癌症、皮肤粗糙、老化、过敏性皮炎和色素沉着如斑点(blotch)和雀斑(feckles)、皱纹和弹性降低、脱发、类风湿性关节炎、巴塞特氏病(Bachet’s disease)和其他组织功能紊乱、肩膀僵硬和对冷异常敏感。其中，特别的是，本发明的药物对预防和/或治疗动脉硬化、心绞痛和心肌梗塞具有显著效果。

另外，本发明的药物也可用于需要预防疾病或者降低疾病发生风险的个体，也就是活体内脂质过氧化物增加的风险个体。

本发明药物的剂型没有特别限制，可根据治疗目的或者给药方案来选择。其具体实例包括片剂、丸剂、粉剂、液体剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、栓剂、注射液、软膏、贴剂、眼科液体剂和滴鼻剂。

本发明药物的给药时间没有特别的限制，可根据目标疾病进行适当的选择。同时，剂量最好依据剂型、给药方案、患者的年龄和性别、其他情况、症状的程度等来决定。

本发明药物的剂量根据给药方案、患者的年龄或者性别、症状的程度和其他情况等做合适的选择。通常就该活性成分的量而言，剂量范围优选0.001到50mg/kg/day，或更优选0.01到1mg/kg/day。

因此，本发明药物的一个优选实施方案中，用药时化学式(1)代表的化合物剂量优选0.001到50mg/kg/day，或更优选0.01到1mg/kg/day。

本发明药物可以包含通常用以抑制脂质过氧化物形成的药物的添加剂。所述添加剂的例子包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、增香剂、稀释剂、表面活性剂和注射用的溶剂。另外，本发明的药物可以包含针对要预防或治疗的疾病或症状的活性成分，例如只要3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的抗氧化活性不受影响，其他成分可以具有改善和/或预防动脉硬化、中风、肝脏功能异常等的作用。

本发明的药物可通过将活性成分3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇混入药物载体来制备。本发明的药物可通过例如调配上述化合物与上述添加剂来制备。

同时，本发明药物也可通过调配提取物和上述添加剂来制备，所述提取物用有机溶剂或热水从已知包含上述化合物的植物或其部分或其匀浆提取包含上述化合物的组分，然后浓缩所提取的组分。

本发明的药物可例如如下制备：匀浆库拉索芦荟(Aloe barbadensis Miller)的叶肉(透明凝胶)部分、但不包含液化的叶皮从而获得提取物，然后用有机溶剂或者热水对其进行提取。

此种情况下，有机溶剂的例子包括一元醇，例如甲醇、乙醇和丁醇；酯，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯和乙酸丁酯；酮，例如丙酮和甲基异丁酮；醚，例如乙醚和石油醚；烃，例如己烷、环己烷、甲苯和苯；卤代烃，例如四氯化碳、二氯甲烷和氯仿；杂环化合物，例如吡啶；二元醇，例如乙二醇；多元醇例如聚乙二醇；腈溶剂，例如乙腈；和上述溶剂的混合液。另外，上述溶剂可含水或不含水。上述溶剂中，优选乙酸乙酯/丁醇(3∶1)的混合液或氯仿/甲醇(2∶1)的混合液。

作为提取方法，常用于植物组分的一般提取方法也适用。一般而言，该方法包括加热回流1份重量新鲜植物或干燥植物和1-300份有机溶剂，在等于或是低于溶剂沸点的温度下搅拌或摇动，或在室温下超声提取植物。如用适合的方法例如过滤或离心从得到的提取物中分离出不溶物质，即获得粗提物。粗提物可用不同的色谱方法例如正相和反相硅胶色谱法进行纯化。在正相硅胶色谱法中，如用氯仿/甲醇的混合梯度溶液作洗脱溶剂，氯仿/甲醇为大约5∶1时本申请发明药物的活性成分3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇可被洗脱出来。

本发明的药物可单独使用或与其他预防/治疗上述已知疾病的药物一起使用。如果本发明药物和其他药物一起使用，预防/治疗上述疾病的效果会增强。同时用以预防/治疗上述疾病的药物可包含在本发明的药物中作为活性成分，也可不与本发明的药物混合在一起而作为单独商品化药物，从而提供包含本发明药物和组合使用的其他药物的药盒。

