CN102103122B - 一种电化学农药残留快速检测仪及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及食品安全技术领域，尤其涉及一种农药检测技术。一种电化学农药残留快速检测仪，包括农药检测模块、与农药检测模块连接的微型处理器系统，农药检测模块包括乙酰胆碱酯酶生物传感器，乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输出端连接微型处理器系统的信号输入端，微型处理器系统连接显示器。由于采用上述技术方案，本发明的检测系统是根据酶催化底物发生反应产生电流的变化进行检测的，不会受到蔬果中色素的干扰，因此样品的提取与处理比较简单；本发明检测农药残留时具有灵敏度高、操作简单、检测结果显示直观、实现自动化检测等优点。

Description

一种电化学农药残留快速检测仪及其检测方法

技术领域

本发明涉及食品安全技术领域，尤其涉及一种农药残留检测技术。

背景技术

随着我国经济的快速稳定增长，人民生活水平不断提高，对食物消费的要求也越来越高。回归大自然、消费无公害食品，已成为新时期消费的潮流和市场走向。但是环境污染对农产品的卫生质量造成了很大威胁，食物中毒事件不断见诸报道，已引起人们的广泛关注。

为了保障人们的食用安全，很多农产品批发市场、宾馆、饭店等场所都应用检测设备检测农产品的农药残留情况。目前，我国农药残留的速测方法是酶抑制试纸法和酶抑制分光光度法(农残快速检测仪)，可以实现有机磷农药及氨基甲酸酯类农药的现场快速检测，具有较好的实用价值。速测卡是通过肉眼观察卡片的颜色变化，因此一般只能用于严重超标的蔬菜样品进行定性测量。酶抑制分光光度法的应用也比较广泛，国内已有多种农药残留速测仪均是基于此原理。分光光法的原理是基于吸光度的变化进行检测的，但蔬菜水果中大量的色素会对分光光度法造成很大的影响，导致检测结果的不准确。但是上述方法存在回收率低、错检、漏检比例较高、重复性差、难以满足低残留和定量检测的要求等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种电化学农药残留快速检测仪，以解决上述技术问题。

本发明的另一目的在于提供一种电化学农药残留检测方法，以解决上述技术问题。

本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：

一种电化学农药残留快速检测仪，包括一农药检测模块，一与所述农药检测模块连接的微型处理器系统，所述农药检测模块包括一乙酰胆碱酯酶生物传感器，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输出端连接所述微型处理器系统的信号输入端，所述微型处理器系统连接一显示器；

乙酰胆碱酯酶生物传感器将放入含有农药的样品液前后的电流信号传送给微型处理器系统，微型处理器系统将所述电流信号进行处理，得到农药浓度，并将所述农药浓度显示在显示器上，供查看。

所述乙酰胆碱酯酶生物传感器采用一三电极体系结构的传感器，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器包括一玻碳电极、一参比电极、一对电极，所述玻碳电极上固定有壳聚糖膜，所述壳聚糖膜上固定有乙酰胆碱酯酶；

将工作电压施加在所述玻碳电极和所述参比电极之间时，所述玻碳电极和所述对电极之间产生电流信号，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器将所述电流信号传送给所述微型处理器系统，所述微型处理器系统将所述电流信号进行处理，得到农药浓度，并将所述农药浓度显示在显示器上，供查看。

本发明采用所述乙酰胆碱酯酶生物传感器来检测农药浓度，检测快速、方便，且检测精度高，本发明实现小型、便捷、适用于现场检测的目的。可以蔬果在采收、上市前，采用本发明进行农药残留的快速测定，直接对有机磷农药残留是否超标量进行检测，避免因食含有残留农药的蔬果而引起中毒，为农产品安全生产与消费提供残留检测的技术支撑。

