JP2950273B2 - ウシロタウイルス病ワクチン - Google Patents
ウシロタウイルス病ワクチンInfo
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ウシロタウイルス
病ワクチン、およびその製造、ならびにその使用に関す
る。
病ワクチン、およびその製造、ならびにその使用に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】子牛の下痢症は、世界の多くの地域にお
いて畜産経営農家に経済的被害を与える主要な原因の一
つとなっている。ロタウイルスは、ReoviridaeのRotavi
rus 属に属するウイルスで、人、猿、牛、馬、豚、めん
羊、犬、猫、ウサギ、マウス、モルモット、カモシカ、
シカ、バイソン、鶏、アヒル、七面鳥、ハトの糞便から
検出されており、幼齢期の急性下痢の原因として重要で
ある。牛では、新生子牛に限ってみられ、発病すると黄
色水様下痢を起こし、脱水、衰弱する。また、コロナウ
イルス、大腸菌など他の下痢の原因病原体との混合感染
は頻度が高く、症状、予後を悪化させる。このような症
状を誘発するウシロタウイルスは世界の殆どの牛群に浸
潤しており、いったん、本ウイルスが侵入すると常在化
し、発生が繰り返されるため成長の遅延を招いて畜産経
営の面で多大な被害をもたらしている。ワクチンとして
は、生ワクチンおよび不活化ワクチンが米国などで実用
化されている。生ワクチンは初乳摂取前の子牛に経口接
種する方法で、不活化ワクチンは母牛に接種し、乳汁免
疫による方法で子牛への免疫を付与している。
いて畜産経営農家に経済的被害を与える主要な原因の一
つとなっている。ロタウイルスは、ReoviridaeのRotavi
rus 属に属するウイルスで、人、猿、牛、馬、豚、めん
羊、犬、猫、ウサギ、マウス、モルモット、カモシカ、
シカ、バイソン、鶏、アヒル、七面鳥、ハトの糞便から
検出されており、幼齢期の急性下痢の原因として重要で
ある。牛では、新生子牛に限ってみられ、発病すると黄
色水様下痢を起こし、脱水、衰弱する。また、コロナウ
イルス、大腸菌など他の下痢の原因病原体との混合感染
は頻度が高く、症状、予後を悪化させる。このような症
状を誘発するウシロタウイルスは世界の殆どの牛群に浸
潤しており、いったん、本ウイルスが侵入すると常在化
し、発生が繰り返されるため成長の遅延を招いて畜産経
営の面で多大な被害をもたらしている。ワクチンとして
は、生ワクチンおよび不活化ワクチンが米国などで実用
化されている。生ワクチンは初乳摂取前の子牛に経口接
種する方法で、不活化ワクチンは母牛に接種し、乳汁免
疫による方法で子牛への免疫を付与している。
【０００３】しかしながら、現在までに実用化されてい
るワクチンは、必ずしも十分な予防効果を有していると
はいい難い。この原因としては、初乳中の抗体が急激に
減少、消失すること、ロタウイルス病は腸管局所の感染
病であり血清中の抗体があまり有効でないことに加え
て、ウイルス株が多種類におよび一種類のウイルス株に
対する抗体だけではロタウイルス病に対する効果が限定
されてしまうことである。なお、このウシロタウイルス
に対するワクチンは、日本では現在までのところ実用化
されていない。
るワクチンは、必ずしも十分な予防効果を有していると
はいい難い。この原因としては、初乳中の抗体が急激に
減少、消失すること、ロタウイルス病は腸管局所の感染
病であり血清中の抗体があまり有効でないことに加え
て、ウイルス株が多種類におよび一種類のウイルス株に
対する抗体だけではロタウイルス病に対する効果が限定
されてしまうことである。なお、このウシロタウイルス
に対するワクチンは、日本では現在までのところ実用化
されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、ウシロ
タウイルス病については、米国などでは既にワクチンが
開発され実用化されていはいるものの、感染予防および
発症予防に対しての効果については、充分とはいえず、
また、現在までのところ日本国内で実用化されたウシロ
タウイルス病ワクチンはない。そこで、本発明は、ウシ
ロタウイルス病ワクチンとして、多種類の株に対しての
感染予防効果および発症予防効果の高いワクチン、抗体
誘導能の高いワクチンを提供せんとするものである。
タウイルス病については、米国などでは既にワクチンが
開発され実用化されていはいるものの、感染予防および
発症予防に対しての効果については、充分とはいえず、
また、現在までのところ日本国内で実用化されたウシロ
タウイルス病ワクチンはない。そこで、本発明は、ウシ
ロタウイルス病ワクチンとして、多種類の株に対しての
感染予防効果および発症予防効果の高いワクチン、抗体
