CN102134267A

CN102134267A - 新去氢茯苓酸

Info

Publication number: CN102134267A
Application number: CN 201110057347
Authority: CN
Inventors: 石任兵; 姜艳艳; 刘洋; 王帅
Original assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Current assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Priority date: 2011-03-10
Filing date: 2011-03-10
Publication date: 2011-07-27
Anticipated expiration: 2031-03-10
Also published as: CN102134267B

Abstract

本发明公开了一种新的化合物，化合物为去氢茯苓酸，该化合物具有较好的抗痴呆活性。

Description

新去氢茯苓酸

技术领域

本发明涉及一种单体化合物，属于化药领域。

背景技术

茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf，为多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌核，茯苓是卫生部颁布的第一批，按照传统既是食品又是药品的34个品种之一。茯苓为《中华人民共和国药典》收载品种。其性平，味甘、淡。归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿、健脾补中、宁心安神的功效。现代药理研究表明，茯苓具有较好的调节免疫功能、抗肿瘤、保肝、抗炎和抗衰老等作用

茯苓的化学成分较为复杂，有多糖、三萜、脂肪酸、甾醇及酶等。多糖和三萜为其主要成分。目前我，根据茯苓化学成分的研究文献报道，无有关新去氢茯苓酸的研究报道，本发明涉及新去氢茯苓酸的制备方法和活性，该化合物具有较好的抗痴呆活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有新的单体化合物。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

新去氢茯苓酸

本发明新去氢茯苓酸单体化合物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：取茯苓药材采用60-90％乙醇加热回流提取2-4次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心；

步骤2：取步骤1离心后的上清液，通过大孔吸附树脂吸附结束后，依次用0-50％乙醇洗脱和70-90％乙醇洗脱，乙醇用量按体积比计算为树脂体积的6-12重量倍，合并70-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；

步骤3：取浸膏I加甲醇回流提取5-10次，每次提取0.5～2小时，至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；

步骤4：取浸膏II，加50-200体积份甲醇溶解，拌入20-500重量份硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；另取空白硅胶500-8000重量份，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1-1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0-1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集；

步骤5：取上述洗脱部分氯仿洗脱流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1-5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每50～200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；

步骤6：按拌样硅胶质量的20-80倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比9∶1∶0.1-10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每50-200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；

步骤7：按拌样硅胶质量的30-100倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为18∶1∶0.2-22∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30-100ml收集一份，合并流份，回收溶剂，浓缩，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得单体化合物。

本发明新去氢茯苓酸单体化合物的制备方法，优选包括如下步骤：

取茯苓药材采用70-90％EtOH加热回流提取2-4次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心；其中优选采用80％乙醇加热回流提取3次；

取上清液，通过大孔吸附树脂吸附结束后，依次用30-50％乙醇洗脱和80-90％乙醇洗脱，乙醇用量为6-12重量倍的原药材量，合并80-90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；其中所述大孔吸附树脂优选3LAB-8型；乙醇洗脱优选依次用40％乙醇洗脱和90％乙醇洗脱；

取I加甲醇回流提取5-10次，每次提取0.5～2小时，至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；

取浸膏II，加100-200体积份甲醇溶解，拌入300-600重量份硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1500-8000重量份，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1-1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0-1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集；其中甲醇优选200体积份；硅胶优选600重量份；空白硅胶优选1500重量份；

取上述洗脱部分氯仿洗脱流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶；采用体积比为50∶1∶0.1-5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每50～200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；

按拌样硅胶质量的30-40倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比9∶1∶0.1-10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每50-200ml收集一份，合并流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶；其中优选按拌样硅胶质量的30倍量取空白硅胶；优选以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱；

按拌样硅胶质量的30-50倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为18∶1∶0.2-22∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30-100ml收集一份，合并流份，回收溶剂，浓缩，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得单体化合物；其中优选按拌样硅胶质量的50倍量取空白硅胶；优选体积比为20∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱。

本发明新去氢茯苓酸单体化合物可以单独、组合或与其它任何中西药物按任意比例配伍，加入常规辅料，按照常规工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液。

本发明所述重量份与体积份为g/ml的关系。

本发明新去氢茯苓酸单体化合物进行了结构鉴定，同时通过实验证明能够改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长，具有显著地抗痴呆作用。