所述壳聚糖膜采用以下方法制得：将醋酸纤维膜置于0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，3℃下浸泡48h以上，完成醋酸纤维膜的预处理；取0.1g壳聚糖粉末，加入10ml 1％(m/m)的醋酸水溶液，搅拌10min至形成黄色的溶胶；室温下3000r/min离心5min除去不溶颗粒；将所述醋酸纤维膜置于所述溶胶中浸泡12h，取出晾干后再置于0.1mol/L、pH8.0的PBS浸泡12h，取出晾干，制得所述壳聚糖膜。

将所述乙酰胆碱酯酶固定在所述壳聚糖膜上的固定方法采用以下方法：依次取200μL的AChE、20μL 5％(体积分数)的戊二醛、60μL1％(质量分数)的牛血清蛋白(BSA)于1mL塑料离心管中，离心管置于冰浴上；添加0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液720μL；将上述物质充分混匀，当液体的上部出现很多泡沫时，表示已经混匀，制得乙酰胆碱酯酶溶液；

取预先处理好的壳聚糖膜一片浸入该酶溶液中，4℃下保持8h；8h后，取出酶片，分别用0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液冲洗至少两次，直到液体中没有任何的泡沫为止；最后将酶片浸泡在0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，4℃下保存，制得酶膜，完成固定。

所述玻碳电极采用功能化多壁碳修饰，所述壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的所述玻碳电极上，从而在较低的电压下获得较高的氧化峰电流，有效地防止了其他氧化物的干涉，提高本发明农药残留检测的精度。所述功能化多壁碳修饰，采用如下方法：

1)多壁碳纳米管的功能化：称取10mg的多壁碳纳米管(MWNTs)，放入100mL的烧杯中，量取40mL浓HNO₃和H₂SO₄混合液(V∶V＝1∶3)加入所述烧杯中混合后，超声4h、120℃离心回流3h，水洗至中性，红外炉干燥，室温下保存待用；

2)所述玻碳电极修饰前，用0.3μm、30nm的Al₂O₃浆在麂皮上抛光至镜面，抛光后用双蒸水洗去表面污物，再移入超声水浴中清洗，每次2～3min，重复三次，最后依次用1∶1乙醇、1∶1HNO₃和去离子水超声清洗，氮气环境下干燥；

3)清洗后，所述玻碳电极要在0.5mol/L的H₂SO₄溶液中用循环伏安法活化，扫描范围为-0.6～1.0V，扫速0.1V/S，反复扫描直至达到稳定的循环伏安图为止；最后在0.20mol/L KNO₃中记录1×10^-3mol/L K₃Fe(CN)₆溶液的循环伏安曲线，以测试所述玻碳电极的性能，扫描速度50mV/S，扫描范围为-0.1V～0.6；当所述循环伏安曲线中的峰电位差在80mV以下，所述玻碳电极可使用，否则要重新处理所述玻碳电极，直到符合要求；

4)取2μL包含功能化的多壁碳纳米管0.12(w/v)％、壳聚糖0.48(w/v)％、戊二醛4.7(v/v)％的凝胶状混合物悬滴在清洗干净的所述玻碳电极表面，室温下干燥8h，随后用0.1mol L^-1磷酸盐缓冲液(pH 8.0)冲洗，4℃保存备用，完成所述玻碳电极的修饰。

所述微型处理器系统包括一单片机，所述单片机的信号输出端连接一D/A转化模块，所述D/A转化模块连接所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输入端；

所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输出端连接一I/V转换模块，所述I/V转换模块连接一差分放大电路，所述差分放大电路连接一低通滤波电路，所述低通滤波电路连接所述单片机的信号输入端。

所述单片机连接所述显示器，所述单片机还连接一按键组，通过所述按键组和所述显示器，选择蔬果品种和农药种类。

所述显示器可以采用液晶显示器。所述显示器的显示屏可以采用触摸显示屏。以便更好的实现人机互动。

所述单片机内置有抑制率和农药浓度的数学模型，所述单片机将所述乙酰胆碱酯酶生物传感器发送的电流信号进行处理，计算出蔬果的抑制率，根据抑制率和农药浓度的数学模型，得到蔬果的农药浓度。

