CN102146122A - 一种具有宫缩作用药物的生产工艺 - Google Patents

一种具有宫缩作用药物的生产工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN102146122A
CN102146122A CN2010105444195A CN201010544419A CN102146122A CN 102146122 A CN102146122 A CN 102146122A CN 2010105444195 A CN2010105444195 A CN 2010105444195A CN 201010544419 A CN201010544419 A CN 201010544419A CN 102146122 A CN102146122 A CN 102146122A
Authority
CN
China
Prior art keywords
carbetocin
fmoc
acid
reaction
gly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010105444195A
Other languages
English (en)
Inventor
李新宇
姚志勇
支钦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHENZHEN CITY JIANYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
SHENZHEN CITY JIANYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHENZHEN CITY JIANYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical SHENZHEN CITY JIANYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN2010105444195A priority Critical patent/CN102146122A/zh
Publication of CN102146122A publication Critical patent/CN102146122A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及一种以卡贝缩宫素为主药的宫缩药物的生产工艺，包括合成以及制剂工艺。其固相合成的技术方案包括如下步骤：1)以氨基树脂为载体，脱保护；2)将Fmoc-Gly-OH的羧基与树脂的氨基相连，得到Fmoc-Gly-氨基树脂；3)依次固相合成序列剩余保护氨基酸；4)脱除半胱氨酸的侧链保护基；5)在半胱氨酸的巯基上接入溴丁酸；6)去末端氨基Fmoc保护；7)进行固相环化；8)切割，得到卡贝缩宫素粗肽；9)精制，得到卡贝缩宫素纯品。该工艺具有反应操作简单、后处理容易、收率高、成本低等特点。本发明同时公开了一种卡贝缩宫素冻干粉针剂的制剂工艺，其主要原料组成为：主药卡贝缩宫素，赋形剂，pH值调节剂和注射用水。该粉针剂具有分散度高，稳定性好等优点。

Description

一种具有宫缩作用药物的生产工艺
技术领域：
本发明涉及一种以卡贝缩宫素为主药的宫缩药物的生产工艺，尤其涉及卡贝缩宫素的一种固相合成法及冻干粉针剂制剂工艺。
背景技术：
卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。
卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。
不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素要长，并且对有出血倾向、需额外使用缩宫素者，卡贝缩宫素耐受性好，与缩宫素一样有效甚至更有效。
目前临床常用的促进子宫收缩药物麦角新碱，会导致恶心、呕吐、高血压和冠脉痉挛等。卡贝缩宫素是一种长效的类催产素药物。与麦角新碱相比，使用卡贝缩宫素在预防经阴道分娩的产后出血方面同样有效，并且恶心、呕吐、高血压的发生比例显著降低。
因此卡贝缩宫素在临床上有很好的应用前景，具有很高的开发价值。
卡贝缩宫素的结构如下：
分子式C45H69N11O12S
分子量988.16
本方法提供了一种产率更高，环境污染更小以及制剂更稳定的生产工艺。
已上市的卡贝缩宫素注射液的处方包含有100μg/ml醋酸卡贝缩宫素，9.0mg/ml氯化钠，50nl/ml冰醋酸。其稳定性差，只可于冰箱温度2℃～8℃保存，不能冻存。卡贝缩宫素冻干粉针剂克服了注射剂存在稳定性差的不足，具有分散度高，稳定性好等优点。
发明内容：
本发明的目的在于提供卡贝缩宫素的一种固相合成法及冻干粉针剂制剂工艺。本发明提供了一种高收率、低成本、环境污染小、有利于实现产业化的卡贝缩宫素固相合成方法，以及能改善制剂的稳定性、延长有效期、便于室温贮藏的冻干粉针剂。
本发明固相合成法中一些常用的缩写具有以下含义：
Fmoc：芴甲氧羰基
TBTU：O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯
HOBt：1-羟基苯骈三唑
DIEA：N，N-二异丙基乙胺
TFA：三氟醋酸
DCM：二氯甲烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
TCTU：6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯
EDT：乙二硫醇
Water：水
Trt：三苯甲基
Me：甲基
一种固相合成卡贝缩宫素的方法，采取以下技术方案：
1)以氨基树脂为载体，脱保护；
2)将Fmoc-Gly-OH的羧基与树脂的氨基相连，得到Fmoc-Gly-氨基树脂；
3)依次固相合成序列剩余保护氨基酸；
4)脱掉半胱氨酸的侧链保护基；