誘導能の高いワクチンを提供せんとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】ロタウイルスは、さまざ
まの動物種から分離されており、血清型も多様性にとん
でいる。その血清型の分類として、Ｇ血清型とＰ血清型
とがある。前記Ｇ血清型はウイルス外殻蛋白であるＶＰ
７蛋白に由来しており、Ｐ血清型は同じく外殻蛋白であ
るＶＰ４蛋白に由来している。これらの血清型は、それ
ぞれの蛋白をコードするＶＰ７遺伝子およびＶＰ４遺伝
子を基にしたＲＴ−ＰＣＲ(reverse transcription-pol
ymerase chain reaction) により決定されている。そこ
で、わが国におけるウシロタウイルスの湿潤状況を調査
する目的で、牛の野外糞便材料から分離したウイルスの
ＧおよびＰ血清型別を行った。その結果、血清型の内訳
は、Ｇ６Ｐ１型が１１株（１７％）、Ｇ６Ｐ５型が１７
株（２６％）、Ｇ６Ｐ１１型が１５株（２３％）、そし
てＧ１０Ｐ１１型が２２株（３４％）であり、４種類の
株の浸潤が確認された（下記表１参照。）。従って、わ
が国におけるウシロタウイルス病ワクチンとしては、こ
の４種類の血清型に対する有効性を保持することが必要
であることが分かった。
まの動物種から分離されており、血清型も多様性にとん
でいる。その血清型の分類として、Ｇ血清型とＰ血清型
とがある。前記Ｇ血清型はウイルス外殻蛋白であるＶＰ
７蛋白に由来しており、Ｐ血清型は同じく外殻蛋白であ
るＶＰ４蛋白に由来している。これらの血清型は、それ
ぞれの蛋白をコードするＶＰ７遺伝子およびＶＰ４遺伝
子を基にしたＲＴ−ＰＣＲ(reverse transcription-pol
ymerase chain reaction) により決定されている。そこ
で、わが国におけるウシロタウイルスの湿潤状況を調査
する目的で、牛の野外糞便材料から分離したウイルスの
ＧおよびＰ血清型別を行った。その結果、血清型の内訳
は、Ｇ６Ｐ１型が１１株（１７％）、Ｇ６Ｐ５型が１７
株（２６％）、Ｇ６Ｐ１１型が１５株（２３％）、そし
てＧ１０Ｐ１１型が２２株（３４％）であり、４種類の
株の浸潤が確認された（下記表１参照。）。従って、わ
が国におけるウシロタウイルス病ワクチンとしては、こ
の４種類の血清型に対する有効性を保持することが必要
であることが分かった。
【０００６】
【表１】
【０００７】次に、同じく牛の野外糞便材料より分離し
たウイルスの増殖性について検討を行った。その結果、
ウイルス株により、増殖性に著しい違いがあることが明
らかとなった。さらに、Ｇ６Ｐ１１型およびＧ１０Ｐ１
１型において増殖性の低いことが確認された（下記表２
参照。）。従って、ワクチン開発のためには、ウイルス
培養上清を採取するよりも、より効果的な抗原の調製法
を開発する必要があると考えられた。
たウイルスの増殖性について検討を行った。その結果、
ウイルス株により、増殖性に著しい違いがあることが明
らかとなった。さらに、Ｇ６Ｐ１１型およびＧ１０Ｐ１
１型において増殖性の低いことが確認された（下記表２
参照。）。従って、ワクチン開発のためには、ウイルス
培養上清を採取するよりも、より効果的な抗原の調製法
を開発する必要があると考えられた。
【０００８】
【表２】
【０００９】そこで、ウイルスの増殖性が悪かったウイ
ルス株の一つであるＧ１０Ｐ１１型ウイルス（野外症例
より分離されたＳｈｍａｎｅ９５０１株；株式会社微生
物化学研究所）について、ウイルス培養上清と感染細胞
から調製した抗原（感染細胞由来抗原）との違いをウイ
ルス価を指標として確認した。その結果を下記表３に示
す。
ルス株の一つであるＧ１０Ｐ１１型ウイルス（野外症例
より分離されたＳｈｍａｎｅ９５０１株；株式会社微生
物化学研究所）について、ウイルス培養上清と感染細胞
から調製した抗原（感染細胞由来抗原）との違いをウイ
ルス価を指標として確認した。その結果を下記表３に示
す。
【００１０】
【表３】
【００１１】表３の成績より、感染細胞由来抗原の方が
より多くのウイルスを含むことが分かる。さらに、この
ようにして調製した抗原を牛に免疫し、中和抗体誘導能
について確認を行った結果、感染細胞由来抗原を免疫し
た場合には、ウイルス培養上清を濃縮した抗原で免疫し
た場合よりも著しく高い中和抗体誘導能を示すことがわ
かった。
より多くのウイルスを含むことが分かる。さらに、この
ようにして調製した抗原を牛に免疫し、中和抗体誘導能
について確認を行った結果、感染細胞由来抗原を免疫し
た場合には、ウイルス培養上清を濃縮した抗原で免疫し
た場合よりも著しく高い中和抗体誘導能を示すことがわ
かった。
【００１２】本発明は、上記のような知見に基づき、さ
らに研究した結果、完成したものである。
らに研究した結果、完成したものである。