一种电化学农药残留检测方法，包括以下步骤：

1)根据待测蔬果，选择匹配的蔬果品种和待测农药种类；

2)计算农药活性抑制率：将电化学农药残留快速检测仪的乙酰胆碱酯酶生物传感器放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₀；

再将乙酰胆碱酯酶生物传感器放入样品液中孵化10分钟，取出后用磷酸盐缓冲液冲洗干净，再放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₁；

计算乙酰胆碱酯酶在接触农药前后的活性抑制率，计算公式如下：

$I\%=\frac{I_0-I_1}{I_0}\×100\%;$

3)获得农药浓度：根据预设的抑制率和农药浓度的关系模型，获得农药的浓度；

4)显示：通过显示器显示农药的浓度。

所述乙酰胆碱酯酶生物传感器采用以下方法制作：将乙酰胆碱酯酶固定在壳聚糖膜上；采用功能化多壁碳修饰玻碳电极；将所述壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的所述玻碳电极上，制得乙酰胆碱酯酶生物传感器。

所述样品液通过榨取蔬果制得。

有益效果：由于采用上述技术方案，本发明的检测系统是根据酶催化底物发生反应产生电流的变化进行检测的，不会受到蔬果中色素的干扰，因此样品的提取与处理比较简单；本发明检测农药残留时具有灵敏度高、操作简单、检测结果显示直观、实现自动化检测等优点。

附图说明

图1为本发明一种电化学农药残留快速检测仪的电路示意图；

图2为本发明一种电化学农药残留检测方法的流程框图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本发明。

参照图1、图2，一种电化学农药残留快速检测仪，包括一农药检测模块，一与农药检测模块连接的微型处理器系统1，农药检测模块包括一乙酰胆碱酯酶生物传感器2，乙酰胆碱酯酶生物传感器2的信号输出端连接微型处理器系统1的信号输入端，微型处理器系统1连接一显示器3；乙酰胆碱酯酶生物传感器2将放入含有农药的样品液前后的电流信号传送给微型处理器系统1，微型处理器系统1将电流信号进行处理，得到农药浓度，并将农药浓度显示在显示器3上，共查看。

乙酰胆碱酯酶生物传感器2采用一三电极体系结构的传感器，乙酰胆碱酯酶生物传感器2包括一玻碳电极、一参比电极、一对电极，玻碳电极上固定有壳聚糖膜，壳聚糖膜上固定有乙酰胆碱酯酶；将工作电压施加在玻碳电极和参比电极之间时，玻碳电极和对电极之间产生电流信号，乙酰胆碱酯酶生物传感器2将电流信号传送给微型处理器系统1，微型处理器系统1将电流信号进行处理，得到农药浓度，并将农药浓度显示在显示器3上，共查看。本发明采用乙酰胆碱酯酶生物传感器2来检测农药浓度，检测快速、方便，且检测精度高，本发明实现小型、便捷、适用于现场检测的目的。可以蔬果在采收、上市前，采用本发明进行农药残留的快速测定，直接对有机磷农药残留是否超标量进行检测，避免因食含有残留农药的蔬果而引起中毒，为农产品安全生产与消费提供残留检测的技术支撑。

壳聚糖膜采用以下方法制得：将醋酸纤维膜置于0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，3℃下浸泡48h以上，完成醋酸纤维膜的预处理；取0.1g壳聚糖粉末，加入10ml 1％(m/m)的醋酸水溶液，搅拌10min至形成黄色的溶胶；室温下3000r/min离心5min除去不溶颗粒。将醋酸纤维膜置于溶胶中浸泡12h，取出晾干后再置于0.1mol/L、pH8.0的PBS浸泡12h，取出晾干，制得壳聚糖膜。将乙酰胆碱酯酶固定在壳聚糖膜上的固定方法采用以下方法：依次取200μL的AChE、20μL 5％(体积分数)的戊二醛、60μL1％(质量分数)的牛血清蛋白(BSA)于1mL塑料离心管中，离心管置于冰浴上。添加0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液720μL。将上述物质充分混匀，当液体的上部出现很多泡沫时，表示已经混匀，制得乙酰胆碱酯酶溶液；取预先处理好的壳聚糖膜一片浸入该酶溶液中，4℃下保持8h；8h后，取出酶片，分别用0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液冲洗至少两次，直到液体中没有任何的泡沫为止。最后将酶片浸泡在0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，4℃下保存，制得酶膜，完成固定。

