CN102875518A

CN102875518A - 京尼平甲醚、其制备方法及其医药用途

Info

Publication number: CN102875518A
Application number: CN2012103641268A
Authority: CN
Inventors: 刘珂; 邹晓丽; 许卉; 郎跃武; 范华英
Original assignee: SUZHOU LEINA PHARMACEUTICAL RESEARCH DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: CHANGZHOU BADIAN MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-09-26
Filing date: 2012-09-26
Publication date: 2013-01-16

Abstract

本发明涉及京尼平衍生物、其制备方法及其医药用途，具体涉及京尼平甲醚、其制备方法以及医药用途，京尼平甲醚包括R-型、S-型及两种构型的不同比例的混合物，本发明公开了R-型、S-型及两种构型的不同比例的混合物的制备方法。

Description

京尼平甲醚、其制备方法及其医药用途

技术领域

本发明涉及一种新的环烯醚萜类化合物、其制备方法及其医药用途，具体是指京尼平衍生物京尼平甲醚、其制备方法及其医药用途。

背景技术

栀子为茜草科栀子属植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效，是历版《中国药典》收载的常用中药，并经卫生部批准可药食两用。栀子临床多用于热病心烦以及黄疸型肝炎、扭挫伤、高血压、糖尿病等的治疗，也是化学性肝损伤辅助治疗保健品的主要药味，含有藏红花素类、栀子苷类和多元酚类等多种化学成分，其中，栀子苷类化合物以环烯醚萜葡萄糖苷京尼平苷（Genipinside）为主，京尼平苷的化学结构如式1中所示。

式1

其苷元京尼平的化学结构如式2中所示。

式2

京尼平苷还存在于杜仲、管花肉苁蓉等植物中，资源十分丰富【付红蕾，等.栀子中京尼平苷的研究现状和应用前景.时珍国医国药 2005,16(1):54；】。近年来，大量的药理研究结果表明，京尼平苷及其苷元京尼平（Genipin）具有保肝利胆【Takeuchi S,et al.Genipin prevents fulminant hepatic failure resulting in reduction of lethality throu gh the suppression of TNF-αproduction.Hepatology Research 2005,33(4):298；Goto H,and Takikawa H.Effect of genipin on cholestasis induced by estradiol-17β-glucuron ide and lithocholate-3-O-glucuornide in rats.Hepatology Research 2010,40(5):524；Ki m SJ,et al.Genipin protects lipopolysaccharide-induced apoptotic liver damage in D-g alactosamine-sensitized mice.European Journal of Pharmacology 2010,635(1-3):188.】、保护神经细胞【Yamazaki M,et al.Cyclic GMP-dependent neurite outgrowth by genipin and nerve growh factor in PC12h cells.European Journal of Pharmacology 2004,488:35；Matsumi Y,et al.Neuroa cell death induced by 6-hydroxydopamine is attenuated by genipin.Journal of Health Science,20086】、抗抑郁【Tian JS,et al.An tidepressant-like effect of genipin in mice.Neuroscience Letters 2010,479(3):236.】、抗炎【Wang QS,et al.Dietary blue pigments derived from genipin,attenuate inflamma tion by inhibiting LPS-induced iNOS and COX-2 expression via the NF-κB inactivatio n.PLoS ONE 2012,7(3):e34122.doi：10.1371/journal.pone.0034122；Nam KN,et al.Genipin inhibits the inflammatory response of rat brain microglial cells.International immunopharmacology 2010,10(4):493；Koo HJ,et al.Anti-inflammatory evaluation of gardenia extract,geniposide and genipin.Journal of Ethnopharmacology 2006,103(3):496；Koo HJ,et al.Antiinflammatory effects of genipin,an active principle of gardeni a.European Journal of Pharmacology 2004,495(2-3):201.】、抗肿瘤【Wang SW，et al.Inhibitory effect of geniposide on aflatoxin B1-induced DNA repair synthesis in primary cultured rat hepatocytes.Cancer Lett 1992,65(2):133；Cao HL,et al.Genipin ind uced apoptosis associated with activation of the c-Jun NH2-terminal kinase and p53 protein in Hela cells.Biological Pharmaceutical Bulletin 2010,33(8):1343.】、降血糖【谢文利,等.京尼平苷的降血糖作用研究.武警医学院学报2008,17(7):580.】、抗氧化、抗高血压、抗血栓以及抗骨质疏松【Suzuki Y,et al.Antithrombotic effect of geniposi de and genipin in the mouse thrombosis model.Planta medica 2001,67(9):807；Ha H,et al.Effects of eucommiae cortex on osteoblast-like cell proliferation and osleoclast inhibition.Arch Pharm Res 2003,26(11):929.】等广泛的生理活性，京尼平还是一种良好的食用色素和生物交联剂材料，是一类极具开发应用前景的天然产物【史卉妍，等.京尼平苷及其衍生物的药效学研究进展.中国药学杂志2006,1:41；Somers P,et al.Genipin blues:an alternative non-toxic crosslinker for heart valves? Journal Heart Valve Disease 2008,17(6):682.Avila MY,et al.Effect of genipin collagen crosslinking on porcine corneas.Journal Cataract Refractive Surgery 2010,36(4):659；李珂.新型生物交联剂京尼平的性质与应用.中国化工贸易2011,6:92.】。

