CN102106888B - 一种中药杏香兔耳风提取过程质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种中药杏香兔耳风提取过程质量控制方法，包括如下步骤：步骤1、测定合格杏香兔耳风提取液中绿原酸含量，并采集近红外光谱；步骤2、采用化学计量学软件分别建立杏香兔耳风提取液近红外光谱与绿原酸含量之间的对应模型；步骤3、测定待测的绿原酸含量样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件分别获得待测的绿原酸含量样品中绿原酸含量的含量。

Description

一种中药杏香兔耳风提取过程质量控制方法

技术领域

本发明涉及中药质量控制领域，具体涉及一种中药杏香兔耳风提取生产过程绿原酸质量控制方法。

技术背景

中药是我国最具有原创和自主知识产权的产业之一。中成药与饮片是中药的主要临床应用形式。由于中药疗效的物质基础的复杂性，中成药生产的质量控制技术手段较为粗放，体现在中成药的质量控制采用的是工艺制法控制，加上代表性的化学指标性成分定量检测和制剂定性检查。即，“过程上的定性加点上的定量”。没有全过程的以理化指标为基础的全面质量控制，这是导致中成药质量、临床疗效稳定性差的重要原因之一。

杏香兔耳风为为菊科兔耳风属植物杏香兔耳风A insliaea fragrans Champ.的干燥全草，有清热解毒、舒筋活血、发表祛风等功效，主治妇女崩漏，痈疽肿毒，毒蛇咬伤[1]，临床上用于治疗湿热下注之带下病、慢性宫颈炎等诸多病症[2]。作为江西习产的妇科药材，杏香兔耳风品种来源及繁殖一直是影响该药材应用的一个因素，江西省林科院开展了江西省科技专项“杏香兔耳风等森林中药材GAP种植技术及产业化开发”，进行了杏香兔耳风繁殖技术的研究，并获得成果鉴定[3]。该药材目前的标准只有简单的理化鉴别，还未建立薄层鉴别和有效成分的含量测定标准。杜艳龙等建立了以3，5-二咖啡酰基奎宁酸含量和鉴别为主的杏香兔耳风提取物的质量标准方法[4]。

近红外(NIR)光谱具有信息量大，但光谱信号重叠情况严重、物质状态信息干扰大的特点，必须依赖大量的波谱计算和分析才能应用于分析工作。因此，NIR技术在物质应用分析技术发展历史上曾经停步不前。伴随NIR光谱技术理论和分光技术的发展，同时借助计算机技术和化学计量学的发展，NIR光谱分析技术已经越来越进入到应用领域，并广泛用于化学、制药、食品工业的快速在线分析。

NIR光谱定性定量检测技术是建立在传统理化分析手段基础上的二级分析方法，依赖于近红外光谱仪、计算机技术和化学计量学软件基础，是目前应用在化工烟草、石油等行业较为成熟的在线和快速检测手段。近红外光谱分析技术是绿色、快速、非破坏性的质量控制、品质分析和在线分析技术，已成为近年来发展最快的分析测试技术之一。但尚未有采用NIR光谱技术用于杏香兔耳风提取液绿原酸含量分析，进行过程质量控制的报道。

发明内容

为了进一步提高和稳定杏香兔耳风提取的生产质量，克服中成药无生产过程的在线控制，本发明应用近红外光谱技术对杏香兔耳风提取液指标成分进行连续取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的提取液指标成分的近红外模型。

本发明的质量控制方法，具体涉及一种快速测定杏香兔耳风提取液中绿原酸含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1、测定合格杏香兔耳风提取液中绿原酸含量，并采集近红外光谱；

步骤2、采用化学计量学软件分别建立杏香兔耳风提取液近红外光谱与绿原酸含量之间的对应模型；

步骤3、测定待测的绿原酸含量样品的近红外光谱；

步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件分别获得待测的绿原酸含量样品中绿原酸含量的含量。

所述杏香兔耳风提取液制备和测定方法步骤如下：

取药材，以水作溶剂共热提取，现场收集浓缩液，取样测定绿原酸含量，同时采集近红外光谱。

本发明所述的方法，其特征在于：采集中药杏香兔耳风提取液近红外光谱时，采用透射方式进行，每一张光谱都是1-1000次扫描的平均结果，分辨率0.3-20nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集中药杏香兔耳风提取液近红外光谱时，采用透射方式进行，每一张光谱都是200-500次扫描的平均结果，分辨率1-5nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集中药杏香兔耳风提取液近红外光谱时，采用透射方式进行，每一张光谱都是300次扫描的平均结果，分辨率2nm，扫描光谱范围为1100-2300nm。

