CN102016588A - 早期确定前列腺癌治疗后复发的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明描述了用于具有低功能灵敏度的PSA测定的组合物和方法,该PSA测定可用于例如,测定接受治疗后的前列腺疾病的早期复发和确定患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)或病情稳定。
Description
技术领域
本发明涉及用于检测治疗后前列腺疾病早期复发的组合物和方法。
背景技术
在世界范围内,每年有大约670,000例前列腺癌的新病例。英国前列腺癌发病率的统计数据参见http://info.cancerresearchuk.org/cancerstats/types/prostate/incidence/(2009年1月23日最后一次访问)。在欧洲,2004年诊断了237,800个新病例,并且其中的85,200人死于前列腺癌。Boyle,P et al.Annalsof Oncology 16:481-488(2005)。除了如癌症家族史、吸烟状况、年龄和种族的临床风险因素之外,前列腺癌的初始检测一般是基于被称为前列腺特异性抗原(PSA)(由正常的、良性的和恶性的前列腺上皮细胞产生的中性丝氨酸蛋白酶)的蛋白质的循环浓度的提高这一发现。由前列腺细胞产生的PSA以游离或复合物形式存在于精液、血清、血浆和尿液中,并且可在这些液体中被测量。游离和复合物形式的同时测量被称为“总PSA”测量,并且被称为“tPSA”或“PSA”也是正确的。在各种前列腺疾病(尤其是前列腺癌)中,血液中的PSA浓度升高,并且这种浓度升高反映在PSA的血清测量中。Valsanen et al.,Prostate Cancer and Prostatic Disease 2:91-97(1999)。因此,在过去的二十年里,如血清PSA的常规免疫测定之类的检测方法已被用于前列腺癌的初期检测。Yu et al.,J.Urology157:913-918(1997)。
一般来说,如果观察到患者体内的血清PSA浓度升高,就进行前列腺活组织检查以证实癌的存在并表征癌的病理学特征。一旦证实是前列腺癌,大约三分之二的患者会通过前列腺根治术(RP,通过外科手术完全切除前列腺)或通过各种方法的放疗、激素治疗或化疗来进行治疗。但是,这些接受治疗的患者中多达40%可能会发生病情复发。参见Moul,J.Urology 163:1632-1642(2000)。前列腺癌的复发与存活率的预后不良有关。但是,如果在早期阶段检测到复发,预后就能够得到改善,从而可以开始进行包括抢救性治疗(salvage therapy)的合适的处理方法。遗憾的是,用于评价复发可能性的现有方法不足以进行早期检测。在RP之前或在RP时进行的临床病理观察,如癌症分期、Gleason评分、诊断时的年龄、手术切缘瘤累(margin involvement)(在手术切缘上存在癌)、癌对局部组织的浸润、癌对前列腺包膜的浸润、癌对精囊的浸润、癌对膀胱颈的浸润、癌对淋巴结的浸润、以及肿瘤总体积在估计疾病复发的可能性上能够提供一些的信息,但并不一定具有预测性,而且也不能被用于确定复发的确切时间。活组织检查或各种类型的成像方法能够用于证实疾病复发,但是这些方法的缺点是灵敏性差。一般来说,到了活组织检查或成像研究检测到新肿瘤时,复发已经处于预后极度不良的后期。因此,这些方法不足以用于早期检测和基于这些方法进行有力治疗。
为了解决基于临床病理学发现和活组织检查或成像研究不足以确定疾病复发的问题,现在判断疾病复发主要是基于治疗后患者体内的血清PSA浓度升高这一发现。例如,在无残留的前列腺根治术之后,仍残留有分泌PSA的前列腺组织并且生理学上清除手术前PSA水平的充足时间已经过去了,PSA的血清浓度跌至最低。如果血清PSA浓度在最低点之后开始升高,则可表示疾病复发。这种类型的复发被称为“生化复发”(BCR),因为该复发只反映了PSA循环水平的升高,而不是新发现局部或远处肿瘤。PSA的生化复发已成为在如RP的治疗之后的前列腺癌的医学处置的现行检测标准。
已公布了各种阈值从而确立认为发生了生化复发的点。Cookson MS,et al.J Urology 177:540-545(2007)。通常,在PSA最低点之后的200pg/mL(0.2ng/ml)的值被用于确定生化复发点。同样,常规的PSA检测具有功能灵敏度可能更高的范围为100pg/ml的检测限。使用检测限为100pg/mL的常规PSA检测对生化复发的平均检测时间为超过38.4个月。Vassilikos et al.,ClinicalBiochemistry 33(2):115-123(2000)。
发明内容
本发明可用于根据临床观察和PSA值和本发明的PSA指标,监测接受前列腺疾病治疗的患者、和检测前列腺癌、以及治疗后或在决定不进行前列腺切除术后治疗后的癌症复发或病情稳定。通过提供对于PSA的检出限(limit of detection)和功能灵敏度超过常规检测的新型检测,本发明对于确定前列腺癌生化复发具有超越常规血清PSA检测的优势。因此,本发明可用于监测接受前列腺疾病治疗的患者和检测在如RP的基本治疗后相对于病情稳定(未复发)的癌症复发。
本文所描述的方法还可用于,例如检测前列腺癌的早期复发或在前列腺癌的前列腺根治术之后早期确定患者情况稳定。本发明的检出限和功能灵敏度的提高能够提早检测到复发,并且在合适的情况下,能够提早开始对复发癌症进行抢救性治疗。
前列腺癌的治疗可以是前列腺根治术、放射疗法、化学疗法或抗雄激素治疗。稳定病情的早期检测能够避免对切缘和Gleason分评分不良的相对较年轻患者实时辅助治疗,否则如果未检测到病情稳定则会对这些患者进行治疗。另一方面,可对使用本发明的方法检测到早期复发的患者进行早期治疗。因此,能够检测低水平PSA的能力使得减少对某些因为具有高复发风险而目前正在进行治疗的患者的治疗,因为现在已知由于他们的PSA水平低因此他们不具有BR。BR的这种早期检测还可以导致早期治疗。Nilsson et.al.,ActaOncologica Vol.43,No.4,pp 316-381,2004。
在一种实施方式中,可在治疗之后监测患者体内的总PSA(tPSA或PSA)水平浓度,通过从治疗后的患者获得一个或多个样本并通过使用检测限至少低至1pg/mL和功能灵敏度低于10pg/mL的PSA检测来确定每一样本中的PSA量。在另一种实施方式中,使用检测限和功能灵敏度低于1pg/mL的PSA检测通过确定PSA值是否超过其对应的PSA指标临界值(cutoff)来确定治疗后患者的前列腺癌的复发。在一种更优选的实施方式中,PSA检测具有的检测限至少低至0.2pg/mL,功能灵敏度等于或低于0.5pg/mL。
本发明的方法中使用的PSA检测的检测限和功能灵敏度的改进能够进行早期生化再度恶化或复发的检测。当癌细胞较少并且这样的细胞对治疗更敏感时,这种早期生化复发的检测将会实现早期的抢救性治疗。抢救性治疗可以包括局部放射疗法,并且可以通过与并发的雄激素阻断(concurrent androgen deprivation)一起进行或不与其一起进行。例如,已显示当用于治疗PSA倍增时间少于6个月(当发生血清PSA浓度倍增的时间,为天或月或年)的男性时,使用标准的常规检测确定的生化复发之后的两年内提供治疗时,抢救性放射疗法具有良好的效果。Trock et al.,ASCO 2008 UrogenitaryCancers Symposium,Abstract No.85。此外,早期生化复发的检测可消除对病情稳定的患者进行进一步昂贵的治疗的需要,或避免了对这些患者的不必要的辅助和抢救性治疗的需要。
在本发明的另外一种实施方式中,使用功能灵敏度至少小于1pg/mL的PSA检测来检测前列腺癌治疗之后的早期复发。基于PSA测量的指标被用于检测早期生化复发。这些指标包括监测过程中观察到的最高PSA水平、最低PSA水平、最低PSA水平的倍数、最高PSA观察水平与最低PSA水平的比值、或倍增数目。还可以使用PSA速率指标,如Ln[PSA]相对(vs.)时间的PSA升高斜坡的速度、第二连续升高(pg/mL/月)和倍增时间。可以单独或组合使用任意这些指标来确定患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)或病情稳定。
在一个方面,本发明中提出的PSA检测被用于确定患者是否具有前列腺癌复发的早期风险,即,检测早期生化复发(ES-BCR),或患者是否更可能表现为病情稳定的特征,即,检测病情稳定。例如,如果所观察到的最高[PSA]等于或超过[PSA]指标,则确定为患者具有ES-BCR,如果所观察到的最高[PSA]低于[PSA]指标,则确定为患者病情稳定。
作为另一个实施例,PSA检测能够被用于测量获自接受了前列腺癌的前列腺根除术的患者的系列样本中的PSA浓度水平。该测量可被用于确定PSA速率值。从而能够通过确定PSA升高值的速率是否等于或超过PSA升高指标的速率来确定患者是否具有ES-BCR或病情稳定。如果PSA升高的速率等于或超过速率指标,则确定患者具有ES-BCR,如果PSA升高的速率低于阈值,则确定患者的病情稳定。当PSA速率指标为倍增时间时,当倍增时间值至少低至倍增时间指标时倍增时间值等于或超过倍增时间指标,即,低倍增时间比高倍增时间与更为不良的预后相关。
在另外一个方面,基于一个或多个PSA指标的其他分析可将患者分为其他的亚类型,从而使临床医生调整治疗以适合该亚类型,并在比目前临床操作更早期地进行这些治疗。早期开始抢救性治疗能够改善患者的治疗效果。
本文中通过参考附图和实施例更充分地描述本发明,附图和实施例要与发明内容部分、具体实施方式部分和具体讨论或公开的任意优选的和/或特定的实施方式一起阅读。但是,可以多种不同的形式来表现本发明,不应理解为限于本文列出的实施方式;而是这些实施方式仅是以举例说明的方式提供,从而本文所披露的内容是完整的、充分的,并将本发明的完整范围充分地传达给所属领域的技术人员。
附图说明
图1示出了本发明的一种实施方式的结果,特别示出了11号复发患者的具有指数拟合的核酸检测免疫分析[PSA](PSA浓度)pg/mL相对前列腺根除术后的天数的曲线图。检测[PSA]是具体实施方式部分中描述的检测研究确定的[PSA]。
图7示出了图示的所有43位复发患者的pg/mL相对前列腺根除术后天数的曲线图。
图8示出了43位复发患者的PSA水平范围限制于1000pg/ml的[PSA]pg/ml相对前列腺切除术后时间的叠加图。
图9示出了前列腺切除术后第一总[PSA]相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图10示出了最低总[PSA]相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图11示出了所观察到的最高[PSA]水平(pg/mL)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图12示出了最高[PSA]水平/最低[PSA]水平相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图13示出了[PSA]水平的第二连续上升(pg/mL/月)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图14示出了倍增时间数据(天)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。
图15A-图15C示出了倍增时间分别<150天、150-400天、或>400天的复发患者的叠加图。
图15A示出了倍增时间<150天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。
图15B示出了倍增时间为150-400天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。
图15C示出了倍增时间>400天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。
图16A-图16D分别示出了以倍增时间分类的复发患者亚类的叠加图,范围限制于1000pg/mL。倍增时间>400天的复发患者被进一步细分为所观察到的最高PSA是否超过或低于200pg/mL。
图16A示出了倍增时间<150天的复发患者的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。
图16B示出了倍增时间为150-400天的复发患者的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。
图16C示出了倍增时间>400天的复发患者的[PSA]>200pg/mL相对手术后天数的叠加图。
图16D示出了复发患者的[PSA]pg/mL相对手术后天数的叠加图。
图17示出了[PSA]pg/mL相对手术后天数的叠加图,几乎无例外,病情稳定的患者的最高PSA通常不超过15pg/mL。
图18示出了显示监测过程中的倍增数目数据相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的马赛克图。
图19示出了显示连续倍增数目数据相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定(0))的马赛克图。
图20A和图20B示出了多变量ROC曲线与所观察到的最高[PSA]水平的单变量ROC曲线对比。图20A示出了多变量ROC曲线。图20B示出了所观察到的最高[PSA]水平的单变量ROC曲线(黑线)相对多变量ROC曲线(虚线)。
图21A和图21B示出了多变量ROC曲线与最高总[PSA]/最低[PSA]水平的单变量ROC曲线的对比。图21A示出了多变量ROC曲线。图21B示出了最高总[PSA]/最低[PSA]水平的单变量ROC曲线(黑线)相对多变量ROC曲线(虚线)。
图22A和图22B示出了多变量ROC曲线与[PSA]第二升高(pg/mL/月)的单变量ROC曲线的对比。图22B示出了多变量ROC曲线。图22A示出了[PSA](pg/mL/month)的第二升高的单变量ROC曲线(黑线)对多变量曲线(虚线)。表22示出了逻辑回归和ROC计算的结果。
