CN102181385B

CN102181385B - 甲醛生物降解剂及其制备方法

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Publication number: CN102181385B
Application number: CN2011100546407A
Authority: CN
Inventors: 曾润颖; 陈兴麟; 叶德赞
Original assignee: Third Institute of Oceanography SOA
Current assignee: Third Institute of Oceanography SOA
Priority date: 2011-03-04
Filing date: 2011-03-04
Publication date: 2012-11-14
Anticipated expiration: 2031-03-04
Also published as: CN102181385A

Abstract

甲醛生物降解剂及其制备方法，涉及一种生物降解剂。提供一株假单胞菌IOFA1，以及甲醛生物降解剂及其制备方法。所述甲醛生物降解剂为假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉。所述甲醛生物降解剂的主要成分为甲醛脱氢酶。所述制备方法为：将假单胞菌IOFA1用培养基进行活化后，接种于培养基中，振荡培养；在培养基中加入甲醛溶液继续振荡培养；将培养液在4℃温度下离心，去除上清液，收集菌体；在菌体中加入100mL无菌水，悬浮起菌体，收集悬浮液；将悬浮液中的菌体破碎后离心，去除沉淀，将上清液过滤除菌，并冷冻干燥，即得假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉，再经纯化，即得甲醛生物降解剂。

Description

甲醛生物降解剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物降解剂，尤其是涉及一种甲醛生物降解剂及其制备方法。

背景技术

甲醛是一种广泛使用的重要化工原材料，但易造成空气污染，给人们的身体健康带来很大的威胁。室内空气甲醛污染主要来自家具和装修用的各种人造板材，它易发生加成、氧化、还原、聚合反应，有高度的水溶性和生物大分子的高度反应性，甲醛在接触部位吸收或降解，进入人体后，主要与人体的蛋白质和核酸反应，损害DNA，引起细胞核的基因突变、DNA单链内交连、DNA与蛋白质交连和抑制DNA损伤的修复；与氨基结合，改变蛋白质的内部结构并凝固，扰乱人体细胞的正常代谢，具有致畸、致癌的危害性。在我国有毒化学品优先控制的名单上，甲醛位居第2位。统计显示，中国每年有11万人死于与室内污染有关的疾病，北京儿童医院经过半年问诊调查发现：近90％的小儿白血患者家中近期都曾经装修过。各国对工作场所及居室中的甲醛浓度都作出了极限规定。如法国、丹麦工作场所临界极限为1ppm，英国定为2ppm，美国定为3ppm。各国对室内空气中甲醛浓度极限规定：丹麦为0.12ppm，美国、法国为0.1ppm，瑞典为0.4ppm。

除了造成空气污染之外，甲醛在水产品方面所造成的食品安全问题也很严重。农业部颁布的《无公害食品、渔用药物使用准则(NY 5071-2002)》中，对甲醛没有明确的规定，既没有规定是违禁药物，也没有规定是允许使用的药物。农业部第627号公告中批准104种药物允许在水产养殖中使用，也没有甲醛药物。而《无公害食品水产品中有毒有害物质限量(NY 5073-2001)》中规定甲醛在所有水产品中是不得检出的。由于没有明确禁止，因此甲醛在一些水产养殖中仍旧得到使用，并且由于滥用导致的甲醛超标时有发生。水产养殖中应用的甲醛是福尔马林(含36％～40％的甲醛)溶液，具有较强的广谱杀菌和杀虫功能。使用例包括：作为防治病害的药物，用法为全池泼洒、药浴、浸泡，正常使用浓度为20～40ppm福尔马林；也可用于水泥池的清塘、消毒，用量为200ppm；此外，也有用甲醛防治鱼类创伤、溃疡、糜烂等疾病，例如用20～40ppm福尔马林和其它抗菌药物治疗鳗鱼的烂尾病等。甲醛在水产品中的药代动力学研究不多，最近有研究结果显示，大菱鲆工厂化养殖规范化使用甲醛，在第8天可以达到未检出水平，不会影响产品可食部分。可见，甲醛的停药期8天，就能符合上市要求。但是很多养殖户并没有做到足够的停药期，相反，为了在运输、贮藏中进行保鲜，还要添加甲醛，因此造成水产制品中的甲醛超标问题严重。