【００１３】即ち、本発明では、以下のような手段を採
用した。 （１）多種類の株に対しての有効性を示すワクチンとす
るため、以下の〜に示す手段を採用した。 ウシロタウイルスの内、ＲＴ−ＰＣＲ法により血清型
別された２種以上の異なる血清型に対する中和抗体産生
を刺激する性質を示す１種または２種以上の株を組み合
わせたワクチン製造用株からワクチンを製造した。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイルス株を用い
た。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０Ｐ１１型の２種の
ウシロタウイルス株を用いた。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ１１型の２種のウ
シロタウイルス株を用いた。 （２）中和抗体誘導能の高いワクチンとするために、以
下の、に示す手段を採用した。 ウシロタウイルスに感染した細胞を界面活性剤入りの
緩衝液に浮遊させた後、ホモジナイザーで細胞を破壊し
てウイルス粒子の抗原性を損なうことなく取り出した抗
原を用いてワクチンを製造した。 前記のようにして不活化した抗原にオイルアジュバン
トを添加した。
用した。 （１）多種類の株に対しての有効性を示すワクチンとす
るため、以下の〜に示す手段を採用した。 ウシロタウイルスの内、ＲＴ−ＰＣＲ法により血清型
別された２種以上の異なる血清型に対する中和抗体産生
を刺激する性質を示す１種または２種以上の株を組み合
わせたワクチン製造用株からワクチンを製造した。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイルス株を用い
た。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０Ｐ１１型の２種の
ウシロタウイルス株を用いた。 前記ワクチン製造用株としてＲＴ−ＰＣＲ法により血
清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ１１型の２種のウ
シロタウイルス株を用いた。 （２）中和抗体誘導能の高いワクチンとするために、以
下の、に示す手段を採用した。 ウシロタウイルスに感染した細胞を界面活性剤入りの
緩衝液に浮遊させた後、ホモジナイザーで細胞を破壊し
てウイルス粒子の抗原性を損なうことなく取り出した抗
原を用いてワクチンを製造した。 前記のようにして不活化した抗原にオイルアジュバン
トを添加した。
【００１４】
【作用および発明の効果】各種血清型のウシロタウイル
ス株のうち、Ｇ６Ｐ５型のウイルス株の免疫血清はＧ６
Ｐ１型ロタウイルスに対する中和抗体も有し、また、Ｇ
６Ｐ１１型の免疫血清はＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに
対する中和抗体を有し、Ｇ１０Ｐ１１型の免疫血清はＧ
６Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗体を有する。従
って、本発明のごとく、ウシロタウイルス病ワクチンと
して、他の株に対する中和抗体誘導能を有する前記のよ
うなウイルス株を使用することで、多種類の株に対する
有効性が得られ、さらに、他の株に対する中和抗体誘導
能を有する複数のウイルス株を組み合わせて使用するこ
とで、より多種類の株に対する有効性が得られる。ま
た、感染細胞から得られる抗原を使用すること、および
オイルアジュバントの添加により、中和抗体誘導能のよ
り一層高いワクチンとすることができる。従って、本発
明のウシロタウイルス病ワクチンは、ウシロタウイルス
病の感染防止および発症抑制に著しく効果があり、本病
の蔓延を防止することができる。
ス株のうち、Ｇ６Ｐ５型のウイルス株の免疫血清はＧ６
Ｐ１型ロタウイルスに対する中和抗体も有し、また、Ｇ
６Ｐ１１型の免疫血清はＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに
対する中和抗体を有し、Ｇ１０Ｐ１１型の免疫血清はＧ
６Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗体を有する。従
って、本発明のごとく、ウシロタウイルス病ワクチンと
して、他の株に対する中和抗体誘導能を有する前記のよ
うなウイルス株を使用することで、多種類の株に対する
有効性が得られ、さらに、他の株に対する中和抗体誘導
能を有する複数のウイルス株を組み合わせて使用するこ
とで、より多種類の株に対する有効性が得られる。ま
た、感染細胞から得られる抗原を使用すること、および
オイルアジュバントの添加により、中和抗体誘導能のよ
り一層高いワクチンとすることができる。従って、本発