图23A-图23C示出了最高总[PSA]、第二升高(pg/mL/月)指标和最高总[PSA]/最低总[PSA]的单变量分析。
图24示出了对于病情稳定的患者经过大约8年时间的[PSA]水平(pg/mL)相对时间(月)的线性拟合曲线。
图25示出了对于复发患者经过大约5年时间的[PSA]水平(pg/mL)相对时间(月)的线性拟合曲线。
具体实施方式
根据本发明,使用检测限至少低至1pg/mL且功能灵敏度低于10pg/mL的总血清PSA检测(总血清PSA是同时测量血清中的游离的和复合物形式的PSA)来监测前列腺癌治疗之后的患者,并且其能够被用于检测治疗后相对于术后病情稳定的早期生化复发。
但是,当使用常规的PSA检测时,即使对作为前列腺癌复发指标的生化复发的应用也是有限制的。当使用常规检测来测量PSA时,前列腺根除术之后的血清PSA的最低值经常低于检出限。参见unker et al.,Anticancer Research 19:2625-2658(1999)。因此,当循环中并不是确实不存在PSA时,常规检测得到的RP后的血清PSA值会显示为零纳克/毫升(ng/ml)。参见Stamey,Clin.Chem.42(6):849-852。即使PSA值高于常规检测的检测限,但浓度也会低于该检测的“功能灵敏度”(以精确性和准确性定量低水平血清PSA浓度的能力)。这表示血清PSA的真实最低浓度不能通过常规检测来检测或精确且准确地得到。这是令人遗憾的,因为最低浓度本身可以是复发的预报信号,较低的最低浓度与较低的复发风险相关。此外,当PSA水平开始升高时,这不能被常规检测检测到,直到复发到了预后再次成为不良的阶段才能被常规检测检测到。
侵袭性癌可能会复发地更快,但是由于其检出限和功能灵敏度不够,常规检测不能检测到这些复发。甚至非侵袭性癌也开始显示出常规检测不可检测的血清PSA升高。因此,常规的血清PSA检测不能辅助医生早期检测前列腺癌复发。
目前FDA批准的大多数常规PSA检测测量低至约100pg/mL,在美国泌尿外科协会前列腺癌指导小组(American UrologicalAssociation Prostate Cancer Guideline Panel)近期推荐的生化复发的定义中反映了该检出限(大于0.2ng/mL(200pg/mL)的[PSA],大于0.2ng/mL的PSA第二确认水平)。参见Cookson,et al.,J.Urology177:540-545(2007)。由于功能灵敏度的限制,常规PSA检测显示在具有低于该检测的功能灵敏度的[PSA]的样本中不存在PSA。例如Stamey(1996);Vassilikos et al.,Clinical Biochemistry 33(2):115-123(2000)。
对于治疗后早期复发的检测,了解治疗后样本中的PSA是否在检测的功能灵敏度内在临床上是很重要的。否则,临床医生和患者就不知道阴性结果是反映了“不存在”PSA还是尽管存在产生PSA的细胞但检测具有检出限。
在本发明的方法中,具有如本文所述的低的功能灵敏度限制的检测已被用于测量女性血清样本中低至0.2-0.5pg/mL范围的PSA水平。检测的0.5pg/mL功能灵敏度能够确定女性血清中的PSA水平是在0.5pg/mL至3pg/mL的范围内,而不是通常认为的零。预期在前列腺根除术之后,男性具有的PSA水平至少等于在女性中发现的水平。因此,功能灵敏度低至0.5pg/mL的检测能够测量接受前列腺根除术后的男性中的可预期的最低PSA水平。
使用功能灵敏度低于0.5pg/mL的PSA检测测量PSA水平能够准确测量治疗后前列腺癌患者体内的低PSA水平。使用NucleicAcid Detection Immunoassay(核酸检测免疫测定)(测试)的[PSA]测量显示,在前列腺根除术后,许多患者具有稳定的低PSA水平,这表明这些患者的癌生长非常缓慢或已被治愈。对于血清PSA水平随时间升高的患者,PSA水平是精确的。患者PSA血清水平的精确性足以确定PSA升高的斜率,并产生PSA水平先前低于目前检测的功能灵敏度的样本的可重复数据。测量PSA水平是指测量总PSA或tPSA的水平。
使用更灵敏的PSA检测确定了在RP后的最低点之后PSA水平的指数升高。PSA检测结果显示,在[PSA]水平达到200pg/mL之前,癌细胞存在并且指数生长很长时间。数据组的回顾性分析结果显示,在血清水平达到目前的生化复发点200pg/mL之前,前列腺癌细胞存在并且生长了相当长的时间。
在本发明的一个方面,具有至少低至0.5pg/mL的功能灵敏度和/或0.2pg/mL的检测限的PSA检测被用于确定早期前列腺癌的复发。它还降低了检测早期复发所需的时间,达到例如比常规检测提前30个月。使用这些PSA检测,在0.5至100pg/mL范围内PSA的准确测量能够识别早期生化复发并比基于目前的临床操作更早开始治疗。
提早检测到需要进行早期复发前列腺癌的抢救性治疗减少了开始对患者实施持续治疗所需的时间,目前这样的治疗通常只在PSA水平超过200pg/mL之后才进行。如本文所述,使用功能灵敏度为0.5pg/mL的PSA检测来监测患者可使对进一步治疗的评价比使用目前的生化复发测量提前了多达30个月。当细胞可能还是更局部化和/或对治疗敏感时,这将有助于提供提前治疗。
在一个方面,本发明的方法能够更早地和更精确地识别具有病情恶化的风险的男性和早期治疗失败的患者。本发明的方法还可用于较早地确定患者未复发。由此,通过可以更早地将患者分为病情稳定或具有早期生化复发,使用更灵敏的PSA检测降低了系统成本和患者的焦虑。
在某些方面,本发明的高度灵敏的、早期检测方法能够用于评价前列腺根除术之后的治疗选择。在某些实施方式中,本发明可用于检测患者的病情是否稳定、是否应该监测和多长时间一次监测患者的复发、是否和什么时候进行抢救性治疗(如抗雄激素治疗、放射疗法和化学疗法)。
前列腺切除术后的治疗主要是根据临床观察确定的,如Gleason评分、诊断时的年龄、手术切缘、肿瘤分期(T-stage)、组织浸润、包膜浸润、精囊浸润、膀胱颈浸润、淋巴结浸润和肿瘤体积。对复发具有预测性的临床参数包括高Gleason评分、使用目前检测方法检测到的高PSA(以目前的检测方法测量的高于200ng/mL)、pT3病、阳性手术切缘和精囊浸润。参见Nilsson,第346页。
较高比例的前列腺癌患者未通过RP被治愈,并且27%-53%会在十年内显示出[PSA]升高。Nilsson et al.,“A systematic overview ofradiation therapy effects in prostate cancer,”Acta Oncologica,43(4):316-381(2004)。但是,30%至70%目前在进行辅助治疗的患者不会复发。因此,只根据如年龄、Gleason评分和手术切缘的临床观察来对前列腺切除术之后的患者进行辅助治疗会使很大一部分病情稳定的患者遭受不必要的昂贵治疗和可能的并发症。
作为一个实例,可对表现出不良临床征兆的患者进行辅助治疗。这些患者包括具有不良切缘和Gleason评分的较年轻的患者。例如,具有不良切缘和Gleason评分>7的五十岁年龄段的患者通常会接受如外部放射治疗(RT)的治疗。对pT3病程的患者以外部束放射治疗进行前列腺切除术后治疗可延长无生化疾病生存期,当提早实施治疗时,未经RP治愈的患者实现病情稳定的可能性要高于延迟抢救性治疗。参见Nilsson et al.,at 316。
但是,本发明的高灵敏检测以及[PSA]值和指标的应用可以单独使用或与临床观察组合使用,以提供稳定病情的早期检测,从而能够避免目前进行的不必要的辅助治疗。例如,相对年轻患者的病情稳定的早期检测(否则会进行治疗)可避免对不必要的治疗的需要和随之而来的副作用的风险。前列腺切除术后治疗的副作用包括失禁、尿频、夜尿、膀胱炎、腹泻、直肠出血、性欲降低和/或阳痿。因此,在某些方面,使用本发明的检测方法在早期检测病情稳定可避免在目前根据临床观察常规进行辅助治疗的患者中实施不必要的辅助治疗。另外,直到使用常规方法得到的[PSA]达到200pg/mL的延迟实施抢救性治疗降低了实现病情稳定的可能性。参见Nilsson,345。
因此,在某些方面,本发明的PSA值和PSA指标可与临床观察结果组合使用从而确定是否进行辅助和/或抢救性治疗。例如,如果通常根据临床观察对患者进行辅助和/或抢救性治疗,但是多个PSA值之一未超过PSA指标,则检测到病情稳定,可以避免进行不必要的治疗。详细描述了可用于这些方法的PSA值和指标。例如,当[PSA]低于15pg/mL且Ln[PSA]对时间的斜率低于Ln[PSA]对时间的斜率指标时,则即使相对较年轻的患者具有不良的切缘并且Gleason评分>7,也可以避免进行辅助治疗,并监测患者直到一个或多个[PSA]值超过[PSA]指标。
在其他方面,当本发明的方法和临床观察结果组合使用来检测早期复发时,可对具有ES-BCR的患者进行提前治疗,从而提高预后。可根据本领域技术人员已知的方法和治疗方案进行放射疗法和化学疗法。可使用本领域技术人员已知的药物或生物药物组合物、组合、剂型和剂量进行抗雄激素治疗以用于治疗前列腺切除术后患者的辅助或抢救性治疗。
本发明的一个实施例是功能灵敏度为约0.5pg/mL且检测限为0.2pg/mL的PSA检测,使用聚合酶链式反应(PCR)产生信号的夹心免疫测定。在下文中描述了在本发明的方法中用于检测血清或血浆样本中的PSA的这样的检测的实例。在美国专利第5,665,539号中描述了蛋白质的免疫PCR形式的检测,其全部内容通过引用结合于本文作为参考。至少低至规定的PSA检测的任意功能灵敏度可用于本发明的方法。检测蛋白质和蛋白质检测中信号生成的方法对于本领域的人员而言是已知的。例如,本发明的方法可使用能够提供用于本发明的方法所需的功能灵敏度的检测方式(包括夹心免疫测定)并产生信号的任何其他方法。例如,产生信号的方法可包括脱氧核糖核酸(DNA)芯片、生物发光、放射性、化学荧光、纳米颗粒或寡核苷酸-纳米颗粒,可以单独使用或组合使用。
此外,如下文更详细的讨论的,如倍增时间和/或所观察到的最大PSA浓度的PSA值可用于进一步将早期复发患者分为多个组。这些分类可能可被用于对不同亚群的患者推荐不同的治疗方法。因此,使用本发明能够为临床医生和患者提供对治疗失败或早期生化复发的精确指示,并能够更及时和更适当地选择治疗方法以控制病情。此外,作为早期检测结果的提前治疗可改善患者的治疗结果,并避免使病情稳定的患者接受更昂贵的治疗。
在一种实施方式中,本发明包括一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR,early stage biochemical recurrence)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本;
b)使用功能灵敏度至少低至20pg/mL的PSA检测测量样本的PSA水平,
c)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值,其中如果一个或多个样本的PSA值超过PSA指标,则检测到了ES-BCR。
PSA检测可用于确定从前列腺癌治疗之后的患者获得的样本中的PSA水平。PSA水平可包括样本中的PSA量或浓度。该样本可以为血浆或血清样本。PSA水平测量可用于监测和评价前列腺癌治疗是否使该病症得到了有效治疗。优选地,PSA检测具有的功能灵敏度至少低至0.5pg/mL,检测限低至0.2pg/mL。
“PSA值”是一种参数,它是观察到的PSA水平的函数。PSA值可以包括,例如,PSA最低水平之后测量的观察到的PSA水平、观察到的PSA水平或所观察到的最大PSA水平与最低PSA水平的比值,Ln[PSA]相对时间的斜率、PSA水平升高的速率、PSA水平的倍增时间、或PSA水平的第二连续升高。所观察的PSA水平可以为浓度或量。
“PSA指标”是预定的边界值、阈值或数目,其以统计显著性来区分病情稳定的患者和具有或将具有生化复发和/或疾病复发的患者的亚群。
当使用功能灵敏度至少低至1pg/mL的PSA检测获得的PSA值超过对应的PSA指标时,就检测到“早期生化复发(early stagebiochemical recurrence)”。可单独或组合使用该值和对应的指标来确定患者是否具有ES-BCR或病情稳定。
可以使用生物化学方法来确定疾病复发,或根据临床观察如成像或活组织检查来确定,尽管这些方法具有对复发灵敏度较差的缺点。使用本发明的方法获得的一个或多个PSA值和PSA指标还可与临床观察结果组合来协助或确定患者的治疗选择。例如,使用本发明的方法检测ES-BCR可导致进一步的治疗,这些治疗包括放射疗法、化学疗法或抗雄激素治疗。在某些实例中,如果[PSA]值早期快速升高和/或早期测量的PSA速率超过了PSA速率指标,则可以许可进行进一步的治疗。作为另外一个实例,根据其他的包括临床观察结果的患者参数,早期不是那么快的[PSA]速率升高会导致或不会导致进一步的治疗。临床观察结果可包括Gleason评分、诊断时的年龄、切缘、肿瘤分期(T-stage)、组织浸润、包膜浸润、精囊浸润、膀胱颈浸润、淋巴结浸润、活组织检查或肿瘤体积。在某些实施方式中,支持进一步治疗的参数包括小于年龄边界值(agecutoff)的年龄、超过Gleason评分边界值的Gleason评分、使用本发明方法的高PSA、阳性切缘和精囊浸润。年龄边界值可以为,例如50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60、65、70、75或80。Gleason评分边界值可以为,例如4、5、6、7、8、9、10。
作为另外一个实例,如果还存在未复发的临床观察指征,如低Gleason评分、或高龄(如超过70或80岁),则[PSA]速率值的缓慢升高可能不会导致进一步治疗。此外,如果本发明的方法检测到病情稳定,则不进行进一步的治疗。在未进行进一步治疗的情况下,理想的是继续使用本发明的方法监测一个或多个PSA值,单独使用或与临床观察结果组合使用从而确定在后期是否要进行进一步治疗。
