CN113125629B - 一种同时鉴别兔耳风多来源的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明揭示了一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，包括：取兔耳风粉末，加醇，加热回流，冷却、过滤，乙酸乙酯振摇提取过滤液，分取乙酸乙酯液、蒸干，取残渣并加入乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；取毛大丁草粉末作为对照，制备过程同上，制得对照溶液；吸取供试品溶液、对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上，采用展开剂展开，取出、晾干并喷以显色剂、氨蒸汽，晾干，置紫外光下检视；供试品溶液色谱在与对照溶液色谱在相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。本发明可鉴别出钩苞大丁草、大丁草作为兔耳风药材新的来源，且不受温、湿度影响，鉴别结果稳定，重复性好，实用性佳。

Description

一种同时鉴别兔耳风多来源的方法
技术领域
本发明属于药材薄层色谱鉴别技术领域，具体涉及一种同时鉴别兔耳风多来源(毛大丁草、芶苞大丁草、大丁草)的方法。
背景技术
兔耳风是我国西南地区少数民族常用药物，在贵州省用药尤其广泛，民间习以将来源于菊科植物的毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.、钩苞大丁草Gerberadelavayi Franch.或大丁草Gerbera anandria(L.)Sch.-Bip.的干燥全草作为兔耳风药材入药，均具有良好的疗效。上述三种原植物在云南、四川、贵州各地苗乡等均有广泛分布，资源丰富。来源于上述三种原植物的兔耳风均具有宣肺止咳，发汗利水，行气活血的功效，用于伤风咳嗽，哮喘，水肿胀满，小便不利，小儿食积等疾病，具有良好的用药价值和开发前景。
兔耳风的来源鉴定对兔耳风药材的质量控制具有重要意义。本发明的发明人发现目前的鉴别方法仅能针对单一来源的兔耳风药材进行，不适用多来源的兔耳风鉴别，针对多来源的兔耳风药材，鉴别人员需重复多次鉴别操作，才可将兔耳风来源逐一鉴别开来，鉴别效率低，鉴别效率不稳定。因此，如何提供一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，鉴别高效，鉴别结果准确且稳定性佳，就成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，可以鉴别钩苞大丁草、大丁草作为兔耳风药材新的来源，操作便捷、高效，鉴别结果准确、稳定性佳，重复性好，实用性佳。
本发明的目的，将通过以下技术方案得以实现：
本发明揭示了一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末0.5g-2.0g，加浓度为15％-45％的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入0.5ml-2ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末0.5g-2.0g作为对照，加浓度为15％-45％的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入1ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：吸取1μl-15μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用体积比为甲苯：氯仿：乙醚：甲醇＝1-3：4-7：1-3：0.05-0.2的展开剂展开，取出、晾干并喷以显色剂、氨蒸汽，晾干，置紫外光下检视；
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱的相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。
进一步地，步骤S1中添加浓度为25％的甲醇。
进一步地，步骤S3中所述显色剂为1wt％-5wt％的氢氧化钠甲醇溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液。
进一步地，所述显色剂为1wt％-5wt％的氢氧化钠甲醇溶液。
进一步地，步骤S3中所述紫外光波长为365nm。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下的优点：
本发明提供的鉴别方法可以鉴别钩苞大丁草、大丁草作为兔耳风药材新的来源，且不受温、湿度影响，操作便捷、高效，鉴别结果准确、稳定性佳，重复性好，实用性佳。
附图说明
图1为本发明的流程图；
图2为本发明实施例1的薄层色谱图；
图3为本发明实施例1-3在不同湿度下的薄层色谱图；
图4为本发明实施例1-3在不同温度下的薄层色谱图；
图5为本发明实施例1-3在不同制备时间下的薄层色谱图；
图6为本发明实施例1-3在不同批次下的薄层色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体的实施方式对本发明作进一步详细的说明。所述实施例的示例在附图中示出，在下述本发明的实施方式中描述的具体的实施例仅作为本发明的具体实施方式的示例性说明，旨在用于解释本发明，而不构成为对本发明的限制。
本发明提供了一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，如图1所示，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末0.5g-2.0g，加浓度为15％-45％的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入0.5ml-2ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末0.5g-2.0g作为对照，加浓度为15％-45％的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入1ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：吸取1μl-15μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用体积比为甲苯：氯仿：乙醚：甲醇＝1-3：4-7：1-3：0.05-0.2的展开剂展开，取出、晾干并喷以显色剂、氨蒸汽，晾干，置于波长为365nm的紫外光下检视；
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱的相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。
优选地，步骤S3中所述显色剂为1wt％-5wt％的氢氧化钠甲醇溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液。
本发明可以鉴别钩苞大丁草、大丁草作为兔耳风药材新的来源，操作便捷、高效，鉴别结果准确，可重复使用。
实施例1
本实施例提供一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末1g，加浓度25％的甲醇50ml，加热70℃-90℃回流1h，冷却、过滤，过滤液用40ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入1ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末1g，加浓度25％的甲醇50ml，加热70℃-90℃回流1h，冷却、过滤，过滤液用40ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入1ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：分别吸取10μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用甲苯：氯仿：乙醚：甲醇＝体积比2：6：2：0.1的展开剂展开，取出、晾干并喷以1wt％的氢氧化钠甲醇溶液、氨蒸汽，晾干，置波长365nm的紫外光下检视。