然而，与此同时，对于栀子及其主要化学成分的毒性研究也一直备受关注。日本学者通过对栀子黄色素的肝毒性成分分析认为，其主要毒性成分是栀子苷【Yamano T,et al.Hepatotoxicity of gardenia yellow color in rat.Toxicology Letters 1988,44(1-2):177．】。中国中医科学院中药研究所杨洪军课题组研究发现，连续3d灌胃给予大剂量栀子的水提物（3.08g/kg）、醇提物（1.62g/kg）或栀子苷（0.28g/kg），均可导致肝重增加，肝指数增大，ALT、AST活性增高，TBIL含量增加，光镜下可见明显的肝细胞肿胀、坏死，大量炎症细胞浸润等形态改变；经口给予大鼠京尼平苷能亦可导致严重的肝损伤，提示栀子苷、京尼平苷等可能是栀子肝毒性的主要物质基础【杨洪军,等．栀子对大鼠肝毒性的实验研究．中国中药杂志2006，31(13):9；李德凤,等.京尼平苷对SD大鼠，Wistar大鼠与ICR小鼠肝毒性的比较研究.中国实验方剂学杂志2007,13(4):31.】。京尼平苷在肠道菌群作用下水解转化成苷元京尼平，被认为是导致其肝损伤作用可能的重要机制之一【Akao T,et al.Enzymic studies on the animal and intestinal bacteria metabolism of geniposide.Biol Pharm Bull 1994,17(12):1573.】。药代动力学的相关研究进一步显示，京尼平口服后在肝脏中快速而广泛地存在首过效应，并在体内能结合氨基酸而形成蓝色色素，导致肝毒性直接物质或许正是栀子蓝【成龙,等.京尼平苷及其代谢物在鼠体内的药代动力学研究.中国中药杂志2007,32(1):61；Hou YC,et al.Metabolism and pharmacokinetics of genipin and geniposide in rats.Food Chemical Toxicology 2008,46(8):2764.】。这可能与其分子中半缩醛结构所导致的化学性质活泼密切相关【卢毅，等.京尼平β-环糊精包合物制备工艺研究.中国药学杂志2008,43(20):1569；杨全军,等.栀子化学成分、药理作用及体内过程研究进展.中国现代中药2010,12(9):7.】。因此，寻找化学和代谢稳定性良好，不易被肠道菌代谢，且避免与氨基酸结合而生成导致肝毒性的栀子蓝的新型京尼平衍生物具有重要意义。

发明内容

本发明以京尼平或京尼平苷为原料，经化学结构修饰，获得一种C-1位羟基甲基化的新的京尼平衍生物，命名为京尼平甲醚，为一对1-位碳的差向异构体，其分子式为C₁₂H₁₆O₅，分子量为240.25，化学结构如式3所示。