PSA指标可以是所观察到的最大PSA水平的预定边界值或阈值、最低PSA水平的倍数(multiplier)、最大观察PSA水平、最低PSA水平、Ln[PSA]相对(vs.)时间的斜率、PSA升高的速率或PSA的倍增时间。倍增时间是(Ln(2)/K),其中K是PSA水平对时间的曲线图的指数拟合的斜率。在倍增时间的情况下,当倍增时间值小于或等于PSA指标时,PSA值“超过”PSA指标。使用如本文描述的标准统计学方法确定PSA指标。例如,PSA水平指标可以为至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60pg/mL的[PSA]指标。更优选地,PSA水平指标为至少约15pg/mL、20pg/mL或25pg/mL的[PSA]指标。还可以规定PSA水平指标的范围。[PSA]指标范围可以为,例如15-25pg/mL、15-22pg/mL或20-25pg/mL。可单独使用PSA或与其他的PSA指标或临床指标组合使用从而确定患者病情稳定或具有ES-BCR。
“PSA最低点”表示从例如接受前列腺根除术治疗后的患者获得的样本测量的最低PSA量。PSA最低点是由于通过治疗去除或杀死增生的前列腺组织造成的PSA清除。PSA的半衰期为2.2天至3.5天,并且将其从血管清除需要耗费3至4周或达6-8周的时间。Ellis et al.,Adult Urology,50(4),573-579,(1997)。在例如前列腺根除术治疗后,在去除或杀死增生前列腺细胞的治疗之后的血清PSA水平降至最低点。在病情稳定的患者中,PSA水平会在降至最低点后保持平稳。样本可以是一系列血清样本以用来测量其PSA水平。一系列的血清样本是从接受了例如前列腺根除术或抢救性治疗的治疗后的同一患者在不同的时间点获得的两个或多个样本。
治疗是指前列腺疾病的医疗处置中的一种或多种治疗。前列腺疾病的治疗优选是前列腺癌的治疗。前列腺癌的治疗优选是前列腺根除术。前列腺癌的治疗还可包括放射疗法,其包括抢救性放射疗法、以及激素疗法或化学疗法。
总PSA检测优选具有至少低至10pg/mL的检测限和至少低至20pg/mL的功能灵敏度。PSA检测优选具有至少低至15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6或0.5pg/mL的功能灵敏度。PSA检测优选具有低至0.2pg/mL的检测限和/或约0.5pg/mL的功能灵敏度。可替代地,在本文中,检测限是指功能检测限或检出限。检出限(limit of detection,LOD)设定为5%的I型或II型误差率检测的样本中的分析物的最低量。
在某些实施方式中,检出限可以为至少低至15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5或0.2pg/mL。PSA检测也可具有低至0.5pg/mL的检测限,而功能灵敏度低至1、2、3、4或5pg/mL。在某些实施方式中,PSA检测可具有0.2pg/mL的功能检测限和0.5pg/mL的功能灵敏度,并且还包含使样本与包含非核酸PSA结合体和能够用于产生PCR信号的核酸标记的结合物接触。
近年来,对于生化复发的最普遍定义是[PSA]超过0.2ng/mL(200pg/mL),然而使用的是100pg/mL至2000pg/mL的水平范围。Doherty et al.,J.Cancer 83(11):1432-1436(2000)。用功能灵敏度至少低至1.0pg/mL的PSA检测来确定早期生化复发是否发生是可能的。早期生化复发的检测在使用常规PSA检测确定的生化复发检测之前进行。
在本发明的一个方面,可通过比较所观察到的最大PSA水平与PSA水平指标来检测基于PSA水平的ES-BCR。PSA水平为10pg/mL至60pg/mL之间的至少任意水平,优选10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55或60pg/mL,更优选10、15、20、25或30pg/mL的PSA水平可用作PSA指标来确定ES-BCR。例如,如果所观察到的最大PSA水平指标是15pg/mL,则将超过15pg/mL的所观察到的最大PSA水平与PSA指标进行比较来检测ES-BCR。
在另外一个方面,可利用所观察到的最大PSA与最低PSA之比作为PSA指标来确定是否发生ES-BCR。例如,所观察到的最大PSA/最低PSA可以为3至11之间的任意值,优选3、4、5、6、7、8、9、10或11,更优选6。最低PSA水平的倍数可以为2X、4X或8X,优选4X。
在本发明的另外一种实施方式中,PSA检测可用于确定从治疗后患者获得的系列样本的PSA。随时间取得的系列样本的PSA测量可用于计算PSA速率值,包括PSA改变的速率、Ln[PSA]相对时间的斜率、或PSA增加的倍增时间。将一个或多个这些PSA速率值与其对应的速率指标进行比较可以确定是否发生ES-BCR。
在该实施方式中,本发明可包含,例如,确定患者是否具有早期生化复发(ES-BCR,early stage biochemical relapse)的方法,包含:
a)从该患者获得样本;
b)使用功能灵敏度至少低至1pg/mL的PSA检测确定每一样本中的PSA水平;
c)确定该PSA速率值超过PSA速率指标,从而检测到ES-BCR;或
确定该PSA速率值未超过PSA速率指标,从而检测到病情稳定。
用于确定PSA值的第一样本可取自治疗后的任意时间,或在预先清除治疗的PSA水平和PSA最低点之时或之后。通常,会在治疗后的2周至8周之间的任意时间取第一样本。可以以用于前列腺疾病的临床监测的任意间隔设定来取样。优选在治疗后30或45天取第一样本,随后优选以3个月的间隔获取其他的样本。如果样本PSA值显示出ES-BCR已发生或显示治疗失败,则可调整时间进程。
应从PSA最低点测量PSA水平的升高的速率。PSA升高速度超过指标水平的患者具有发生早期生化复发的特征。可通过使用统计学分析,包括单变量逻辑回归和受试者工作特性(ROC)分析、双变量分析或多变量分析或其他合适的统计学方法来获得病情稳定和具有ES-BCR的患者亚群进行良好区分的指标值,从而获得、评价或确定速率指标。
如下文进一步讨论的,PSA水平随时间的升高速率是患者是否具有ES-BCR或病情稳定的一个良好指标。此外,诸如第二连续升高的速率指标可用作患者是否具有ES-BCR或病情稳定的指标。[PSA]指标的改变速度或第二连续升高指标可以为0.2pg/mL/月和2.5pg/mL/月之间的任意值,优选0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.2.、3.4、3.6、3.8或4.0pg/mL/月,并且更优选0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0或2.0pg/mL/月,或这些值中的任意值。作为另外一个实例,Ln[PSA]相对时间的斜率指标可以为超过约0.015至0.0425之间的任意水平,优选0.015、0.175、0.020、0.0225、0.025、0.0275、0.030、0.0325、0.035、0.0375、0.040、0.0425或0.045,并且更优选0.03。
此外,在一种实施方式中,患者是否具有ES-BCR的倍增时间指标可以为400-800天之间的任意天数,更优选400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775或800天,并且最优选550天。当PSA速率值未超过PSA速率指标时,确定病情是稳定的;如果PSA速率值等于或超过PSA速率指标,则检测到了ES-BCR。在倍增时间指标的情况下,如果PSA倍增时间天数等于或少于倍增时间指标,则检测到了ES-BCR。对于倍增时间值和指标,如果倍增时间值小于倍增时间指标,将确定倍增时间值超过倍增时间指标。
在其他的实施方式中,所观察到的最大PSA指标和Ln[PSA]相对时间的斜率指标的组合用于确定患者是否病情稳定或具有ES-BCR。例如,该方法还包含c)确定PSA水平超过15pg/mL的PSA指标并且Ln[PSA]相对时间的斜率超过0.03的Ln[PSA]相对时间的斜率指标,从而检测到ES-BCR。另外,如果PSA水平小于15pg/mL或PSA水平升高速率低于约0.03,则检测到病情稳定。在该实施例中,如果两个PSA升高速率都等于或超过速率指标,并且所观察到的PSA值等于或超过所观察到的最大PSA指标,则确定ES-BCR。
在另外一个方面,本发明提供了一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR,early stage biochemicalrecurrence)的方法,包含
a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本;
b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA检测测量每一样本中的PSA水平;
c)确定PSA速率值;
d)确定PSA速率值等于或小于PSA速率指标,从而检测到了ES-BCR;和
e)根据PSA速率指标将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
PSA倍增时间值等于或超过速率阈值的患者可根据倍增时间被分类为具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)。作为一个实施例,在某些实施方式中,倍增时间等于或少于10个月显示出快速复发;倍增时间大于约10个月到长达等于24个月或约24个月显示出中性ES-BCR,倍增时间大于约24个月显示出慢性复发。
在另外一个方面,本发明提供了一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)的方法,包含
a)从前列腺癌治疗后的患者获得一系列血清样本组;
b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA检测测量每一样本中的PSA水平;
c)确定倍增时间值和所观察到的最大PSA值;
d)确定倍增时间等于或小于倍增时间指标,从而检测到了ES-BCR;和
e)根据倍增时间和所观察到的最大PSA将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
在另一方面,可将PSA倍增时间等于或超过倍增时间阈值的患者根据倍增时间和/或所观察到的最大PSA分类为四个ES-BCR亚类。1型复发患者的倍增时间少于150天。2型复发患者的倍增时间为150-400天,3型复发患者和4型复发患者的倍增时间超过400天。对于3型患者,所观察到的最大PSA超过200pg/mL,而4型患者对于超过400天的持续时间所观察到的最大PSA值不超过200pg/mL。
在另外一个方面,本发明提供了一种确定检测患者在前列腺癌的抢救性治疗之后是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包含
a)从接受抢救性治疗后的患者获得样本;
b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA测定测量每一样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值;
其中,如果PSA值超过PSA指标,则检测到了ES-BCR,如果PSA值未超过PSA指标,则检测到了病情稳定。
在另外一个方面,本发明提供了一种包含使用PCR信号检测的适合于进行PSA夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物(conjugate,结合物)的试剂盒,其中该测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至0.5pg/mL的功能灵敏度。该试剂盒还包含确定一个或多个PSA值的软件。
在另外一个方面,本发明提供了一种包含检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法说明的标签(label),其包含
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本;
b)使用功能灵敏度小于1pg/mL的PSA检测测量样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值;
其中,如果PSA值等于或超过PSA指标,则检测到了ES-BCR,如果PSA值未超过PSA指标,则检测到病情稳定。
实施例
使用较高灵敏度测定来测量总PSA(tPSA)的临床研究显示,通过使用较高灵敏度的检测来监测血清PSA的变化能够提前检测到生化复发。相比之下,以前报道的常规检测的功能灵敏度是有限的,并且不能可靠地报告低于约0.01ng/mL(10pg/mL)的PSA水平。因此,使用高灵敏度[PSA]测定提供了更可靠的早期BCR检测。
使用功能灵敏度为0.5pg/mL的核酸检测免疫测定(测定)来测量血清样本中的总PSA(tPSA)。参见Clin Chem 53(6)Suppl.,2007,#C-15。以夹心免疫测定的形式来实施测定。
在设计为检测接受前列腺根除术的男性患者样本中pg/mL水平的PSA测定中使用了针对PSA上不同表位的两种抗体。
实施例1A:产生信号核酸-抗PSA偶合物(conjugate)
第一抗体偶合(化学连接)于Jablonski和Adams在IVDTechnology(2006年11月)中所描述的60个碱基的寡核苷酸。然后在pH范围为7.0-7.5下将该报告抗体在含有牛血清白蛋白(BSA)和表面活性剂的的缓冲稀释液中稀释到约10-30皮摩尔(pM)以减少非特异性结合。
实施例1B:产生捕获核酸-抗PSA偶合物
将第二抗体固定在直径大约为1微米的顺磁微粒上。捕获抗体具有与其化学连接的生物素,使用Pierce提供的类别号为21335的EZ-连接硫代-NHS-LC-生物素(硫代琥珀酰亚胺基-6-(生物素氨基)己酸酯(盐),使用它们的目录中描述的方法来使用上述生物素,随后通过制造商Seradyn(类别号为3015-2104)制造的已连接到磁性微粒上的链霉亲和素连接物将其连接到顺磁微粒上。
实施例1C:
测定的条件
使75微升(μl)的报告抗体与20μl的患者血清样本在室温下反应两小时。然后以异质的形式将固定在顺磁微粒上的捕获抗体加入到报告抗体和样本溶液中。轻轻搅拌使顺磁微粒保持为悬浮状态,从而使该混合物反应30分钟。