玻碳电极采用功能化多壁碳修饰，壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的玻碳电极上。采用功能化多壁碳修饰过的玻碳电极能够在较低的电压下获得较高的氧化峰电流，有效地防止了其他氧化物的干涉，提高本发明农药残留检测的精度。功能化多壁碳修饰，采用如下方法：1)多壁碳纳米管的功能化：称取10mg的多壁碳纳米管(MWNTs)，放入100mL的烧杯中，量取40mL浓HNO₃和H₂SO₄混合液(V∶V＝1∶3)加入烧杯中混合后，超声4h、120℃离心回流3h，水洗至中性，红外炉干燥，室温下保存待用。2)玻碳电极修饰前，用0.3μm、30nm的Al₂O₃浆在麂皮上抛光至镜面，抛光后用双蒸水洗去表面污物，再移入超声水浴中清洗，每次2～3min，重复三次，最后依次用1∶1乙醇、1∶1HNO₃和去离子水超声清洗，氮气环境下干燥。3)清洗后，玻碳电极要在0.5mol/L的H₂SO₄溶液中用循环伏安法活化，扫描范围为-0.6～1.0V，扫速0.1V/S，反复扫描直至达到稳定的循环伏安图为止；最后在0.20mol/L KNO₃中记录1×10^-3mol/L K₃Fe(CN)₆溶液的循环伏安曲线，以测试玻碳电极的性能，扫描速度50mV/S，扫描范围为-0.1V～0.6；当循环伏安曲线中的峰电位差在80mV以下，玻碳电极可使用，否则要重新处理玻碳电极，直到符合要求。4)取2μL包含功能化的多壁碳纳米管0.12(w/v)％、壳聚糖0.48(w/v)％、戊二醛4.7(v/v)％的凝胶状混合物悬滴在清洗干净的玻碳电极表面，室温下干燥8h，随后用0.1mol L^-1磷酸盐缓冲液(pH 8.0)冲洗，4℃保存备用，完成玻碳电极的修饰。

微型处理器系统1包括单片机11，单片机11的信号输出端连接D/A转化模块12，D/A转化模块12连接乙酰胆碱酯酶生物传感器2的信号输入端；乙酰胆碱酯酶生物传感器2的信号输出端连接I/V转换模块13，I/V转换模块连接差分放大电路14，差分放大电路14连接一低通滤波电路15，低通滤波电路15连接单片机11的信号输入端。单片机11连接显示器3，单片机11还连接一按键组4，通过按键组4和显示器3，选择蔬果品种和农药种类。显示器3可以采用液晶显示器。显示器3的显示屏可以采用触摸显示屏。以便更好的实现人机互动。单片机11内置有抑制率和农药浓度的数学模型，单片机11将乙酰胆碱酯酶生物传感器2发送的电流信号进行处理，计算出蔬果的抑制率，根据抑制率和农药浓度的数学模型，得到蔬果的农药浓度。

一种电化学农药残留检测方法，包括以下步骤：第一步，根据待测蔬果，通过显示器和按键组来选择匹配的蔬果品种和待测农药种类。第二步，计算农药活性抑制率：将电化学农药残留快速检测仪的乙酰胆碱酯酶生物传感器2放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₀。再将乙酰胆碱酯酶生物传感器2放入样品液中孵化10分钟，样品液通过榨取蔬果制得，取出后用磷酸盐缓冲液冲洗干净，再放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₁。计算乙酰胆碱酯酶在接触农药前后的活性抑制率，计算公式如下：