本发明的药物因3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的抗氧化作用具有抑制脂质过氧化物的形成的优异效果。

(本发明的食品或者饮料)

在本发明的抗氧化剂用于食品或饮料的情况下(称为“本发明食品或饮料”)，该食品或饮料可用来降低由于生物组分的氧化例如脂质的氧化、特别是脂质过氧化物的形成造成的疾病或症状的风险，或者用来预防这样的疾病或症状。

本发明食品或者饮料包含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

本发明的“食品或饮料”不仅包括供人摄入的食品或者饮料，也包括给动物而非人摄入的饲料。

本发明食品或者饮料所含的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的浓度根据食品或者饮料的形式来设定。其优选浓度至少为0.0001％(质量)，较优选浓度至少为0.001％(质量)，更优选浓度至少为0.005％(质量)，特别优选浓度至少为0.01％(质量)。本发明食品或者饮料中该化合物的浓度上限并没有特别限制，例如，浓度为90％(质量)以下，优选浓度为70％(质量)以下，更优选浓度为50％(质量)以下。

另外，本发明食品或者饮料中的上述化合物合适的浓度可以根据食品或者饮料的形式进行设定，从而使得摄入量0.001-50mg/kg/day，更优选0.01-1mg/kg/day。因此，本发明食品或者饮料的一个优选实施方案中，所用的食品或者饮料中摄入的上述化合物的剂量优选0.001-50mg/kg/day或更优选0.01-1mg/kg/day。

本发明食品或者饮料优选进一步包含乳化剂。该乳化剂并没有特别限制只要能够用在食物里面。例如，已在日本批准为食品添加剂的乳化剂例如甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯和卵磷脂都可优选使用。

含有乳化剂的食品或饮料能够很好地分散化学式(1)代表的化合物，因此能够非常稳定地产生其效果。

另外，如果化学式(1)代表的化合物加工为含脂肪和油的食品或者饮料，或优选加工为以脂肪和油作为主要成分的食品或者饮料，由于脂质氧化而造成的变质被抑制，该食品或者饮料可具有良好的保藏稳定性。上述化合物的浓度如上所述。同样该食品或者饮料优选乳化形式。包含脂肪和油的食品或者饮料的例子包括食用油、调料、蛋黄酱、黄油、人造黄油和奶油。所述乳化食品优选含有乳化剂。优选的乳化剂如上所述。

本发明食品或者饮料优选为功能性食品或者饮料。

“功能性食品或者饮料”指的是食品直接或间接地表现出预防疾病或者降低疾病发生风险的效果。其例子包括现在日本出售的指定健康用途和健康补品的食品。

本发明食品或者饮料形式的例子包括饮料，例如软饮料、碳酸饮料、营养饮料、果汁饮料和乳酸菌饮料(包括用以制备这些饮料的浓缩储存溶液和粉末)；冰类，例如冰激淋、冰果子露和刨冰；面条类，例如荞麦面条、小麦面条、豆类淀粉型通心粉面条(bean-starch vermicelli)、饺子、烧卖(su my wrap)、中国面条和方便面；糖果类，例如硬糖、口香糖(chewing gum)、糖果、泡泡糖(gum)、巧克力、片状糖果、小吃、饼干、果子冻、果酱、奶酪和烘焙糕点；加工的水产和家禽产品，例如煮鱼酱(boiled fish paste)、火腿和香肠；奶类产品，例如加工奶、牛奶饮料、发酵奶和黄油；日常食品和焙烘食品；其他食品或者饮料，例如肠营养食品、流质食品、婴儿牛奶和运动饮料。

具体来说，因为人在食用食物的时候能轻易的识别将要食用的活性成分的量，功能性食品或者饮料优选颗粒状、片状或者液体补充物/剂。

本发明食品或者饮料优选具有功能标识，例如“抗氧化”、“抑制脂质氧化”或“抑制脂质过氧化物形成”。也就是说，本发明的食品或者饮料优选以抑制脂质过氧化物形成的食品或者饮料的形式出售，这些食品或者饮料具有“抑制脂质过氧化物形成”的功能标识并包含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