5)在半胱氨酸的巯基上接入溴丁酸；
6)去末端氨基Fmoc保护；
7)进行固相环化：
8)切割，得到卡贝缩宫素粗肽；
9)精制，得到卡贝缩宫素纯品。
附图说明：
图1为本发明固相合成卡贝缩宫素的工艺流程图。
本发明提供了一种固相合成卡贝缩宫素的方法，其氨基树脂为Rink Amide MBHA树脂，树脂替代度为0.8～1.2mmol/g。其Fmoc保护的氨基酸分别是Fmoc-Gly，Fmoc-Leu，Fmoc-Pro，Fmoc-cys(Trt)，Fmoc-Asn(Trt)，Fmoc-Gln(Trt)，Fmoc-Ile，Fmoc-Tyr(Me)，4-Br-butyric acid。其缩合试剂为TBTU/HOBt/DIEA。其保护氨基酸以及缩合试剂的投料量是2～5倍当量。其接氨基酸过种中的每一步都经Kaiser Test，颜色呈阴性则依次接保护氨基酸。其脱除半胱氨酸侧链保护基的试剂是1％TFA/DCM。其溴丁酸是在DIEA/DMF作用下与半胱氨酸的巯基反应。其环化试剂是TCTU/DIEA，溶剂为DMF。其裂解试剂是按TFA∶EDT∶water＝95∶2.5∶2.5的体积比配制而成。其卡贝缩宫素纯品是粗肽经反相高效液相色谱法分离纯化而得，其色谱条件为：
色谱柱：Φ15cm
色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)10μm
上样量：≤30g目的肽/次
检测波长：230nm
流速：400ml/min
流动相：A：0.5％醋酸水溶液；B：乙腈
色谱条件：梯度程序见下表。
本发明同时制备了一种含卡贝缩宫素药物的冻干粉针剂，其包括主药卡贝缩宫素、赋形剂、pH调节剂与注射用水。
本发明同时制备了一种含卡贝缩宫素药物的冻干粉针剂，其赋形剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、氯化钠、山梨醇等；其pH 值调节剂选自冰醋酸、盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、枸橼酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠等。
经过大量优化实验，本发明发现了最优选配方组成。其中，其赋形剂优选甘露醇和乳糖，pH值调节剂最优选冰醋酸，pH 值最优选3.0-5.5。
另外，本发明还提供了制备含卡贝缩宫素药物的冻干粉针剂的方法。其工艺如下：
1精密称取处方量的上述物料至灭菌容器中；
2加入适量注射用水完全溶解；
3用冰醋酸调节pH值至3.0至5.5之间；
4注射用水定容；
5活性碳吸附热原；
60.45μm微孔滤膜过滤；
70.22μm微孔滤膜过滤；
8检查合格后灌装于西林瓶中，真空冷冻干燥，出箱、压塞、扎盖；
9检查合格后贴签包装。
具体实施方式：
本发明包含但不局限于以下实施例。
实施例1：制备Fmoc-Gly-树脂
将100.00g Fmoc-RinkAmide MBHA resin加入到反应柱中，该树脂的替代度为1.0mmol/g。加入500mlDMF溶胀，然后加入DCM500ml/次洗涤3次，再加入DMF500ml/次洗涤3次。向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。保护氨基酸以及缩合试剂的投料量为3倍当量，称取Fmoc-Gly-OH89.19g及TBTU96.32g、HOBt40.54g、DIEA38.77g，加入DMF搅拌溶解，搅拌均匀后加入到玻璃反应柱内，搅拌反应24小时。KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。反应完毕后，抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤3次，再用DCM500ml/次洗涤3次，抽干，倒出，放入真空干燥箱干燥12小时。取出称重，为104.42g，测定替代度为0.85mmol/g。
实施例2：制备Fmoc-Leu-Gly-树脂
将104.42g Fmoc-Gly-树脂加入到反应柱中，加入DCM500ml/次洗涤3次，再加入DMF500ml/次洗涤3次。向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500m1，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称收Fmoc-Leu-OH 94.00g及TBTU85.4lg、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例3：制备Fmoc-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30mm，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称取Fmoc-Pro-OH 89.75g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例4：制备Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称收Fmoc-Cys(Trt)-OH155.80g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应5小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例5：制备Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称取Fmoc-Asn(Trt))-OH158.72g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应5小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例6：制备Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称取Fmoc-Gln(Trt)-OH 