CN102093966B - 水貂源植物乳杆菌mdl1118及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一株水貂源的植物乳杆菌菌株及其应用。具体涉及的植物乳杆菌MDL1118,专利保藏号CGMCC No.4238。植物乳杆菌MDL1118可发酵广泛碳水化合物,具有高效降解胆固醇的功能;植物乳杆菌MDL1118单独应用或与常规载体组合可以增加水貂采食量,日增重,增强机体免疫机能,并且可使水貂季节性腹泻下降50%。
Description
技术领域
本发明涉及一株从水貂肠道内分离得到的植物乳杆菌,并特别涉及其在水貂日粮中的应用。
技术背景
在动物肠道中95%以上的微生物为乳酸菌等益生菌,动物肠道为这些肠道微生物提供优越的栖息和繁殖环境。肠道微生物及其基因组赋予动物没有必要在自身上进化的特性,弥补动物某些生物学不足。肠道微生态区系是个复杂的动态生态系统,通常与宿主的新陈代谢密切相关。肠道微生物及其代谢产物对宿主的能量平衡和生理活动产生重要影响,能够降解和发酵复杂非可消化性碳水化合物,释放出部分能量,可再次被宿主吸收和利用,扩大了宿主可利用原料范围,提高能量利用效率,并影响氨基酸的动态平衡。对人来说,血液中1-20%的赖氨酸和苏氨酸来自肠道内细菌的合成;肠道微生物还可合成必需维生素K和B族维生素。此外肠道微生物可分泌蛋白酶,脂肪酶,淀粉酶等,促进营养物质分解为可直接被宿主吸收利用的小分子物质。
哺乳动物肠道通过自然选择而存在的固有菌,能对很多药物及营养物质的代谢产生明显的影响,改变它们的生物学利用率及代谢结果。宿主和肠道微生物在长期的协同进化过程中形成的相互协同关系,二者共同组成肠道微生态系统,保障该系统最大限度地从有限的食物中获取最大可能的营养价值,维护系统长期稳定和动态平衡。
随着微生态学理论研究的不断深入。微生态制剂(或称微生态调节剂Biogen,microeclogial modulator)也随之迅速发展起来。以益生菌为主要作用成份的微生态制剂作为促进动物健康的有益菌,其功能是多方面的。近年来人们对益生菌的研究越来越多。益生菌可以降低腹泻及肠炎的发病率,可以抑制急性肠炎,轮状病毒引起的腹泻,以及抗生素导致的腹泻,并且还可以抑制Helicobacter pylori感染,减轻消化道紊乱症。此外益生菌在对与致病菌感染及相应的免疫激活方面也可以表现出其益生活性。可以降低炎症症状,如炎症性肠炎(IBD)和肠易激综合征(IBS),肠道微生物及其代谢产物对宿主的能量平衡和生理活动产生重要影响,能够降解和发酵非可消化性碳水化合物,补救出部分能量,可以再次被宿主吸收和利用,扩大了宿主可利用原料的范围和提高了能量利用效率。降低血清中胆固醇含量,增加含有益生菌乳产品的食入量,已作为降低血清胆固醇的一种方式。很多研究表明,有些乳酸杆菌具有降低总胆固醇和低密度(LDL)胆固醇的能力,肠道益生菌数量的改变,会导致肝脏脂类代谢的改变,并且降低血浆脂蛋白水平。增加含有益生菌乳产品的食入量, 已作为降低血清胆固醇的一种方式。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)广泛存在于自然界,在植物表面,天然发酵的酸牛乳,泡菜,青贮饲料,酸面团及动物体内均有发现。植物乳杆菌作为一种动物原籍菌,具有很多优良性状,可改善肠道健康,调节机体免疫,对于促进宿主健康具有重要作用,目前国内外对植物乳杆菌的研究和应用较多,已被广泛应用于食品或饲料添加剂。
水貂属于鼬科,肉食哺乳动物。这种小型的肉食动物消化特点同其他单胃动物相比具有其独特性,即消化道较短,食物在肠道内停留的时间较短,对纤维性物质及淀粉消化率低,对脂肪的消化率高达95-98%,新鲜动物性饲料中蛋白质的消化率为87%~90%。本发明就是基于上述问题,提出了一种针对毛皮动物生产专用的水貂源植物乳杆菌并检测其应用效果。
发明内容
从健康成年水貂肠道内分离乳酸菌,取小肠内容物20g,加入100ml无菌水中,摇床震荡30min,使内容物充分溶解,梯度稀释,利用倾注培养法进行分离培养,37℃培养72h选择具有溶钙圈的菌落,采用平板划线的方式纯化,纯化3-4代,镜检,将纯化后的乳酸菌接入MRS液体培养基中,检测其微生物学特性,如形态学、生理学特性(表1)以及糖分解代谢(表2)的能力,检测其体外培养对胆固醇的降解功能(表3)。进行对小鼠安全性(表4)检测以及对水貂生产性能(表5)的影响。
该植物乳杆菌MDL1118已于2010年10月21日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所)保藏,保藏号CGMCC No.4238。其分类命名为:植物乳杆菌,拉丁名为:Lactobacillusplantarum。
附图说明
图1植物乳杆菌体外培养条件下对胆固醇的降解,横坐标为培养时间(h),纵坐标为胆固醇降解率(%)。
下面结合实施例和图进一步说明本发明:
实施例I
形态学观察、显微镜检以及生理生化指标检测
无菌条件下挑取该植物乳杆菌MDL1118涂于干净的载玻片上,制片,革兰氏染色进行形态学及染色结果观察。无菌条件下将植物乳杆菌接种于相应的培养基或培养条件下,进行生理生化指标的检测观察。