明のウシロタウイルス病ワクチンは、ウシロタウイルス
病の感染防止および発症抑制に著しく効果があり、本病
の蔓延を防止することができる。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明でワクチン製造に用いるウ
シロタウイルス株は、野外症例より分離されるウイルス
株のうちのＧ６Ｐ５型、Ｇ１０Ｐ１１型という特定の血
清型の株を選択して使用するものであり、具体的には、
Ｇ６Ｐ５型としては例えばＨｙｏｇｏ９３０１株（株式
会社微生物化学研究所）、また、Ｇ１０Ｐ１１型として
はＳｈｉｍａｎｅ９５０１株（株式会社微生物化学研究
所）が挙げられる。またＧ１０Ｐ１１株の代わりにＧ６
Ｐ１１型、例えばＭｉｅ９００１株（株式会社微生物化
学研究所）を用いることもできる。これらのウシロタウ
イルスが感染増殖しやすい感受性の高い細胞としては、
アカゲザルの胎児腎臓由来株化細胞であるＭＡ１０４細
胞を用いることが望ましい。また、本発明で用いる界面
活性剤は、細胞成分などの凝集を防ぐ目的で使用するこ
とから、蛋白質に対する作用が温和である非イオン性界
面活性剤を使用することが好ましい。
シロタウイルス株は、野外症例より分離されるウイルス
株のうちのＧ６Ｐ５型、Ｇ１０Ｐ１１型という特定の血
清型の株を選択して使用するものであり、具体的には、
Ｇ６Ｐ５型としては例えばＨｙｏｇｏ９３０１株（株式
会社微生物化学研究所）、また、Ｇ１０Ｐ１１型として
はＳｈｉｍａｎｅ９５０１株（株式会社微生物化学研究
所）が挙げられる。またＧ１０Ｐ１１株の代わりにＧ６
Ｐ１１型、例えばＭｉｅ９００１株（株式会社微生物化
学研究所）を用いることもできる。これらのウシロタウ
イルスが感染増殖しやすい感受性の高い細胞としては、
アカゲザルの胎児腎臓由来株化細胞であるＭＡ１０４細
胞を用いることが望ましい。また、本発明で用いる界面
活性剤は、細胞成分などの凝集を防ぐ目的で使用するこ
とから、蛋白質に対する作用が温和である非イオン性界
面活性剤を使用することが好ましい。
【００１６】
１．他の血清型に対する中和抗体誘導能 Ｈｙｏｇｏ９３０１、Ｍｉｅ９００１およびＳｈｉｍａ
ｎｅ９５０１の各種ロタウイルス株と免疫血清との交差
中和試験の結果を表４に示す。
ｎｅ９５０１の各種ロタウイルス株と免疫血清との交差
中和試験の結果を表４に示す。
【００１７】
【表４】
【００１８】表４の結果から明らかなように、Ｇ６Ｐ５
型であるＨｙｏｇｏ９３０１株で免疫すると、ホモ株で
あるＧ６Ｐ５型に対すると同様にＧ６Ｐ１型ロタウイル
スに対する中和抗体も誘導され、また、Ｇ６Ｐ１１型で
あるＭｉｅ９００１株で免疫すると、Ｇ６Ｐ１１型に対
すると共にＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗
体も誘導され、Ｇ１０Ｐ１１型であるＳｈｉｍａｎｅ９
５０１株で免疫すると、Ｇ１０Ｐ１１型に対すると共に
Ｇ６Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗体も誘導され
る。
型であるＨｙｏｇｏ９３０１株で免疫すると、ホモ株で
あるＧ６Ｐ５型に対すると同様にＧ６Ｐ１型ロタウイル
スに対する中和抗体も誘導され、また、Ｇ６Ｐ１１型で
あるＭｉｅ９００１株で免疫すると、Ｇ６Ｐ１１型に対
すると共にＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗
体も誘導され、Ｇ１０Ｐ１１型であるＳｈｉｍａｎｅ９
５０１株で免疫すると、Ｇ１０Ｐ１１型に対すると共に
Ｇ６Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗体も誘導され
る。
【００１９】２．ワクチンの作製 ウシロタウイルス（Ｈｙｏｇｏ９３０１株およびＳｈｉ
ｍａｎｅ９５０１株）を種ウイルスとして、これをロー
ラーボトルで培養したＭＡ１０４細胞に接種し、３７℃
で６０分間吸着後、ウイルス増殖用培養液を４００ミリ
リットル添加し、３７℃で回転培養を行った。そして、
４〜７日後、ウイルスの増殖極期に培養液および感染Ｍ
Ａ１０４細胞を採取し、３０００ｒｐｍ、１０分間の条
件で遠心分離し、その沈渣を回収した。パラオキシエチ
レン（ｎ）−ｔ−オクチルフェニルエーテル（但し、ｎ
＝９，１０）を０．２％容量含むりん酸緩衝食塩液を１
０倍量加え、ホモジナイザーにより細胞の破壊を行い、
３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離上清にホルマリン
を１％加えて４℃で不活化したものを抗原とした。そし
て、この抗原３容に７容のオイルアジュバント（無水マ
ンニトール・オレイン酸エステル加流動パラフィン）を
加えてワクチンとし、その適当量をワクチン瓶に分注し