目前，空气中甲醛污染的处理方法基本采用物理或化学方法，例如用化学制剂、光触媒、活性炭吸附、室内植物的吸收转化等。公开号为CN1421255A的中国专利提供一种由各种化学物质经共聚共混所职称的化学甲醛消除剂，主要用于降低用人造板装修后的室内空气中的游离甲醛。公告号为CN1404891A的中国专利提供一种由酰肼类化合物为主要成分的甲醛消除剂，适合于人造板工业生产后处理。公告号为CN1425725的中国专利提供一种以茶叶为原料以乙醇为媒介取得的茶多酚，可喷在家具涂料表面。而公告号为CN101293373的专利，则采用抽真空的办法使游离甲醛抽离出板材，然后再通入氨气，使甲醛与氨气反应20～50分钟，生成六亚甲基四胺。而在水产品中超标甲醛的去除方面，目前没有相关的研究论文和专利。

上述方法中化学处理方法会造成二次污染，物理吸附法仅仅是将甲醛转移到另外的载体上，并没有从根本上清除甲醛。而生物降解方法可将甲醛真正转化为无毒害的物质，是最有效的方法。很多微生物、植物都已被发现可以耐受或者转化甲醛，例如：黄爱葵在容积为0.5m³玻璃箱内对爱玉合果玉、黄金葛、金边虎尾兰、吊兰和中斑吊兰等几种室内常见盆栽观赏植物净化室内主要污染气体的能力进行研究，发现爱玉合果玉对甲醛的吸收效果最好，11h能将甲醛浓度从0.001113mg/L降为0.000008mg/L。邵茂清([1]邵茂清，重庆建筑室内空气中甲醛污染调查及植物净化甲醛的实验研究.2005：重庆.39-42)将大小不同的9盆吊兰放在56.7m³的卧室中，24h空气中甲醛浓度从0.00033mg/L降至0.00008mg/L，而大小不同的9盆芦荟24h可将44.1m³的室内甲醛浓度从0.00031mg/L降至0.0001mg/L。

植物虽然能有效降解甲醛，但是其作用浓度非常低，远远低于微生物能降解甲醛的量。Saeed Mirdamadi等人([2]Saeed M，A.R.，Pooneh K，et al，Isolation of bacteria able to metabolizehigh concentrations of formaldehyde.Microbiology and Biotechnology，2005.21(3)：1299-1301)报道2株M.extorquens(ESS和PSS)和4株P.pseudoalcaligenes(LSW，SSW，NSW，OSS)能降解甲醛的细菌，其中P.pseudoalcaligenes OSS培养24h后可完全消耗3700mg/L的甲醛，培养72h可将5920mg/L的甲醛消耗70％，M.extorquens ESS和M.extorquens PSS还能完全降解甲醛2960mg/L。Yamazaki等人([3]Yamazaki，T.，W.Tsugawa，and K.Sode，Biodegradation offormaldehyde by a formaldehyde-resistant bacterium isolated from seawater.Appl BiochemBiotechnol，2001.91-93：213-217)从海水中分离了一株甲醛耐受细菌，发现它在3％的氯化钠里能降解甲醛400mg/L。Tetsuya Kondo等人([4]Kondo，T.，et al.，Purification andcharacterization of formate oxidase from a formaldehyde-resistant fungus.FEMS Microbiol Lett，2002.214(1)：137-142)从土壤中分离一株甲醛耐受真菌(可称甲醛降解菌)Aspergillus nomiusIRI013，它能生长在最高甲醛浓度为4500mg/L里并把它完全消耗掉。但这些微生物均只能以“在体”形式消耗或降解甲醛，即甲醛的消耗依赖于微生物的生长，其应用受到很大限制。

发明内容

本发明的目的是提供一株假单胞菌IOFA1(Pseudomonas sp.IOFA1)。

本发明的另一目的是提供一种甲醛生物降解剂及其制备方法。

所述假单胞菌IOFA1(Pseudomonas sp.IOFA1)已于2010年10月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，该保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M 2010280，该保藏中心的地址为中国.武汉.武汉大学。

所述假单胞菌IOFA1的样品来源为印度洋深海2000m水深的沉积物经分离获得的。菌株的筛选分离和培养方法为：将所述沉积物2g放入30mL含甲醛浓度50mg/L的2216E液体培养基中，4℃富集；然后将富集液稀释100～1000倍，涂布于50mg/L、100mg/L、200mg/L甲醛浓度的2216E平板上，16℃培养；将得到的菌株进一步纯化保种，并通过对16S rRNA的测序进行初步的菌种鉴定，进一步从中筛选出可在非“在体”条件下降解甲醛的IOFA1菌株。

