CN102018137A - 一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂,所述中药添加剂由包括下述配比的原料制成:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1。还公开一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂的制备方法。本发明的中药制剂可明显改善血清生化参数,明显降低肝细胞凋亡数量,显著防止肝细胞病理性损伤,具有明显的保肝护肝作用。
Description
技术领域
本发明属于新型饲料添加剂类,尤其涉及一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂及其应用,适用于水生养殖动物肝损伤保护、肝代谢功能障碍和肝脏疾病的辅助治疗。
背景技术
受养殖环境恶化和抗生素等药品滥用的影响,动物主要的物质能量代谢器官——肝脏受损伤,进而产生严重代谢障碍类疾病,最终导致动物死亡的事例愈来愈多,极大地制约了当前养殖业的健康发展。
肝脏是机体代谢的重要器官,不仅仅分泌消化代谢酶,也具有重要的免疫功能,因此,肝脏的损伤对动物的健康状态影响极大。肝的损伤也有不同程度,一般称之为慢性,亚急性、急性三种。实践中,急性肝损伤最难以治疗和痊愈。
现有较多的合成药剂用于治疗肝损伤。部分维生素(如核黄素)、肉毒碱、乳清酸以及天然磷脂、腺苷蛋氨酸等等均有作用,且在临床应用广泛。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂及其应用,用于水生养殖动物肝损伤保护、肝代谢功能障碍和肝脏疾病的辅助治疗。
本发明采用如下技术方案:
一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂,所述中药添加剂由包括下述配比的原料制成:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1。
一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)组方药材:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1;
(2)除杂:除去茵陈蒿中存在的杂物;
(3)粉碎:采用中草药粉碎机进行粉碎,茵陈蒿粉碎为棉絮状,大黄和栀子粉碎过40目筛;
(4)浸提:加入17倍量的95%乙醇,放置十二小时或过夜,然后用抽提装置抽提三次;
(5)浓缩:使用旋转蒸发仪回收抽提液中酒精,浓缩获得浸膏;
(6)常温干燥:将盛放浸膏容器敞口放置,常温下过夜干燥;
(7)包合:制备β-环糊精饱和水溶液,将浸膏加入到饱和溶液中,研磨搅拌半小时至1小时;
(8)干燥成品:将混合液常温或置于40-50℃干燥箱干燥,得到粉末状固体即为成品;
(9)包装储存。
所述的制备方法,所述步骤(4)中前两次每次回流提取3小时,最后一次2小时。
所述的制备方法,所述步骤(7)中将浸膏按照浸膏∶β-环糊精饱和溶液=1∶6的比例加入到饱和溶液中。
附图说明
图1为本发明中药添加剂的制备方法流程图;
图2为空白组肝细胞电镜照片;
图3对照组肝细胞电镜照片;
图4、5、6为试验组肝细胞电镜照片,图4为低剂量S2,图5为中剂量S3,图6为高剂量S4。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例,对本发明进行详细说明。
实施例1
本实施例提供一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂,其制备产品的工艺流程为:组方药材——除杂——粉碎——浸提3次——浓缩浸膏——常温干燥——干膏研磨——环糊精与干膏混合——干燥成品——包装储存;
其中,组方药材:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1;
除杂:除去茵陈蒿中存在的一些较大枝条等杂物;
粉碎:采用中草药粉碎机进行粉碎,茵陈蒿粉碎为棉絮状,大黄和栀子粉碎过40目筛;
浸提:加入17倍量的95%乙醇(放置十二小时或过夜),然后用索氏抽提装置抽提三次,前两次每次回流提取3小时,最后一次2小时;
浓缩:使用旋转蒸发仪回收抽提液中酒精,获得提取物(浸膏);
常温干燥:将盛放浸膏容器敞口放置,常温下过夜干燥;
包合:制备β-环糊精饱和水溶液,将浸膏按照比例加入到饱和溶液中(浸膏∶β-环糊精饱和溶液=1∶6),研磨搅拌半小时至1小时;
干燥成品:将混合液常温或置于40-50℃干燥箱干燥,得到粉末状固体即为成品;
包装储存:添加沸石粉和微晶纤维素作为辅料以稀释防潮;使用富马酸二甲酯作为防腐剂(0.05-0.1%);塑料袋包装;
所用主要仪器:回流浓缩器,超声波清洗仪等。
实施例2
茵陈汤制剂对喹乙醇造成的肝损伤保护作用研究
1材料与方法
试验鱼:健康鲤,体重52.12±2.95g,体长12.77±0.46cm,购于西安市周至联集渔场。实验鱼数量250尾,分成5组(对照组、模型组、茵陈汤低剂量组、茵陈汤中剂量组、茵陈汤高剂量组,茵陈汤制剂采用专利方法制备),每组2个处理,每个处理25尾鱼,实验组(除对照组)以200mg·kg-1饲料的喹乙醇剂量拌料连续饲喂造肝损伤模型。