た。
ｍａｎｅ９５０１株）を種ウイルスとして、これをロー
ラーボトルで培養したＭＡ１０４細胞に接種し、３７℃
で６０分間吸着後、ウイルス増殖用培養液を４００ミリ
リットル添加し、３７℃で回転培養を行った。そして、
４〜７日後、ウイルスの増殖極期に培養液および感染Ｍ
Ａ１０４細胞を採取し、３０００ｒｐｍ、１０分間の条
件で遠心分離し、その沈渣を回収した。パラオキシエチ
レン（ｎ）−ｔ−オクチルフェニルエーテル（但し、ｎ
＝９，１０）を０．２％容量含むりん酸緩衝食塩液を１
０倍量加え、ホモジナイザーにより細胞の破壊を行い、
３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離上清にホルマリン
を１％加えて４℃で不活化したものを抗原とした。そし
て、この抗原３容に７容のオイルアジュバント（無水マ
ンニトール・オレイン酸エステル加流動パラフィン）を
加えてワクチンとし、その適当量をワクチン瓶に分注し
た。
【００２０】上記２．で得られたワクチンについて、以
下の各種試験を行い、ワクチンとしての効果および安全
性を調べた。
下の各種試験を行い、ワクチンとしての効果および安全
性を調べた。
【００２１】（１）異常毒性否定試験 表５に示すように、４週齢のマウス（雌）１０匹、およ
び体重約３５０ｇのモルモット２匹にワクチンを注射
し、一般臨床症状および体重の推移を１０日間観察し
た。なお、マウスについては腹腔内へ０．５ミリリット
ル、モルモットへは筋肉内へ２ミリリットルのワクチン
を注射した。
び体重約３５０ｇのモルモット２匹にワクチンを注射
し、一般臨床症状および体重の推移を１０日間観察し
た。なお、マウスについては腹腔内へ０．５ミリリット
ル、モルモットへは筋肉内へ２ミリリットルのワクチン
を注射した。
【００２２】
【表５】 表５の結果から明らかなように、ワクチンを注射された
いずれの動物も一般臨床症状に異常は観察されず、体重
は順調に増加した。
いずれの動物も一般臨床症状に異常は観察されず、体重
は順調に増加した。
【００２３】（２）牛に対する安全性試験 下記表６に示すように、牛２頭に対し、ワクチンを３週
間隔で２回注射し、その後２週間、体温測定、腫張およ
び臨床症状の観察を行った。その結果、いずれの牛も異
常は認められず、従って、ワクチン注射による副反応は
観察されなかった。
間隔で２回注射し、その後２週間、体温測定、腫張およ
び臨床症状の観察を行った。その結果、いずれの牛も異
常は認められず、従って、ワクチン注射による副反応は
観察されなかった。
【００２４】
【表６】
【００２５】（３）異なる方法で作製した抗原について
の牛における抗体応答 ウイルス培養上清を材料としてポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）により濃縮した抗原（ＰＥＧ濃縮抗原）、ウ
イルス培養上清を材料として限外濾過により濃縮した抗
原（限外濾過濃縮抗原）、およびウイルス感染細胞を界
面活性剤（非イオン性界面活性剤）存在下でホモジナイ
ズすることにより得られた抗原（感染細胞由来抗原）の
３種類の抗原を、ホルマリンで不活化後、この抗原３容
と１容のオイルアジュバント（無水マンニトール・オレ
イン酸エステル加流動パラフィン）とを混合し、牛の筋
肉内に１ミリリットルずつ３週間隔で２回注射し、初回
注射時より１週間毎に血清を採取した。採取した血清に
ついて、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５型ロタウイルスに対する中
和抗体価を測定した。その成績を表７に示す。
の牛における抗体応答 ウイルス培養上清を材料としてポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）により濃縮した抗原（ＰＥＧ濃縮抗原）、ウ
イルス培養上清を材料として限外濾過により濃縮した抗
原（限外濾過濃縮抗原）、およびウイルス感染細胞を界
面活性剤（非イオン性界面活性剤）存在下でホモジナイ
ズすることにより得られた抗原（感染細胞由来抗原）の
３種類の抗原を、ホルマリンで不活化後、この抗原３容
と１容のオイルアジュバント（無水マンニトール・オレ
イン酸エステル加流動パラフィン）とを混合し、牛の筋
肉内に１ミリリットルずつ３週間隔で２回注射し、初回
注射時より１週間毎に血清を採取した。採取した血清に
ついて、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５型ロタウイルスに対する中
和抗体価を測定した。その成績を表７に示す。
【００２６】
【表７】
【００２７】表７に示すように、感染細胞由来抗原を投
与して免疫した場合には、ウイルス培養上清を濃縮した
抗原を投与して免疫した場合よりも著しく高い中和抗体
