CN102205123B

CN102205123B - 一种防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法

Info

Publication number: CN102205123B
Application number: CN2011101289087A
Authority: CN
Inventors: 龚建森; 苗晋锋; 李新华; 倪同艳; 刘学贤; 吕晓娟; 李志兵
Original assignee: Jiangsu Institute Poultry Sciences
Current assignee: Jiangsu Institute Poultry Sciences
Priority date: 2011-05-18
Filing date: 2011-05-18
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2031-05-18
Also published as: CN102205123A

Abstract

本发明公开了一种防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法，属于生物制品技术领域。先后使用小鹅瘟活疫苗和小鹅瘟灭活疫苗免疫健康蛋禽，收集其所产卵，无菌分离卵黄；将卵黄与氯化钠溶液混合均匀后，加入适量多孔淀粉充分吸附；再将上述液体与海藻酸钠溶液混合均匀后，经喷雾干燥设备脱水，制得防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂。本发明方法科学、工艺简单、成本低廉、损耗极小，制剂具有疗效显著、保存方便、缓释性好、易吸收、无毒、无残留等特点。与传统的卵黄抗体注射剂相比，防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂不仅延长了保护期，还可以通过口服途径使用，无应激反应，同时还具有一定的促生长作用。

Description

一种防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种用于预防和治疗小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法。

背景技术

小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的烈性传染病，发病率和死亡率都很高，发病雏鹅或雏番鸭的死亡率最高可达90％-100％。小鹅瘟的发病率和死亡率与雏鹅（雏番鸭）日龄大小有非常密切的关系，在自然条件下，本病仅发生于3-30日龄的雏鹅（雏番鸭）。

长期以来，小鹅瘟疫病的防控是采用种鹅（种番鸭）在开产前接种小鹅瘟疫苗，通过母源抗体给雏鹅（雏番鸭）提供被动免疫。但由于现行疫苗免疫保护期限较短（仅2个月左右），如果在种鹅产蛋期间加强免疫又会引起各种严重的应激反应（减食、减蛋，生长受抑等），造成目前养殖者在种鹅产蛋期间普遍不愿加强免疫，上述原因导致开产后期所孵出的雏鹅（雏番鸭）感染小鹅瘟的几率大增。由于小鹅瘟通常发生于30日龄以内的雏鹅（雏番鸭），因此，养殖者更倾向于在易感日龄内使用卵黄抗体进行预防与治疗，以此弥补疫苗使用的缺陷。

虽然小鹅瘟卵黄抗体在养殖中发挥了重要的作用，但目前使用的小鹅瘟卵黄抗体仍存在以下不足之处：⑴目前使用的小鹅瘟卵黄抗体均为注射制剂，不但使用费时费力，而且无法避免因注射引起的疫病传播与各种严重应激反应（食欲废绝，肌肉坏死，生长受抑等）；⑵制作过程较为复杂，通常需使用大量的有机溶剂或盐类进行抗体的提纯，不仅增加了制造成本，也对抗体效价也有较大影响；⑶目前使用的小鹅瘟卵黄抗体注射剂不具有缓释功能，导致其半衰期较短，在疫病高发、频发时需多次使用才可达到效果；⑷目前使用的小鹅瘟卵黄抗体均为液体制剂，抗体效价受温度、光照等因素影响较大，导致临床使用中疗效降低；⑸小鹅瘟卵黄抗体不同批次间的抗体效价差异较大，如效价低于要求，则需进行浓缩处理，导致工艺复杂，生产费用增加；⑹禽蛋中有许多营养成分（如蛋白质、氨基酸、维生素等），通过纯化方法制备卵黄抗体，会破坏上述营养物质，造成较大的资源浪费。

因此，养殖者需要一种使用方便，应激反应小，具有一定的促生长作用，通过饮水或采食途径使用的小鹅瘟卵黄抗体。

发明内容

本发明的目的是针对现有小鹅瘟卵黄抗体注射剂所存在的缺陷，提供一种能经口服途径使用的防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法，本发明的原理是利用多孔淀粉对卵黄抗体进行高效吸附，再使用肠溶性高分子材料进行包埋，最后通过喷雾干燥设备脱水。本发明通过使用包被技术，解决现有小鹅瘟卵黄抗体注射剂存在的使用不便，副作用大，工艺复杂，半衰期短，保存不便等不足之处。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的，一种防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）先后使用小鹅瘟活疫苗和小鹅瘟灭活疫苗免疫健康蛋禽，当血清抗体琼扩效价达1:16后开始收集其所产卵，无菌分离卵黄；