主要试剂:喹乙醇购自北京中农发药业有限公司黄冈分公司,批准文号:兽药字(2006)170301441。
试验采用单因子完全随机设计。试验5个配方,以常用商品配方为对照组S0,以模型组为S2(200mg·kg-1饲料的喹乙醇),在模型组日粮基础之上添加1.35%、2.7%、5.4%实施例1所制备的制剂制成三种茵陈汤饲料,以上五种饲料分别记为处理S1、S2、S3、S4、S5。全部用用人工制粒机制成φ2.5mm硬颗粒饲料,贮存待用。
饲养试验在室内循环水养殖系统进行,试验鱼购回后用3%食盐水消毒,放于160L的循环养殖桶中,商品饲料驯化试养7天后,选择规格整齐,体质健壮的个体250尾,开始正式试验。每天于8:30、12:30、16:30三次投喂,每次投喂均视吃食情况而定,以其不抢食为止,正式试验期间要尽量做到饲料投喂无残饵,共计六6周。每天做好水温、投饵量、死鱼等饲养记录,试验期间水温16~23℃、溶解氧10~13mg/l DO>9.0mg/L、氨氮<0.5mg/L,pH值6.9~7.2,水质符合渔业水质标准。
饲养实验结束后,停食24h后全部称重、测量体长,每箱随机取6尾采血,用于血液生化指标测定,然后取内脏团称重,随后立即分离取肝胰脏、脾脏、肠道称重、测肠长,并保存肌肉。每箱再取12尾不抽血,前3尾迅速取肝胰脏、肠道(分前、中、后)放入波恩氏液(Bouin′s)固定,用于石蜡切片的制作。中间3尾,采取剖杀鱼的肝组织,2.5%戊二醛固定,用于电镜切片的制作。后6尾取剖杀鱼的肝组织,用于流式细胞仪的检测。每箱再取5尾,剖杀后迅速取出肝胰脏,用预冷的去离子水冲洗干净,滤纸吸干后装袋密封,置-80℃冰箱中保存备用。
血液指标采用岛津ALAB600全自动分析仪测定。
2结果
2-1血液生化参数
表1不同茵陈汤制剂的添加量对鲤血液生化指标的影响
血清中谷丙转氨酶活性(ALT)以对照组最高,显著高于空白组(P<0.05),与其余3组差异不显著(P>0.05),其余3组间差异不显著(P>0.05);谷草转氨酶活性(AST)以对照组鲤鱼显著高于其它四组(P<0.05),其它四组之间差异不显著(P>0.05);总胆红素(TB)低剂量组、中剂量组显著高于其它3组(P<0.05),其它3组之间差异不显著(P>0.05);NA的水平对照组、低剂量组之间差异不显著(P>0.05),但显著低于其它3组(P<0.05),其它3组之间差异不显著(P>0.05);CL的水平对照组最低,与空白组之间差异不显著(P>0.05),但显著低于其它3组(P<0.05),其它3组之间差异不显著(P>0.05);碱性磷酸酶(AKP)、血糖水平(GLU)各组之间无显著差异(P>0.05),但均具有先降低再上升的趋势;血清中总蛋白TP、总胆固醇Chol和甘油三酯TG、K含量各处理间无显著性差异(P>0.05),但对照组均最高,各处理间有升高后再降低的趋势。
2-2肝细胞存活量
表2不同添加剂量对肝细胞存活量的影响
注:Q1死细胞,Q2晚期凋亡细胞,Q3活细胞,Q4早期凋亡细胞
2-3肝细胞电镜观察
电镜图片分析:
空白(图2):细胞膜、核膜光滑整齐,细胞间界限清晰,线粒体清晰可见,未见明显异常现象。对照(图3):细胞肿胀,边界不清晰,细胞内出现了明显的空泡现象,细胞膜不完整,损伤严重.试验组(图4、5、6)细胞膜、核膜较光滑整齐,细胞间界限清晰,线粒体清晰可见,防止了肝细胞的大量凋亡损伤,无明显异常现象。
3结论
添加1.35%的本发明的中药制剂可明显改善血清生化参数,明显降低肝细胞凋亡数量,显著防止肝细胞病理性损伤,具有明显的保肝护肝作用。
应当理解的是,对本领域普通技术人员来说,可以根据上述说明加以改进或变换,而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (4)
1.一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂,其特征在于,所述中药添加剂由包括下述配比的原料制成:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1。
2.一种抗鱼类肝损伤的中药添加剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)组方药材:茵陈蒿、栀子、大黄,重量比例3∶1∶1;
(2)除杂:除去茵陈蒿中存在的杂物;
(3)粉碎:采用中草药粉碎机进行粉碎,茵陈蒿粉碎为棉絮状,大黄和栀子粉碎过40目筛;
(4)浸提:加入17倍量的95%乙醇,放置十二小时或过夜,然后用抽提装置抽提三次;
(5)浓缩:使用旋转蒸发仪回收抽提液中酒精,浓缩获得浸膏;
(6)常温干燥:将盛放浸膏容器敞口放置,常温下过夜干燥;
(7)包合:制备β-环糊精饱和水溶液,将浸膏加入到饱和溶液中,研磨搅拌半小时至1小时;
(8)干燥成品:将混合液常温或置于40-50℃干燥箱干燥,得到粉末状固体即为成品;
(9)包装储存。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中前两次每次回流提取3小时,最后一次2小时。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(7)中将浸膏按照浸膏∶β-环糊精饱和溶液=1∶6的比例加入到饱和溶液中。
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