式3

在京尼平甲醚中，其C-1位的绝对构型可以为S型，命名为京尼平甲醚A（1S-京尼平甲醚），如式4所示。

式4

其C-1位的绝对构型也可以为R型，命名为京尼平甲醚B（1R-京尼平甲醚），如式5所示。

式5

本发明提供了京尼平甲醚的药物组合物，由治疗有效量的京尼平甲醚和药学上可接受的辅料组成。

所述的京尼平甲醚，可以是京尼平甲醚A，可以是京尼平甲醚B，也可以是京尼平甲醚A和B任意比例的混合物。

本发明还提供了京尼平甲醚的制备方法：取京尼平或京尼平苷一定量，溶于3-10倍量甲醇（重量体积比）中，在搅拌下迅速加入1~2mol/L的盐酸甲醇溶液3-10倍量（重量体积比），室温下继续搅拌反应10~20min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗2~3次，减压蒸干，残余物行进行分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，即得。

本发明还公开了一种制备京尼平甲醚A的方法，京尼平甲醚混合物经甲醇、乙醇或乙腈-水重结晶即得。

还公开了一种制备京尼平甲醚B的方法，京尼平甲醚混合物用制备高效液相色谱仪、C18键和反相硅胶色谱柱、或CG161树脂柱进行分离即得。

本发明所述的化合物可以用于治疗抑郁症、早老性痴呆、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、帕金森氏症、败血病、哮喘、牙周病、癌症或肝胆管疾病。

初步的药效学研究发现，京尼平甲醚在体外5-HT重摄取抑制剂实验以及体外抑制炎症细胞因子TNF-α及IL-1β表达方面均显示有强于京尼平的活性，表明C-1位羟基经甲基化修饰后所得的京尼平甲醚有效保留了母体化合物京尼平的骨架结构和活性药效团。与此同时，由于羟基甲基化，本品不仅可以避免葡萄糖苷类化合物（如栀子苷、京尼平苷）经体内肠道菌群水解代谢后形成京尼平，而且可以避免京尼平入血后与氨基酸结合而生成导致肝毒性的栀子蓝，进而使得药物的口服生物利用度和血药浓度均大大提高，血脑屏障透过性显著改善，成药性提高。

附图说明

图1京尼平甲醚的¹³C NMR谱图；

图2京尼平甲醚的¹H NMR谱图；

图3京尼平甲醚A的¹³C NMR谱图；

图4京尼平甲醚A的¹H NMR全谱；

图5京尼平甲醚A的NOESY谱（全谱）；

图6京尼平甲醚A的NOESY局部放大谱1；

图7京尼平甲醚A的NOESY局部放大谱2；

图8京尼平甲醚体外5-HT重摄取抑制剂实验结果；

图9大鼠分别灌胃给予京尼平甲醚和京尼平的血浆药时变化曲线；

图10大鼠分别灌胃给予京尼平甲醚和京尼平的脑血比经时变化曲线。

具体实施方式

为了便于理解本发明，特列举实施例，以进一步诠释本发明，而不是对本发明的任何方式的限制。

实施例1京尼平甲醚的制备

取京尼平500g，溶于1500mL甲醇中，在搅拌下迅速加入2mol/L的盐酸甲醇溶液1500mL，室温下继续搅拌反应10min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗3次，减压蒸干，残余物行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，得京尼平甲醚。

实施例2京尼平甲醚的制备

取京尼平500g，溶于5000mL甲醇中，在搅拌下迅速加入1mol/L的盐酸甲醇溶液5000mL，室温下继续搅拌反应20min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗2次，减压蒸干，残余物行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，得京尼平甲醚。

实施例3京尼平甲醚的制备

取京尼平500g，溶于2000mL甲醇中，在搅拌下迅速加入1mol/L的盐酸甲醇溶液 2000mL，室温下继续搅拌反应15min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗3次，减压蒸干，残余物行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，得京尼平甲醚。