“标识(indication)”包括所有告知消费者上述目的/功用的标识。也就是说，不管标识的目的、标识的内容、标识的目标/介质，“标识”应包括所有能够提醒和促使消费者了解上述目的的标识。

另外，短语“(具)有标识”指的是标识行为是使人们能够认识与食品或者饮料(产品)相关的标识。

标识行为优选直接给予消费者上述目的指示。其具体例子包括在根据本发明食品或者饮料的产品或产品包装上记录上述目的的书面行为、本产品广告、价目表或者交易文件(包括用电磁方法提供的文件)的上述目的书面记录行为。

同时，所述标识的内容(标识内容)最好通过了政府等的批准(例如标识通过了基于政府规定的不同机构的批准，并且有据此官方批准的表格)。

其例子包括健康食品、功能食品或者饮料、肠道食品、供特殊饮食用的食品、有健康声明的食品、指定健康用的食品、有营养功能声明的食品、准药品等的标识。特别的是，标识还应该包括通过健康、劳工和福利部批准的标识，例如指定健康用途食品系统或类似系统批准的标识。后者的例子包括用于指定健康用途的食品标识、用于指定健康用途的调理食品的标识、表明可能影响身体结构或功能的标识和降低疾病风险的标识。特别的是，作为典型的标识，例如根据健康促进行动法令(ordinance for health promotion action)(日本健康、劳工和福利部，第86号法令，2003年4月30日)规定的指定健康用途的食品的标识(特别是健康目的的标识)和类似的标识。

不必说，表示上述目的的要旨不限于“抗氧化”、“抑制脂质的氧化”和“抑制脂质过氧化物的形成”；要旨也包括-种表述：其表明抗氧化作用或者效果、或抑制脂质过氧化物形成的作用或者效果；要旨还包括一种表述：其涉及预防因ROS或者脂质过氧化物而引起的疾病或者症状的作用或者效果、或者减少所述疾病或者症状发生风险的作用或者效果，这些也包括在本发明的范围内。其例子包括“(用于)较高脂质过氧化物水平的人”，“用于较高脂质过氧化物水平的人”，“(用于)较高脂质过氧化物水平存在问题的人”和“用于较高脂质过氧化物水平存在问题的人”。

另外，本发明的食物或者饮料优选不仅包括上述目的的标识，还需要上述活性成分的标识和表明目的和活性成分之间的关联性的标识。

本发明食品或者饮料可以通过混合活性成分3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇来制备。本发明的食品或者饮料可以通过例如混合上述化合物和食品或者饮料的原料，然后加工该混合物制得。

同时，本发明食品或者饮料可以通过一起加工用热水或者不同溶剂从已知含有上述活性成分的植物等原料提取的提取物和食品或者饮料的原料制备。获得提取物的具体方法参见“本发明的药物”部分。

另外，当本发明的食品或者饮料是颗粒状、片状或是液体补充物时，作为活性成分的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇优选和如下的物质一起调配：糖，例如乳果糖、麦芽糖醇和乳糖醇，和其他的糖，例如糊精和淀粉；蛋白，例如明胶、大豆蛋白和玉米蛋白；氨基酸，例如丙氨酸、谷酰胺和异亮氨酸；多聚糖，例如纤维素和阿拉伯树胶；脂肪和油，例如大豆油和中型链三酰甘油。

(本发明的食品添加剂)

当本发明的抗氧化剂用作食品添加剂(称为“本发明的食品添加剂”)时，该已加入食品或者饮料的食品添加剂能用于降低因生物组分的氧化例如脂质的氧化、特别是脂质过氧化物形成而引起的疾病或者症状的风险，或者用于预防这些疾病或者症状。

另外，本发明的食品添加剂也可在食用之前加入食品或者饮料中用以抑制食品或者饮料组分的氧化，例如脂质的氧化。本发明的食品添加剂特别适合加入含有脂肪和油、或以脂肪和油作为主要成分的食品或饮料。“本发明食品或者饮料”部分列举了含有脂肪和油的食品或者饮料的例子。

