CN102106950A

CN102106950A - 一种女金胶囊提取浓缩过程质量控制方法

Info

Publication number: CN102106950A
Application number: CN2011100678590A
Authority: CN
Inventors: 耿炤; 胡浩武; 李胜华; 王木兰; 梅玲华; 孙晓波
Original assignee: Jiangxi Huiren Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Zhongchuang Medicine Science Co., Ltd.; Jiangxi Huiren Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-03-21
Filing date: 2011-03-21
Publication date: 2011-06-29
Anticipated expiration: 2031-03-21
Also published as: CN102106950B

Abstract

本发明提供一种女金胶囊提取浓缩过程质量控制方法，包括如下步骤：步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液中黄芪苷含量之间的对应模型；步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。

Description

一种女金胶囊提取浓缩过程质量控制方法

技术领域

本发明涉及中药质量控制领域，具体涉及一种中药女金胶囊提取浓缩生产过程黄芪苷质量控制方法。

技术背景

中药是我国最具有原创和自主知识产权的产业之一。中成药与饮片是中药的主要临床应用形式。由于中药疗效的物质基础的复杂性，中成药生产的质量控制技术手段较为粗放，体现在中成药的质量控制采用的是工艺制法控制，加上代表性的化学指标性成分定量检测和制剂定性检查。即，“过程上的定性加点上的定量”。没有全过程的以理化指标为基础的全面质量控制，这是导致中成药质量、临床疗效稳定性差的重要原因之一。

女金胶囊系由收录于《中国药典》的中药名方女金丸改剂而成，由当归、川芎等20味药组成，经现代工艺加工制成，具有调经养血、理气止痛作用，对月经不调、痛经、小腹胀痛、腰腿酸痛具有良好的疗效。女金胶囊制剂过程长，包括挥发油提取、乙醇回流、药渣煎煮、浓缩、混和、制粒、成型等过程。其制剂过程控制采用工艺参数控制。

近红外(NIR)光谱具有信息量大，但光谱信号重叠情况严重、物质状态信息干扰大的特点，必须依赖大量的波谱计算和分析才能应用于分析工作。因此，NIR技术在物质应用分析技术发展历史上曾经停步不前。伴随NIR光谱技术理论和分光技术的发展，同时借助计算机技术和化学计量学的发展，NIR光谱分析技术已经越来越进入到应用领域，并广泛用于化学、制药、食品工业的快速在线分析。NIR光谱定性定量检测技术是建立在传统理化分析手段基础上的二级分析方法，依赖于近红外光谱仪、计算机技术和化学计量学软件基础，是目前应用在化工烟草、石油等行业较为成熟的在线和快速检测手段。近红外光谱分析技术是绿色、快速、非破坏性的质量控制、品质分析和在线分析技术，已成为近年来发展最快的分析测试技术之一。但尚未有采用NIR光谱技术用于女金胶囊提取、浓缩液黄芪苷含量分析，进行过程质量控制的报道。

发明内容

为了进一步提高和稳定女金胶囊提取浓缩的生产质量，克服中成药无生产过程成分指标的在线控制，本发明应用近红外光谱技术对女金胶囊提取浓缩液指标成分进行连续取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的提取液指标成分的近红外模型。

本发明的质量控制方法，具体涉及一种快速测定女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；

步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液中黄芪苷含量之间的对应模型；

步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；

步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。

其中所述女金中药提取液的处方和制备方法如下，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60％乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30(50～60℃)以上的清膏。

其中步骤1中，女金中药提取浓缩液的制备及测定方法如下：

按女金胶囊处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60％乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30(50～60℃)以上的清膏，备用；上述回流提取和浓缩过程中，连续取样，样品采集近红外光谱，并测定黄芩苷含量；

本发明所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是1-1000次扫描的平均结果，分辨率0.3-20nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是200-500次扫描的平均结果，分辨率1-5nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是300次扫描的平均结果，分辨率2nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，以现场取样方式、在线取样方式和旁线取样方式之一进行。

本发明所述的方法，其特征在于：黄芪苷含量的测定条件为：采用RP-HPLC对连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，色谱柱YMC ODS分析柱(6×150mm，5μm，柱温25℃)，流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液(42.5∶57.5)，进样体积20uL，流速1ml/min，UV检测波长276nm。

本发明所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证。

本发明所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证；(4)精密度试验；(5)稳定性试验。

本发明应用NIR光谱技术对中药女金胶囊提取、浓缩过程中指标成分黄芪苷进行连续取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的女金胶囊提取、浓缩液指标成分的近红外模型。该方法为女金胶囊提取浓缩过程中指标成分快速定量分析和生产过程中的在线检测，控制产品的质量提供了有效的分析方法。

附图说明

图1黄芩苷对照品HPLC图

图2女金胶囊回流提取液样品HPLC图

图3女金胶囊浓缩液HPLC图

图4女金胶囊回流提取液NIR原始总光谱图

图5女金胶囊浓缩液NIR原始总光谱图

图6女金胶囊回流提取液NIR图的一阶导数光谱图

图7女金胶囊浓缩液NIR图的一阶导数光谱图

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明，但不表明对本发明权利要求的限制。

实施例1

仪器与试药

仪器AOTF Luminar 5030-731近红外光谱分析仪(美国BRIMROSE公司)，配套使用的SNAP光谱采集软件和CAMO化学计量学软件；Aglient1100色谱仪(美国Agilent公司)，DAD二极管阵列检测器；多功能提取罐(常熟市医药化工设备总厂)。

试药当归、白芍、川芎、熟地黄、党参、白术(炒)、茯苓、甘草、肉桂、益母草、牡丹皮、没药(制)、蒿本、白芷、延胡索(醋制)、黄芩、白薇、香附(醋制)、砂仁、陈皮、赤石脂(煅)、鹿角霜、阿胶(江西汇仁药业有限公司)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水。