实施例4京尼平甲醚的制备

取京尼平苷875g，溶于3000mL甲醇中，在搅拌下迅速加入1mol/L的盐酸甲醇溶液3000mL，室温下继续搅拌反应20min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗2次，减压蒸干，残余物行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，得京尼平甲醚。

实施例5京尼平甲醚A的制备

取京尼平500g，溶于2000mL甲醇中，在搅拌下迅速加入2mol/L的盐酸甲醇溶液2000mL，室温下继续搅拌反应10min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗3次，减压蒸干，残余物行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，得京尼平甲醚。

取上述京尼平甲醚2g，加甲醇20mL重结晶，得京尼平甲醚A的单体成分。

实施例6京尼平甲醚A的制备

取上述京尼平甲醚2g，加乙醇20mL重结晶，得京尼平甲醚A的单体成分。

实施例7京尼平甲醚A的制备

取上述京尼平甲醚2g，经乙腈-水（80:20）20mL重结晶，得京尼平甲醚A的单体成分。

实施例8京尼平甲醚B的制备

经用制备高效液相色谱仪进行分离，得京尼平甲醚B的单体成分。

实施例9京尼平甲醚B的制备

经C18键和反相硅胶柱分离，得京尼平甲醚B的单体成分。

实施例10京尼平甲醚B的制备

经CG161树脂柱分离，得京尼平甲醚B的单体成分。

将实施例7和实施例10分别制备得到的京尼平甲醚A和B进行测试，其NMR谱学测试数据归纳如表1，相关图谱详见附图1至图7。

表1京尼平甲醚A和B的NMR（in CDCl₃）信号归属

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE001

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE002

实施例11京尼平甲醚体外5-HT重摄取抑制剂实验

1、实验材料

受试药物：京尼平甲醚（来源于实施例1）、氯丙咪嗪（阳性对照）

实验动物：清洁级Wistar大鼠

2、实验方法

2.1溶液制备

取京尼平甲醚适量，用DMSO溶解，分别制成0.01、0.1、1.0、10和100nmol/L的溶液。

2.2体外5-HT重摄取抑制剂实验

取Wistar大鼠，断头处死，快速取脑，分离大脑皮层，称重，按重量体积比加入9倍量0.32mol/L的冰冷蔗糖溶液，匀浆。匀浆液用梯度离心法在4℃制备突触体，用于5-HT重摄取实验。

重摄取的反应体系中含有：突触体悬液80μL，待测药物20μL，[³H]-5-HT Krebs溶液100μL(2.0pmol/L)，总体积200μL，37℃孵育10min。将突触体转移至滤膜，吸滤分离游离³H-5-HT，滤膜于80℃干燥后加闪烁液20μL，进行计数。其中空白对照为反应体系中加入40%乙醇溶液（含20%TritonX 100）20μL，破坏突触体结构，测定非重吸收特异及非特异结合5-HT量。以氯丙咪嗪（终浓度1×10-7～1×10-3mol/L）为阳性对照，制备标准曲线。模型对照为反应体系中加入Krebs缓冲液20μl，不加药物。按下式计算5-HT重摄取抑制率：

3、结果

本发明提供的化合物京尼平甲醚活性图如图8所示，IC₅₀为8nmol/L，对照药物氯丙咪嗪的IC₅₀为12nmol/L。结果表明，京尼平甲醚体外5-HT重摄取实验显示与对照药物氯丙咪嗪相同效果。

实施例12京尼平甲醚的开场实验、强迫小鼠游泳实验及悬尾实验

1、材料

受试品：京尼平甲醚（来源于实施例2），用适量0.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）水溶液，研磨成混悬液；