162.45g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应6小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例7：制备Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称取Fmoc-Ile-OH 97.73g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3.5小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例8：制备Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。称取Fmoc-Tyr(Me)-OH 111.06g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应4小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例9：制备Fmoc-Tyr(Me)-I le-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的1％TFA/DCM溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。
实施例10：制备Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(CH2CH2CH2COOH)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入溴丁酸44.42g及DIEA34.38g，加入500mlDMF搅拌溶解，反应30分钟。取样，用DMF洗涤6次，用Ellman反应监测巯基反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。
实施例11：制备H-Tyr(Me)-Ilc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(CH2CH2CH2COOH)-Pro-Leu-Gly-树脂
向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。
实施例12：环化
称取TCTU94.57g及DIEA34.38g加入1100ml中搅拌溶解，完全溶解后加入到反应柱内，氮气吹搅反应90min。反应完毕后，取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF1100ml/次洗涤3次，再用DCM1100ml/次洗涤3次，抽干，倒出。
实施例13：裂解
将环化后的树脂加入到圆底烧瓶中，加入配制好的裂解试剂(TFA∶EDT∶water＝95∶2.5∶2.5)2200ml，搅拌反应120min。过滤，树脂用TFA洗涤3次。合并滤液，缓慢沉降到20000ml的无水乙醚中。静置2h后开始离心，离心完毕后用冰无水乙醚2200ml/次离心洗涤6次，将得到的粗肽放入冰箱过夜，冷冻干燥，即得卡贝缩宫素粗品。
实施例14：纯化
色谱柱：Φ15cm
色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)10μm
上样量：≤30g目的肽/次
检测波长：230nm
流速：400ml/min
流动相：A：0.5％醋酸水溶液；B：乙腈
色谱条件：梯度程序见下表。
Figure BSA00000346063600071
将得到的粗肽馏分减压干燥后加水30000ml溶解，溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤。滤液按照纯化条件上样，收集目的峰溶液，并将收集的溶液浓缩，冷冻干燥，得目标产物，收率为75％。
实施例15：制备卡贝缩宫素冻干粉针剂
卡贝缩宫素计100μg/ml，3％w/v甘露醇，用冰醋酸调节pH为3.8，其制备工艺如下：
在无菌条件下，称取醋酸卡贝缩宫素(含卡贝缩宫素100mg)，以及甘露醇30g，置于灭菌容器中，加处方量80％注射用水，搅拌使溶解，用冰醋酸调pH至3.8，加注射用水至1000ml，揽匀。加5g注射用活性炭搅拌30min，灭菌滤器粗滤脱炭，用0.45μm微孔滤膜过滤，最后用0.22μm微孔滤膜过滤，滤液检测合格后，灌装于2ml灭菌西林瓶内(1ml/瓶)，冷冻真空干燥，真空压塞，出箱，轧盖。使每瓶相当于100μg卡贝缩宫素。
由本实施例制得卡贝缩宫素冻干粉针剂(含卡贝缩宫素100μg)1000瓶，通过稳定性加速试验与动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验，对其稳定性及临床用药安全性进行了考察。
稳定性加速试验：
分别将上市的一批供试品和按市售包装的一批样品放入温度为40±2℃、相对温度为75％±5％的恒温恒湿箱中进行考察，分别在0、1、2、3和6个月时取样测定，结果见表15-1和表15-2。
表15-1供试品加速试验结果
Figure BSA00000346063600081
表15-2样品加速试验结果
Figure BSA00000346063600082
通过表15-1和表15-2可以看出，经加速试验考察6个月，本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂与已上市的卡贝缩宫素注射液比较，外观色泽、酸度、溶液澄清度没有明显变化，而已上市的供试品的杂质增加、含量下降，表明本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂可于室温下保存，稳定性增加。