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱在相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点，如图2所示。图2中，1为毛大丁草、2为钩苞大丁草、3为大丁草，4为对照药材，图2的薄层色谱图可表明供试品中的兔耳风同时来源于毛大丁草、芶苞大丁草、大丁草。
实施例2
本实施例提供一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末0.5g，加浓度15％的乙醇25ml，加热70℃-90℃回流0.5h，冷却、过滤，过滤液用20ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入0.5ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末0.5g，加浓度15％的乙醇25ml，加热70℃-90℃回流0.5h，冷却、过滤，过滤液用20ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入0.5ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：吸取6μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用甲苯：氯仿：乙醚：甲醇＝体积比1：4：1：0.05的展开剂展开，取出、晾干并喷以1wt％的碳酸钠溶液、氨蒸汽，晾干，置波长365nm的紫外光下检视；
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。
实施例3
本实施例提供一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末2g，加浓度45％的甲醇100ml，加热70℃-90℃回流2h，冷却、过滤，过滤液用80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入2ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末2g，加浓度45％的甲醇100ml，加热70℃-90℃回流2h，冷却、过滤，过滤液用80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入2ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：吸取15μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用甲苯：氯仿：乙醚：甲醇＝体积比3：7：3：0.2的展开剂展开，取出、晾干并喷以5wt％的氢氧化钠溶液、氨蒸汽，晾干，置波长365nm的紫外光下检视。
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱相应的位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。
上述实施例1-3采用不同浓度硫酸调节展开环境的相对湿度至32％、58％、72％，并在25℃温度下分别检验上述三种相对湿度环境下的展开效果和鉴定结果，如图3所示。图3中，从左至右各图的展开环境相对湿度分别为32％、58％、72％，各图中1为毛大丁草、2为钩苞大丁草、3为大丁草，4为对照药材，由图3可知，不同湿度下各色谱图的条带清晰，Rf值有一定差异，但均能较好的鉴别，表明本发明提供的同时鉴别方法基本不受湿度影响。
上述实施例1-3中，相对湿度均为58％并在10℃、25℃、35℃展开，分别检验不同温度下的展开效果和鉴定结果，如图4所示。图4中，从左至右各图的环境温度分别为10℃、25℃、35℃，各图中1为毛大丁草、2为钩苞大丁草、3为大丁草，4为对照药材，由图4可知，不同温度下各色谱图的条带清晰，Rf值差异不明显，表明本发明提供的同时鉴别方法不受温度影响。
上述实施例1-3中，取同一批次的毛大丁草、芶苞大丁草、大丁草并分别于实验3天前、2天前、1天前和实验当天制成供试品溶液，分别点滴在同一硅胶G板上并展开、显色，结果如图5所示。图5中，从左至右各图分别对应同一批次的毛大丁草、芶苞大丁草、大丁草，各图中1为实验当天、2为放置1天、3为放置2天、4为放置3天，5为对照药材，由图5可知，放置1-3天的供试品溶液展开后的色谱图基本一致，表明供试品溶液在3天内稳定性良好。
上述实施例1-3中，取12批药材分别进行鉴别，结果如图6所示。图6中，左图1-6批样品按序依次为：毛大丁草S1、毛大丁草S2、钩苞大丁草S3、钩苞大丁草S4、大丁草S5、大丁草S6，右图7-12批样品按序依次为：毛大丁草S7、毛大丁草S8、毛大丁草S9、钩苞大丁草S10、钩苞大丁草S11、大丁草S12，13为对照药材。由图6可知，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱中显相同颜色的荧光主斑点，分离度好，斑点显色清晰，表明本发明提供的鉴别方法重复性好，稳定性佳，实用性佳。
综上所述，本发明提供的鉴别方法可以鉴别钩苞大丁草、大丁草作为兔耳风药材新的来源，且不受温、湿度影响，操作便捷、高效，鉴别结果准确、稳定性佳，重复性好，实用性佳。
应该注意的是，上述实施例是对本发明进行说明而不是对本发明进行限制，并且本领域技术人员在不脱离所附权利要求的范围的情况下可设计出替换实施例。因此，应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内，不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。在权利要求中，单词“包括”不排除存在未列在权利要求中的数据或步骤。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种同时鉴别兔耳风多来源的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1，供试品溶液制备：取兔耳风粉末0.5g-2.0g，加浓度为15%-45%的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入0.5ml-2ml乙酸乙酯溶解，制得所述供试品溶液；所述兔耳风粉末选自毛大丁草、芶苞大丁草或大丁草中任一种；
步骤S2，对照溶液制备：取毛大丁草粉末0.5g-2.0g作为对照，加浓度为15%-45%的甲醇或乙醇25ml-100ml，加热70℃-90℃回流0.5h-2h，冷却、过滤，过滤液用20ml-80ml乙酸乙酯通过振摇提取，分取乙酸乙酯液、蒸干，取蒸干后的残渣并加入1ml乙酸乙酯溶解，制得所述对照溶液；
步骤S3，薄层色谱鉴别：吸取1μl-15μl的所述供试品溶液、所述对照溶液，分别点滴在同一硅胶G薄层板上并呈条带状，采用体积比为甲苯：氯仿：乙醚：甲醇= 1-3：4-7：1-3：0.05-0.2的展开剂展开，取出、晾干并喷以显色剂、氨蒸汽，晾干，置紫外光下检视；所述显色剂为1wt%-5wt%的氢氧化钠甲醇溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液；
步骤S4，结果分析：所述供试品溶液色谱在与所述对照溶液色谱的相对应位置处，显出相同颜色的荧光主斑点。
2.根据权利要求1所述的同时鉴别兔耳风多来源的方法，其特征在于：步骤S1中添加浓度为25%的甲醇。
3.根据权利要求1所述的同时鉴别兔耳风多来源的方法，其特征在于：所述显色剂为1wt%-5wt %的氢氧化钠甲醇溶液。
4.根据权利要求1所述的同时鉴别兔耳风多来源的方法，其特征在于：步骤S3中所述紫外光波长为365nm。
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