阳性对照药：氟西汀，2mg/kg/d；

动物：ICR小鼠，雄性，体重20~25g；

仪器：小鼠开场试验箱；

2、方法

动物分组：雄性ICR成年小鼠，20~25g，每个试验分组为：对照组(0.5%CMC-Na溶液)，京尼平甲醚低剂量组（5mg/kg/d）、中剂量组（10mg/kg/d）和高剂量组（20mg/kg/d），氟西汀组（2mg/kg/d），京尼平组（20mg/kg/d）。小鼠口服给药体积为20ml/kg，药物对应的浓度分别为：京尼平甲醚：0.25，0.5，1mg/ml；氟西汀：0.1mg/ml；京尼平：1mg/ml。分别取京尼平甲醚，溶于0.5%CMC-Na水溶液中，配成0.025%、0.05%、0.1%的溶液，氟西汀溶于0.5%CMCNa水溶液中，配成0.01%的溶液，京尼平溶于0.5%CMCNa水溶液中，配成0.1%的溶液。

实验方法：所有动物均饲养于SPF级实验动物中心。口服给药7天后，进行相关的行为学评定。在实验的全过程中，动物可自由进食，饮水。

数据分析：实验结果以（均值±标准差）表示，各组间结果进行单因素方差分析。

(1)开场实验

取小鼠60只，按体重随机分为6组，给予相应药物，动物连续灌胃给药7天。末次给药后1h，分别将小鼠置于开场实验中心点，记录5min内小鼠的跨格次数和中间四格停留时间。

(2)强迫小鼠游泳实验

有机玻璃缸高30cm，直径18cm，水深10cm，水温23±2℃。取小鼠60只，按体重随机分为6组，给予相应药物，动物连续灌胃给药7天。末次给药后1h，将小鼠放于水中游泳6min，用秒表记录后4min累积不动的时间。

(3)悬尾试验

小鼠在悬尾状态下很快会出现绝望行为，表现为不再挣扎，呈现特有的安静不动状态。取小鼠60只，按体重随机分为6组，给予相应药物，动物连续灌胃给药7天。末次给药后1h，分别将小鼠悬尾挂好后，适应1min，用秒表记录后5min内累计的不动时间。

3、实验结果

(1)开场实验

表2京尼平甲醚对小鼠开场实验的影响

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

(2)强迫游泳

表3京尼平甲醚对小鼠强迫游泳实验中绝望时间的影响

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE004

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

(3)悬尾实验

表4京尼平甲醚对小鼠悬尾实验中绝望时间的影响

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE005

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE006

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4、结论

(1)开场实验：结果表明，京尼平甲醚连续给药7天后，各给药组对小鼠的爬格次数物显著影响，其中，京尼平甲醚中剂量组（10mg/kg/d）、高剂量组（20mg/kg/d）及氟西汀组（2mg/kg/d）、京尼平组（20mg/kg/d）与对照组比较可以显著减少小鼠在开场实验箱中中间四格的停留时间（P<0.05）。

(2)强迫游泳：结果表明，京尼平甲醚低剂量（5mg/kg/d）与对照组比较，给药后4min内小鼠的绝望时间明显减少（P<0.05），中剂量组（10mg/kg/d）、高剂量组（20mg/kg/d）与对照组比较则有明显差异（P<0.01）。氟西汀对此模型无效。

(3)悬尾实验：结果表明，京尼平甲醚低剂量组（5mg/kg/d）与对照组比较，给药后5min内小鼠的绝望时间有明显减少（P<0.05），与对照药氟西汀一致，中剂量组（10mg/kg/d）、高剂量组（20mg/kg/d）与对照组比较有显著差异（P＜0.01）。

以上试验结果表明，京尼平甲醚具有抗抑郁作用。

实施例13京尼平甲醚抑制前炎症因子释放的实验研究

1、实验材料

实验细胞：正常人外周血单核细胞（PBMC）

受试药物：京尼平甲醚（来源于实施例3）、京尼平；

阳性对照：地塞米松（美国Sigma公司）

试剂：菲科帕克液（Ficoll-Paque Plus，Amersham Bioscinence）；内毒素（LPS，lipopolysaccaride）和地塞米松（DEX，CalBiochem）；TNF-αELISA Kit及IL-1βELISA Kit（晶美生物工程公司）；二甲基亚砜（DMSO）为美国Sigma公司产品；细胞培养基及胎牛血清Gibco公司产品