假单胞菌IOFA1经16S rDNA序列分析鉴定为假单胞菌属，其与模式种Pseudomonasmonteilii CIP 104883(AF064458)的同源性为99.787％。

所述假单胞菌IOFA1可作为出发菌株，制备假单胞菌IOFA1菌体破碎液，所述假单胞菌IOFA1菌体破碎液具有以下性质：

1)含不依赖于NAD的甲醛脱氢酶(formaldehyde dehydrogenase，FDH)，可直接降解甲醛而不需要其它的辅助因子(例如NAD⁺)。

2)作用时间短，活性高。1mg经冷冻干燥后的菌体破碎液干粉可在1h内完全降解20μg甲醛。按照国标计算，1m³空间内的甲醛污染程度≤0.08mg，即：假设室内甲醛污染超过100倍，即1m³空间里有8mg甲醛，用0.4g的甲醛降解剂就能在1h内完全降解。

3)稳定性好，20℃以下的温度中放置26天可保持活性不变；在30℃放置在6天内保持95％以上活力，26天后仍可保持约60％的活力。

所述甲醛生物降解剂为假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉。

所述甲醛生物降解剂的主要成分为甲醛脱氢酶，按质量百分比，所述甲醛脱氢酶至少占90％，所述甲醛脱氢酶为一种甲醛降解酶，甲醛生物降解剂中还含有10％以下的杂蛋白，所述杂蛋白与甲醛降解功能无关。

所述假单胞菌IOFA1菌体破碎液，即甲醛生物降解剂的制备方法包括以下步骤：

1)将假单胞菌IOFA1用培养基进行活化后，接种于培养基中，振荡培养；

2)在培养基中加入甲醛溶液继续振荡培养；

3)将步骤2)中所得的培养液在4℃温度下离心，去除上清液，收集菌体；

4)在菌体中加入100mL无菌水，悬浮起菌体，收集悬浮液；

5)将悬浮液中的菌体破碎后离心，去除沉淀，将上清液过滤除菌，并冷冻干燥，即得假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉，再经纯化，即得甲醛生物降解剂。

在步骤1)中，所述培养基可采用LB培养基；所述培养的条件可为：在20～37℃的条件下振荡培养至OD₆₀₀＝0.8～1.5；所述LB培养基的配制方法为：称取10g氯化钠，10g蛋白胨和5g酵母膏，溶解于蒸馏水中，并用蒸馏水定容至1L，经121℃灭菌20min。

在步骤2)中，所述在培养基中加入甲醛溶液最好至终浓度为100～200mg/mL；所述继续振荡培养的条件可为：在20～37℃条件下振荡培养24～72h。

在步骤4)中，所述无菌水可采用经4℃预冷的无菌水。

在步骤5)中，所述破碎可采用匀浆机破碎，条件为：匀浆压力为700MPa，时间为5min；或采用超声波破碎，条件为：模式01，变幅杆03，工作时间10min，超声2.5s，间隙7.5s，功率30％，可选用信仪-II D超声仪；所述过滤可采用0.22μm的滤膜进行过滤；所述滤膜可为亲水性滤膜，例如纤维素膜、聚醚砜膜等。

以下给出甲醛含量的测定方法：

1)配制甲醛反应液，加入15g醋酸铵，0.3mL冰醋酸，0.2mL乙酰丙酮，加入纯净水定容至100mL。

2)测定时，在2mL待测液体加入2mL甲醛反应液，并以2mL纯净水加2mL甲醛反应液为对照，在37℃培养箱中放置45min，然后测量OD₄₁₂。

与现有的甲醛降解剂相比，本发明采用假单胞菌IOFA1制备的甲醛生物降解剂及其制备方法具有以下突出优点：

1)由于在发酵制备过程中加入甲醛，因此可有效刺激甲醛降解酶的产生，提高产量。

2)由于甲醛生物降解剂中不含菌体，因此不存在微生物的人工扩散问题。

3)由于甲醛生物降解剂中的甲醛脱氢酶降解甲醛时不需要NAD的参与，因此不仅作用条件简单，而且作用时间短，活性高，1mg甲醛生物降解剂在1h内完全降解20μg甲醛；同时稳定性好，20℃条件下6d可保持活性不变，即1mg甲醛生物降解剂在1h内完全降解20μg甲醛；25～30℃条件下3d保持40％活力，即1mg甲醛生物降解剂在1h内完全降解8μg甲醛，而一般室内空气中甲醛污染的浓度均在1mg/m³以下，因此每m³空间仅需50mg甲醛生物降解剂，即可在1h内完全降解。