血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验：
血管刺激性：
选取双耳无损伤的健康家兔6只，左则耳缘静脉注射实施例15溶液1ml，右耳注射等容量5％葡萄糖溶液，每天1次，连续注射7天。
注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在距注射部位分别为110、215、315cm的近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表15-3。
表15-3血管刺激性评分及判断标准
Figure BSA00000346063600091
结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例15溶液的刺激性，与5％葡萄糖溶液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。
肌肉刺激性：
取健康家兔6只，每只家免左侧股四头肌内注射实施例15溶液1ml，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3大)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表15-4中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18大放血处死后重复上述操作，评价标准见表15-4。
表15-4肌肉刺激反应评价标准
Figure BSA00000346063600101
结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例15溶液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。
对豚鼠的致敏作用：
选取健康豚鼠6只，每只腹腔注射实施例15溶液0.5ml，隔日注射1次，其注射3次。然后随机分为2组，分别在第1次给药后14或21天，静注实施例15溶液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。
结果两组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等。
体外溶血性试验：
制备2％家兔红细胞悬液。取试管7支，按表15-5加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表15-6。
表15-5卡贝缩宫素溶液体外溶血试验加样表
Figure BSA00000346063600111
表15-6红细胞体外溶血与凝集试验判断标准
结果，蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和各卡见缩宫素溶液在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度卡贝缩宫素溶液管底沉积的红细胞均能完全分散，表明卡贝缩宫素溶液无红细胞凝集反应。
血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明，实施例15溶液无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应。表明本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂安全性好，可供临床静脉注射与肌肉注射应用。
实施例16：制备卡贝缩宫素冻干粉针剂
卡贝缩宫素计100μg/ml，3％w/v乳糖，用冰醋酸调节pH为3.8，其制备工艺如下：
在无菌条件下，称取醋酸卡贝缩宫素(含卡贝缩宫素100mg)，以及乳糖30g，置于灭菌容器中，加处方量80％注射用水，搅拌使溶孵，用冰醋酸调pH至3.8，加注射用水至1000ml，搅匀。加5g注射用活性炭搅拌30min，灭菌滤器粗滤脱炭，用0.45m微孔滤膜过滤，最后用0.22μm微孔滤膜过滤，滤液检测合格后，灌装于2ml灭菌西林瓶内(1ml/瓶)，冷冻真空干燥，真空压塞，出箱，轧盖。使每瓶相当于100μg卡贝缩宫素。
由本实施例制得卡贝缩宫素冻干粉针剂(含卡贝缩宫素100μg)1000瓶，通过加速试验与动物血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验，对其稳定性及临床用药安全性进行了考察。
加速试验：
分别将上市的一批供试品和按市售包装的一批样品放入温度为40±2℃、相对湿度为75％±5％的恒温恒湿箱中进行考察，分别在0、1、2、3和6个月时取样测定，结果见表16-1和表16-2。
表16-1供试品加速试验结果
表16-2样品加速试验结果
Figure BSA00000346063600122
通过表16-1和表16-2可以看出，经加速试验考察6个月，本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂与已上市的卡贝缩宫素注射液比较，外观色泽、酸度、溶液澄清度没有明显变化，而已上市的供试品的杂质增加、含量下降，表明本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂可于室温下保存，稳定性增加。
血管刺激性、肌肉刺激性、溶血及过敏性实验：
血管刺激性：
选取双耳无损伤的健康家兔6只，左侧耳缘静脉注射实施例16溶液1ml，右耳注射等容量5％葡萄糖溶液，每天1次，连续注射7天。
注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在距注射部位分别为110、215、315cm的近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表16-3。
表16-3血管刺激性评分及判断标准
Figure BSA00000346063600131