本发明所述的方法，其特征在于：采集中药杏香兔耳风提取液近红外光谱时，以现场取样方式、在线取样方式和旁线取样方式之一进行。

本发明所述的方法，其特征在于：所述绿原酸的测定条件为：取杏香兔耳风提取液1ml至10ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为供试品；另称取绿原酸对照品9.58mg至10ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度，取1ml至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，配成95.8ug/ml对照品溶液，再稀释成9.58ug/ml浓度溶液作为对照品溶液；照紫外测定法，于328nm处测定吸收度，以外标法对供试品绿原酸类成分进行含量测定。

本发明所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证。

本发明所述的方法，其特征在于：步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLS1)、交叉-验证法(cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验证；(4)精密度试验；(5)稳定性试验。

本发明应用NIR光谱技术对中药杏香兔耳风提取过程中指标成分绿原酸进行连续取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的杏香兔耳风提取液指标成分的近红外模型。该方法为杏香兔耳风提取过程中指标成分快速定量分析和生产过程中的在线检测，控制产品的质量提供了有效的分析方法。

附图说明

图1杏香兔耳风提取液样品近红外光谱原始总光谱图

图2杏香兔耳风提取液样品近红外光谱一阶导数光谱图

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明，但不表明对本发明权利要求的限制。

实施例1

仪器与试药

仪器 AOTF Luminar 5030-731近红外光谱分析仪(美国BRIMROSE公司)，配套使用的SNAP光谱采集软件和CAMO化学计量学软件；PE Lambda 25紫外分光光度仪(美国珀金埃尔默仪器有限公司)，多功能提取罐(常熟市医药化工设备总厂)。

试药 杏香兔耳风药材(江西汇仁药业有限公司)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇为分析纯试剂，水为超纯水。

方法与结果

1样品制备与收集

取药材杏香兔耳风置多功能提取罐内，加入20倍量水，浸渍60分钟，煎煮1.5小时，过滤，药渣加水15倍量，煎煮1.5小时，过滤，合并滤液。提取过程中每3分钟用取样器取50ml提取液，采集近红外光谱，并进行绿原酸类成分含量测定。

2样品绿原酸类成分UV分析

取杏香兔耳风提取液1ml至10ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为供试品。另称取绿原酸对照品9.58mg至10ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度，取1ml至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，配成95.8ug/ml对照品溶液，再稀释成9.58ug/ml浓度溶液作为对照品溶液。照紫外测定法，于328nm处测定吸收度，以外标法对供试品绿原酸类成分进行含量测定。

3获取NIR光谱

扫描光谱时在样品溶液中浸入NIR光谱仪自带的光纤透射式探头，光纤长2m，待溶液稳定并无气泡后进行扫描。测试条件为：扫描次数300次，分辨率2nm，扫描光谱范围为1100～2300nm，共得到61个样品的总光谱图，见附图1。

4建立模型

4.1光谱预处理 对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线漂移的影响。采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)。一阶导数光谱图见附图2。经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂移。

4.2建立PLS1数学模型 样品顺序编号，随机选择8个作为外部验正集样品，其余作为建模样品。将经过预处理后的光谱数据与HPLC分析数据进行关联，采用偏最小二乘法(PLS1)，交叉-验证法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析软件建立模型。NIR和HPLC测定的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差Residual这2个统计量来检验剔除。经过异常值的剔除进行优化，得到较为理想的校正模型。得到的样品绿原酸类成分的NIR光谱预测值与样品绿原酸类成分实测值之间相关性良好，测定数据偏差较小。样品绿原酸类成分模型的主成分维数为6，R2＝0.9411，RMSECV＝86.33807。