4)经测试，甲醛生物降解剂可有效降低装修材料所释放的甲醛，使室内空气中的游离甲醛含量达到现行国家标准(≤0.08mg/m³)；也可有效降解水产品(制品)中残留的甲醛污染。

附图说明

图1为甲醛生物降解剂中酶组分分析的SDS-PAGE电泳图。在图1中，M：分子量标准；1～2：甲醛生物降解剂；3：洗脱液；由图1可见，含有2条主要的条带，分子量分别约为45kd和20kd，分别将两个条带切下回收，结果表明，条带2中不含蛋白，应为SDS-PAGE电泳时上样缓冲液中的溴酚兰染色剂所形成的条带；将条带1进行质谱分析，将所得片段结果进行比对，表明其为甲醛脱氢酶(FDH)。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明不仅仅局限于以下实施例。

实施例1甲醛生物降解剂制备实施例

1)将菌株假单胞菌IOFA1用LB培养基进行活化后，按1％的比例接种于液体LB培养基中，在30℃的条件下振荡培养至OD₆₀₀＝1.0；

2)在LB培养基中加入甲醛溶液至终浓度为100mg/mL；继续在30℃条件下振荡培养36h；

3)将步骤2)中的假单胞菌IOFA1培养液在4℃下离心，去除上清液，收集菌体；

4)在菌体假单胞菌IOFA1中加入200mL经4℃预冷的无菌水，悬浮起菌体，收集悬浮液；

5)对悬浮液中的菌体进行破碎，在4℃下离心，去除沉淀，将上清液用0.22μm的滤膜进行过滤除菌，并冷冻干燥，所得干粉即为甲醛生物降解剂。所述破碎可采用匀浆机破碎，条件为：匀浆压力为700MPa，时间为5min；或采用超声波破碎，条件为：模式01，变幅杆03，工作时间10min，超声2.5s，间隙7.5s，功率30％，可选用信仪-IID超声仪；所述滤膜可为亲水性滤膜，例如纤维素膜、聚醚砜膜等。

以下给出甲醛生物降解剂功能分析：

1.甲醛测定方法

1)配制甲醛反应液：将15g醋酸铵溶解于50mL蒸馏水中，加入0.3mL冰醋酸和0.2mL乙酰丙酮，混合均匀后用蒸馏水定容至100mL。

2)酶解反应测定：在反应管中加入20μL不同浓度的甲醛溶液和1mg甲醛生物降解剂，加入蒸馏水补足体积到2mL，于25℃下反应15min，30min，60min后进行测量；

3)加入2mL步骤1)中配制的甲醛反应液，25℃下放置45min，测量OD₄₁₂，数值越小表示甲醛浓度越低。

2.甲醛生物降解剂对不同浓度甲醛的降解效率参见表1。

表1甲醛生物降解剂对不同浓度甲醛的降解效率

^*表中甲醛浓度单位均为mg/L

结果表明，本发明中的甲醛降解剂具有很高的降解效率，当反应液中甲醛浓度10mg/L(即甲醛含量为20μg)时，仅1mg甲醛降解剂即可在1h内将其完全降解；而甲醛浓度为1mg/L(即含量为2μg)时可在15min内被完全降解；甲醛浓度为5mg/L(即含量为10μg)时可在30min内被完全降解。按照国标计算，1m³空间内的甲醛污染程度≤0.08mg/m³，即使污染超过100倍，即1m³空间里有8mg甲醛，用0.4g的甲醛降解剂就能在1h内完全降解。

3.甲醛生物降解剂的热稳定性

将制备好的甲醛降解剂在不同温度(10℃、20℃、30℃、40℃)放置1d，2d，4d，6d，26d后，分别取出测量酶活，并以失活酶液作为阴性对照，测定其甲醛降解效果，如表2。

表2放置不同时间后甲醛生物降解剂对甲醛的降解活力

^*表中甲醛浓度单位均为mg/L。

^**1，2，4，6，26分别对应在不同温度下放置了1d，2d，4d，6d，26d后的酶。

结果表明，甲醛生物降解剂在20℃以下的温度下可在至少26d内保持约100％活性，在30℃条件下可在6d内保持约100％活力，26d后仍可保持约60％的活力；在40℃条件下在4d后可保持约50％的活力，6d保持20％的活力。上述结果表明甲醛生物降解剂的热稳定性良好，在30℃条件下持续发挥作用达26d。