实验例1 新去氢茯苓酸结构鉴定实验

实施例1-4制备的新去氢茯苓酸可以采用本实验例进行结构鉴定

白色针状结晶易溶于氯仿、甲醇、吡啶，硫酸乙醇显色为紫红色。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 627[M-H]^-，负离子ESI-MS给出准分子离子峰m/z：627[M-H]^-；据此确定化合物分子量为628，结合¹H-NMR和¹³C-NMR数据，推断该化合物分子式为C₃₇H₅₆O₈。¹H-NMR谱给出δ_H：4.83(1H，s)，4.96(1H，s)，5.57(1H，brs)，5.39(1H，d，J＝6.0Hz)四个烯氢信号；¹³C-NMR谱给出δ_C：120.7，142.8，146.0，116.5，156.1，107.2六个烯碳信号。通过总结同生源关系的其它化合物的波谱数据，可以判断此化合物母核为羊毛甾-7，9(11)-二烯型三萜，且侧链双键为C＝CH₂也就是C₂₄＝C₃₁型。其中C＝CH₂型环外双键质子的化学位移为δ_H：4.83(1H，s，H-31)，4.96(1H，s，H-31)；7，9(11)异环共轭二烯型质子化学位移为δ_H：5.57(1H，brs，H-7)，5.39(1H，d，J＝6.0Hz，H-11)；C＝CH₂型环外双键碳化学位移为δ_C：156.1(C-24)，107.1(C-31)；7，9(11)异环共轭二烯型碳化学位移为δ_C：120.8(C-7)，142.9(C-8)，146.0(C-9)，116.7(C-11)。¹H-NMR高场区有8个甲基δ_H：0.90(3H，s)，0.96(3H，s)，0.97(3H，d，J＝2.8Hz)，0.99(3H，d，J＝2.8Hz)，1.00(3H，s)，1.04(3H，s)，1.41(3H，s)，1.71(3H，s)。另外¹H-NMR谱还显示连氧碳上的2个偕氢信号δ_H：4.50(1H，m)，4.94(1H，brs)；¹³C-NMR谱给出δ_C：78.2，76.4，69.9三个连氧碳信号。从化学位移值可推测δ_C：78.2，76.4为环上的连氧碳信号，δ_C：69.9可能为侧链上的连氧碳信号。另外¹³C-NMR谱给出δ_C：178.6，174.6，171.4三个羰基碳信号，根据总结的相同生源关系的其它化合物的波谱数据，可初步确定δ_C：178.6为21位羧基碳的信号。

HSQC和HMBC谱给出δ_H：4.94(1H，brs)归属于δ_C：78.2，与δ_C：31.1，44.8，174.6远程相关。δ_H：5.39(1H，d，J＝6.0Hz)归属于δ_C：116.5，与δ_C：146.0，37.6，45.1远程相关。δ_H：4.96(1H，brs)归属于δ_C：107.2，与δ_C：33.2，34.1远程相关。δ_H：4.83(1H，brs)归属于δ_C：107.2，与δ_C：33.2，34.1远程相关。δ_H：4.52(1H，dd，J＝6.4，7.2Hz)归属于δ_C：76.4，与δ_C：49.4，48.5远程相关。δ_H：2.84(1H，dd，J＝11.2，5.6Hz)归属于δ_C：57.6，与δ_C：36.2，45.1，76.4，17.6，48.5，178.6，31.4远程相关。δ_H：2.92(1H，t d，J＝10.8，2.0Hz)归属于δ_C：48.5，与δ_C：45.1，57.6远程相关。δ_H：1.04(3H，s)归属于δ_C：17.6，与δ_C：36.2，45.1，49.4，57.6远程相关。δ_H：1.00(3H，s)归属于δ_C：22.7，与δ_C：31.1，44.8，14δ.0，37.6远程相关。δ_H：0.97(3H，d，J＝6.8Hz)归属于δ_C：22.0，与δ_C：156.1，34.1，21.8远程相关。δ_H：0.99(3H，d，J＝7.2Hz)归属于δ_C：21.8，与δ_C：156.1，34.1，22.0远程相关。δ_H：0.90(3H，s)归属于δ_C：28.1，与δ_C：78.2，36.7，44.8远程相关。δ_H：0.96(3H，s)归属于δ_C：22.5，与δ_C：78.2，36.7，44.8远程相关。δ_H：1.41(3H，s)归属于δ_C：26.6，与δ_C：45.1，49.4，44.4，142.8远程相关。δ_H：1.71(3H，s)归属于δ_C：28.4，与δ_C：46.3，69.9，46.4远程相关。δ_H：3.14(1H，J＝15.6Hz)，3.18(1H，J＝15.6Hz)归属于δ_C：46.3，与δ_C：171.4，69.9，28.4，46.4远程相关。δ_H：3.06(1H，s)，3.03(H，s)归属于δ_C：46.4，与δ_C：174.6，69.9，28.4，46.3远程相关。