（2）将步骤（1）分离的卵黄与等体积的质量浓度为5%氯化钠溶液混合均匀，加入体积为卵黄与氯化钠溶液总体积20%-40%的多孔淀粉，30℃-40℃控温搅拌30-60分钟；

（3）将步骤（2）制得的液体与等体积的质量浓度为2%-5%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水，制得防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂（干粉）。

本发明制得的防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，该制剂的粒径范围5μm-20μm，每克制剂中所含的琼扩抗体效价在1:16以上，该制剂可以通过口服途径使用，该制剂的免疫保护期12-15天，免疫保护期长于普通的小鹅瘟卵黄抗体注射剂，该制剂可有效防治小鹅瘟疫病。

本发明方法科学，工艺简单，制备条件温和，对卵黄抗体效价几乎没有影响。本发明通过使用多孔淀粉作为核心材料，制成的缓释制剂粒径均匀，易干燥脱水，分散性较好。

防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，不仅具有缓释性能好、毒副作用低、成本低廉，使用方便、保存期长等优点，还可以通过饮水或采食途径使用，极大地降低了因注射使用造成的疫病传播以及各种严重应激反应。防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂每克所含的琼扩抗体效价在1:16以上，产品不添加任何防腐剂，在2-8℃密封的条件下保存2年以上效价仍不降低。

附图说明

图1是防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的扫描电镜图片。

具体实施方式

实施例1

选择90日龄的健康蛋鸡，使用小鹅瘟活疫苗进行初次免疫（肌肉注射1ml）；间隔7天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第二次免疫（肌肉注射2ml）；间隔14天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第三次免疫（肌肉注射3ml）；间隔21天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第四次免疫（肌肉注射3ml）。第四次免疫后采用琼脂扩散试验检测血清抗体效价达1:32时，收集其所产卵，无菌分离卵黄。将卵黄与等体积的质量浓度为5%氯化钠溶液混合均匀，加入体积为卵黄与氯化钠溶液总体积20%的多孔淀粉，40℃控温搅拌60分钟。再将上述液体与等体积质量浓度为2%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水得到干粉，即防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释剂，每克防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释剂的琼扩效价达1:64。

取3日龄无小鹅瘟抗体的健康易感雏鹅40只，均分为四组，不同组别的试验雏鹅隔离饲养。四组试验雏鹅全部肌肉注射致死量的小鹅瘟强毒，于第二日，将第一组试验雏鹅灌服防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂稀释液（1ml/只，所含琼扩效价为1:16），第二组试验雏鹅灌服常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第三组试验雏鹅肌肉注射常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第四组为对照组，四组试验雏鹅均持续饲养8天，记录发病死亡情况。结果第一组试验雏鹅的存活率为80%（8/10），第二组试验雏鹅的存活率为20%（2/10），第三组试验雏鹅的存活率为80%（8/10），第四组试验雏鹅的存活率10%（1/10）。上述结果表明口服途径使用防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，注射途径使用常规卵黄抗体均具有良好的治疗效果，而口服途径使用常规卵黄抗体的治疗效果较差。

实施例2

选择90日龄的健康蛋鸡，使用小鹅瘟活疫苗进行初次免疫（肌肉注射1ml）；间隔10天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第二次免疫（肌肉注射3ml）；间隔21天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第三次免疫（肌肉注射3ml）。第三次免疫后采用琼脂扩散试验检测血清抗体效价达1:16时，收集其所产卵，无菌分离卵黄。将卵黄与等体积质量浓度为5%氯化钠溶液混合均匀，加入体积为卵黄与氯化钠溶液总体积30%的多孔淀粉，30℃控温搅拌50分钟。再将上述液体与等体积的质量浓度为3%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水得到干粉，即防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，每克防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的琼扩效价达1:32。

取3日龄无小鹅瘟抗体的健康易感雏鹅40只，均分为四组，不同组别的试验雏鹅隔离饲养。第一组试验雏鹅灌服防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂稀释液（1ml/只，所含琼扩效价为1:16），第二组试验雏鹅灌服常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第三组试验雏鹅肌肉注射常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第四组为对照组。于第二日将四组试验雏鹅全部肌肉注射致死量的小鹅瘟强毒，持续饲养8天，记录发病死亡情况。结果第一组试验雏鹅的存活率为100%（10/10），第二组试验雏鹅的存活率为30%（3/10），第三组试验雏鹅的存活率为90%（9/10），第四组试验雏鹅的存活率为0（0/10）。上述结果表明口服途径使用防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，注射途径使用常规卵黄抗体均具有良好的预防效果，而口服途径使用常规卵黄抗体的预防效果较差。