本发明的食品添加剂含3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分。

本发明的食品添加剂里的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的浓度可进行适当设定。优选浓度至少为0.001％(质量)，较优选浓度至少为0.01％(质量)，更优选浓度至少为0.05％(质量)，特别优选浓度至少为0.1％(质量)。另外，本发明的食品添加剂中没有特别限定所述化合物的浓度上限，例如其浓度为90％(质量)以下，较优选浓度为70％(质量)以下，更优选是浓度在50％(质量)以下。

本发明的食品添加剂优选进一步包含乳化剂。只要能用于食品，该添加剂并没有特别限制。例如，已在日本批准的作为食品添加剂的乳化剂都可优选使用，例如甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯和卵磷脂。

当乳化剂加入本发明的食品添加剂时，作为本发明食品添加剂活性成分的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇在水溶性食品或者饮料中的分散性会得到提升。

本发明的食品添加剂的形式没有特别的限制，可以是常用于食品添加剂的形式，例如粉状、颗粒状、片状或是液状液体。

当本发明的食品添加剂包含上述乳化剂时，该食品添加剂优选乳化剂的形式。当添加剂为乳化剂时，3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇在水溶性的食品或者饮料中的分散性会进一步得到提高。

除了3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分以及乳化剂之外，本发明的食品添加剂还可以包含常用的添加剂，例如填充剂。同时，本发明的食品添加剂也可以包含常用在食品添加剂中的其他已知组分。

本发明的食品添加剂可通过混合3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为活性成分来制备。本发明的食品添加剂可以通过例如调配上述活性成分、优选加入上述乳化剂和任选加入上述添加剂或其他组分来制备。

同时，本发明的食品添加剂能通过调配用热水或者不同溶剂从已知含有上述化合物的植物等原料提取的提取物、优选加入上述乳化剂和任选加入上述添加剂或者其他组分来制备。“本发明的药物”部分有获得该提取物的具体方法。

本发明的食品添加剂可用来制备本发明的上述食品或者饮料。添加到食品或者饮料的食品添加剂的量可以根据作为本发明中上述食品或者饮料的活性成分即3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的量进行适当地调整。

另外，本发明的食品添加剂优选有目的标识例如“抗氧化”，“抑制脂质氧化”，或“抑制脂质过氧化物的形成”。

在“本发明食品和饮料”中描述了“标识”和“标识行为”。

(本发明的皮肤外用制剂)

本发明的皮肤外用制剂中的抗氧化剂(称为“本发明的皮肤外用制剂”)能用来治疗或改善、或预防皮肤由于生物组分的氧化、例如脂质的氧化、特别是脂质过氧化物形成引起的症状。

例如，该制剂能用来改善或预防色素沉着例如如斑点或雀斑、皮炎如过敏性皮炎或痤疮，或用于改善或者预防皱纹、弹性降低、脱发等。

皮肤的外用制剂包括所有药品、准药品和化妆品。

皮肤外用制剂的制备可通过混合化学式(1)代表的化合物和普遍已知的基本原料获得。“本发明的药物”部分描述了提取该化合物的方法等。

【本发明赋予抗氧化活性的方法】

本发明包含一种赋予食品或者饮料抗氧化活性、较优选为抑制脂质氧化活性、更优选为抑制脂质过氧化物形成的活性的方法，该方法包括加入化学式(1)代表的化合物进入食品或者饮料，使该化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)，较优选浓度至少为0.001％(质量)，更优选浓度至少为0.005％(质量)，特别优选浓度至少为0.01％(质量)。此种情况时，上面“本发明食品或者饮料”部分的食品或者饮料的定义同样适用于这里的“食品或者饮料”。

所述的“添加/加入(所述/该)化合物……”包括加入通过纯化或合成的化合物和加入浓缩上述化合物得来的提取物，该提取物用热水或者不同溶剂提取自已知的含上述化合物的植物等原料。“本发明的药物”部分描述了获得提取物的具体方法。

【本发明提高抗氧化活性的方法】

另外，本发明包括提高含有化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料抗氧化活性、较优选为抑制脂质氧化的活性、更优选为抑制脂质过氧化物形成的活性的方法，该方法包括加入由化学式(1)代表的化合物进入食品或者饮料，使该化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)，较优选浓度至少为0.001％(质量)，更优选浓度至少为0.005％(质量)，特别优选是浓度至少为0.01％(质量)。同样，此种情况下在“本发明食品或者饮料”部分的食品或者饮料的定义同样适用于这里的“食品或者饮料”。

