CN102081074B

CN102081074B - 一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量检测方法

Info

Publication number: CN102081074B
Application number: CN 200910246537
Authority: CN
Inventors: 张伟; 王莹; 朱海贝; 吴宇
Original assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Current assignee: KPC Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2009-11-30
Filing date: 2009-11-30
Publication date: 2013-09-11
Anticipated expiration: 2029-11-30
Also published as: CN102081074A

Abstract

本发明提供一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法，包括：提供2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮含量测定用供试品溶液；以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液为流动相，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液，外标法分析得到所述供试品中2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量。通过所述质量检测方法，可以在制备2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮过程中，对2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量进行准确的评价，以保证最终得到质量稳定的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮。

Description

一种2’-羟基-4,4’,5’,6’-四甲氧基查耳酮的含量检测方法

技术领域

本发明与2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的制备工艺有关，具体涉及一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法。

背景技术

2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮(2′-hydroxy-4，4′，5′，6′-tetrametho-xychalcone)结构式如(I)式，CAS(美国化学文摘服务社)登录号为41929-26-4，分子式为C₁₉H₂₀O₆，分子量为344.12，又叫(反式)-1-(6-羟基-2，3，4-甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-2-丙烯-1-酮((E)-1-(6-Hydroxy-2，3，4-trimethoxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)-2-propen-1-one)，有文章(Suksamrarn，Apichart；Chotipong et al，Antimycobacterial activity and cytotoxicity of flavonoidsfrom the flowers of Chromolaena odorata，Archives of Pharmacal Research，27(5)，507-511(English)2004 Pharmaceutical Society of Korea)报道，该化合物可从暹罗草(Chromolaena odorata)的花中提取分离。

2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮是合成灯盏花乙素及其衍生物的关键中间体原料。研究表明，以灯盏花乙素为主成分制成的药物对高血压、脑溢血、脑血栓、脑栓塞多发性神经炎、慢性蛛网膜炎及其后遗症具有较好疗效，并对风湿、冠心病也有一定疗效。

因此，获得质量稳定的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮对于以2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮为起始原料的化学合成具有重要的意义，尤其是有利于制备质量稳定的灯盏花乙素及其衍生物。

在现有技术中，还未提供在制备2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的过程中有关2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法。

发明内容

本发明解决的技术问题在于，提供一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法，通过该质量检测方法，对所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量进行准确的评价，以有利于制备质量稳定的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮。

为了解决以上技术问题，本发明提供一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法，包括：

提供2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量测定用供试品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液作为流动相，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液，外标法分析得到所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量。

优选的，所述甲醇和水的混合溶液中甲醇和水的体积比为90～70∶10～30，所述乙腈和水的混合溶液乙腈和水的体积比为90～70∶10～30。

优选的，所述在液相色谱仪中检测所述供试品溶液的理论板数按2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮峰计算不低于5000。

优选的，所述在色谱仪中检测所述供试品溶液使用的检测波长为350nm～370nm。

优选的，所述质量检测方法还包括检测所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质含量的步骤，所述检测所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质的步骤具体包括：

提供2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮有关物质检查用供试品溶液；

取所述供试品溶液稀释得到对照溶液；

取所述对照溶液和有关物质检查用供试品溶液在液相色谱中分析，对比所述供试品溶液的有关物质峰面积与所述对照溶液的主峰面积，得到所述有关物质的含量。

优选的，所述取所述对照溶液和有关物质检查用供试品溶液在液相色谱中检测使用的固定相为十八烷基硅烷键合或八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液。

优选的，所述取所述对照溶液和供试品溶液在液相色谱中分析时的时间为 2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮主成分峰保留时间的2倍以上。

优选的，在所述检测所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质含量的步骤中，所述有关物质检查用供试品溶液的浓度为0.1mg/ml～0.3mg/ml。

优选的，在所述检测所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质含量的步骤中，所述对照溶液的浓度为1μg/ml～10μg/ml。

优选的，在所述检测所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质含量的步骤中，所述取所述对照溶液和供试品溶液在液相色谱中分析具体包括：