以下给出甲醛生物降解剂中与甲醛降解相关的酶组成分析：

1.基因水平的成分分析

从已进行全基因组测序的假单胞菌IOFA1(Pseudomonas sp.IOFA1)中进行开放阅读框(ORF)的搜索，获得了编码FDH的ORF，该基因长度为1227bp，预计蛋白为45.399kd。

2.蛋白水平的成分分析

1)将实施例1中所获得的甲醛生物降解剂用截留分子量为50kd的超滤膜进行超滤，去除大于50kd的截留液，收集滤出液；

2)将步骤1)中的滤出液用截留分子量为30kd的超滤膜进行超滤，去除滤出液，用无菌水将留在超滤膜上的蛋白洗下，收集洗脱液；

3)测定步骤2)中洗脱液的甲醛降解活性，结果表明，可在30min内完全降解400mg/mL的甲醛；对步骤1)中的截留液和步骤2)中的滤出液进行甲醛降解活性测定，结果表明这两部分均无甲醛降解活性，说明甲醛降解剂的有效酶成分存在于步骤2)所收集的洗脱液中；

4)对步骤2)得到的洗脱蛋白进行SDS-PAGE分析，参见图1。图中含有2条主要的条带，分子量分别约为45kd和20kd。分别将两个条带切下回收，结果表明条带2中不含蛋白，应为SDS-PAGE电泳时上样缓冲液中的溴酚兰染色剂所形成的条带；

5)将条带1进行质谱分析，将所得片段结果进行比对，表明其为甲醛脱氢酶(FDH)。

以下给出甲醛降解剂降解效果实施例

1.甲醛降解剂在消除水产品(制品)中残留甲醛的应用实施例

本发明中甲醛生物降解剂在消除水产制品中残留甲醛的实施例如下：

1)将本发明中所述的甲醛降解剂溶解于自来水中，配制成浓度为1g/L的浸泡液；

2)鱿鱼购自农贸市场，实验组鱿鱼用含100mg/L甲醛(即100ppm)的海水浸泡10h后，去除海水，用自来水洗涤2遍，取3份100g组织样品，其中一份直接在20℃中放置1h(记为“空白对照”)；第二份浸泡于自来水，放置在20℃中1h(记为“阴性对照”)；第三份用步骤1)中的浸泡液在20℃中浸泡1h(记为“处理后”)。

3)步骤2)中的三份组织样品匀浆，参照中华人民共和国水产行业标准SC/T3025-2006《水产品中甲醛的测定》，在匀浆后的组织中通入水蒸汽蒸馏，蒸馏至200mL，吸取2mL蒸馏液进行甲醛含量测定，结果见表3。

表3鱿鱼处理前后甲醛含量

	空白对照	阴性对照^*	处理后^*
				甲醛浓度(mg/L)	5.12	3.97	0

^*每组设置5个平行样，取平均值

结果表明，经甲醛降解剂浸泡后的鱿鱼组织中的甲醛已经被完全降解，而阴性对照组中样品比空白对照低，可能是甲醛部分溶解于水中的缘故。该实施例表明本发明中的甲醛生物降解剂可应用于消除水产品中的残留甲醛。

