CN102204943B

CN102204943B - 一种续断总皂苷的提取方法

Info

Publication number: CN102204943B
Application number: CN 201110140133
Authority: CN
Inventors: 张龙清; 胡献跃; 金灵华; 方肖庆; 黄秀清
Original assignee: ZHEJIANG DEYER PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHEJIANG DEYER PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-05-27
Filing date: 2011-05-27
Publication date: 2013-05-01
Anticipated expiration: 2031-05-27
Also published as: CN102204943A

Abstract

本发明公开了一种续断总皂苷的提取方法，取续断粉碎成粗粉，加乙醇加热回流数次，或加热回流1小时后再循环回流至提取液近无色，合并提取液，回收乙醇至无乙醇味，加水适量，加热溶解后过滤；滤液用石油醚萃取脱脂，静置分出水相，析出沉淀，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加乙醇加热溶解后回收乙醇，干燥，即得续断总皂苷提取物。本发明方法提取工艺简单，在提取过程中不再采用正丁醇萃取，省略多次萃取步骤，简化了提取工艺，降低生产成本，减少有毒有机溶剂（正丁醇）的使用，易工业化生产。

Description

一种续断总皂苷的提取方法

技术领域

本发明涉及一种植物续断中活性成分的提取方法，尤其是涉及一种续断总皂苷的提取方法。

背景技术

续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides.Y.Cheng et T.M.Ai的干燥根，它具有补肝益肾，续接筋骨，抗骨质疏松，止血安胎等功效，临床上主要用于治疗腰膝酸软、跌打损伤、骨折、腰椎骨质增生、先兆性流产和习惯性流产等，其主要活性成分是三萜皂苷。近代研究表明续断中主要化学成分有：皂苷类、环烯醚萜类、生物碱、挥发油、蔗糖、甾醇、钙、铁、镁、锰、锌、铜等微量元素及少量苷元。目前已从续断中分离出20多种皂苷，其中三萜皂苷中以3－O－α－L－吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元－28－O－β－D－吡喃葡萄糖（1－6）－β－D－吡喃葡萄糖酯苷（川续断皂苷Ⅵ，Asperosaponin Ⅵ）含量最高。

传统的续断总皂苷的提取方法通常是，取续断药材烘干后粉碎，用乙醇回流提取三次，每次回流时间2小时，合并提取液，减压回收乙醇近干，加水形成混悬液，用正丁醇萃取3-5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇至蒸干，加水溶解后再加石油醚脱脂，脱脂后的水溶液浓缩析出沉淀物，洗涤、干燥得续断总皂苷提取物。

名称为“续断总皂苷及其提取方法和应用”的发明专利申请（200710031558.6）公开了一种续断总皂苷的提取方法，取续断药材，用6-10倍量的40-90%乙醇或水提取3次，每次1-3小时，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇液到无乙醇味，加水稀释成每毫升含0.2～1.5g药材的溶液,静置12～36小时,取上清液,滤过,滤液加入到D101或其它大孔树脂的层析柱上,循环吸附2～3次,用3～6倍量柱体积的0.5～5.0%碱液洗脱,再用3～6倍量柱体积的水洗脱至中性,弃去两次洗脱液,再用3～8倍量柱体积的50%～95%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇,浓缩干燥得总皂苷。该方法提取工艺繁琐，生产成本高。

发明内容

本发明的目的是提供一种续断总皂苷的提取方法，能够克服现有的提取方法使用大量有机溶剂，工艺繁琐，生产成本高，污染环境等缺陷，是一种工艺简单、易工业化生产，可显著降低生产成本和更为环保的续断总皂苷的提取方法。

本发明采用以下技术方案：

一种续断总皂苷的提取方法，其特征在于：取续断粉碎成粗粉，加质量浓度为90%以上的乙醇加热回流2-4次或加热回流1小时后再循环回流至提取液近无色，合并提取液，浓缩回收乙醇至无乙醇味，浓缩液加水适量，加热溶解后过滤；滤液用石油醚脱脂，静置分出水相，析出沉淀，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加乙醇加热溶解后，回收乙醇，干燥，即得续断总皂苷提取物。

所述的方法具体包括以下步骤：

（1）取续断药材烘干、粉碎成粗粉，加3～15倍量90%以上浓度的乙醇回流提取2-4次，回流时间每次0.5-4小时，或加热回流1小时后再循环回流至提取液近无色，合并提取液，浓缩至无乙醇味，浓缩液加10倍量以下的水，加热20℃-90℃溶解，过滤，得滤液；

