CN102175811B - 一种鉴别卵磷脂纯度的方法 - Google Patents

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Abstract

一种鉴别卵磷脂纯度的方法，属于农产品质量检测技术领域，该方法提供一种高效展开剂，使卵磷脂主要成分、脂肪酸、甘油酯和溶血卵磷脂在薄层层析板上得到快速分离，然后采用显色剂确定各种成分，最后依据其斑点面积计算卵磷脂的纯度。该方法具有设备要求简单、快速、直观的特点，既可用于卵磷脂纯度的检测，也可以用于研究磷脂酶水解进程。

Description

一种鉴别卵磷脂纯度的方法
技术领域
本发明属于农产品质量检测技术领域，特别涉及卵磷脂纯度的鉴别方法。
背景技术
卵磷脂是重要的营养补充剂和食品添加剂，不同的提取纯化工艺对卵磷脂的纯度影响很大，同时卵磷脂在贮存过程中或在酶的作用下会发生水解，水解程度的不同也会影响产品的纯度，产品纯度直接影响其功能特性。卵磷脂纯度鉴别可采用薄层层析法（TLC）、柱层析、高效液相色谱法和核磁共振检测方法。国外通常采用高效液相色谱或核磁共振法对卵磷脂纯度进行分析，尽管分析结果准确，但设备价格昂贵；国内一般采用的柱层析法，其检测周期长、耗用的试剂量大、原料浪费严重；所以对卵磷脂纯度的鉴别，一直是困扰科研和生产的难题。
经典的薄层层析法不仅设备要求简单、操作方便、分离条件易于掌握，而且结果直观，适合于卵磷脂的纯度鉴别。通常使用薄层层析法对卵磷脂成分进行分析时，主要局限于对其具体组分或脂肪酸构成进行分析，卵磷脂的分析范围较窄（主要局限于几种磷脂或其分子种），不能兼顾甘油酯及其水解产物脂肪酸和溶血卵磷脂，因此很大程度上限制了运用该方法对卵磷脂纯度及其水解程度的鉴别。
发明内容
本发明的目的是提供一种方便操作、直观、准确地鉴别卵磷脂纯度的方法。
本发明操作步骤是：
1）将卵磷脂样品用氯仿溶解，配制成浓度为5mg/mL的卵磷脂溶液；
2）将上述卵磷脂溶液点样于距一矩形薄层层析板底端1.0cm处，使点样下方的薄层层析板与展开剂液面接触，当展开剂上缘距离薄层层析板顶端1.3cm时立即取出薄层层析板，待薄层层析板上展开剂晾干后，再将薄层层析板完全浸泡于显色剂中，然后取出；
3）薄层层析板上的卵磷脂、脂肪酸和甘油酯、溶血卵磷脂的显色斑点分别是黄色、白色和乳黄色，将薄层层析板扫描后测量出卵磷脂、脂肪酸和甘油酯、溶血卵磷脂的面积分别为S、S1和S2，卵磷脂的纯度=                                                 
Figure 164237DEST_PATH_IMAGE001
×100%；
特点是：本发明所述展开剂由氯仿、甲醇、异丙醇、水和三乙胺组成，所述氯仿：甲醇：异丙醇：水和三乙胺的体积比为23：9：1：1：0.67；本发明所述显色剂由溴百里香酚蓝、NaOH和水组成，所述溴百里香酚蓝、NaOH分别占显色剂总质量的0.035%和0.36%。
本发明采用的薄层层析法，使用高效展开剂，使卵磷脂主要成分、脂肪酸和溶血卵磷脂在10cm的薄层层析板上得到快速分离，然后采用显色剂确定显示各种成分和面积，再通进计算，得到卵磷脂的纯度。
本发明有益效果：（1）设备要求简单，仅需简单的薄层层析装置，在普通的实验室中就能完成；（2）检测周期短，整个实验流程20min内即可完成；（3）结果直观，卵磷脂、甘油酯、卵磷脂的显色图面积，能直接观测到卵磷脂的纯度。
附图说明
图1 卵磷脂及相关组分显色区域的薄层层析色谱示意图。
具体实施方式
操作：
（1）称取500mg卵磷脂样品，用氯仿溶解并定容至100mL，配制成5mg/mL的溶液；
（2）将上述卵磷脂溶液点样于距一矩形薄层层析板底端1.0cm处，使点样下方的薄层层析与展开剂液面接触，当展开剂上缘距离薄层层析板顶端1.3cm时立即取出薄层层析板，待薄层层析板上展开剂晾干后，再将薄层层析板完全浸泡于显色剂中，然后取出；
（3）可观察至薄层层析板上的卵磷脂、脂肪酸与甘油酯、溶血卵磷脂的显色斑点分别是黄色、白色、乳黄色，将薄层层析板扫描后测量出其面积分别为36mm2、4mm2和4mm2；
（4）计算：卵磷脂的纯度= 
Figure 986700DEST_PATH_IMAGE001
×100%=81.82%。

Claims (1)

1.一种鉴别卵磷脂样品纯度的方法，包括以下步骤：
1）将卵磷脂样品用氯仿溶解，配制成浓度为5mg/mL的卵磷脂溶液；
2）将上述卵磷脂溶液点样于距一矩形薄层层析板底端1.0cm处，使点样下方的薄层层析板与展开剂液面接触，当展开剂上缘距离薄层层析板顶端1.3cm时立即取出薄层层析板，待薄层层析板上展开剂晾干后，再将薄层层析板完全浸泡于显色剂中，然后取出；
3）薄层层析板上的卵磷脂、脂肪酸和甘油酯、溶血卵磷脂的显色斑点分别是黄色、白色和乳黄色，将薄层层析板扫描后测量出卵磷脂、脂肪酸和甘油酯、溶血卵磷脂的面积分别为S、S1和S2，卵磷脂的纯度=                                                 
Figure 762646DEST_PATH_IMAGE001
×100%；
其特征在于：所述展开剂由氯仿、甲醇、异丙醇、水和三乙胺组成，所述氯仿：甲醇：异丙醇：水和三乙胺的体积比为23：9：1：1：0.67；所述显色剂由溴百里香酚蓝、NaOH和水组成，所述溴百里香酚蓝、NaOH分别占显色剂总质量的0.035%和0.36%。
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