含化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料包括含百合科(Liliaceae)植物提取物的食品或者饮料。其例子包括含芦荟植物叶肉的食品或者饮料。如上所述，该“加入(所述/该)化合物……”包括加入通过纯化或者合成得到的化合物和加入上述的提取物。

【对抑制脂质过氧化物形成作用的评价】

不同测试样品(包括本发明的抗氧化剂)抑制脂质过氧化物形成的作用可通过用例如硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)反应物(TBA reactive substance，TBARS)的量作为指标来评价。具体来说，可定义为：TBARS的量越大，则形成的脂质过氧化物的量越大。

TBARS的例子包括丙二醛(malondialdehyde，MDA)，其在高温和酸性条件下和TBA反应，其也是脂质过氧化的天然副产品。MDA-TBA的加成化合物可以通过比色法测MDA在530nm-540nm的吸光度来检测。

同时，测试样品抑制脂质过氧化物形成的作用能通过使用ApoE基因缺陷小鼠来评价，所述小鼠常用作由于高胆固醇血症(高-LDL-胆固醇血症)而产生动脉硬化的动物模型(例如参见文献1：“Saibokogaku(Cell Engineering)，”Extra Issue，“Medical Experiment Manual”series，Strategy for Study of Arteriosclerosis+Hyperlipidemia，Shujunsha Co.，1^st edition，1^st impression，published on April 1，1996，pp.441-443)。

该模型小鼠并不表现出肥胖症，但已知依次发生高-LDL-胆固醇血症、动脉硬化和心血管疾病。另外，该模型小鼠脂质过氧化物的水平高于正常小鼠，随时间可观察到动脉内动脉粥样硬化病变(硬化斑块)。因此，可通过使用测试样品给药模型小鼠后检测模型小鼠血液内脂质过氧化物的水平来评价测试样品抑制脂质过氧化物形成的作用。

另外，本领域普遍已知氧化型LDL造成动脉硬化的原发性损伤。因此，可通过统计测试样品治疗后的每只模型小鼠动脉中动脉粥样硬化病变(硬化斑块)的数目来评价该测试样品通过抑制脂质过氧化物的形成来降低动脉硬化风险的作用。

【制备实施例1】

(生产3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇)

以下介绍从库拉索芦荟(Aloe barbadensis Miller)中提取和纯化3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。

100kg库拉索芦荟(Aloe barbadensis Miller)的叶肉(亮胶部分)用匀浆器研磨成液状，加入100L乙酸乙酯/丁醇(3∶1)的混合液，搅拌。

混合液静置过夜，分为乙酸乙酯/丁醇的混合液和水层，收集乙酸乙酯/丁醇的混合液。减压浓缩乙酸乙酯/丁醇的混合液，因此得到13.5g乙酸乙酯/丁醇混合液的提取物。

溶解13g该提取物于1ml的氯仿/甲醇(1∶1)混合溶液，使该混合溶液通过并吸附于填充有400g硅胶60(Merck & Co.，Inc制备)的色谱柱。用浓度梯度的氯仿/甲醇的混合液进行洗脱，其中甲醇浓度逐步增加(氯仿/甲醇混合比＝100∶1，25∶1，10∶1，5∶1和1∶1)。洗脱组分中，氯仿∶甲醇＝5∶1洗出的组分溶解于1ml的氯仿/甲醇(1∶1)的混合液。随后该混合物通过并吸附于填充有180g COSMOSIL 140(Nacalai Tesque，Inc.制造)的色谱柱。然后，连续用600ml 85％的甲醇溶液，600ml 95％的甲醇溶液和100ml 100％的甲醇溶液进行洗脱。3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇浓缩并分离于95％甲醇的洗脱液组分中，随后除去该组分的溶剂获得3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。该化合物的结构通过MS和NMR证实。

实施例

下文将以实施例的方式更详细地介绍本发明。但是，本发明并不局限于下列实施例。

【实施例1】

用发生动脉硬化的ApoE基因缺陷模型小鼠来检测3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇抑制脂质过氧化物形成的作用。