4.3模型预测效果验证 以建立的校正模型对8份外部验正集样品进行分析。样品绿原酸类成分的测试结果分别见表1。NIR光谱预测值与样品绿原酸类成分测定真值的相关系数R2分别为0.992。结果表明，NIR光谱预侧值与样品绿原酸类成分实测值之间相关性良好。

表1绿原酸校正模型对外部验证集样品的分析结果

5精密度试验

取1个预测样品，重复扫描20次，将所得光谱带入建立的校正模型计算含量，以考察方法的精密度，结果提取液绿原酸类成分含量的RSD为2.58％，说明仪器精精密度较好。

6稳定性试验

取1个预测样品，每1h扫描一次，于5h内重复扫描5次，考察样品的稳定性。结果样品绿原酸类成分含量的RSD为1.08％，说明样品在5h内相对稳定。

7预测回收率试验

取5个预测样品，分别扫描，将所得光谱带入建立的校正模型，计算绿原酸类成分预测值与UV测定的真值之间的比值(预测回收率)，样品绿原酸类成分的预测回收率分别为104.1％。

本例建立的AOTF-近红外光谱测定杏香兔耳风提取液中绿原酸类成分的新方法，集快速、直接、多成分同时测定和能够实现现场分析为一体，解决了杏香兔耳风提取过程中定量分析的操作复杂、分析周期长，不能用于在线检测的问题，各项分析参数能够满足药品生产过程中含量测定的要求。

由于本例采用了UV定量方法，加之NIR光谱模型及其分析手段的建立是一个动态的过程，通过样本的数量不断增加，样本的代表性增强，可以建立更加稳定的模型，其分析结果会更加稳定和准确。本方法将为中药生产的的在线质量控制提供有效的分析方法和借鉴。

Claims (1)

1.一种测定杏香兔耳风提取液中绿原酸含量的方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1、测定合格杏香兔耳风提取液中绿原酸含量，并采集近红外光谱；

样品制备与收集

取药材杏香兔耳风置多功能提取罐内，加入20倍量水，浸渍60分钟，煎煮1.5小时，过滤，药渣加水15倍量，煎煮1.5小时，过滤，合并滤液，提取过程中每3分钟用取样器取50ml提取液，采集近红外光谱，并进行绿原酸类成分含量测定，

样品绿原酸类成分UV分析

取杏香兔耳风提取液1ml至10ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为供试品，另称取绿原酸对照品9.58mg至10ml容量瓶，用甲醇稀释至刻度，取1ml至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，配成95.8ug/ml对照品溶液，再稀释成9.58ug/ml浓度溶液作为对照品溶液，照紫外测定法，于328nm处测定吸收度，以外标法对供试品绿原酸类成分进行含量测定，

获取NIR光谱

扫描光谱时在样品溶液中浸入NIR光谱仪自带的光纤透射式探头,光纤长2m ,待溶液稳定并无气泡后进行扫描，测试条件为：扫描次数300次,分辨率2nm ,扫描光谱范围为1100～2300 nm，共得到61个样品的总光谱图,

步骤2、采用化学计量学软件分别建立杏香兔耳风提取液近红外光谱与绿原酸含量之间的对应模型；

光谱预处理  对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线漂移的影响，采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法savitzky-golay，一阶导数光谱图，经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂移，

建立PLS1数学模型　样品顺序编号，随机选择8个作为外部验正集样品，其余作为建模样品，将经过预处理后的光谱数据与UV分析数据进行关联,采用偏最小二乘法PLS1 ,交叉-验证法cross-validation ,用Unscrambler定量分析软件建立模型，NIR和UV测定的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差Residual这2个统计量来检验剔除，经过异常值的剔除进行优化,得到较为理想的校正模型，得到的样品绿原酸类成分的NIR光谱预测值与样品绿原酸类成分实测值之间相关性良好,测定数据偏差较小，样品绿原酸类成分模型的主成分维数为6,R2=0.9411, RMSECV= 86.33807，

步骤3、测定待测的绿原酸含量样品的近红外光谱；

步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件分别获得待测的绿原酸含量样品中绿原酸含量的含量。

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