实施例II
不同碳水化合物发酵活性检测
无菌条件下,用接种环挑取少许生长旺盛的,培养18-24h的植物乳杆菌MDL1118,接种入北京陆桥技术有限责任公司生产的不同糖发酵管内,37℃恒温培养18-24h,观察发酵液颜色变化,以判断对不同碳水化合物的发酵。
表2不同碳水化合物发酵活性
由表1,2可知,植物乳杆菌MDL1118增殖迅速,可在较广泛温度范围内生长,可广泛利用碳水化合物产生能量,是一株优良乳酸菌。
实施例III
在体外培养过程中对胆固醇的降解作用
将纯化后的植物乳杆菌MDL1118,接种入MRS液体培养基中,37℃培养18-24小时,每隔四小时取样,离心取上清,利用邻苯二甲醛法测定24h内胆固醇的降解能力。
表3乳酸菌MDL1118对胆固醇的降解率
取样时间 | 胆固醇降解率% |
4 | 58.15 |
8 | 20.73 |
12 | 17.28 |
16 | 9.90 |
24 | 12.36 |
由表3和图1可知,植物乳杆菌MDL1118在体外培养条件下可以降解胆固醇,尤其在对数生长前期对胆固醇的降解率高达58%以上,由此说明水貂源植物乳杆菌MDL1118在体外培养条件下对胆固醇具有较高的降解特性,其在降解高胆固醇食品及饲料方面具有广阔的应用前景。
实施例IV
植物乳杆菌MDL1118对小白鼠安全性及生产性能指标的影响
将植物乳杆菌MDL1118接入10ml液体培养基中,接种量1%,37℃培养18h,5000rmp/min 离心10分钟,用生理盐水稀释为107cfu/ml,高浓度109cfu/ml,选取健康的成年昆明系小白鼠,每组15只,每天每只经口灌注不同浓度的MDL1118稀释液0.3ml,对照组灌注等量的生理盐水,连续灌注20天,观察10天,每天进行观察,记录采食情况,体重情况。定期称重,每日监测采食情况,30d时进行屠宰试验,称量胸腺,脾脏重量,计算免疫器官指数。
表4.植物乳杆菌MDL1118对小白鼠安全性及生产性能指标影响
组别 | 死亡只数 | 平均日增重g | 平均日采食量g | 免疫器官指数 |
对照组 | 2 | 9.90 | 12.98 | 0.57% |
MDL1118-107 | 0 | 11.07 | 18.25 | 0.59% |
MDL1118-109 | 0 | 11.06 | 18.44 | 0.59% |
由表4可知,水貂源的植物乳杆菌,以不同剂量灌注小鼠,未有小鼠死亡,并且添加植物乳杆菌MDL1118组小鼠的日采食量以及平均日增重均显著高于对照组,免疫器官指数略高于对照组。由此可知,植物乳杆菌MDL1118对小白鼠无致死性。并且对小白鼠的日增重及平均日采食量具有促进作用,并且具有促进小鼠免疫功能的作用。
实施例V
植物乳杆菌MDL1118对水貂生产性能的影响
将植物乳杆菌按1%的接种量,接入液体培养基中,37℃培养18h-24h,分为试验组和对照组,选取健康的育成期水貂,每组20只,试验组每天每只随饲料给饲109cfu/g干物质的植物乳杆菌MDL1118,对照组不添加,定期称重,每日监测采食情况,连续饲喂30天,屠宰,称量脾脏重量,计算脾脏器官指数。
表5.植物乳杆菌MDL1118对水貂生产性能的影响
组别 | 腹泻只数 | 死亡只数 | 平均日增重g | 平均日采食量g | 脾脏器官指数% |
对照组 | 11 | 4 | 22.28 | 368.81 | 0.36 |
MDL1118-109 | 1 | 0 | 23.82 | 376.14 | 0.51 |
由表5可知,在育成期水貂日粮中添加植物乳杆菌MDL1118,可以降低在8月末到9月初期间,水貂季节性腹泻的发病率达50%,具有提高水貂平均采食量及平均日增重的趋势,与对照组相比,可使脾脏器官指数明显增加,进一步说明植物乳杆菌MDL1118可显著提高水貂免疫机能。
结论
上述结果表明,本发明所涉及的植物乳杆菌MDL1118,可以增加小鼠及水貂的日采食量及日增重,增强动物的免疫机能,水貂源植物乳杆菌MDL1118,可以预防水貂季节性腹泻的发生,改善动物的生产性能。
Claims (6)
1.一种植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)MDL1118,保藏编号CGMCC No.4238。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌MDL1118在降解胆固醇中的应用。
3.根据权利要求1所述的植物乳杆菌MDL1118在改善水貂日采食量,日增重,降低腹泻率方面的应用。
4.根据权利要求2所述的应用,植物乳杆菌MDL1118可以与其他常规载体组合,降低胆固醇。
5.根据权利要求3所述的应用,植物乳杆菌MDL1118与其他常规载体混合后加入水貂日粮中,可以提高水貂生产性能。
6.一种饲料预混料,该饲料预混料含有权利要求1所述植物乳杆菌MDL1118。
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