誘導能を示すことが分かる。
与して免疫した場合には、ウイルス培養上清を濃縮した
抗原を投与して免疫した場合よりも著しく高い中和抗体
誘導能を示すことが分かる。
【００２８】（４）抗体応答試験 牛２頭を用い、Ｇ６Ｐ５型ロタウイルスであるＨｙｏｇ
ｏ９３０１株を使用して上記２．の方法によりワクチン
を作製し、筋肉内に１ミリリットルずつ３週間隔で２回
注射し、初回注射時より、１週間毎に血清を採取した。
採取した血清について、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６Ｐ１
１、およびＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗
体価を測定した。その成績を表８に示す。
ｏ９３０１株を使用して上記２．の方法によりワクチン
を作製し、筋肉内に１ミリリットルずつ３週間隔で２回
注射し、初回注射時より、１週間毎に血清を採取した。
採取した血清について、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６Ｐ１
１、およびＧ１０Ｐ１１型ロタウイルスに対する中和抗
体価を測定した。その成績を表８に示す。
【００２９】
【表８】
【００３０】表６に示すように、Ｇ６Ｐ５型の１種類の
ロタウイルス株の免疫のみでも、Ｇ６Ｐ５およびＧ６Ｐ
１型ロタウイルスに対する中和抗体が誘導される。しか
し、このＧ６Ｐ５型の１種類のロタウイルス株の免疫の
みでは、Ｇ６Ｐ１１およびＧ１０Ｐ１１型ロタウイルス
に対する中和抗体誘導能が低いことも分かる。
ロタウイルス株の免疫のみでも、Ｇ６Ｐ５およびＧ６Ｐ
１型ロタウイルスに対する中和抗体が誘導される。しか
し、このＧ６Ｐ５型の１種類のロタウイルス株の免疫の
みでは、Ｇ６Ｐ１１およびＧ１０Ｐ１１型ロタウイルス
に対する中和抗体誘導能が低いことも分かる。
【００３１】次に、上記と同様にＧ６Ｐ５型ロタウイル
スであるＨｙｏｇｏ９３０１株およびＧ１０Ｐ１１型の
ロタウイルスであるＫＫ３株（農林水産省家畜衛生試験
場より分与されたもの）を使用して、２種類のロタウイ
ルスを含む混合ワクチンとして牛に注射し、中和抗体価
測定を行った成績を表９に示す。
スであるＨｙｏｇｏ９３０１株およびＧ１０Ｐ１１型の
ロタウイルスであるＫＫ３株（農林水産省家畜衛生試験
場より分与されたもの）を使用して、２種類のロタウイ
ルスを含む混合ワクチンとして牛に注射し、中和抗体価
測定を行った成績を表９に示す。
【００３２】
【表９】
【００３３】表９に示すように、Ｇ６Ｐ５型およびＧ１
０Ｐ１１型の２種類の株を組み合わせたワクチンを投与
して免疫化することにより、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６
Ｐ１１、およびＧ１０Ｐ１１型のいずれの型のロタウイ
ルスに対しても中和抗体が誘導されることが分かる。
０Ｐ１１型の２種類の株を組み合わせたワクチンを投与
して免疫化することにより、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６
Ｐ１１、およびＧ１０Ｐ１１型のいずれの型のロタウイ
ルスに対しても中和抗体が誘導されることが分かる。
【００３４】更に、上記と同様にＧ６Ｐ５型ロタウイル
スであるＨｙｏｇｏ９３０１株およびＧ６Ｐ１１型のロ
タウイルスであるＭｉｅ９００１株を使用して、２種類
のロタウイルスを含む混合ワクチンとして牛に注射し、
中和抗体価測定を行った成績を表１０に示す。
スであるＨｙｏｇｏ９３０１株およびＧ６Ｐ１１型のロ
タウイルスであるＭｉｅ９００１株を使用して、２種類
のロタウイルスを含む混合ワクチンとして牛に注射し、
中和抗体価測定を行った成績を表１０に示す。
【００３５】
【表１０】
【００３６】表１０に示すように、Ｇ６Ｐ５型およびＧ
６Ｐ１１型の２種類の株を組み合わせたワクチンを投与
して免疫化することにより、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６
Ｐ１１、およびＧ１０Ｐ１１型のいずれの型のロタウイ
ルスに対しても中和抗体が誘導されることが分かる。
６Ｐ１１型の２種類の株を組み合わせたワクチンを投与
して免疫化することにより、Ｇ６Ｐ１、Ｇ６Ｐ５、Ｇ６
Ｐ１１、およびＧ１０Ｐ１１型のいずれの型のロタウイ
ルスに対しても中和抗体が誘導されることが分かる。
Claims (22)
- 【請求項１】 ウシロタウイルスの内、ＲＴ−ＰＣＲ法
により血清型別された２種以上の異なる血清型の株に対
する中和抗体産生を刺激する性質を示す１種または２種
以上の株を組み合わせたワクチン製造用株が不活化され
たウシロタウイルス病ワクチン。 - 【請求項２】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣＲ
法により血清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイルス
株である請求項１記載のウシロタウイルス病ワクチン。 - 【請求項３】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣＲ
法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０Ｐ１１
型の２種のウシロタウイルス株である請求項１記載のウ
シロタウイルス病ワクチン。 - 【請求項４】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣＲ
法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ１１型
の２種のウシロタウイルス株である請求項１記載のウシ
ロタウイルス病ワクチン。 - 【請求項５】 ウシロタウイルスとして、ＲＴ−ＰＣＲ
法により血清型別された２種以上の異なる血清型の株に
対する中和抗体産生を刺激する性質を示す１種または２
種以上の株を用い、このウシロタウイルスに感染した細
胞を界面活性剤入りの緩衝液に浮遊させた後、ホモジナ
イザーで細胞を破壊してウイルス粒子の抗原性を損なう
ことなく抗原を取り出し、この抗原を不活化することを
特徴とするウシロタウイルス病ワクチンの製造方法。 - 【請求項６】 前記細胞として、アカゲザルの胎児腎臓
由来株化細胞を用いてなる請求項５記載のウシロタウイ
ルス病ワクチンの製造方法。 - 【請求項７】 前記界面活性剤として、非イオン性界面
活性剤を用いてなる請求項５記載のウシロタウイルス病
ワクチンの製造方法。 - 【請求項８】 不活化した抗原にオイルアジュバントを
添加してなる請求項５記載のウシロタウイルス病ワクチ
ンの製造方法。 - 【請求項９】 前記ウシロタウイルスとして、ＲＴ−Ｐ
ＣＲ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイ
ルス株を用いてなる請求項５記載のウシロタウイルス病
ワクチンの製造方法。 - 【請求項１０】 前記ウシロタウイルスとして、ＲＴ−
ＰＣＲ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０
Ｐ１１型の２種のウシロタウイルス株を用いてなる請求
項５記載のウシロタウイルス病ワクチンの製造方法。 - 【請求項１１】 前記ウシロタウイルスとして、ＲＴ−
ＰＣＲ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ
１１型の２種のウシロタウイルス株を用いてなる請求項
５記載のウシロタウイルス病ワクチンの製造方法。 - 【請求項１２】 ウシロタウイルス病に対して動物（た
だし、ヒトは除く。）を免疫化する方法であって、ウシ
ロタウイルスの内、ＲＴ−ＰＣＲ法により血清型別され
た２種以上の異なる血清型の株に対する中和抗体産生を
刺激する性質を示す１種または２種以上のワクチン製造
用株が不活化されたウシロタウイルス病ワクチンを動物
（ただし、ヒトは除く。）に投与することからなるウシ
ロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除く。）
を免疫化する方法。 - 【請求項１３】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイル
ス株である請求項１２記載のウシロタウイルス病に対し
て動物（ただし、ヒトは除く。）を免疫化する方法。 - 【請求項１４】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０Ｐ１
１型の２種のウシロタウイルス株である請求項１２記載
のウシロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除
く。）を免疫化する方法。 - 【請求項１５】 前記ワクチン製造用株が、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ１１
型の２種のウシロタウイルス株である請求項１２記載の
ウシロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除
く。）を免疫化する方法。 - 【請求項１６】 ウシロタウイルス病に対して動物（た
だし、ヒトは除く。）を免疫化する方法であって、ウシ
ロタウイルスとして、ＲＴ−ＰＣＲ法により血清型別さ
れた２種以上の異なる血清型の株に対する中和抗体産生
を刺激する性質を示す１種または２種以上の株を用い、