孵育结束时,从剩余溶液磁性分离微粒,小心地去除剩余溶液而在孔的一侧留下磁性颗粒。然后将磁性颗粒清洗3-5次从而去除未结合的报告抗体。将该溶液缓冲至中性pH,该溶液含有如Tween20的表面活性剂。所得到的清洗后的颗粒只含有PSA(如果存在的话),捕获抗体和由DNA标记的报告抗体成为夹心结构。
然后将含有与DNA互补的互补引物和Taq聚合酶的PCR试剂加入到清洗后的顺磁微粒中,进行实时PCR。该PCR扩增步骤使用标准的市售试剂。在含有结合于报告抗体的DNA的免疫复合物的存在下,进行DNA模板的扩增。
然后从由已知的tPSA浓度校准(5、25和100pg/mL)产生的标准曲线读取未知样本。此外,每一96孔板包含0.0pg/mL、10.0pg/mL和80.0pg/mL的PSA对照,进一步保证每块板的运行的PCR扩增步骤都在适当的控制下。
如Jablonski和Adams在IVD Technology(2006年11月)中所述,还可以以同质形式进行该测定。例如,第一抗PSA单克隆抗体由寡核苷酸序列(a)标记,第二抗体偶合于寡核苷酸序列(b)或(c)。寡核苷酸序列(a)分别与序列(b)和(c)3’末端的最后9个和15个碱基互补。在含有0.1%的牛血清白蛋白(BSA)的10mmolTris(pH 8.0)中将偶合对稀释到10-100pmol,并且在PSA的存在下结合2小时。然后用Tris/BSA稀释溶液,从而将块状偶合物浓度降至低于1pmol,并在52℃下保持1分钟以使未结合的偶合物完全融化。加入含有Taq聚合酶和下游引物的PCR试剂混合物,并封闭(seal)反应。将温度降低至23℃以使与免疫复合物相连的DNA链完全杂交并且开始第一链的延伸。游离的MAb-DNA在稀释溶液中的第一延伸的时间范围(time frame)内不能以相同程度杂交,并且不能参与随后的指数扩增。使与PSA免疫复合物相连的重叠DNA标记延伸5分钟,通过将温度提高到85℃超过3分钟来结束。立即开始所形成的模板的实时PCR扩增,破坏不再需要的免疫复合物。该测定的灵敏度确定为约100fg/mL。
为了证明PSA测定的性能,IMD从EleftheriosDiamandis M.D.Ph.D.(University Health Network and TorontoMedical Laboratories,多伦多,ON,加拿大)的实验室获得患者样本。这些样本包括42位先前被Dr.Diamandis描述为具有病情稳定特征的患者,和43位具有被他分类为具有生化复发的PSA值升高的患者。在前列腺切除术后获得这些样本,如果手术后他们的PSA值降低至100pg/mL则将他们的样本包括在内。使用几种标准确定生化复发,并且生化复发是基于研究过程中获得的时间点值。参见Yu,He;Diamandis,Eleftherios,P.Wong,Pui-Yuen;Nam,Robert;Trachtenberg,John“Detection of Prostate Cancer Relapse with Prostate SpecificAntigen Monitoring at Levels of.001 to 0.1ug/L”J.Urology157:913-18(1997)。
实施例2:评价疾病结果的指标的回顾性研究
测定被用于测量前列腺根除术后前列腺癌患者的系列血清样本中的tPSA水平。将结果与较早的使用基于免疫荧光(IFM)测定的研究测定的血清样本的PSA水平的测量结果进行比较。Vassilikos et al.,Clin.Biochem.33:115-123(2000)。然后分析测定结果从而确定患者临床结果的一致性。
样本
遵循以前发表的研究(J Urol 157:913-8,1997)储存的血清样本(N=435)用于本研究。在1993和1994年收集样本,使用AbbottLaboratories IMx测定来测量PSA水平,然后将样本于-40℃冷冻储存。样本也用于Vassilikos等的研究,其中使用IFM测定来确定tPSA水平。在Clin Chem 39:2108-14,1993中更详细地描述了IFM测定。从85位RP后的基线tPSA<100pg/mL(利用IMx测定测量)的患者获得用于Vassilikos等的研究的血清样本,在RP后从每一位患者获取超过3个系列样本(平均为5.0,中值为5,范围为3-6)。中值年龄为63岁(年龄范围为49-73岁),RP前的tPSA为7.1ng/mL(0.1-49.0),Gleason评分为7(5-9),肿瘤累及程度百分比是25%(1-90%)。临床分期为T1a-c(16)、T2a-b(35)和未知(33)。4位患者接受了RP前治疗(激素=1;放射疗法=2)。在Journal of Urology的研究中,对开始时以Abbott IMx测定确定tPSA值的血清样本通过IFM方法进行了再次分析,与初始值比较未显示显著差异。Journalof Urology的文章确定了BCR为≥2次的连续tPSA升高达到≥100pg/mL,复发从第一次tPSA升高开始。
如果RP后前列腺根除术(RP)后患者的PSA水平低于使用目前FDA批准的常规PSA测定的可检测限,就将他们的血清样本包括在测定PSA研究中。多种常规测定都报道患者在手术后具有零或<0.1ng/mL(<100pg/mL)的值。PSA可检测低于FDA批准的PSA测定大约200倍的PSA水平。因此,使用更高灵敏度的PSA测定能够在第一时间测量前列腺切除术后患者的真实PSA水平。更灵敏和更准确的PSA水平测量使得能够将患者分为两类-病情稳定和早期生化复发。
研究中患者的描述性统计
根据Diamandis的研究测定,四十三(43)位被分类为复发,四十二名(42)位被分类为病情稳定。Yu,et al.,J.Urology 157:913-18(1997)。获得了患者类群的临床病理学变量描述性统计结果。在下表2中总结了复发和病情稳定类群的患者之间的临床变量分布差异的显著性(p<0.05表示复发类群和病情稳定类群之间的变量分布的显著性差异)。
表2:临床病理学变量-复发患者和病情稳定患者之间分布的差异显著性
变量 | N | P |
诊断时的年龄 | 68 | 0.6117* |
分期 | 51 | 0.3324** |
Gleason评分 | 66 | 0.0276** |
手术前化学疗法 | 55 | 0.1611** |
治疗类型 | 51 | 0.4216** |
累及切缘 | 61 | 0.0006** |
前列腺周围组织浸润 | 51 | 0.0006** |
包膜浸润 | 62 | 0.0181** |
精囊浸润 | 62 | 0.6216** |
膀胱颈浸润 | 51 | 0.7037** |
累及淋巴结 | 60 | n/a |
肿瘤体积 | 56 | 0.0008* |
*Wilcoxon秩和
**卡方
在目前的研究中,84位患者(98.8%)可以利用测定测量tPSA以进行生化评价,并且他们中的60%-70%是临床病理学可评价的。利用测量tPSA显示,RP后的最低点或第一tPSA值的中间值(范围)是4.1pg/mL,其范围是0.2-167.9pg/mL。
此外,如上文复发和病情稳定的类群间的临床变量分布的差异显著性的图表所示:亚群之间的Gleason、手术切缘、前列腺周围浸润、包膜浸润和肿瘤体积都显示出显著差异,并且可以成为结果的预测因子(predictor)。
实施例3:基于[PSA]的测量作为疾病结果指标的评价
从样本组收集的数据的分析能够评价各种PSA测量指标预示着疾病结果的假设,并且可用于监测前列腺癌治疗后的患者。这些指标包括基于患者的系列样本的tPSA的测定测量的以下值:tPSA倍增时间(只计算测定的PSA值能够指数拟合的患者);前列腺切除术后第一水平(最低点值不一定与前列腺切除术后第一值相同);最低点后观察到的最高tPSA水平(可于监测中的任意点);最高tPSA水平与最低点之比(需要至少一个在最低点之后的某一时间显示出高于明显的最低水平的值,从而显示出可能的复发);第二连续升高pg/mL/月;升高速率;监测过程中的倍增数目;监测过程中的连续倍增数目。
对于本研究中分析的每一位患者,将利用测定测量的tPSA(pg/mL)作为手术后天数的函数作图。例如,图1示出了11号复发患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。图2示出了31号复发患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。图3示出了38号复发患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。图4示出了病情稳定的86号患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。图5显示出了病情稳定的120号患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。图6示出了病情稳定的126号患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的具有指数拟合的曲线图。
通过患者是否落入复发类别或病情稳定类别将所有患者的曲线图分开。图7示出了全部43位复发患者的t[PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数的曲线图。图8示出了43位复发患者的t[PSA]相对前列腺切除术后时间的叠加图,将范围限制为1000pg/mL时,没有点。
在倍增时间的分析中,研究排除了曲线不能被指数拟合的病情稳定的患者。42位病情稳定的患者中的十位被包括在倍增时间分析中。对于其他的所有分析(所观察到底最高PSA水平、前列腺切除术后第一PSA水平、最低PSA水平、所观察到达最高PSA水平/最低水平比值、倍增数目、连续倍增数目和第二pg/mL/月升高),使用全部43位复发患者和全部42位病情稳定患者的数据,即,未进行排除。
实施例4:疾病结果的可能指标的分析
实施了每一可能的PSA指标(前列腺切除术后第一PSA水平,最低PSA水平,最高观察PSA水平,最高观察PSA水平/最低水平比值,倍增数目,连续倍增数目、第二pg/mL/月升高,倍增时间(其中指数拟合是可能的))对复发或稳定病情的分析,从而评估每一结果作为复发预测因子的相对效用。病情稳定和具有疾病复发的患者的临床分类被用作参考结果。所使用的统计检验是连续变量的Wilcoxon秩和检验和分类变量的Pearson卡方检验。
分析显示,所有计算得到的[PSA]参数都是临床结果(复发或病情稳定)的显著预测因子(Wilcoxon秩和或Pearson卡方p<0.05)。所观察到底最高tPSA水平、第二连续升高pg/mL/月和倍增时间最适合于区分患者亚群。最高PSA水平与最低水平之比和倍增数目也显示出清楚(fair)的区分。
对每一[PSA]指标分析的讨论如下。
实施例4A:前列腺切除术后第一水平相对患者亚群(复发或
病情稳定)的分析
图9示出了前列腺切除术后第一tPSA水平相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表4示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表5中示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的平均值和标准差。根据前列腺切除术后第一tPSA水平相对患者亚群(复发或病情稳定)的数据分析,该参数将两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。病情稳定人群的均值+/-均值的标准误差(SEM)[PSA]是4.1pg/mL+/-0.58,而复发人群的均值+/-SEM[PSA]是28.2+/-5.72。p<0.0001。但是,病情稳定人群与复发人群的重叠达到并超过了中间值。
实施例4B:最低tPSA水平相对患者亚群(复发或病情稳定)
的分析
图10示出了最低t[PSA]水平(pg/mL)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表6示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表7中示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的平均值和标准差。根据最低[PSA]水平的数据分析,该参数将两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。病情稳定人群的均值+/-SEM最低[PSA]是2.4pg/mL+/-0.42,而复发人群的均值+/-SEM最低[PSA]是27.2+/-5.8。p<0.0001。但是,病情稳定人群与复发人群的重叠达到并超过了中间值。
实施例4C:所观察到的最大tPSA水平相对患者亚群(复发
或病情稳定)的分析
图11示出了所观察到的最高[PSA]水平(pg/mL)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表8示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表9中示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的平均值和标准差。所观察到的最高[PSA]水平相对患者亚群的分析显示,最高tPSA水平将病情稳定和复发患者这两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。病情稳定人群的均值+/-SEM[PSA]是9.0pg/mL+/-3.11,而复发人群的均值+/-SEM[PSA]是1295.9+/-403.91。p<0.0001。病情稳定人群与复人群组仅有10%至25%的重叠,因此对二者进行了非常好的区分。在本研究中,只有一位病情稳定的患者具有的观察到的PSA水平高于15pg/mL。
实施例4D:最高tPSA水平/最低水平相对患者亚群(复发或
病情稳定)的分析