(1)样品的准备

以上制备实施例1中制备的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇用作测试样品，Mevalotin(DAIICHI SANKYO COMPANY，LIMITED.)HMG-CoA还原酶抑制剂用作对照样品。

所述样品分别用生理盐水溶解，使每个测试化合物的浓度为30μg/ml。注意生理盐水用作阴性样品。

(2)测试方法

六周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠(购自Japan SLC，Inc.)先用高胆固醇的食物(Research Diets Inc.制造)喂饲2周后，分组，每组15只小鼠。

对于每组小鼠，各自分别经口给予包括测试样品、对照样品或阴性样品的溶液，每天一次，连续三天，用医学针头每25g小鼠体重给予1ml量。开始给药后的早期(开始给药后14天)，从每只小鼠的尾静脉取血，分离血清。然后用OxiSelect TBARS Assay Kit(MDA Quantitation制造)测量TBARS的量。同时，作为对照，用上述同样的方式从每只正常小鼠取血。

(3)测试结果

表1是该实施例的测试结果。表1显示每天给药剂量为30μg小鼠血液中脂质过氧化物的量(血清MDA浓度)。

阴性样品处理的小鼠中，血液中脂质过氧化物和正常小鼠比较有升高的趋势。但是，在连续用测试样品治疗的模型小鼠中，血液中抑制脂质过氧化物形成的效果清楚地得到了证实(统计结果具有显著差异，在表中用“*”标记)。结果表明用3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇给药予ApoE基因缺陷小鼠后，血液中脂质过氧化物的浓度水平几乎降低到几乎等同于正常小鼠的水平，有效预防或者治疗动脉硬化。

另一方面，用对照样品(Mevalotin)处理后的小鼠和阴性样品处理后的小鼠比较，血液中脂质过氧化物的量并没有观察到明显的降低。

值得注意的是，测试样品给药的过程中没有观察到副作用，给药后也没有异常的病理发现。

上述结果表明3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇具有抑制脂质过氧化物形成的效果，对预防或者治疗动脉硬化是有效的。

表1

实施例2

实施例2中，通过统计已知动脉硬化模型小鼠(即ApoE基因缺陷小鼠)的动脉内粥样硬化损伤(斑块)的数目，评价3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇通过抑制脂质过氧化物的效果来降低动脉硬化的风险的效果。

(1)样品制备

测试样品、对照样品和阴性样品的制备方法和上面实施例1的方法一致，制备品用于测试。

(2)测试方法

六周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠(购自Japan SLC，Inc.)首先用高胆固醇的食物(Research Diets Inc.制备)喂养2周后，分组，每组15只小鼠。

对于每组的小鼠，各自分别经中给予包括测试样品、对照样品或阴性样品的溶液，每天一次，连续39天，用医学针头每25g小鼠体重给予1ml。开始给药后40天，胸主动脉用福尔马林固定，并用油红染色，对斑块进行计数。

(3)测试结果

该实施例的测试结果如表2所示。表2显示用测试样品溶液给药模型小鼠后动脉中粥样硬化损伤(斑块)的数目。

结果表明阴性样品处理小鼠的斑块数是12.2，测试样品处理模型小鼠的斑块目减半为5.8。测试样品对抑制动脉内皮斑块的形成是有效的(统计结果显示有显著差异，用“*”在表中标记)。

另一方面，用对照样品(Mevalotin)处理的小鼠，虽然斑块形成有减少，但是统计结果显示：和阴性样品处理组比较没有明显的差异。

值得注意的是，在给药中和给药后，在小鼠体重和病理发现方面都没有观察到副作用。

该结果阐明了3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇对抑制血管内斑块的形成有效果，且可以通过抑制脂质过氧化物的作用降低动脉硬化的风险。