结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例16溶液的刺激性，与5％葡萄糖溶液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。
肌肉刺激性：
取健康家兔6只，每只家兔左侧股四头肌内注射实施例16溶液1ml，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病是检查。然后按表16-4中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表16-4。
表16-4肌肉刺激反应评价标准
Figure BSA00000346063600141
结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例16溶液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或环死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。
对豚鼠的致敏作用：
选取健康豚鼠6只，每只腹腔注射实施例16溶液0.5ml，隔日注射1次，共注射3次。然后随机分为2组，分别在第1次给药后14或21天，静注实施例16溶液1ml。观察豚鼠有无兴奋不安、呼吸困难等过敏症状。
结果两组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等。
体外溶血性试验：
制备2％家兔红细胞悬液。取试管7支，按表16-5加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6小时的外果。红细胞体外凝集与溶血的判断标准见表16-6。
表16-5卡贝缩宫素溶液体外溶血试难加样表
Figure BSA00000346063600142
表16-6红细胞体外溶血与凝集试验判断标准
Figure BSA00000346063600151
结果，蒸馏水对照管在0.5小时完全溶血。生理盐水和各卡贝缩宫素溶液在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度卡贝缩宫素溶液管底沉积的红细胞均能完全分散，表明卡贝缩宫素溶液无红细胞凝集反应。
血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血性及过敏性实验表明，实施例16溶液无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应。表明本发明制备的卡贝缩宫素冻干粉针剂安全性好，可供临床静脉注射与肌肉注射应用。

Claims (10)

1.一种固相合成卡贝缩宫素的方法，包括以下步骤：
1)以氨基树脂为载体，脱保护；
2)将Fmoc-Gly-OH的羧基与树脂的氨基相连，得到Fmoc-Gly-氨基树脂；
3)依序列固相合成剩余保护氨基酸；
4)脱除半胱氨酸的侧链保护基；
5)在半胱氨酸的巯基上接入溴丁酸；
6)去末端氨基Fmoc保护；
7)进行固相环化；
8)切割，得到卡贝缩宫素粗肽；
9)精制，得到卡贝缩宫素纯品。
2.权利要求1所述的方法，其氨基树脂为Rink Amiide MBHA树脂，树脂替代度为0.8～1.2mmol/g；其保护氨基酸分别是Fmoc-Gly，Fmoc-Leu，Fmoc-Pro，Fmoc-cys(Trt)，Fmoc-Asn(Trt)，Fmoc-Gln(Trt)，Fmoc-Ile，Fmoc-Tyr(Me)，4-Br-butyric acid；其缩合试剂为TBTU/HOBt/DIEA；其保护氨基酸以及缩合试剂的投料量是2～5倍当量；其接氨基酸过程中的每一步都经Kaiser Test，颜色呈阴性则依次接保护氨基酸。
3.权利要求1所述的方法，其脱除半胱氨酸侧链保护基的试剂是1％TFA/DCM。
4.权利要求1所述的方法，其溴丁酸是在DIEA/DMF作用下、与半胱氨酸的疏基反应。
5.权利要求1所述的方法，其环化试剂是TCTU/DIEA，溶剂为DMF。
6.权利要求1所述的方法，其裂解试剂是按TFA∶EDT∶water＝95∶2.5∶2.5的体积比配制而成。
7.权利要求1所述的方法，其卡贝缩宫素纯品是粗肽经反相高效液相色谱法分离纯化而得，其色谱条件为：
色谱柱：Φ15cm
色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)10μm
上样量：≤30g目的肽/次
检测波长：230nm
流速：400ml/min
流动相：A：0.5％醋酸水溶液；B：乙腈
色谱条件：梯度程序见下表。 
Figure FSA00000346063500021
8.一种卡贝缩宫素冻干粉针剂，其特征在于所述制剂由主药卡贝缩宫素、赋形剂、pH调节剂与注射用水组成；其主药卡贝缩宫素的浓度优选5-1000μg/ml。
9.权利要求8所述制剂，其武形剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、氯化钠、山梨醇；优选1-10％w/v甘露醇和1-10％w/v乳料。
10.权利要求8所述制剂，其pH值调节剂选自冰醋酸、盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、枸橼酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠等，调节pH为2.5至6.0之间；优选用冰醋酸调pH为3.0-5.5。 