このウシロタウイルスに感染した細胞を界面活性剤入り
の緩衝液に浮遊させた後、ホモジナイザーで細胞を破壊
してウイルス粒子の抗原性を損なうことなく取り出した
抗原が不活化されたウシロタウイルス病ワクチンを動物
（ただし、ヒトは除く。）に投与することからなるウシ
ロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除く。）
を免疫化する方法。 - 【請求項１７】 前記細胞が、アカゲザルの胎児腎臓由
来株化細胞である請求項１６記載のウシロタウイルス病
に対して動物（ただし、ヒトは除く。）を免疫化する方
法。 - 【請求項１８】 前記界面活性剤が、非イオン性界面活
性剤である請求項１６記載のウシロタウイルス病に対し
て動物（ただし、ヒトは除く。）を免疫化する方法。 - 【請求項１９】 不活化された抗原にオイルアジュバン
トが添加された請求項１６記載のウシロタウイルス病に
対して動物（ただし、ヒトは除く。）を免疫化する方
法。 - 【請求項２０】 前記ウシロタウイルスが、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型のウシロタウイル
ス株である請求項１６記載のウシロタウイルス病に対し
て動物（ただし、ヒトは除く。）を免疫化する方法。 - 【請求項２１】 前記ウシロタウイルスが、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ１０Ｐ１
１型の２種のウシロタウイルス株である請求項１６記載
のウシロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除
く。）を免疫化する方法。 - 【請求項２２】 前記ウシロタウイルスが、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ法により血清型別されたＧ６Ｐ５型およびＧ６Ｐ１１
型の２種のウシロタウイルス株である請求項１６記載の
ウシロタウイルス病に対して動物（ただし、ヒトは除
く。）を免疫化する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1210397A JP2950273B2 (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | ウシロタウイルス病ワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1210397A JP2950273B2 (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | ウシロタウイルス病ワクチン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10203998A JPH10203998A (ja) | 1998-08-04 |
| JP2950273B2 true JP2950273B2 (ja) | 1999-09-20 |
Family
ID=11796240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1210397A Expired - Fee Related JP2950273B2 (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | ウシロタウイルス病ワクチン |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2950273B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7906311B2 (en) | 2002-03-20 | 2011-03-15 | Merial Limited | Cotton rat lung cells for virus culture |
| CA2699024C (en) | 2009-11-06 | 2016-12-13 | Intervet International B.V. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
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1997
- 1997-01-27 JP JP1210397A patent/JP2950273B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10203998A (ja) | 1998-08-04 |
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