$I\%=\frac{I_0-I_1}{I_0}\×100\%;$

第三步，获得农药浓度：根据预设的抑制率和农药浓度的关系模型，获得农药浓度。微型处理器系统中预设有至少两种农药种类的关系模型，当使用者选择某一种农药种类后，微型处理器系统根据此农药种类的关系模型，获得农药浓度。例如，使用者选择农药种类为敌敌畏农药，预设的敌敌畏农药的抑制率和农药浓度的关系模型如下：当I％的浓度范围在25ngL^-1～50ngL^-1时，I％＝35.929x-35.761。当I％的浓度范围在50ngL^-1～100μgL^-1时，I％＝18.697x-5.3303，其中I％为活性抑制率，x为农药浓度。微型处理器系统1可以根据技术的农药活性抑制率I％，计算出农药浓度。

第四步，显示：通过显示器3显示农药的浓度。乙酰胆碱酯酶生物传感器2采用以下方法制作：将乙酰胆碱酯酶固定在壳聚糖膜上；采用功能化多壁碳修饰玻碳电极；将壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的玻碳电极上，制得乙酰胆碱酯酶生物传感器2。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (6)

1.一种电化学农药残留快速检测仪，包括一农药检测模块、一与所述农药检测模块连接的微型处理器系统，其特征在于，所述农药检测模块包括一乙酰胆碱酯酶生物传感器，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输出端连接所述微型处理器系统的信号输入端，所述微型处理器系统连接一显示器；

乙酰胆碱酯酶生物传感器将放入含有农药的样品液前后的电流信号传送给微型处理器系统，微型处理器系统将所述电流信号进行处理，得到农药浓度，并将所述农药浓度显示在显示器上，供查看；

所述乙酰胆碱酯酶生物传感器采用一三电极体系结构的传感器，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器包括一玻碳电极、一参比电极、一对电极，所述玻碳电极上固定有壳聚糖膜，所述壳聚糖膜上固定有乙酰胆碱酯酶；

将工作电压施加在所述玻碳电极和所述参比电极之间时，所述玻碳电极和所述对电极之间产生电流信号，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器将所述电流信号传送给所述微型处理器系统，所述微型处理器系统将所述电流信号进行处理，得到农药浓度，并将所述农药浓度显示在显示器上，供查看；

所述壳聚糖膜采用以下方法制得：将醋酸纤维膜置于0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，3℃下浸泡48h以上，完成醋酸纤维膜的预处理；取0.1g壳聚糖粉末，加入10ml1%(m/m)的醋酸水溶液，搅拌10min至形成黄色的溶胶；室温下3000r/min离心5min除去不溶颗粒；将所述醋酸纤维膜置于所述溶胶中浸泡12h，取出晾干后再置于0.1mol/L、pH8.0的PBS浸泡12h，取出晾干，制得所述壳聚糖膜；

将所述乙酰胆碱酯酶固定在所述壳聚糖膜上的固定方法采用以下方法：依次取200μL的AChE、20μL5%(体积分数)的戊二醛、60μL1%(质量分数)的牛血清蛋白于1mL塑料离心管中，离心管置于冰浴上；添加0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液720μL；将上述物质充分混匀，当液体的上部出现很多泡沫时，表示已经混匀，制得乙酰胆碱酯酶溶液；

取预先处理好的壳聚糖膜一片浸入该酶溶液中，4℃下保持8h；8h后，取出酶片，分别用0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液冲洗至少两次，直到液体中没有任何的泡沫为止；最后将酶片浸泡在0.1mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液中，4℃下保存，制得酶膜，完成固定;

所述玻碳电极采用功能化多壁碳修饰，所述壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的玻碳电极上；所述功能化多壁碳修饰，采用如下方法：

1）多壁碳纳米管的功能化：称取10mg的多壁碳纳米管，放入100mL的烧杯中，量取40mL浓HNO₃和H₂SO₄混合液，其中浓HNO₃和H₂SO₄的体积比是1:3，加入所述烧杯中混合后，超声4h、120℃离心回流3h，水洗至中性，红外炉干燥，室温下保存待用；