2.甲醛降解剂在消除空气中甲醛污染中的应用实施例

在密闭的有机玻璃箱(长100cm×宽70cm×高60cm)中进行测试。

空气中甲醛浓度用美国Hal Technology公司的甲醛检测仪(型号：HAL-HC0201)测定。

甲醛生物降解剂的喷雾释放采用普通的市售家用加湿器进行。

1)在有机玻璃箱(以下简称“箱”)中预先放置好微型家用加湿器(市售商品)、甲醛检测仪和装有10倍稀释后福尔马林的广口瓶。

2)在加湿器内添加含有0.5g/mL甲醛生物降解剂的水溶液

3)开启甲醛检测仪以进行连续检测。将装有福尔马林溶液的瓶盖拧开，待箱内甲醛浓度到达3～4ppm后打开箱门，立即取出广口瓶，并关闭箱门。

4)10min后，待甲醛检测仪读数稳定时，接通放置在箱内的加湿器电源，甲醛生物降解剂将以喷雾方式释放到空气中，待箱内完全充满水雾时关闭加湿器电源。

5)持续检测2h，结果见表4。

6)对照组实验中，重复步骤1)～4)，但在步骤2)中加湿器内仅添加水，不含甲醛生物降解剂。连续检测的结果见表4。

表4小型密闭空间中甲醛生物降解剂对空气中甲醛消除的效果

^*浓度单位为ppm。

上述实施例表明，对照组中，由于水雾的扩散，使空气中的甲醛部分溶解于水雾中，因此在开始阶段甲醛浓度有所下降，但随着时间的推移，水雾消散，空气中水分减少，甲醛依然会释放出来。而添加甲醛生物降解剂后，可在30min内完全降解空气中2～3ppm的甲醛，并且2h后箱内甲醛仍未检出，表明甲醛已完全降解。大多数装修后居室内甲醛浓度为0.3～0.6ppm，本实施例采用的浓度远高于该值，表明甲醛生物降解剂具有高效的清除空气中甲醛的作用。

实施例2

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，OD₆₀₀值为1.3；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为150mg/mL，培养时间为48h。

实施例3

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，OD₆₀₀值为1.5；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为200mg/mL，继续培养的温度为30℃，培养时间为60h。

实施例4

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，振荡培养的温度为20℃，OD₆₀₀值为0.8；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为100mg/mL，继续培养的温度为20℃，培养时间为72h。

实施例5

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，振荡培养的温度为25℃，OD₆₀₀值为1.2；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为150mg/mL，继续培养的温度为25℃，培养时间为36h。

实施例6

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，振荡培养的温度为35℃，OD₆₀₀值为1.5；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为200mg/mL，继续培养的温度为35℃，培养时间为30h。

实施例7

与实施例1类似，其区别在于在步骤1)中，振荡培养的温度为37℃，OD₆₀₀值为1.5；在步骤2)中，加入甲醛后培养基中甲醛的终浓度为200mg/mL，继续培养的温度为37℃，培养时间为24h。

Claims

1.一株假单胞菌IOFA1（Pseudomonas sp.IOFA1），所述假单胞菌IOFA1（Pseudomonassp.IOFA1）已于2010年10月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，该保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M 2010280，该保藏中心的地址为中国.武汉.武汉大学。

2.甲醛生物降解剂，其特征在于所述甲醛生物降解剂为权利要求1所述假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉；所述甲醛生物降解剂的主要成分为甲醛脱氢酶，按质量百分比，所述甲醛脱氢酶至少占90%，所述甲醛脱氢酶为一种甲醛降解酶，甲醛生物降解剂中还含有10%以下的杂蛋白。

3.如权利要求2所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将假单胞菌IOFA1用培养基进行活化后，接种于培养基中，振荡培养；

2）在培养基中加入甲醛溶液继续振荡培养；

3）将步骤2）中所得的培养液在4℃温度下离心，去除上清液，收集菌体；

4）在菌体中加入100mL无菌水，悬浮起菌体，收集悬浮液；

5）将悬浮液中的菌体破碎后离心，去除沉淀，将上清液过滤除菌，并冷冻干燥，即得假单胞菌IOFA1菌体破碎液干粉，再经纯化，即得甲醛生物降解剂。

4.如权利要求3所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述培养基采用LB培养基。

5.如权利要求3所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述培养的条件为：在20～37℃的条件下振荡培养至OD₆₀₀＝0.8～1.5。

6.如权利要求4所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于所述LB培养基的配制方法为：称取10g氯化钠，10g蛋白胨和5g酵母膏，溶解于蒸馏水中，并用蒸馏水定容至1L，经121℃灭菌20min。

7.如权利要求3所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述在培养基中加入甲醛溶液至终浓度为100～200mg/mL；所述继续振荡培养的条件为：在20～37℃条件下振荡培养24～72h。

8.如权利要求3所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于在步骤4）中，所述无菌水是采用经4℃预冷的无菌水。

9.如权利要求3所述的甲醛生物降解剂的制备方法，其特征在于在步骤5）中，所述破碎采用匀浆机破碎，条件为：匀浆压力为700MPa，时间为5min；或采用超声波破碎，条件为：模式01，变幅杆03，工作时间10min，超声2.5s，间隙7.5s，功率30%，选用信仪-ⅡD超声仪；所述过滤采用0.22μm的滤膜进行过滤；所述滤膜为亲水性滤膜，所述亲水性滤膜选自纤维素膜或聚醚砜膜。