CN2010105444195A 2010-11-12 2010-11-12 一种具有宫缩作用药物的生产工艺 Pending CN102146122A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105444195A CN102146122A (zh) 2010-11-12 2010-11-12 一种具有宫缩作用药物的生产工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105444195A CN102146122A (zh) 2010-11-12 2010-11-12 一种具有宫缩作用药物的生产工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102146122A true CN102146122A (zh) 2011-08-10

Family

ID=44420607

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010105444195A Pending CN102146122A (zh) 2010-11-12 2010-11-12 一种具有宫缩作用药物的生产工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102146122A (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102796178A (zh) * 2012-07-23 2012-11-28 无锡市凯利药业有限公司 一种卡贝缩宫素的固相合成方法
CN102977192A (zh) * 2012-12-06 2013-03-20 安徽工程大学 一种卡贝缩宫素的纯化方法
CN103833831A (zh) * 2013-10-22 2014-06-04 海南双成药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法
CN103992390A (zh) * 2013-09-10 2014-08-20 杭州诺泰制药技术有限公司 一种合成卡贝缩宫素的方法
CN104086631A (zh) * 2014-07-10 2014-10-08 成都天台山制药有限公司 卡贝缩宫素和制法
CN105622725A (zh) * 2016-03-30 2016-06-01 吉尔生化（上海）有限公司 一种制备卡贝缩宫素的方法
CN105646669A (zh) * 2016-03-30 2016-06-08 吉尔生化（上海）有限公司 一种纯化卡贝缩宫素的方法
CN106854230A (zh) * 2015-12-08 2017-06-16 深圳翰宇药业股份有限公司 一种固相片段法合成卡贝缩宫素
CN107106640A (zh) * 2014-10-01 2017-08-29 奥克希托恩生物科学公司 含有分娩控制物质的口服崩解固体药物剂量单元
WO2018113272A1 (zh) * 2016-12-23 2018-06-28 深圳翰宇药业股份有限公司 一种含缩宫素类似物的药物组合物及其制备方法和用途
CN110841055A (zh) * 2019-12-25 2020-02-28 翔宇药业股份有限公司 一种具有宫缩作用药物组合物的生产方法
WO2021031471A1 (zh) * 2019-08-21 2021-02-25 深圳翰宇药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法
CN115626954A (zh) * 2022-10-26 2023-01-20 深圳新声药业有限公司 卡贝缩宫素的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1143911A (zh) * 1994-03-18 1997-02-26 凡林有限公司 用于口服的肽类的稳定化组合物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1143911A (zh) * 1994-03-18 1997-02-26 凡林有限公司 用于口服的肽类的稳定化组合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
朱在仁等: "前列腺素E无菌冻干粉剂工艺研究", 《贵阳医学院学报》, vol. 10, no. 3, 31 December 1985 (1985-12-31), pages 180 *
贾伟等: "《药物控释新剂型》", 30 April 2005, article "第七章多肽、蛋白质类药物注射用缓释、控释剂型", pages: 182 *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102796178A (zh) * 2012-07-23 2012-11-28 无锡市凯利药业有限公司 一种卡贝缩宫素的固相合成方法
CN102977192A (zh) * 2012-12-06 2013-03-20 安徽工程大学 一种卡贝缩宫素的纯化方法
CN103992390A (zh) * 2013-09-10 2014-08-20 杭州诺泰制药技术有限公司 一种合成卡贝缩宫素的方法
CN103833831A (zh) * 2013-10-22 2014-06-04 海南双成药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法
CN103833831B (zh) * 2013-10-22 2015-11-25 海南双成药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法
CN104086631A (zh) * 2014-07-10 2014-10-08 成都天台山制药有限公司 卡贝缩宫素和制法
CN107106640B (zh) * 2014-10-01 2021-06-15 奥克希托恩生物科学公司 含有分娩控制物质的口服崩解固体药物剂量单元
CN107106640A (zh) * 2014-10-01 2017-08-29 奥克希托恩生物科学公司 含有分娩控制物质的口服崩解固体药物剂量单元