图12示出了最高[PSA]水平(pg/mL)/最低水平[PSA](pg/mL)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表10示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表11中示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的平均值和标准差。最高PSA水平/最低水平PSA相对患者亚群的分析显示,最高PSA与最低[PSA]水平之比将两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。p<0.001。病情稳定人群的均值+/-SEM是3.6+/-0.6,而复发人群的均值+/-SEM是87.5+/-20.3。但是,病情稳定人群与复发人群的重叠接近中间值。
实施例4E:第二连续升高pg/mL/月相对患者亚群(复发或病
情稳定)的分析
图13示出了[PSA]水平第二连续升高(pg/mL/月)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表12示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表13中示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的平均值和标准差。第二连续升高(pg/mL/月)的分析显示,该参数将两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。病情稳定人群的均值+/-SEM第二连续升高是0.15pg/mL/月+/-0.13,而复发人群的均值+/-SEM是63.5+/-36.78。p<0.0001。病情稳定人群与复发人群重叠约25%,因此显示出良好的区别能力(discriminatory power)。
实施例4F:倍增时间(天)相对患者亚群(复发或病情稳定)
的分析
图14示出了倍增时间(天)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)和病情稳定(0))的曲线图。表14示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的分位点。表15示出了病情稳定组(0)和复发组(1)的均值和标准差。数据的分析显示,倍增时间(天)将两类人群明显区分开来,因此是结果的预测因子。p<0.0001。病情稳定人群的平均值是1208+/142.9,而复发人群的平均值是318.6+/-26.04。病情稳定人群与复发人群仅重叠10%至25%,因此很好地进行了区分。
根据使用PSA测定所观察到的倍增时间对患者进行的其他分
类
进行了其他分析从而确定倍增时间是否能用于区分患者复发亚群的进一步亚分类。PSA倍增时间分析可以根据<150天(急性复发)、150-400天(中性复发)和>400天(慢性复发)进一步将患者分为三类人群。速率被认为反映了指数生长的速率,因此反映了癌症生长的侵袭性。
图15A-图15C分别示出了倍增时间为<150天、150-400天和>400天的复发患者的叠加图。图15A示出了倍增时间<150的复发患者的[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图,范围限制为1000pg/mL。
图15B示出了倍增时间为150-400的复发患者的[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图,范围限制为1000pg/mL。
图15C示出了倍增时间>400的复发患者的[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图,范围限制为1000pg/mL。
复发患者可被分为四类,第1组,倍增时间小于150天,第2组,倍增时间在150-400天之间,第3组和第4组,倍增时间都大于400天。在第3组中,所观察到的最高PSA超过200pg/mL,而在第4组中,所观察到的最高PSA不超过200pg/mL。
图16A-图16D分别示出了倍增时间的复发患者亚类的叠加图,范围限制为1000pg/mL。倍增时间>400天的复发患者进一步被分为所观察到的最高PSA高于或低于200pg/mL。
图16A示出了倍增时间<150天的复发患者的[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图。
图16B示出了倍增时间<150-400天的复发患者的[PSA]pg/mlvs手术后天数的叠加图。
图16C示出了倍增时间>400的复发患者的最大[PSA]>200pg/mL vs手术后天数的叠加图。
图16D示出了复发患者的[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图。
图17示出了[PSA]pg/ml vs手术后天数的叠加图,几乎无例外地,病情稳定的患者具有的PSA最大值通常不超过15pg/mL。
实施例4G:倍增数目相对患者亚群(复发或病情稳定)的单
变量分析
上表16说明具有前列腺癌复发的43位患者倍相对于病情稳定的42位患者的倍增数目增加。p<0.0001(卡方)时的差异是很明显的。在1次和2次倍增区域中,亚群之间有重叠。重叠的程度是总体人群的约60%,但是有趣的是,(a)总是对复发人群的观察到倍增,并且(b)在病情稳定的人群中没有患者具有3次或4次倍增。图18示出了监测过程中的倍增数目相对前列腺癌复发(1)或病情稳定(0)的患者亚群的数据的马赛克图。
实施例4H:连续倍增数目相对患者亚群(复发或病情稳定)
的单变量分析
上表17说明具有前列腺癌复发的43位患者相对于病情稳定的42位患者连续倍增数目增加。p<0.0001(卡方)时差异是很明显的。重叠的程度为总体人群的约80%。图19示出了连续倍增数目相对前列腺癌复发(1)或病情稳定(0)的患者亚群的数据的马赛克图。
实施例5:使用单变量逻辑回归和受试者工作特性(ROC)分
析的指标评价
单变量逻辑回归和受试者工作特性(ROC)曲线分析被用于评价基于PSA测量的各种指标(前列腺切除术后第一PSA水平、最低PSA水平、所观察到的最高PSA水平、倍增数目、连续倍增数目、第二pg/mL/月升高)是否预示疾病的结果。病情稳定或具有疾病复发的患者的临床分类用作参考。此外,为了计算倍增时间,统计分析示出了指数拟合和其他拟合对于43位复发患者中的40位和42位病情稳定患者中的10位是合适的。如果R2是至少~0.5,则采用指数参数用于倍增时间计算,即使其他的拟合能够提供更好的拟合。此外,为了计算倍增时间,tPSA值必须随着时间升高。
为了评价候选测定指标预测前列腺癌的生化复发的能力,采用了逻辑回归和ROC分析。单独采用每一候选指标的逻辑回归模型(在其自身的模型中)包括最高观察值、倍增时间、所观察到的最大PSA水平/最低水平比值、第二pg/mL/月、倍增数目,它们被用于产生优势比(odds ratio)(治疗效果的测量,将治疗组出现的结果类型的可能性与对照组的结果进行比较;显著偏离值1.0的优势比是理想的)和Wald检验的p值。ROC分析提供ROC曲线下方面积的点估计值(灵敏度相对100-特异性(specificity)的曲线图;面积为1.0是理想的)和相关的95%的置信区间(95%CI)、最佳区分指标值、和处于最佳区分指标值的相关灵敏度和特异性。在下表18和19中总结了结果。
单变量分析的结果的总结
表18:单变量逻辑回归和ROC结果的总结:
参数 | AUC | Wald p |
所观察到的最大值 | 0.994 | 0.0009 |
倍增时间 | 0.992 | |
最大值/最低值 | 0.973 | 0.0002 |
pg/mL/月 | 0.968 | 0.0444 |
倍增数目 | 0.902 |
表19:单变量逻辑回归和ROC结果的总结
除了倍增#指标之外,ROC曲线下方的面积接近于理想状态1.0,灵敏度和特异性的组合高。由于观察的限制,倍增时间的倍增#的逻辑回归模型不能收敛。因此,亚群(病情稳定和早期生化复发)的最强指标是测定PSA水平的所观察到的最高水平,最高PSA水平/最低水平之比和第二pg/mL/月升高。所有这些指标是生化复发的显著预测因子(所有的Wald p值<0.05)。
实施例6:使用多变量逻辑回归和ROC的指标评价
为了进一步评价被认为是单变量分析中的强预测因子的候选指标(测定PSA所观察到的最高水平、最高水平/最低值比值、和第二pg/mL/月升高),进行了多变量逻辑回归和ROC分析。其目的是确定当模型中存在临床病理学预后指标时,测定候选指标是否能够保持预报性能。这些临床病理学指标先前都已显示为复发的显著预测因子,包括:手术切缘累及;癌的包膜浸润;和癌的前列腺周边组织浸润。
对于每一个模型,为测定指标和临床病理学指标提供优势比和Wald p值。还提供了ROC曲线下方面积(AUC)和其相关的95%CI。此外,统计确定了测定指标的多变量模型的AUC和单变量模型的AUC之间的差异显著性。如果该统计解释的p值<0.05,其表示多变量模型显示出超过测定指标本身的预测能力,相反地,p值>0.05表示测定指标是有效力的并且是独立的预测因子,将临床病理学指标加入到模型中并未显著提高前列腺癌复发检测的预报能力。
实施例6A:多变量结果-所观察到的最高PSA
表20
图20A和图20B示出了多变量ROC曲线与所观察到的最高[PSA]水平的单变量ROC曲线的比较。图20A示出了多变量ROC曲线。图20B示出了所观察到的最高[PSA]水平的单变量ROC曲线(黑线)相对多变量ROC曲线(虚线)。表20示出了逻辑回归和ROC计算的结果。所观察到的最高[PSA]值的逻辑回归被用于产生优势比和Wald检测的p值。ROC分析提供了曲线下方面积(AUC)的点估计值,还提供了其相关的95%CI。
实施例6B:多变量结果-最高tPSA/最低比值:
表21
图21A和图21B示出了多变量ROC曲线与最高总 [PSA]/最低[PSA]水平的单变量ROC曲线的比较。图21A示出了多变量ROC曲线。图21B示出了最高总[PSA]/最低[PSA]水平的单变量ROC曲线(实线)相对多变量ROC曲线(虚线)。表21示出了逻辑回归和ROC计算的结果。最高总[PSA]/最低[PSA]水平的逻辑回归模型被用于产生优势比和Wald检验的p值。ROC分析提供了曲线下方面积(AUC)的点估计值,还提供了其相关的95%CI。
所观察到的最高PSA水平对最低PSA水平的比值是独立的结果预测因子(p=0.0051),与只使用所观察到的最高PSA/最低相比,多变量模型未使AUC显著提高(p=0.191)。
实施例6C:多变量结果-第二升高(pg/mL/月)
表22
当包括前列腺周围组织浸润和包膜浸润时,模型不能收敛
图22A和图22B示出了多变量ROC曲线与第二[PSA]升高(pg/mL/月)的单变量ROC曲线的比较。图22B示出了多变量ROC曲线。图22A示出了第二[PSA]升高(pg/mL/月)的单变量ROC曲线(实线)相对多变量ROC曲线(虚线)。表22示出了逻辑回归和ROC计算的结果。第二[PSA]升高(pg/mL/月)的逻辑回归模型被用于产生优势比和Wald检验的p值。ROC分析提供了曲线下方面积(AUC)的点估计值,还提供了其相关的95%CI。
第二升高(pg/mL/月)是结果的独立预测因子,与只使用第二升高相比,多变量模型未使AUC显著提高(p=0.701)。
实施例7:[PSA]指标作为二元分类表示法的评价
还进行了单变量逻辑回归和ROC分析作为二元分类表示法来评价所观察到的最高PSA水平、最高水平/最低水平比值和第二升高(pg/mL/月)的使用。在表23中示出了结果。二元分类表示法的指标边界值(cutoff)为:所观察到的最高水平为25pg/mL,第二升高为0.6pg/mL/月,所观察到的最高PSA水平/最低水平的比值为6。每位患者被分类为超过或未超过这些边界值。
表23-二元分类表示法
前列腺切除术后所观察到的最高值(二元分类)的单变量逻辑回归
最高值/最低值(二元分类)的单变量逻辑回归
pg/mL/月(二元分类)的单变量逻辑回归
如图23A-图23C所示,每一[PSA]指标的单变量分析显示这些[PSA]指标的二元分类表示法都是非常有效的,p<0.0001,AUC值接近1.0。
研究结论:
检测限至少低至0.2pg/mL和功能灵敏度至少低至0.5pg/mL的tPSA能够可靠地测量低至0.5pg/mL的tPSA浓度,提供准确的PSA最低结果和PSA倍增时间计算。使用具有至少低至0.5pg/mL的低功能灵敏度的PSA测定(如测定)的tPSA测量显示,病情稳定患者组具有低并且稳定的PSA水平,大约平均值为3.5PG/ML(0.0035ng/Ml)。病情稳定的患者和具有生化复发的患者之间差异的统计学显著性较高。
所观察到的最高PSA水平是病情稳定或生化复发亚群的非常有效的指标。使用功能灵敏度至少低至0.5pg/mL的PSA测定获得的所观察到的最高PSA水平能够用于早期检测生化复发。pg/mL/月升高也是病情稳定或生化复发亚群的非常有效的指标。所观察到的最高PSA水平与最低水平之比也是病情稳定或生化复发亚群的非常有效的指标。
实施例8:没有更早期数据的患者的差异显著性的计算
根据40位复发患者和10位病情稳定患者的指数拟合,计算当使用测定对样本组测量tPSA时达到10pg/mL、25pg/mL、100pg/mL和200pg/mL的[PSA]时所需要的天数。这种类型的分析能够在前列腺根除术之后非常早期的时间点进行复发和病情稳定的人群的比较。在该回顾性研究中,根据现有指数拟合的数据的推断,在确定与复发患者达到10pg/mL PSA所需的时间相关的较小值时产生较大比例的误差。但是,达到25pg/mL、100pg/mL和200pg/mL时所需要的时间的结果提高的置信度。Wilcoxon秩和分析被用于确定两个亚群之间的差异的显著性。如下表24所示,疾病复发人群比病情稳定人群显著地更早达到特定的[PSA]水平。
表24:根据指数拟合达到各pg/ml PSA水平所需的天数
*Wilcoxon秩和
根据40位复发和10位病情稳定患者的指数拟合计算各时间点(3个月、6个月、9个月、12个月和18个月)的测定pg/mL PSA。使于Wilcoxon秩和分析来确定两个亚群之间的差异的显著性。如下表25所示,复发亚群的在给定时间点的所有值都高于病情稳定亚群。差异的显著性随时间升高,在18个月最终达到p<0.001。这表示类群随着时间持续发散(diverge)。
表25:通过指数拟合计算的各时间点的NADiA PSA pg/ml
*Wilcoxon秩和