2、实验方法

新鲜血液以EDTA为抗凝剂，Ficoll分离血细胞，重悬细胞于含有10%胎牛血清的RIMP 1640培养基中。在96孔板中加入100μL密度为1×10⁵细胞每毫升新分离的细胞，每孔细胞总数为1×10⁴个，每个样品作3个孔。在细胞中加入不同浓度的京尼平甲醚（用DMSO溶解）（终浓度分别为0.1，1，10，100，1000μg/mL）、阳性对照（地塞米松，用DMSO溶解，10μM）或溶剂对照（0.1%DMSO）10μL。置于37℃含5%CO₂的培养箱中保温15min；加入100μg/mL的LPS 10μL，置于37℃含5%CO₂的培养箱中保温16h；以1000rpm的转速离心15min，将上清液转移入新的板中，测定TNF-α及IL-1β浓度；按下列公式计算抑制率(%)：

抑制率（%）=[1-（药物处理组—空白组）/（内毒素处理组—空白组）]×100%

3、实验结果，见表5-表7。

表5京尼平甲醚体外抑制TNF-α及IL-1β表达的活性

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE007

表6京尼平甲醚体外抑制TNF-α表达的剂量依赖关系

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE008

表7京尼平甲醚体外抑制IL-1β表达的剂量依赖关系

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE009

3、结论

以上实验结果表明，在正常人外周血单核细胞中京尼平甲醚能明显抑制内毒素诱导的前体炎症因子TNF-α及IL-1β的表达，京尼平甲醚对TNF-α及IL-1β的抑制呈剂量依赖关系。

实施例14京尼平甲醚和京尼平大鼠药代动力学实验

1、实验材料

受试药物：京尼平甲醚（来源于实施例1）、京尼平。

实验动物：清洁级Wistar大鼠，

共12只，随机分为两组，每组6只，分别给予京尼平甲醚和京尼平。

2实验方法

给药方式与剂量：灌胃，200mg/kg。

血样采集与处理：分别在给药前（0min）及给药后一定时间间隔由大鼠眼内眦静脉丛采血300μL，于4℃以8000rpm的转速离心10min，取上清100μL，加甲醇1000μL，涡旋60s；超声5min；8000rpm离心10min，取上清1000μL，40℃氮气吹干，残渣加甲醇200μL，涡旋30s复溶，待测。

检测方法：HPLC-UV法。色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CBC（4.6×150mm，5μm），流动相甲醇-水（含0.2%乙酸）77∶23，流速1mL/min，检测波长238nm，柱温30℃，进样量20μL。

3、结果

大鼠灌胃给予京尼平和京尼平甲醚后的血浆药物浓度经时变化如附图9所示；经DAS2.0软件处理得主要药动学参数，见表8。

表8大鼠灌胃给予京尼平和京尼平甲醚的血浆药动学参数（Mean±SD，n=6）

Figure 2012103641268100002DEST_PATH_IMAGE010

上述数据表明，京尼平经结构改造为京尼平甲醚后，其在大鼠体内的药物代谢与动力学性质显著改善，具体表现为口服吸收加快，清除率显著降低，消除减缓，体内驻留时间延长，C_max和AUC提高8~10倍。

实施例15京尼平苷和京尼平甲醚的血脑屏障透过性评价实验

1、实验材料

受试药物：京尼平甲醚（来源于实施例1）、京尼平。

实验动物：清洁级Wistar大鼠，共30只，随机分为两大组，每个大组再随机分为5个小组，每小组3只，分别给予京尼平甲醚和京尼平。

2、实验方法

给药方式与剂量：灌胃，200mg/kg。

生物样品采集：分别在给药前及给药后一定时间间隔断头处死大鼠，采集血浆和脑组织。

样品制备：（1）血浆样品：大鼠血液300μL，于4℃以8000rpm的转速离心10min，取上清100μL，加入甲醇1000μL，涡旋60s；超声5min；以8000rpm的转速离心10min，取上清1000μL，40℃氮气吹干，残渣加甲醇200μL，涡旋30s复溶，待测。（2）脑组织样品：小心剥净血管后，称重，按重量-体积1∶2加入生理盐水，在冰浴上以10000rpm的转速匀浆30s；取匀浆液500μL置5mL EP管中，加甲醇500μL，涡旋30s；再加乙腈2500μL，涡旋60s，超声5min，以8000rpm的转速离心10min，取上清液3300μL，40℃氮气吹干，残渣加流动相200μL，涡旋30s复溶，以8000rpm的转速离心10min，上清液待测。