CN106854230A (zh) * 2015-12-08 2017-06-16 深圳翰宇药业股份有限公司 一种固相片段法合成卡贝缩宫素
CN105646669A (zh) * 2016-03-30 2016-06-08 吉尔生化（上海）有限公司 一种纯化卡贝缩宫素的方法
CN105622725B (zh) * 2016-03-30 2018-12-18 吉尔生化（上海）有限公司 一种制备卡贝缩宫素的方法
CN105622725A (zh) * 2016-03-30 2016-06-01 吉尔生化（上海）有限公司 一种制备卡贝缩宫素的方法
WO2018113272A1 (zh) * 2016-12-23 2018-06-28 深圳翰宇药业股份有限公司 一种含缩宫素类似物的药物组合物及其制备方法和用途
CN108236716A (zh) * 2016-12-23 2018-07-03 深圳翰宇药业股份有限公司 一种含缩宫素类似物的药物组合物及其制备方法和用途
WO2021031471A1 (zh) * 2019-08-21 2021-02-25 深圳翰宇药业股份有限公司 一种卡贝缩宫素的制备方法
CN110841055A (zh) * 2019-12-25 2020-02-28 翔宇药业股份有限公司 一种具有宫缩作用药物组合物的生产方法
CN115626954A (zh) * 2022-10-26 2023-01-20 深圳新声药业有限公司 卡贝缩宫素的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102146122A (zh) 一种具有宫缩作用药物的生产工艺
EP2246064B1 (en) Recombinant ganoderma lucidium immunomodulatory protein (rlz-8) and uses thereof
EP2078035B1 (en) Peptides having activities of epidermal growth factor and its uses
CN101361961B (zh) 多肽小分子在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用
CN104053675B (zh) 低抗凝血肝素
CN108431023B (zh) 治疗黑皮质素-4受体途径相关病症的方法
CN104086631A (zh) 卡贝缩宫素和制法
CN105518021A (zh) 药物组合物
WO2007049905A1 (en) Peptides for promoting hair growth and improving wrinkle and cosmetic compositions comprising the same
CN104244957B (zh) 用于治疗分娩停止的方法
CN104203256B (zh) 用于引产的包含硫酸化的葡糖胺聚糖的联合治疗
WO2023035632A1 (zh) 一种活性肽及其相关用途
CN102146121A (zh) 一种含有oxt拮抗剂药物的生产工艺
BG98426A (bg) Пептиди с органо-защитна активност,метод за тяхното получаване и приложението им за лечение
CN104870470B (zh) 人松驰素类似物、其药物组合物及其在医药上的应用
CN114599667B (zh) 一种角蛋白bd-1、制法和其药物组合物与用途
EP2016094A1 (en) Novel analogues of antimicrobial and anticancer peptide synthesized and produced from gaegurin 5
CN103848914B (zh) 一种具抗凝活性的菲牛蛭素多肽及其制备方法与用途
CN106163569A (zh) 活化的神经降压素分子及其用途
CN103641889A (zh) 一种降糖肽及其药物用途
US20210196610A1 (en) Composition for promoting hair growth comprising adiponectin-derived peptide
CN114599673B (zh) 一种角蛋白bd-6、制法和其药物组合物与用途
CN112724231B (zh) 一种角蛋白bd-11、制法和其药物组合物与用途
CN104918629B (zh) Sp肽或其衍生物在制备降低il‑13水平的药物中的应用
CN101880656A (zh) 一种蝮蛇毒凝血酶及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent of invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Address after: 518057 Nanshan District, Guangdong Province, a high tech in the middle of the road No. ten Shenzhen biological incubation base, building 412, room 2, No.

Applicant after: Shenzhen City Jianyuan Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Address before: 518000, overseas student Pioneer Building, 29 South Ring Road, Nanshan hi tech Zone, Guangdong, Shenzhen 1702

Applicant before: Shenzhen City Jianyuan Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110810