CN1712953A - 龙血竭质量控制检测方法 - Google Patents

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陈植和
周家礽
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Abstract

本发明涉及一种中药材原料药的检测方法，尤其是可以用以进行质量控制的成分的检测方法。发明所述的龙血竭质量控制检测方法是用高效液相色谱法同时测定龙血竭中龙血素A和龙血素B含量的方法。本发明所述的龙血竭质量控制检测方法由以下步骤组成：一、色谱条件与系统适用性试验；二、对照品溶液的制备；三、供试品溶液的制备；四、测定。为了全面、准确地控制龙血竭的质量，本发明制定了用高效液相色谱法同时测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量。经分析方法验证，其精密度、重现性、回收率和稳定性符合中国药典2000年一部附录《中药质量标准分析方法验证指导原则》的要求。

Description

龙血竭质量控制检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药材原料药的检测方法，尤其是可以用以进行质量控制的成分的检测方法。
背景技术
龙血竭为龙舌兰科植物剑叶龙血树Dracaeua cochinchinensis(Lour.)S.H.Chen含脂木质部经提取加工成的树脂，为常用中药，有活血散瘀，定痛止血，敛疮生肌功效，主要用于跌打损伤，瘀血作痛，妇女气血凝滞，外伤出血，褥疮久不收口。已收载于国家药品标准WS3-082(Z-016)-99(Z)。目前所执行的标准质量控制只测定龙血素B(C18H20O5)的含量，经研究发现，龙血竭中主要成分为黄酮类，仅仅只控制药材中一种黄酮的量难以准确地反映产品质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种全面、准确的控制龙血竭质量的龙血竭质量控制检测方法。
本发明所述的龙血竭质量控制检测方法是用高效液相色谱法同时测定龙血竭中龙血素A和龙血素B含量的方法。
为了全面、准确地控制龙血竭的质量，申请人对龙血竭中黄酮类成分进行了研究，提出增加其中含量高、易定量的龙血素A(C17H18O4)的含量测定，结果表明，云南产龙血竭中龙血素A含量较广西产的高5至6倍，且不同产地龙血竭中龙血素A含量差异较大，据文献报道龙血素A(C17H18O4)、龙血素B(C18H20O5)属黄酮类查耳酮类化合物，是龙血竭的主要有效成分。为确保产品质量可控和安全有效，申请人研究制定了用高效液相色谱法同时测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量。经分析方法验证，其精密度、重现性、回收率和稳定性符合中国药典2000年一部附录《中药质量标准分析方法验证指导原则》的要求。
本发明所述的龙血竭质量控制检测方法由以下步骤组成：
一、色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；冰醋酸溶液1→100-乙腈63±1∶37±1为流动相，检测波长为275±2nm，柱温：30±1℃，理论板数按龙血素A及B峰计算均应不低于5000，龙血素A峰与B峰分离度应大于2.0；
二、对照品溶液的制备
称取经干燥剂减压干燥24小时的龙血素A、龙血素B对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含龙血素A 0.18mg、含龙血素B 0.04mg的混合溶液，即得；
三、供试品溶液的制备
取本品粉末约0.25g，精密称定至25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理10分钟使龙血竭溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，即得；
四、测定
精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的方法学考察：
线性关系考察：
分别精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15、20ul，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表1，采用Agilent色谱工作站Chem Station计算标准曲线，见图1、图2。以峰面积积分值对样量进行回归，龙血素A在0.1840μg---3.680μg、龙血素B在0.0419μg---0.8380μg范围内显现良好的线性关系。龙血素A回归方程为：Y＝3411.92X+34.40，r＝0.99989；龙血素B回归方程为：Y＝2694.85X+14.79，r＝0.99960；其中Y为峰面积，X为进样量，r为相关系数。
                     表1线性关系考察结果
进样量               龙血素A                      龙血素B
(μl)      进样量(μg)      峰面积      进样量(μg)      峰面积
1          0.1840           634.9       0.0419           119.0
2          0.3680           1269.5      0.0838           235.2
5          0.9200           3179.9      0.2095           588.1
10         1.840            6468.9      0.4190           1195.9
15         2.760            9433.6      0.6285           1690.1
20         3.680            12527.0     0.8380           2259.7
精密度试验：
取同一龙血素A及龙血素B对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次(进样10μl)，测得峰面积积分值见表2。
                    表2精密度试验结果
次数                龙血素A峰面积            龙血素B峰面积
1                   6389.5                   1116.0
2                   6351.9                   1112.1
3                   6363.3                   1115.8
4                   6364.9                   1118.0
5                   6361.0                   1119.3
6                   6361.1                   1116.9
平均值              6365.3                   1116.4
RSD(％)             0.20                     0.22
稳定性试验：
取同一供试品溶液，按上述色谱条件，进样10μl，在不同时间测定，结果见表3。
                    表3稳定性试验结果
时间                龙血素A                龙血素B
0                   10525.5                1620.3
5hr                 10510.6                1627.8
25hr                10645.6                1644.8
45hr                10684.2                1652.2
96hr                10544.0                1663.2
166hr               10738.4                1678.2
平均值              10608.05               1647.75
RSD                 0.89％                 1.31％
结果表明，样品在166hr(约7天)内比较稳定。
重现性试验：
取龙血竭粉末(过三号筛，小试样)约0.25g，共称取6份，按含量测定方法试验，结果见表4。
                    表4重现性试验结果
编        取样量(g)        龙血素A(％)        龙血素B(％)
号
1         0.2582           2.88               0.58
2         0.2457           2.89               0.58
3         0.2464           2.85               0.58
4         0.2655           2.92               0.59
5         0.2488           2.93               0.59
6         0.2310           2.84               0.59
含量平均值                 2.885              0.585
RSD                        1.2                0.94
结果表明，重现性良好。
加样回收率试验：
取已测定含量龙血竭粉末(中试样品，010101；含龙血素A为2.80％、龙血素B为0.59％)约0.12g，共称取6份，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入龙血素A及B对照品溶液(每lml中含龙血素A 0.1840mg/ml、龙血素B 0.0419mg/ml)10、15、20ml，补加甲醇至约20ml，超声处理10min，放至室温，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，测定含量并计算回收率，结果见表5、表6。
                   表5龙血素A加样回收率试验结果
                   样品龙血素A含
编号    取样量                   加样量      测得总量      回收率
                   量
1       0.1166g    3.26mg        1.84mg      5.06mg        97.8％
2       0.1138g    3.19mg        1.84mg      4.95mg        95.7％
3       0.1216g    3.40mg        2.76mg      6.04mg        95.7％
4       0.1131g    3.17mg        2.76mg      5.93mg        100.0％
5       0.1208g    3.38mg        3.68mg      6.94mg        96.7％
6       0.1291g    3.61mg        3.68mg      7.18mg        97.0％
                   表6龙血素B加样回收率试验结果
                   样品龙血素B含
编号    取样量                   加样量      测得总量      回收率
                   量
1       0.1166g    0.69mg        0.419mg     1.09mg        95.5％
2       0.1138g    0.67mg        0.419mg     1.08mg        97.9％
3       0.1216g    0.72mg        0.629mg     1.32mg        95.4％
4       0.1131g    0.67mg        0.629mg     1.30mg        100.2％
5       0.1208g    0.71mg        0.838mg     1.53mg        97.9％
6       0.1291g    0.76mg        0.838mg     1.59mg        99.0％
结果表明，本品加样回收率符合规定。
附图说明
图1为龙血素A标准曲线图。
图2为龙血素B标准曲线图。
具体实施方式
实施例：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；冰醋酸溶液(1→100)-乙腈(63∶37)为流动相，检测波长为275nm。柱温：30℃。理论板数按龙血素A及B峰计算均应不低于5000，龙血素A峰与B峰分离度应大于2.0。
对照品溶液的制备  精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的龙血素A、龙血素B对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含龙血素A 0.18mg、含龙血素B0.04mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备  取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定至25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理10分钟使龙血竭溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，即得。
测定法  精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