实施例9:利用速度作为EC-BCR的指标
经过长达8年的时间,完成了比较16位病情稳定的患者和13位复发患者的前列腺根除术后[PSA]vs时间的线性图的回顾性研究。该研究使用如实施例1-6所描述的NADiA测定来测量总[PSA]。如果患者在研究过程中未表现出前列腺癌复发,则将稳定患者确定为稳定。如果患者具有前列腺癌复发的阳性骨扫描或死于前列腺癌,则确定患者为复发。经过大约8年的时间,使用NADiA测定来确定[PSA]水平。为每一位患者计算线性曲线拟合。示出了稳定患者(#1002)(图24)和复发患者(#2001)(图25)的线性曲线拟合的实施例。
确定了每一位患者的斜率,并在下表26中列出。
表26每一位病情稳定和复发患者的线性曲线的斜率包括在下表中:
病情稳定患者组的最大斜率值(pg/ml/月)是0.472,或比复发患者组的最低斜率值6.58低13倍多。数据表明,使用该高灵敏度测定提供了对前列腺癌的病情稳定和复发患者的100%区分,如果[PSA]vs时间的斜率小于1则认为患者不具有前列腺根除术之后的前列腺癌复发。注意,每一患者组的平均值之间也具有显著差异。
实施例10:根据确定急性、中性或慢性ES-BCR进行前列腺
切除术后治疗
如上所述,从前列腺切除术后的患者获得值。确定PSA速率值(如倍增时间)从而区分复发患者亚群的进一步亚类。
PSA倍增时间的分析可进一步将患者分类为三组,其特征为(1)倍增时间等于或少于约10个月,其显示出急性或快速复发;(2)倍增时间超过约10个月达到等于24个月或约24个月,其显示出中性ES-BCR,和(3)特征为倍增时间超过约24个月,其显示出慢性ES-BCR。
使用外部放射疗法对显示急性复发的患者进行前列腺切除术后治疗。
从显示中性或慢性复发的患者获得Gleason评分的临床观察和创缘。使用外部放射疗法对不超过60岁,Gleason评分>7且创缘不良的显示出中性或慢性复发的患者进行前列腺切除术后治疗。
超过80岁的显示出慢性复发的患者不接受放射疗法。
其他患者的生化复发进行监控。
本文描述的本发明的特定实施方式的描述不是要限定或排除本发明范围内的其他实施方式。
Claims (113)
1.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括:
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本;
b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值;
其中,如果所述PSA值至少是或超过PSA指标,则检测到ES-BCR,如果所述PSA值未超过所述PSA指标,则检测到病情稳定。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述PSA指标是[PSA]。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述检出限至少低至1.0pg/mL。
4.根据权利要求1或14所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.5pg/mL。
5.根据权利要求1或14所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.2pg/mL。
6.根据权利要求1、4或14中任一项所述的方法,其中,所述样本是所述患者的系列样本组中的一个,并确定每一样本中的所述PSA的量。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述PSA指标是速率指标。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述速率指标是倍增时间。
9.根据权利要求7所述的方法,其中,所述速率指标是Ln[PSA]相对时间的斜率。
10.根据权利要求7所述的方法,其中,所述速率指标是[PSA]升高的速度。
11.根据权利要求6所述的方法,其中,所述PSA指标是所观察到的最高PSA水平/最低PSA水平。
12.根据权利要求6所述的方法,其中,所述PSA值是[PSA]。
13.根据权利要求6所述的方法,其中,所述PSA值是第二连续升高(pg/mL/月)。
14.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本;
b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定两个或多个PSA值;
其中,如果两个或多个PSA值的每一个至少为或超过其分别的PSA指标,则检测到ES-BCR。
15.根据权利要求14所述的方法,其中,所述检出限至少低至1.0pg/mL。
16.根据权利要求14所述的方法,其中,一个PSA指标是速率指标。
17.根据权利要求14所述的方法,其中,所述PSA指标之一是Ln[PSA]相对时间的斜率。
18.根据权利要求16所述的方法,其中,所述速率指标是倍增时间。
19.根据权利要求16所述的方法,其中,所述速率指标是[PSA]升高的速度。
20.根据权利要求16所述的方法,其中,所述速率指标是所观察到的最高PSA水平/最低PSA水平。
21.根据权利要求14所述的方法,其中,所述PSA值是第二或更多的连续升高(pg/mL/月)。
22.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,[PSA]是PSA值,并且所述[PSA]至少为或超过所测量到的最低[PSA]的2倍。
23.根据权利要求1、14、45或49-60中任一项所述的方法,其中,所述测量PSA水平还包括:
使所述样本与包含非核酸PSA结合体和核酸标记的偶合物接触。
24.根据权利要求6所述的方法,其中,所述测量PSA水平还包括:
使所述样本与包含非核酸PSA结合体和核酸标记的偶合物接触。
25.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间指标为150天。
26.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间指标为400天。
27.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间指标为550天。
28.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间指标为700天。
29.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间值为150-400天,检测到2型ES-BCR。
30.根据权利要求9或17中任一项所述的方法,其中,所述Ln[PSA]相对时间的斜率指标至少为0.03。
31.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间值为约150天至约400天。
32.根据权利要求8或18中任一项所述的方法,其中,所述倍增时间值为约10个月至24个月。
33.根据权利要求11或20中任一项所述的方法,其中,所述观察到的最高PSA/最低值为3至11。
34.根据权利要求11或20中任一项所述的方法,其中,所述观察到的最高PSA/最低值是6。
35.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]指标是10pg/mL。
36.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]指标是15pg/mL。
37.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]指标是20pg/mL。
38.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]指标是25pg/mL。
39.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]指标是50pg/mL。
40.根据权利要求22所述的方法,其中,所述[PSA]指标是10pg/mL。
41.根据权利要求22所述的方法,其中,所述[PSA]指标是15pg/mL。
42.根据权利要求22所述的方法,其中,所述[PSA]指标是20pg/mL。
43.根据权利要求22所述的方法,其中,所述[PSA]指标是25pg/mL。
44.根据权利要求22所述的方法,其中,所述[PSA]指标是50pg/mL。
45.一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)的方法,包含
a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本组;
b)使用检出限为约0.5pg/mL的PSA测定来测量每一样本中的PSA水平;
c)确定倍增时间和所观察到的最高PSA水平;
d)确定所述倍增时间低于倍增时间指标,从而检测ES-BCR;和
e)根据所述倍增时间和所观察到的最高PSA将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
46.根据权利要求45所述的方法,其中,所述倍增时间小于150天。
47.根据权利要求45所述的方法,其中,所述倍增时间为150天至400天。
48.根据权利要求45所述的方法,其中,所述倍增时间超过400天。
49.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本,其中所述样本是来自所述患者的系列样本组之一,并确定每一样本的PSA的量;
b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定Ln[PSA]相对时间的斜率;
其中,如果所述Ln[PSA]相对时间的斜率值至少为或超过Ln[PSA]相对时间的斜率指标,则检测到ES-BCR,如果所述Ln[PSA]相对时间的斜率值未超过Ln[PSA]相对时间的斜率指标,则检测到病情稳定。
50.根据权利要求49所述的方法,其中,所述检出限低于1.0pg/mL。
51.根据权利要求14或49中任一项所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.5pg/mL。
52.根据权利要求14或49中任一项所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.2pg/mL。
53.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本,其中所述样本是来自所述患者的系列样本组之一,并确定每一样本的PSA的量;
b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定[PSA]升高的速度;
其中,如果所述[PSA]升高的速度值至少为或超过[PSA]升高的速度指标,则检测到ES-BCR,如果所述[PSA]升高的速度值未超过[PSA]升高的速度指标,则检测到病情稳定。
54.根据权利要求53所述的方法,其中,所述检出限低于1.0pg/mL。
55.根据权利要求53所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.5pg/mL。
56.根据权利要求53所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.2pg/mL。
57.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本,其中所述样本是来自所述患者的系列样本组之一,并确定每一样本的PSA的量;
b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
其中,如果[PSA]值至少为或超过[PSA]指标,则检测到ES-BCR,如果PSA值未超过PSA指标,则检测到病情稳定。
58.根据权利要求57所述的方法,其中,所述检出限低于1.0pg/mL。
59.根据权利要求57所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.5pg/mL。
60.根据权利要求57所述的方法,其中,所述检出限至少低至0.2pg/mL。
61.一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本组;
b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA测定来测量每一样本中的PSA水平;
c)确定PSA速率值;
d)确定所述PSA速率值等于或小于PSA速率指标,从而检测到ES-BCR;和
e)根据所述PSA速率指标将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
62.根据权利要求1、10、14、19、45或49-60、92中任一项所述的方法,其中,检测到ES-BCR导致选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
63.根据权利要求1、10、14、19、45或49-60、93、94中任一项所述的方法,其中,检测到病情稳定导致在后期没有检测到ES-BCR时就不进行进一步的治疗。
64.根据权利要求61所述的方法,其中,检测到ES-BCR,并且分类为急性的ES-BCR导致选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
65.根据权利要求61所述的方法,其中,检测到ES-BCR,并且分类为中性的ES-BCR,还包含(f)获得临床参数,对比年龄边界值年轻的、Gleason评分超过Gleason评分边界值的患者进行选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
66.根据权利要求61所述的方法,其中,检测到ES-BCR,并且分类为慢性的ES-BCR,还包含(f)获得临床参数,对比年龄边界值年轻的、Gleason评分超过Gleason评分边界值的患者进行选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