2）所述玻碳电极修饰前，用0.3μm、30nm的Al₂O₃浆抛光至镜面，抛光后用双蒸水洗去表面污物，再移入超声水浴中清洗，每次2～3min，重复三次，最后依次用1:1乙醇、1:1HNO₃和去离子水超声清洗，氮气环境下干燥；

3）清洗后，所述玻碳电极要在0.5mol/L的H₂SO₄溶液中用循环伏安法活化，扫描范围为－0.6～1.0V，扫速0.1V/S，反复扫描直至达到稳定的循环伏安图为止；最后在0.20mol/L KNO₃中记录1×10^-3mol/L K₃Fe(CN)₆溶液的循环伏安曲线，以测试所述玻碳电极的性能，扫描速度50mV/S，扫描范围为－0.1V～0.6；当所述循环伏安曲线中的峰电位差在80mV以下，所述玻碳电极可使用，否则要重新处理所述玻碳电极，直到符合要求；

4）取2μL包含功能化的多壁碳纳米管0.12(w/v)%、壳聚糖0.48(w/v)%、戊二醛4.7(v/v)%的凝胶状混合物悬滴在清洗干净的所述玻碳电极表面，室温下干燥8h，随后用0.1mol L^-1、pH8.0磷酸盐缓冲液冲洗，4℃保存备用，完成所述玻碳电极的修饰。

2.根据权利要求1所述的一种电化学农药残留快速检测仪，其特征在于，所述微型处理器系统包括一单片机，所述单片机的信号输出端连接一D/A转化模块，所述D/A转化模块连接所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输入端；

所述乙酰胆碱酯酶生物传感器的信号输出端连接一I/V转换模块，所述I/V转换模块连接一差分放大电路，所述差分放大电路连接一低通滤波电路，所述低通滤波电路连接所述单片机的信号输入端。

3.根据权利要求2所述的一种电化学农药残留快速检测仪，其特征在于，所述单片机连接所述显示器，所述单片机还连接一按键组，通过所述按键组和所述显示器，选择蔬果品种和农药种类。

4.一种电化学农药残留检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的电化学农药残留快速检测仪进行检测，检测过程包括以下步骤：

1）根据待测果蔬，选择匹配的蔬果品种和待测农药种类；

2）计算农药活性抑制率：将电化学农药残留快速检测仪的乙酰胆碱酯酶生物传感器放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₀；

再将乙酰胆碱酯酶生物传感器放入样品液中孵化10分钟，取出后用磷酸盐缓冲液冲洗干净，再放入含有10mL的磷酸盐缓冲液中进行循环伏安检测，得到氧化峰电流值I₁；

计算乙酰胆碱酯酶在接触农药前后的活性抑制率，计算公式如下：

$I\%=\frac{I_0-I_1}{I_0}\×100\%;$

3）获得农药浓度：根据预设的抑制率和农药浓度的关系模型，获得农药的浓度；

4）显示：通过显示器显示农药的浓度。

5.根据权利要求4所述的一种电化学农药残留检测方法，其特征在于，所述乙酰胆碱酯酶生物传感器采用以下方法制作：将乙酰胆碱酯酶固定在壳聚糖膜上；采用功能化多壁碳修饰玻碳电极；将所述壳聚糖膜通过O型圈固定在功能化多壁碳修饰过的玻碳电极上，制得乙酰胆碱酯酶生物传感器。

6.根据权利要求4所述的一种电化学农药残留检测方法，其特征在于，当选择待测农药种类为敌敌畏农药时，预设的敌敌畏农药的抑制率和农药浓度的关系模型如下：当I%的范围在25ngL^-1～50ngL^-1时，I%=35.929x-35.761；当I%的范围在50ngL^-1～100μgL^-1时，I%=18.697x-5.3303；其中I%为活性抑制率，x为农药浓度。

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