测定方法：HPLC-UV。色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CBC（4.6×150mm，5μm），流动相甲醇-水（含0.2%乙酸）77∶23，流速1mL/min，检测波长238nm，柱温30℃，进样量20μL。

3、结果

测定给药大鼠的血浆及脑组织药物浓度，计算脑组织与血浆药物浓度的比值，作经时变化曲线，见图10。

结果表明，京尼平甲醚灌胃给予大鼠的血脑屏障透过性较京尼平显著改善，在给药1h左右脑血比值即达最大值（~2.0），并在给药后8h内维持相对稳定的较高值（~1.0），因此对于神经系统疾病可能获得显著优于京尼平的药效。

实施例16京尼平甲醚的显色实验

取1g京尼平甲醚，将其溶于10g乙酸乙酯中，制成浓度为10%的溶液，而后加入1g甘氨酸，搅拌，常温反应30min，未形成蓝色溶液或蓝色沉淀。

取1g京尼平甲醚，将其溶于10g乙酸乙酯中，制成浓度为10%的溶液，而后加入1g精氨酸，搅拌，常温反应30min，未形成蓝色溶液或蓝色沉淀。

取1g京尼平甲醚，将其溶于10g乙酸乙酯中，制成浓度为10%的溶液，而后加入1g赖氨酸，搅拌，常温反应30min，未形成蓝色溶液或蓝色沉淀。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.京尼平甲醚，其具有下式结构：

2.根据权利要求书1所述的京尼平甲醚，其特征在于，其C-1位的绝对构型为R型，结构式如下：

3.根据权利要求书1所述的京尼平甲醚，其特征在于，其C-1位的绝对构型为S型，结构式如下：

4.根据权利要求书1所述的京尼平甲醚，其特征在于，其为C-1位绝对构型为S型的京尼平甲醚和C-1位绝对构型为R型的京尼平甲醚的混合物。

5.根据权利要求书4所述的京尼平甲醚，其特征在于：C-1位绝对构型为S型的京尼平甲醚和C-1位绝对构型为R型的京尼平甲醚的混合比例为99%:1%到1%:99%。

6.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的京尼平甲醚以及可药用的载体。

7.权利要求1中京尼平甲醚的制备方法，其特征是包含以下步骤：取京尼平或京尼平苷一定量，按重量体积比溶于3-10倍量甲醇中，在搅拌下按重量体积比迅速加入3-10倍量1~2mol/L的盐酸甲醇溶液，室温下继续搅拌反应10~20min，立即倒入盛有用乙酸乙酯饱和过的水中，混匀，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，用水洗2~3次，减压蒸干，残余物行进行分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，即得。

8.根据权利要求7中所述的制备方法，其特征是还包括以下步骤：将权利要求7制备得到京尼平甲醚混合物经甲醇、乙醇或乙腈-水重结晶即得C-1位的绝对构型为S型的京尼平甲醚。

9.根据权利要求7中所述的制备方法，其特征是还包括以下步骤：将权利要求7制备得到京尼平甲醚混合物用制备高效液相色谱仪、C18键和硅胶色谱柱、或CG161树脂柱进行分离即得。

10.权利要求书1、2、3、4或5中所述化合物或权利要求6所述的药物组合物在制备治疗抑郁症、早老性痴呆、糖尿病、系统性红斑狼疮、硬皮病、结节病、皮肌炎、帕金森氏症、败血病、哮喘、牙周病、癌症或肝胆管疾病药物中的用途。