方法与结果

1样品制备与收集

按照处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60％乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30(50～60℃)以上的清膏，备用。上述回流提取和浓缩过程中，每4min取样一次，样品采集近红外光谱，并测定黄芩苷含量，分别取样50份、40份。

2样品黄芪苷含量分析

采用RP-HPLC对连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，分析条件：色谱柱YMC ODS分析柱(6×150mm，5μm，柱温25℃)，流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液(42.5∶57.5)，进样体积20uL，流速1ml/min，UV检测波长276nm。重现性变异系数为0.13％(n＝3)，图谱见附图1-附图3。校正集样品结果带入软件建立模型，验证集样品用于模型验证。

3获取NIR光谱

扫描光谱时在样品溶液中浸入NIR光谱仪自带的光纤透射式探头，光纤长2m，待溶液稳定并无气泡后进行扫描。测试条件为：扫描次数300次，分辨率2nm，扫描光谱范围为1100～2300nm。回流提取及浓缩液样品总光谱图，分别见附图4，附图5。

4建立模型

4.1光谱预处理对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线漂移的影响。采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)，一阶导数光谱图见附图6，附图7。经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂移。

4.2建立PLS1数学模型回流提取和浓缩样品分别顺序编号，随机分别选择8个作为外部验正集样品，其余作为建模样品。将经过预处理后的光谱数据与HPLC分析数据进行关联，采用偏最小二乘法(PLS1)，交叉-验证法

(cross-validation)，用Unscrambler定量分析软件建立模型。NIR和HPLC测定的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差Residual这2个统计量来检验剔除。经过异常值的剔除进行优化，得到较为理想的校正模型。得到的样品黄芩苷的NIR光谱预测值与HPLC分析值之间相关性良好，测定数据偏差较小。回流提取液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2＝0.9794，RMSECV＝0.066506；浓缩液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2＝0.9855，RMSECV＝0.115755。

4.3模型预测效果验证以建立的校正模型对外部验正集样品进行分析。样品黄芩苷的测试结果分别见表1，表2。NIR光谱预测值与样品黄芩苷HPLC测定真值的相关系数R2分别为0.9969，0.9844。结果表明，NIR光谱预侧值与样HPLC分析值之间相关性良好。

表1回流提取液黄芩苷含量校正模型外部验证结果mg·ml^-1

表2浓缩液黄芩苷含量校正模型外部验证结果mg·ml^-1

5精密度试验

各取1个提取、浓缩预测样品，重复扫描20次，将所得光谱带入建立的校正模型计算含量，以考察方法的精密度，结果提取液与浓缩液黄芩苷含量的RSD分别为1.93％，1.86％，说明仪器精精密度良好。

6稳定性试验

各取1个提取、浓缩预测样品，每1h扫描一次，于5h内重复扫描5次，考察样品的稳定性。结果表明，样品回流提取液与浓缩液黄芩苷含量的RSD分别为为1.16％，1.07％，说明样品在5h内相对稳定。

7预测回收率试验

各取1个提取、浓缩预测样品，分别扫描，将所得光谱带入建立的校正模型，计算黄芩苷预测值与HPLC测定的真值之间的比值(预测回收率)，提取液与浓缩液黄芩苷的预测回收率分别为99.3％，99.6％。

本例建立的AOTF-近红外光谱测定女金胶囊提取、浓缩液中黄芪苷的方法，集快速、直接、多成分同时测定和能够实现现场分析为一体，解决了女金胶囊提取浓缩过程中定量分析的操作复杂、分析周期长，不能用于在线检测的问题，各项分析参数能够满足药品生产过程中含量测定的要求。

NIR光谱模型及其分析手段的建立是一个动态的过程，通过样本的数量不断增加，样本的代表性增强，可以建立更加稳定的模型，其分析结果会更加稳定和准确。本研究为进一步实现女金胶囊制剂生产过程中的理化指标的在线质量控制提供了有效方法和技术基础。

Claims

1.一种测定女金中药提取浓缩液中黄芪苷的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是1-1000次扫描的平均结果，分辨率0.3-20nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是200-500次扫描的平均结果，分辨率1-5nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是300次扫描的平均结果，分辨率2nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：黄芪苷含量的测定条件为：采用RP-HPLC对连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，色谱柱YMC ODS分析柱(6×150mm，5μm，柱温25℃)，流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液(42.5∶57.5)，进样体积20uL，流速1ml/min，UV检测波长276nm。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证；(4)精密度试验；(5)稳定性试验。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤如下：

步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；样品制备与收集

样品黄芪苷含量分析

获取NIR光谱

光谱预处理对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线漂移的影响。采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)，一阶导数光谱图见附图6，附图7。经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂移。

建立PLS1数学模型回流提取和浓缩样品分别顺序编号，随机分别选择8个作为外部验正集样品，其余作为建模样品。将经过预处理后的光谱数据与HPLC分析数据进行关联，采用偏最小二乘法(PLS1)，交叉-验证法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析软件建立模型。NIR和HPLC测定的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差Residual这2个统计量来检验剔除。经过异常值的剔除进行优化，得到较为理想的校正模型。得到的样品黄芩苷的NIR光谱预测值与HPLC分析值之间相关性良好，测定数据偏差较小。回流提取液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2＝0.9794，RMSECV＝0.066506；浓缩液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2＝0.9855，RMSECV＝0.115755。

步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：其中步骤1中，女金中药提取浓缩液的制备及测定方法如下：

按女金胶囊处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60％乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30(50～60℃)以上的清膏，备用；上述回流提取和浓缩过程中，连续取样，样品采集近红外光谱，并测定黄芩苷含量。