由以上碳氢相关信息可知δ_C：174.6，171.4的羰基信号，以及δ_C：69.9的连氧碳信号均在连于3位的侧链上，根据¹H-NMR谱、¹³C-NMR谱、HSQC和HMBC谱综合分析可知连于3位的侧链结构为

同时由ESI-MS给出的准分子离子峰m/z：627[M-H]^-和碎片离子峰m/z：525可以进一步证实3位侧链的结构。

最后结合¹H-NMR谱、¹³C-NMR谱、HSQC和HMBC谱，并参考文献Takaaki Tai，Testsuro Shingu，Tohru Kikuchi，et al.Isolation of lanostane-type triterpene acid having an acetoxyl group from sclearotia of poria cocos[J].Phytochemistry，1995，40(1)：225-231中具有相同母核结构的3-epi-dehydropachymic acid的波谱数据，对该化合物的¹H-NMR谱的质子信号和¹³C-NMR谱的碳信号进行归属，如下表1，并确认该化合物为3-(3’-hydroxy-3’-methylglutaryloxy)-16α-Dihydro-xy-lanosta-7，9(11)，24(31)-trien-21-oic acid，后经文献检索，确认为新化合物，命名为新去氢茯苓酸。

表1 新去氢茯苓酸的¹H-NMR(in C5H5N，400MHZ)和¹³C-NMR数据(in C5H5N，100MHZ)

实验例2 药效试验

(一)实验材料

1.实验动物

SD大鼠，雄性，体重256.3±8.4g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2009-2010

2.药品与试剂

受试药：新去氢茯苓酸，给药前用0.5％CMC-Na溶解配成溶液。

东莨菪碱，购于Fluka公司，生产批号：2040506，大鼠剂量为0.5g/kg。

3.器材

大鼠跳台仪，箱内隔成2室，可同时测定2只大鼠。

(二)实验方法与结果

1.分组及给药

大鼠按体重随机分成4组，即1个模型对照组、1个正常对照组、新去氢土莫酸大、小剂量组，每组12只。新去氢土莫酸大、小剂量组连续给药4天，模型组与正常组给予等容积的0.5％CMC-Na。

2.实验方法

第四天给药后30分钟(准确计时)腹腔注射东莨菪碱造模，30分钟后进行训练(记忆获得实验)，24小时后测试(记忆巩固实验)。模型组注射东莨菪碱造模，30分钟进行训练，24小时后测试。正常组直接进行训练，24小时后测试。

跳台行为学实验过程

将同组2只大鼠同时放入跳台仪中，适应环境3分钟，训练5分钟，记录仪记录第一次跳上跳台的时间(潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。24小时后，进行记忆巩固测试，先将大鼠放到跳台上，记录第一次跳下时间(触电潜伏期)，安全期时间，5分钟内的跳下次数(错误次数)。

3.统计方法

使用SAS8.0统计软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)，分别将记忆巩固测试阶段各组给药大鼠与模型组大鼠和正常组大鼠进行比较，求得组间差异。

4.实验结果

表2 新去氢茯苓酸抗痴呆实验结果

注：&&P＜0.01，与对照组比较；**P＜0.01，与模型组比较；*P＜0.05，与模型组比较

(三)结论

与模型组相比，新去氢茯苓酸大、小剂量组均可改善模型大鼠的学习记忆能力，使模型大鼠错误次数减少，潜伏期延长，。

附图说明

图1：新去氢茯苓酸的ESI-MS图谱

图2：新去氢茯苓酸的¹HNMR谱(in C5H5N，400MHZ)

图3：新去氢茯苓酸的¹³CNMR谱(in C5H5N，100MHZ)

图4：新去氢茯苓酸的HSQC谱(in C5H5N，100MHZ)

图5：新去氢茯苓酸的HMBC谱(in C5H5N，100MHZ)

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：

取茯苓药材1kg，采用80％EtOH加热回流提取3次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心，取上清液，通过3LAB-8型大孔吸附树脂，待吸附结束后，依次用10L40％乙醇洗脱和10L90％乙醇洗脱，合并90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；取I加甲醇回流提取至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；取浸膏II，加200ml甲醇溶解，拌入600g硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1.5Kg，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份；取体积比为50∶1、20∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱部分的200～295流份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1、40∶1∶0.1、30∶1∶0.1、20∶1∶0.1、15∶1∶0.1、10∶1∶0.1、5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份，合并70～80份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的30倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每50ml收集一份，合并12～20份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的50倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为20∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30ml收集一份，合并8～12份，回收溶剂，浓缩至小体积，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得到新去氢茯苓酸40mg。