取所述对照品溶液注入液相色谱仪，使主成分峰高约为记录仪满量程的10％；

取所述对照溶液与所述供试品溶液5～20μl注入色谱仪，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示。

优选的，所述质量检测方法还包括将所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮进行红外检测，确认是否具有下述波数(cm^-1)：2961±2，2936±2，2903±2，2362±2，1626±2，1610±2，1602±2，1572±2，1545±2，1508±2，1489±2，1445±2，1397±2，1343±2，1284±2，1243±2，1174±2，1148±2，1201±2，1019±2，987±2，941±2，836±2，604±2，559±2。

本发明提供一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法。在所述质量检测方法中，以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液为流动相，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液，外标法得到所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量。通过所述质量检测方法，可以在制备2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮过程中，对2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量进行准确的评价，以保证最终得到质量稳定的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮。

附图说明

图1为本发明实施例1中测量的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮含量的色谱图；

图2为本发明实施例2中测量的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮有关物质检查用供试品色谱图；

图3为本发明实施例2中测量的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮有关物质检查用对照溶液色谱图；

图4为本发明实施例3测试的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的红外光谱图。

具体实施方式

本发明提供的一个2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法的实施例，包括：

提供2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮含量测定用供试品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液为流动相，在液相色谱仪中检测所述供试验品溶液，外标法分析得到所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量。

本发明所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮含量测定用供试品溶液是指将2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮溶于有机溶剂得到的溶液，所述有机溶剂可以为低级醇，所述低级醇可以为甲醇、乙醇、丙醇，优选为甲醇。对于所述供试品溶液的浓度，优选为10μg/ml～50μg/ml，更优选为15μg/ml～30μg/ml。

按照本发明，以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂并以甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液作为流动相在液相色谱中检测所述供试品溶液。在所述甲醇和水的混合溶液中，甲醇和水的体积比优选为90～70∶10～30，更优选为90～80∶10～20，更优选为85∶15；所述乙腈和水的混合溶液中，乙腈和水的体积比优选为90～70∶10～30，更优选为90～80∶10～20，更优选为85∶15。

在液相色谱仪中检测所述供试品溶液使用的检测波长优选为350nm～370nm，更优选为360nm。在液相色谱仪中检测所述供试品溶液的理论板数按2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮峰计算优选不低于5000，更优选不低于8000。

按照本发明，优选向所述液相色谱仪内注入2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮对照品溶液检测，然后外标法以峰面积计算得到所述供试品溶液中2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量。

按照本发明，所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法还包括检测2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中有关物质含量的步骤，所述检测有关物质含量的步骤具体包括：

提供2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的有关物质检查用供试品溶液；

取所述供试品溶液稀释得到对照溶液；

取所述有关物质检查用供试品溶液和对照溶液在液相色谱仪中分析，对比所述有关物质检查用供试品溶液的有关物质峰面积和所述对照溶液的主峰面积，得到所述有关物质的含量。

本发明所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中的有关物质被定义为在2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮中与2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮结构相近、并能在色谱仪中显示杂质峰的物质。

按照本发明，在检测有关物质含量的步骤中，所述有关物质检查用供试品溶液的浓度优选为0.1mg/ml～0.3mg/ml，更优选为0.15mg/ml～0.25mg/ml，更优选为0.20mg/ml。所述对照溶液的浓度优选被稀释到1μg/ml～10μg/ml，更优选为1.5μg/ml～5μg/ml，所述有关物质用供试品溶液所用的溶剂优选用与所述含量测定用供试品溶液相同的溶剂。

按照本发明，在检测有关物质含量的步骤中，所述取所述对照溶液和供试品溶液在液相色谱中检测时使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇和水的混合溶液或乙腈和水的混合溶液。在所述甲醇和水的混合溶液中，甲醇和水的体积比优选为90～70∶10～30，更优选为90～80∶10～20，更优选为85∶15；所述乙腈和水的混合溶液中，乙腈和水的体积比优选为90～70∶10～30。

按照本发明，在检测2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮有关物质含量的步骤中，所述取所述对照溶液和有关物质检查用供试品溶液在液相色谱中分析时的时间为2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮主成分峰保留时间的2倍以上。所述液相色谱仪的其它条件可以与所述检测2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮纯度中的液相色谱仪的条件相同。