表2

工业实用性

本发明的抗氧化剂可安全用药，有效抑制生物组分的氧化，特别是可有效地抑制血液里脂质过氧化物的形成。因此，该抗氧化剂可以有效治疗和/或预防疾病和症状，例如动脉硬化、中风、心绞痛、心肌梗塞、肝脏功能异常、肝硬化、肝炎、视网膜病变、白内障、老年性痴呆、帕金森氏病、过敏性疾病、癌症、皮肤粗糙和老化。其中，本发明的抗氧化剂对治疗和/或预防动脉硬化、心绞痛和心肌梗塞具有显著效果。因此，本发明的药物可用于治疗和预防上述疾病和症状有用。另外，因为本发明的上述食品或者饮料可以安全食用，且有效地抑制活体内特别是血液内脂质过氧化物的形成，所以食用本发明食品或者饮料可预防上述疾病和症状并且可降低其发生风险。另外，本发明的食品添加剂可以用来制备所述食品或者饮料，且可以抑制食品或者饮料组分的氧化。除此之外，本发明的皮肤外用制剂可以有效治疗或改善或预防色素沉着如斑点或雀斑、皮炎如过敏性皮炎或痤疮，或用于改善或者预防皱纹、弹性降低、脱发等。

Claims (29)

1.一种抗氧化剂，其包含作为活性成分的以下化学式(1)代表的化合物：

2.根据权利要求1的抗氧化剂，其包含浓度至少为0.0001％(质量)的化学式(1)代表的化合物。

3.根据权利要求1或者2的抗氧化剂，其用于抑制脂质的氧化。

4.根据权利要求3的抗氧化剂，其用于抑制脂质过氧化物的形成。

5.根据权利要求1到4任一项的抗氧化剂，其是皮肤外用制剂。

6.根据权利要求1到4任一项的抗氧化剂，其为含所述化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料。

7.根据权利要求6的抗氧化剂，其中所述食品或者饮料包含乳化剂。

8.一种制备权利要求1到7任一项的抗氧化剂的方法，其包括混合所述化学式(1)代表的化合物作为活性成分。

9.一种用于抑制脂质过氧化物形成的药物，其包含作为活性成分的以下化学式(1)代表的化合物：

10.根据权利要求9的药物，其包含浓度至少为0.0001％(质量)的所述化学式(1)代表的化合物。

11.一种制备权利要求9或者10的药物的方法，其包括混合作为活性成分的所述化学式(1)代表的化合物。

12.用于抑制脂质过氧化物形成的食品或者饮料，其包含作为活性成分的以下化学式(1)代表的化合物：

13.根据权利要求12的食品或者饮料，其包含浓度至少为0.0001％(质量)的所述化学式(1)代表的化合物。

14.根据权利要求12或者13的食品或者饮料，其进一步包含乳化剂。

15.根据权利要求12到14任一项的食品或者饮料，其包含脂肪和油。

16.根据权利要求12到15任一项的食品或者饮料，其是功能性食品或者饮料。

17.一种制备权利要求12到16任一项的食品或者饮料的方法，其包括混合所述化学式(1)代表的化合物作为活性成分。

18.一种用于抑制脂质过氧化物形成的食品添加剂，其包含作为活性成分的以下化学式(1)代表的化合物：

19.根据权利要求18的食品添加剂，其进一步包含乳化剂。

20.根据权利要求18或者19的食品添加剂，其包含浓度至少为0.001％(质量)的化学式(1)代表的化合物。

21.一种制备权利要求18到20任一项的食品添加剂的方法，其包括混合作为活性成分的所述化学式(1)代表的化合物。

22.一种赋予食品或者饮料抗氧化活性的方法，其包括将以下化学式(1)代表的化合物

加入食品或者饮料中，使得该化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)。

23.一种提高含以下化学式(1)代表的化合物的食品或者饮料的抗氧化活性的方法，其包括将化学式(1)代表的化合物加入食品或者饮料中，使所述化合物在食品或者饮料中的浓度至少为0.0001％(质量)

24.以下化学式(1)代表的化合物在制备抗氧化剂中的用途

25.包含浓度至少为0.0001％(质量)的以下化学式(1)代表的化合物的组合物在制备抗氧化剂中的用途

26.一种以下化学式(1)代表的化合物，其用于抗氧化

27.一种包含浓度至少为0.0001％(质量)的以下化学式(1)代表的化合物的组合物，其用于抗氧化

28.一种治疗或者预防氧化引起的疾病或者症状的方法，其包括将以下化学式(1)代表的化合物给予需要抗氧化的个体

29.根据权利要求28的治疗或者预防氧化引起的疾病或者症状的方法，其包括给予含浓度至少为0.0001％(质量)的所述化学式(1)代表的化合物的组合物。