实施例3

选择150日龄的健康种鸭，使用小鹅瘟活疫苗进行初次免疫（肌肉注射1ml）；间隔10天，使用小鹅瘟活疫苗进行第二次免疫（肌肉注射2ml）；间隔14天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第三次免疫（肌肉注射3ml）。第三次免疫后采用琼脂扩散试验检测血清抗体效价达1:64时，收集其所产卵，无菌分离卵黄。将卵黄与等体积的质量浓度为5%氯化钠溶液混合均匀，加入体积为卵黄与氯化钠溶液总体积40%的多孔淀粉，30℃控温搅拌30分钟。再将上述液体与等体积的质量浓度为4%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水得到干粉，即防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，每克防治小鹅瘟卵黄抗体缓释制剂的琼扩效价达1:64。

取3日龄无小鹅瘟抗体的健康易感雏鹅60只，均分为三组，不同组别的试验雏鹅隔离饲养。第一组试验雏鹅经饮水途径使用防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂（1ml/只，所含琼扩效价为1:16），第二组试验雏鹅肌肉注射常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第三组为对照组。分别于第5、10、15、20日，从每组中随机抽取5只试验雏鹅，肌肉注射致死量的小鹅瘟强毒，单独饲养8天，记录发病死亡情况。结果见表1，由表可见第一组（口服组）的试验雏鹅在免疫5、10、15、20日攻毒后的存活率分别为100%、80%、60%和20%，第二组（注射组）的存活率分别为100%、60%、40%和20%。上述结果表明防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂一次免疫的保护期不足15天，常规卵黄抗体注射剂一次免疫的保护期不足10天。与常规卵黄抗体注射剂相比，本发明的防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂具有延长免疫保护期的效果。

表1 不同试验组的雏鹅攻毒保护结果

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实施例4

选择180日龄的健康种鹅，使用小鹅瘟活疫苗进行初次免疫（肌肉注射1ml）；间隔7天，使用小鹅瘟活疫苗进行第二次免疫（肌肉注射2ml）；间隔14天，使用小鹅瘟油乳剂灭活疫苗进行第三次免疫（肌肉注射4ml）。第三次免疫后采用琼脂扩散试验检测血清抗体效价达1:64时，收集其所产卵，无菌分离卵黄。将卵黄与等体积的质量浓度为5%氯化钠溶液混合均匀，加入体积为卵黄与氯化钠溶液总体积40%的多孔淀粉，35℃控温搅拌40分钟。再将上述液体与等体积的质量浓度为5%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水得到干粉，即防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，每克防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的琼扩效价达1:64。

取3日龄无小鹅瘟抗体的健康易感雏鹅60只，均分为三组，不同组别的试验雏鹅隔离饲养。第一组试验雏鹅经拌料途径使用防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂（1ml/只，所含琼扩效价为1:16），第二组试验雏鹅肌肉注射常规卵黄抗体液（1ml/只，所含琼扩效价1:16），第三组为对照组。分别于第5、10、15、20日，从每组中随机抽取5只试验雏鹅，肌肉注射致死量的小鹅瘟强毒，单独饲养8天，记录发病死亡情况。结果见表2，由表可见第一组（口服组）的试验雏鹅在免疫5、10、15、20日攻毒后的存活率分别为100%、100%、80%和0，第二组（注射组）的存活率分别为100%、80%、40%和20%。上述结果表明防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂一次免疫的保护期达15天，常规卵黄抗体注射剂一次免疫的保护期达10天。与常规卵黄抗体注射剂相比，本发明的防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂具有延长免疫保护期的效果。

表2 不同试验组的雏鹅攻毒保护结果

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Claims

1. 一种防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（3）将步骤（2）制得的液体与等体积的质量浓度为2%-5%的海藻酸钠溶液混合，充分混匀后经喷雾干燥设备脱水，制得防治小鹅瘟的卵黄抗体缓释制剂，该制剂的粒径大小为5μm-20μm，每克制剂所含琼扩抗体效价为1:16以上，适合口服途径使用。