67.根据权利要求61所述的方法,其中,检测到病情稳定导致在后期没有检测到ES-BCR时就不进行进一步的治疗。
68.根据权利要求17所述的方法,其中,第二PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是15pg/mL。
69.根据权利要求17所述的方法,其中,第二PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是10pg/mL。
70.根据权利要求17所述的方法,其中,第二PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是5pg/mL。
71.根据权利要求14所述的方法,其中,第一PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是5pg/mL。
72.根据权利要求14所述的方法,其中,第一PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是10pg/mL。
73.根据权利要求14所述的方法,其中,第一PSA指标是[PSA],且所述[PSA]边界值是15pg/mL。
74.根据权利要求68、69或70中任一项所述的方法,其中,[PSA]值小于[PSA]边界值并且Ln[PSA]相对时间的斜率小于Ln[PSA]相对时间的斜率指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
75.根据权利要求68、69或70中任一项所述的方法,其中,[PSA]值小于[PSA]边界值并且第二PSA值小于第二PSA指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
76.根据权利要求71所述的方法,其中,所述[PSA]值小于5pg/mL的所述[PSA]临界值并且所述第二PSA值小于PSA指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
77.根据权利要求72所述的方法,其中,所述[PSA]值小于10pg/mL的所述[PSA]边界值并且所述第二PSA值小于PSA指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
78.根据权利要求73所述的方法,其中,所述[PSA]值小于15pg/mL的所述[PSA]边界值并且所述第二PSA值小于PSA指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
79.根据权利要求74和75中任一项所述的方法,还包含监测患者ES-BCR。
80.一种试剂盒,包含:
a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定
的核酸-抗PSA偶合物,其中所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至0.5pg/mL的检出限。
81.一种试剂盒,包含:
a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物,其中所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至1.0pg/mL的检出限。
82.一种试剂盒,包含:
a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物,其中所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至2.0pg/mL的检出限。
83.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒,其中,所述核酸-抗PSA偶合物还包含第一核酸-抗PSA偶合物和第二核酸-抗PSA偶合物,其中所述第二核酸-抗PSA偶合物结合于固体支持物。
84.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒,还包含用于确定一个或多个PSA值的软件。
85.根据权利要求46、47或48中任一项所述的方法,还包含用于确定一个或多个PSA值的软件。
86.一种包含检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法的说明的标签,所述方法包括
a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本;
b)使用检出限低于1pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值;
其中,如果所述PSA值超过PSA指标,则检测到ES-BCR,如果所述PSA值未超过所述PSA指标,则检测到病情稳定。
87.一种检测患者在接受前列腺癌的抢救性治疗后是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法,包括
a)从接受抢救性治疗后的患者获得样本;
b)使用检出限为约0.5pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平;
c)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值;
其中,如果所述PSA值超过PSA指标,则检测到ES-BCR,如果所述PSA值未超过所述PSA指标,则检测到病情稳定。
88.根据权利要求2或12中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]值超过所测量到的最低[PSA]至少4倍。
89.根据权利要求1、14、45、49、53、57、61或87中任一项所述的方法,其中,所述PSA测定是使用适合用于实施PSA夹心免疫测定的两种核酸-抗PSA偶合物的夹心免疫测定,并且还包含使用PCR信号检测。
90.根据权利要求89所述的方法,其中,所述核酸-抗PSA偶合
物还包含第一核酸-抗PSA偶合物和第二核酸-抗PSA偶合物,其中所述第二核酸-抗PSA偶合物结合于固体支持物。
91.根据权利要求89所述的方法,其中,所述PSA夹心免疫测定是均相测定。
92.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度超过所述[PSA]升高速度指标,其中检测到了ES-BCR。
93.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度未超过所述[PSA]升高速度指标,其中检测到了病情稳定。
94.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度未超过所述[PSA]升高速度指标,当后期没有检测到ES-BCR时,不进行进一步的治疗。
95.根据权利要求94的任一项所述的方法,还包含监测患者的ES-BCR。
96.根据权利要求92所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
97.根据权利要求93所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
98.根据权利要求94所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
99.根据权利要求95所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
100.根据权利要求92所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
101.根据权利要求93所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
102.根据权利要求94所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
103.根据权利要求95所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
104.根据权利要求92所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
105.根据权利要求93所述的方法,其中所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
106.根据权利要求94所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
107.根据权利要求95所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
108.根据权利要求92所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.0pg/mL/月。
109.根据权利要求93所述的方法,其中所述[PSA]升高速度指标是约1.0pg/mL/月。
110.根据权利要求94所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.0pg/mL/月。
111.根据权利要求95所述的方法,其中,所述[PSA]升高速度指标是约1.0pg/mL/月。
112.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒,其中,所述核酸-抗PSA偶合物还包含第一核酸-抗PSA偶合物和第二核酸-抗PSA偶合物,其中所述第二核酸-抗PSA偶合物结合于固体支持物。
113.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒,其中,所述夹心免疫测定是均相测定。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108959839A (zh) * | 2017-05-26 | 2018-12-07 | 长沙金域医学检验所有限公司 | 一种生化发光功能灵敏度评估方法 |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2003296925A1 (en) * | 2002-11-01 | 2004-06-07 | Leucadia Technologies, Inc. | Displacement sandwich immuno-pcr |
US7858323B2 (en) | 2004-06-09 | 2010-12-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Phage microarray profiling of the humoral response to disease |
CN101137758B (zh) | 2004-11-03 | 2012-10-10 | 意力速分子诊断股份有限公司 | 均相分析物检测 |
PT1815028E (pt) | 2004-11-03 | 2012-01-24 | Iris Molecular Diagnostics Inc | Microbolhas para separação por afinidade |
EP3450979A3 (en) * | 2010-03-17 | 2019-04-24 | The Regents of The University of Michigan | Using phage epitopes to profile the immune response |
WO2012170776A2 (en) * | 2011-06-09 | 2012-12-13 | Quanterix Corporation | Methods of determining a patient's prognosis for recurrence of prostate cancer and/or determining a course of treatment for prostate cancer following a radical prostatectomy |
GB2505266A (en) * | 2012-04-09 | 2014-02-26 | Soar Biodynamics Ltd | Estimating the probability of a prostate condition by dynamic analysis |
US20130323739A1 (en) * | 2012-06-05 | 2013-12-05 | Iris International, Inc. | Method for determining recurrence or stable disease after treatment for prostate cancer |
US10745760B2 (en) | 2014-01-17 | 2020-08-18 | University Health Network | Biopsy-driven genomic signature for prostate cancer prognosis |
KR20190057444A (ko) | 2015-08-10 | 2019-05-28 | 에센릭스 코프. | 단계 간단화, 소량 샘플, 속도 가속화, 사용이 용이한 생물화학 측정장치 및 방법 |
WO2017048881A1 (en) | 2015-09-14 | 2017-03-23 | Essenlix Corporation | Device and system for collecting and analyzing vapor condensate, particularly exhaled breath condensate, as well as method of using the same |