实施例2：

取茯苓药材1kg，采用85％EtOH加热回流提取2次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心，取上清液，通过4LAB-8型大孔吸附树脂，待吸附结束后，依次用8L30％乙醇洗脱和12L80％乙醇洗脱，合并80％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；取I加甲醇回流提取至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；取浸膏II，加200ml甲醇溶解，拌入500g硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1.6Kg，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0、100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每120ml收集一份。取体积比为50∶1、30∶1和20∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱部分的220～310流份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1、40∶1∶0.1、30∶1∶0.1、20∶1∶0.1、15∶1∶0.1、10∶1∶0.1、5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每80ml收集一份，合并75～90份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的30倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每40ml收集一份，合并25～25份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的40倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为22∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每35ml收集一份，合并8～12份，回收溶剂，浓缩至小体积，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得到新去氢茯苓酸48mg。

实施例3：

取茯苓药材1kg，采用90％EtOH加热回流提取3次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心，取上清液，通过5LAB-8型大孔吸附树脂，待吸附结束后，依次用15L40％乙醇洗脱和8L90％乙醇洗脱，合并90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；取I加甲醇回流提取至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；取浸膏II，加200ml甲醇溶解，拌入550g硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1.5Kg，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0、100∶1、40∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份。取体积比为40∶1、20∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱部分的190～270流份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1、40∶1∶0.1、30∶1∶0.1、20∶1∶0.1、15∶1∶0.1、10∶1∶0.1、5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每110ml收集一份，合并60～78份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的35倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比9∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每60ml收集一份，合并10～16份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的50倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为18∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30ml收集一份，合并8～12份，回收溶剂，浓缩至小体积，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得到新去氢茯苓酸50mg。

实施例4：

取茯苓药材1kg，采用75％EtOH加热回流提取2次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心，取上清液，通过2.5LAB-8型大孔吸附树脂，待吸附结束后，依次用8L40％乙醇洗脱和14L75％乙醇洗脱，合并75％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；取I加甲醇回流提取至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；取浸膏II，加200ml甲醇溶解，拌入400g硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1.5Kg，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1、40∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份。取体积比为40∶1、20∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱部分的200～295流份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，采用体积比为50∶1∶0.1、40∶1∶0.1、30∶1∶0.1、20∶1∶0.1、15∶1∶0.1、10∶1∶0.1、5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每90ml收集一份，合并80～90份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的40倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每45ml收集一份，合并14～22份，减压回收溶剂，浓缩至小体积，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的50倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为20∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每40ml收集一份，合并8～12份，回收溶剂，浓缩至小体积，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得到新去氢茯苓酸44mg。

Claims

1.一种化合物，其特征在于该化合物结构式为：

2.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法为：

3.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法步骤1中采用80％乙醇加热回流提取3次。

4.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法步骤2中大孔吸附树脂为AB-8型；乙醇洗脱依次用40％乙醇洗脱和90％乙醇洗脱。

5.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法步骤4中甲醇为200体积份；硅胶为600重量份；空白硅胶为1500重量份。

6.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法步骤6中以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱。

7.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法步骤7中以体积比20∶1∶0.2的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱。

8.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取茯苓药材1kg，采用80％EtOH加热回流提取3次，合并提取液，减压回收至无醇味，离心，取上清液，通过3LAB-8型大孔吸附树脂，待吸附结束后，依次用10L40％乙醇洗脱和10L90％乙醇洗脱，合并90％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，并与离心沉淀合并，得干浸膏I；取I加甲醇回流提取至提取液近无色，合并提取液，减压回收溶剂，减压干燥，得干浸膏II；取浸膏II，加200ml甲醇溶解，拌入600g硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另取空白硅胶1.5Kg，加石油醚充分溶胀后，湿法装柱，将拌样硅胶装于柱顶，依次采用体积比为100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱结束后，依次采用体积比为100∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份，取体积比为50∶1、20∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱部分的200～295流份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，得到拌样硅胶，依次采用体积比为50∶1∶0.1、40∶1∶0.1、30∶1∶0.1、20∶1∶0.1、15∶1∶0.1、10∶1∶0.1、5∶1∶0.1的氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份，合并70～80份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的30倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比10∶1∶0.1的二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每50ml收集一份，合并12～20份，减压回收溶剂，浓缩，拌入空白硅胶，挥尽溶剂，得到拌样硅胶，另按拌样硅胶质量的50倍量取空白硅胶，湿法装柱，将拌样硅胶加至柱顶，以体积比为20∶1∶0.2氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶剂进行洗脱，分份收集，每30ml收集一份，合并8～12份，回收溶剂，浓缩，静置析出白色针状结晶，用甲醇反复重结晶，得到新去氢茯苓酸。