（2）滤液中加石油醚，混合均匀，30℃～60℃保温搅拌20～60分钟，静置1小时以上，放出下层液，析出沉淀，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加乙醇加热溶解后回收乙醇，干燥，即得续断总皂苷提取物。

所述的方法总皂苷占提取物百分含量大于等于50.0%，川续断皂苷Ⅵ（C₄₇H₇₆O₁₈）占提取物含量大于等于30.0%。

所述的续断粗粉为10～80目，优选10～30目。

本发明方法通过乙醇回流提取液浓缩，加水形成提取物的水溶液，过滤后以石油醚脱酯，不再经过其他有机溶剂萃取，其纯度不低于用传统工艺提取的总皂苷提取物。

步骤（2）中石油醚加入量为滤液重量的0.5～5倍量。

所述的石油醚的沸程为60℃～90℃。

步骤（2）中所述的乙醇质量浓度为15%以上。

本发明的续断总皂苷的提取方法，工艺较传统的提取工艺简单，在提取过程中不再采用正丁醇萃取，简化了提取的步骤，生产化工艺简单，降低生产能耗，减少有毒有机溶剂（正丁醇）的使用，达到更环保的目的，提取出的续断总皂苷的纯度与使用正丁醇萃取后制得的续断总皂苷的纯度基本一致，药效学研究比较表明无显著性差异。根据本发明方法的提取物中，总皂苷占提取物质量百分含量为大于等于50.0%，川续断皂苷Ⅵ占提取物质量百分含量大于等于30.0%。

下面结合具体实施例对本发明进行详细描述。本发明的保护范围并不以具体实施方式为限，而是由权利要求加以限定。

附图说明

图1 本发明续断总皂苷提取工艺制得的总皂苷HPLC图谱。

具体实施方式

实施例1

取续断药材烘干、粉碎成10～80目粗粉。取续断粗粉80kg，分别加入90%浓度的乙醇200L、150L、150L，分别于80 ℃回流提取三次，提取时间分别为2、2、0.5小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加20L水加热80℃溶解，过滤，得滤液；滤液加40L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀，35℃保温搅拌30分钟脱酯，静置4小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加20%浓度的乙醇32kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷8.0kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为 84.7% , 川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为75.8%。

实施例2

取续断药材烘干、粉碎成30～60目粗粉。取续断粗粉80kg，加无水乙醇200L、150L、150L，分别于78℃回流提取三次，提取时间分别为3、2、1小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加40L水加热70℃溶解，过滤，得滤液；滤液加80L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀，45℃保温搅拌45分钟脱酯，静置8小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加35%浓度的乙醇32kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷8.0kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为 92.9% ，川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为81.4%。

实施例3

取续断药材烘干、粉碎成30～80目粗粉。续断粗粉80kg，加91%浓度的乙醇300L、200L、150L，分别于80 ℃回流提取三次，提取时间分别为3、2、2小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加80L水加热55℃溶解，过滤，得滤液；滤液加 160L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀， 55℃保温搅拌45分钟脱酯，静置10小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加50%浓度的乙醇30kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷11.2kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为 89.5%。川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为79.7%。

实施例4

取续断药材烘干、粉碎成30～80目粗粉。续断粗粉80kg，加92%浓度的乙醇400L、200L、200L，分别于78 ℃回流提取三次，提取时间分别为3、2、2小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加120L水加热45℃溶解，过滤，得滤液；滤液加 240L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀， 60℃保温搅拌45分钟脱酯，静置12小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加70%浓度的乙醇22kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷10.4kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为92.9%，川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为80.3%。

实施例5

取续断药材烘干、粉碎成10～30目粗粉。续断粗粉80kg，加95%浓度乙醇400L、300L、300L，分别于78 ℃回流提取三次，提取时间分别为3、2、2小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加160L水加热30℃溶解，过滤，得滤液；滤液加 320L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀， 50℃保温搅拌30～60分钟脱酯，静置12小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加95%浓度的乙醇18kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷9.0kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为95.5%。川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为81.8%。

实施例6

取续断药材烘干、粉碎成10～30目粗粉。续断粗粉80kg，加94% 浓度的乙醇500L、500L、200L，分别于78 ℃回流提取三次，提取时间分别为4、3、2小时，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加80L水加热55℃溶解，过滤，得滤液；滤液加 120L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀， 40℃保温搅拌30分钟脱酯，静置12小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加95%浓度的乙醇20kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷11.9kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为91.7%。川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为80.5%。