Claims (3)

1、一种龙血竭质量控制检测方法，其特征是用高效液相色谱法同时测定龙血竭中龙血素A和龙血素B含量的方法。
2、按照权利要求1所述的龙血竭质量控制检测方法，其特征在于由以下步骤组成：
一、色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；冰醋酸溶液1→100-乙腈63±1∶37±1为流动相，检测波长为275±2nm，柱温：30±1℃，理论板数按龙血素A及B峰计算均应不低于5000，龙血素A峰与B峰分离度应大于2.0；
二、对照品溶液的制备称取经干燥剂减压干燥24小时的龙血素A、龙血素B对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含龙血素A 0.18mg、含龙血素B0.04mg的混合溶液，即得；
三、供试品溶液的制备取本品粉末约0.25g，精密称定至25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理10分钟使龙血竭溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，即得；
四、测定精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3、按照权利要求2所述的龙血竭质量控制检测方法，其特征在于由以下步骤组成：
一、色谱条件与系统适用性试验    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；冰醋酸溶液1→100-乙腈63∶37为流动相，检测波长为275nm，柱温：30℃，理论板数按龙血素A及B峰计算均应不低于5000，龙血素A峰与B峰分离度应大于2.0；
二、对照品溶液的制备    精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的龙血素A、龙血素B对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含龙血素A 0.18mg、含龙血素B 0.04mg的混合溶液，即得；
三、供试品溶液的制备  取过三号筛的本品粉末0.25g，精密称定至25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理10分钟使龙血竭溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，即得；
四、测定法    精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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Effective date: 20091202

C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: DIHON PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD.

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Address after: 650106 Kunming science and Technology Development Zone, Yunnan Province Road No. 45

Patentee after: Dihon Pharmaceutical Group Co., Ltd.

Address before: 650106 No. 45, medical Road, Kunming hi tech Industrial Development Zone, Yunnan, Kunming

Patentee before: Kuning Dianhong Pharmaceutical Co., Ltd.

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Effective date of registration: 20191225

Address after: 650503 1298 Bio Valley Street, majinpu, Kunming, Yunnan

Patentee after: Yunnan Shengke Pharmaceutical Co., Ltd

Address before: 650106 No. 45, medical Road, hi tech Development Zone, Yunnan, Kunming

Patentee before: Dihon Pharmaceutical Group Co., Ltd.