按照本发明，所述质量检测方法还包括将所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮进行红外检测，确认所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮是否具有下述波数(cm^-1)的特征峰：2961±2，2936±2，2903±2，2362±2，1626±2，1610±2，1602±2，1572±2，1545±2，1508±2，1489±2，1445±2，1397±2，1343±2，1284±2， 1243±2，1174±2，1148±2，1201±2，1019±2，987±2，941±2，836±2，604±2，559±2。如果所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮具有上述波数，则表明所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮具有所要求的基团，如果所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮与上述波数不一致，则可以确定所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的基团与所要求的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的基团不同，例如某些基团的位置与所要求的基团位置不一致，此时可以认为被检测的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮不能符合要求

为了进一步了解本发明，下面结合实施例本发明提供的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的质量检测方法进行描述。

以下为本发明实施例所用的由昆明制药集团股份有限公司提供的编号为DZHS005-A、DZHS005-B、DZHS005-C的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮作为三种测试样品。

实施例1

使用仪器为：Agilent1100高效液相色谱仪，包括：G1331A四元梯度泵、G1322A真空脱气机、G1329A自动进样器、G1314紫外检测器、G1329A柱温箱和Agilent1100化学工作站，色谱柱为Apollo C18 250×4.6mm。

用十八硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水混合溶液为流动相，所述混合液中，按体积比甲醇∶水为85∶15，检测波长为360nm，理论板数按2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮峰计算8000。

取编号为DZHS007-B的测试样品，加入甲醇溶解并稀释得到浓度为20μg/ml的溶液作为供试品溶液，量取所述供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1所示，色谱分析结果如表1：

表1、实施例1中2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮供试品溶液的色谱分析结果

取sigma公司购买的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮对照品(含量100.0％)，加入甲醇溶解并稀释得到浓度为20μg/ml的溶液，作为对照品溶液，量取所述对照品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；

使用单点外标法计算含量：通过计算所述供试品溶液和对照品溶液的峰面积的比值即得所述供试品的含量。三种测试样品的结果如下：DZHS005-A、DZHS005-B、DZHS005-C按干燥品计算含2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮分别为99.3wt％、99.5wt％、99.6wt％。

实施例2

所用色谱仪、填充剂、流动相与实施例1相同。

取2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮样品，用甲醇溶解制成0.20mg/ml的供试品溶液；取部分所述供试品溶液用甲醇稀释制成2.0μg/ml的对照溶液。

取所述对照品溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的10％；

取所述对照溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍以上。

图2所示为编号为DZHS005-C供试品溶液色谱图，有关物质峰已全部显示。表2为对应的色谱分析结果。

表2、实施例2中2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮供试品溶液的色谱分析结果

图3所示为对照品溶液色谱图，只显示了主峰，表3为对应的色谱分析结果：

表3、实施例2中对照溶液的色谱分析结果

计算得到，样品DZHS005-C中有关物质含量小于1.0wt％。

对样品DZHS005-A、DZHS005-C测试结果表明，上述两种样品中的有关物质含量均小于1.0wt％。

实施例3

取样品DZHS005-A进行红外光谱(IR)分析

仪器：Shimadzu FTIR-8400S红外光谱仪

压片：溴化钾压片

红外图谱请见图4，红外光谱波数(cm^-1)为：2961，2936，2903，2362，1626，1610，1602，1572，1545，1508，1489，1445，1397，1343，1284，1243，1174，1148，1201，1019，987，941，836，604，559。

测试结果表明，样品DZHS005-A具有与所述要求的2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮相同的基团。

Claims

1.一种2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量检测方法，包括：

以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以甲醇和水的混合溶液为流动相，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液，外标法分析得到所述2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮的含量；

所述甲醇和水的混合溶液中甲醇和水的体积比为85∶15；

所述在液相色谱仪中检测所述供试品溶液使用的检测波长为350nm～370nm。

2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述在液相色谱仪中检测所述供试品溶液的理论板数按2’-羟基-4，4’，5’，6’-四甲氧基查耳酮峰计算不低于5000。