实施例7

取续断药材烘干、粉碎成10～30目粗粉。续断粗粉80kg，加92% 浓度的乙醇640L，

加热回流1小时后，在回流的情况下边放提取液边补充浓缩回收的乙醇，如此循环提取6小时至提取液近无色。浓缩提取液至无乙醇味，加80L水加热55℃溶解，过滤，得滤液；滤液加 120L石油醚（沸程60～90℃）搅拌均匀， 45℃保温搅拌30分钟脱酯，静置12小时，分层后放出下层水溶液，析晶，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加95%浓度的乙醇20kg加热溶解后回收乙醇，干燥，得总皂苷11.0kg。

所得提取物中，续断总皂苷的重量百分含量为90.4%。川续断皂苷Ⅵ占提取物含量为76.5%。

实施例8

药效学试验：续断总皂苷提取物对维甲酸所致大鼠骨质疏松的影响

取大鼠80只，按体重随机分为8组，一组作为正常对照组，给予0.5%CMC-Na，其余7组大鼠均给予维甲酸70mg/kg，以制备骨质疏松模型，在这7组大鼠中，1组作为模型对照组给予0.5%CMC-Na，3组分别给予传统工艺提取制得的续断总皂苷高0.4g/kg、中0.2 g/kg 和低0.1g/kg3个剂量作为阳性对照组，其余3组分别给予本发明工艺制得的续断总皂苷高0.4g/kg、中0.2 g/kg 和低0.1g/kg 3个剂量。动物同时灌胃维甲酸及药物2周后，停服维甲酸，继续给药2周，于停药后第二天将大鼠处死，解剖双侧股骨，左侧股骨用于测定骨重系数、骨矿密度、骨灰含量和骨钙、骨磷，右侧股骨用于作病理组织学检测。结果见表1－4。

表1 本品对骨质疏松大鼠骨重系数和骨灰含量的影响（

±S）（n=10）

△△△P＜0.01，与正常对照组比较， *** P＜0.01与模型对照组比较。

表2本品对骨质疏松大鼠股骨密度的影响（

±S）（n=10）

** P＜0.05, *** P＜0.01与模型对照组比较；△△△P＜0.01，与正常对照组比较。

注：1#－股骨头部；2#－大转子部；3#－股骨颈部；4#－转子间部。

表3 本品对骨质疏松大鼠骨钙、骨磷的影响（

±S）（n=10）

△△△P＜0.01，与正常对照组比较，*** P＜0.01与模型对照组比较。

表4 本品对骨质疏松大鼠股骨头的骨小梁宽度的影响（±S）（n=10）

** P＜0.05，*** P＜0.01与模型对照组比较，△△△P＜0.01，与正常对照组比较。

由表1－4可见，本发明提取工艺制得的续断总皂苷高、中、低剂量组与传统提取工艺制得的续断总皂苷高、中、低剂量都能使骨质疏松大鼠的骨重系数、骨灰含量、骨矿密度、骨小梁宽度、骨磷含量显著增加（P＜0.01, P＜0.05），两者间增加量比较无显著性差异(P>0.05)。本发明提取工艺制得的续断总皂苷高、中剂量组与传统提取工艺制得的续断总皂苷高、中剂量都能使骨钙含量显著升高（P＜0.01），两者间升高值比较无显著性差异(P>0.05)。

Claims

1.一种续断总皂苷的提取方法，其特征在于：取续断粉碎成粗粉，加90%以上浓度的乙醇加热回流2-4次，或加热回流1小时后再循环回流至提取液近无色，合并提取液，浓缩回收乙醇至无乙醇味，浓缩液加水适量，加热溶解后过滤；滤液用石油醚脱脂，静置分出水相，析出沉淀，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加乙醇加热溶解后回收乙醇，干燥，即得续断总皂苷提取物。

2.根据权利要求1所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于所述的方法具体包括以下步骤：

（2）滤液中加入石油醚，混合均匀，30℃～60℃保温搅拌20～60分钟，静置1小时以上，放出下层液，析出沉淀，过滤得续断总皂苷粗品，粗品加乙醇加热溶解后回收乙醇，干燥，即得续断总皂苷提取物。

3.根据权利要求1或2所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于：所述的续断粗粉为10目～80目。

4.根据权利要求1或2所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于：所述的石油醚加入量为滤液重量的0.5～5倍量。

5.根据权利要求1或2所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于：所述的石油醚的沸程为60℃～90℃。

6.根据权利要求1或2所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于：续断总皂苷粗品所加的乙醇质量浓度为15%以上。

7.根据权利要求1或2所述的续断总皂苷的提取方法，其特征在于：续断总皂苷提取物中，总皂苷占提取物百分含量大于等于50.0%，川续断皂苷Ⅵ占提取物含量大于等于30.0%。