CN112462055A (zh) | 2015-09-14 | 2021-03-09 | Essenlix公司 | 用于分析样品,尤其是血液,的装置和系统以及其使用方法 |
JPWO2018101328A1 (ja) * | 2016-11-29 | 2019-10-24 | コニカミノルタ株式会社 | 診療補助情報の取得方法 |
JP6667052B1 (ja) | 2016-12-21 | 2020-03-18 | エッセンリックス コーポレーション | 試料を認証するためのデバイスおよび方法ならびにその使用 |
JP7003158B2 (ja) | 2017-02-07 | 2022-01-20 | エッセンリックス コーポレーション | 圧縮開放流アッセイおよび使用 |
CA3053002A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Essenlix Corp. | Bio/chemical material extraction and assay |
US11883824B2 (en) | 2017-02-09 | 2024-01-30 | Essenlix Corporation | Assay using different spacing heights |
CN110998325A (zh) | 2017-02-09 | 2020-04-10 | Essenlix公司 | 扩增测定 |
WO2018148609A2 (en) | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Essenlix Corporation | Colorimetric assays |
CN111448449A (zh) | 2017-02-16 | 2020-07-24 | Essenlix公司 | 采用纹理化表面的测定 |
US11280706B2 (en) | 2017-08-01 | 2022-03-22 | Essenlix Corporation | Dilution calibration |
CN111492222A (zh) | 2017-08-01 | 2020-08-04 | Essenlix公司 | 样品收集、保持和测定 |
US11725227B2 (en) | 2017-08-01 | 2023-08-15 | Essenlix Corporation | Devices and methods for examining drug effects on microorganisms |
WO2019075415A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Essenlix Corporation | DEVICES AND METHODS FOR AUTHENTICATING MEDICAL ANALYSIS AND USES THEREOF |
US11609224B2 (en) | 2017-10-26 | 2023-03-21 | Essenlix Corporation | Devices and methods for white blood cell analyses |
US11237113B2 (en) | 2017-10-26 | 2022-02-01 | Essenlix Corporation | Rapid pH measurement |
US10807095B2 (en) | 2017-10-26 | 2020-10-20 | Essenlix Corporation | Making and tracking assay card |
WO2019118652A1 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Essenlix Corporation | Sample manipulation and assay with rapid temperature change |
WO2019118936A2 (en) | 2017-12-14 | 2019-06-20 | Essenlix Corporation | Devices, systems, and methods for monitoring hair |
WO2019140334A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Essenlix Corporation | Homogeneous assay (ii) |
US11885952B2 (en) | 2018-07-30 | 2024-01-30 | Essenlix Corporation | Optics, device, and system for assaying and imaging |
WO2021113794A1 (en) * | 2019-12-06 | 2021-06-10 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Clinical decision support for personalized adaptive prostate cancer therapy |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004042030A2 (en) * | 2002-11-01 | 2004-05-21 | Leucadia Technologies, Inc. | Displacement sandwich immuno-pcr |
CN1871517A (zh) * | 2002-02-19 | 2006-11-29 | 免疫公司 | 快速有效分离循环癌细胞的方法和试剂 |
WO2006126008A2 (en) * | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Oncimmune Limited | Improved immunoassay methods |
WO2006137932A2 (en) * | 2004-11-03 | 2006-12-28 | Leucadia Technologies, Inc. | Homogeneous analyte detection |
US20070077571A1 (en) * | 2000-06-15 | 2007-04-05 | Ellington Andrew D | Methods and apparatus for identifying allosterically regulated ribozymes |
CN1945328A (zh) * | 2005-10-06 | 2007-04-11 | 横河电机株式会社 | 化学处理盒及其使用方法 |
CN101566626A (zh) * | 2008-07-22 | 2009-10-28 | 深圳市人民医院 | 一种抗原检测方法及其应用 |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1582956A (en) * | 1976-07-30 | 1981-01-21 | Ici Ltd | Composite magnetic particles |
US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
FR2571498B1 (fr) * | 1984-10-04 | 1988-04-08 | Immunotech Sa | Procede de separation de cellules utilisant des anticorps et des billes de faible densite |
US4618525A (en) * | 1985-06-03 | 1986-10-21 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Coated glass microbubbles and article incorporating them |
US4824776A (en) * | 1985-07-25 | 1989-04-25 | Molecular Biosystems, Inc. | Method for increasing the sensitivity of nucleic acid hybridization assays |
US4946778A (en) * | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US4933447A (en) * | 1987-09-24 | 1990-06-12 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Quinoline derivatives |
US5766849A (en) * | 1989-07-11 | 1998-06-16 | Gen-Probe Incorporated | Methods of amplifying nucleic acids using promoter-containing primer sequence |
SE9002480D0 (sv) * | 1990-07-23 | 1990-07-23 | Hans Lilja | Assay of free and complexed prostate-specific antigen |
EP0529070A1 (en) * | 1991-02-27 | 1993-03-03 | Amoco Corporation | Methods for improving the sensitivity of hybridization assays |
US5665539A (en) * | 1991-07-12 | 1997-09-09 | The Regents Of The University Of California | Immuno-polymerase chain reaction system for antigen detection |
US6723303B1 (en) * | 1991-09-17 | 2004-04-20 | Amersham Health, As | Ultrasound contrast agents including protein stabilized microspheres of perfluoropropane, perfluorobutane or perfluoropentane |
US5270184A (en) * | 1991-11-19 | 1993-12-14 | Becton, Dickinson And Company | Nucleic acid target generation |
US6172208B1 (en) * | 1992-07-06 | 2001-01-09 | Genzyme Corporation | Oligonucleotides modified with conjugate groups |
DE69430665T2 (de) * | 1993-01-15 | 2002-11-21 | New York Health Res Inst | Empfindlicher nukleinsäure-sandwichhybridisierungs-assay und kits |
US5985548A (en) * | 1993-02-04 | 1999-11-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Amplification of assay reporters by nucleic acid replication |
ATE244406T1 (de) * | 1993-05-10 | 2003-07-15 | Nissui Pharm Co Ltd | Verfahren zur bestimmung von mehr als einem immunologischen liganden und bestimmungsreagenz sowie satz dafuer |
US5635602A (en) * | 1993-08-13 | 1997-06-03 | The Regents Of The University Of California | Design and synthesis of bispecific DNA-antibody conjugates |
US5599677A (en) * | 1993-12-29 | 1997-02-04 | Abbott Laboratories | Immunoassays for prostate specific antigen |
US5648213A (en) * | 1994-08-30 | 1997-07-15 | Beckman Instruments, Inc. | Compositions and methods for use in detection of analytes |
JPH08178926A (ja) * | 1994-10-25 | 1996-07-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | イムノアッセイプレートおよびその用途 |
DE19524133A1 (de) * | 1995-07-03 | 1997-01-09 | Bayer Ag | Die Verwendung von neuen und bekannten kationischen 4,5-Dihydro-1H-1,2,3-triazoliumverbindungen als Farbstoffe, neue kationische 4,5-Dihydro-1H-1,2,3-triazoliumverbindungen und deren Herstellung |
US6165942A (en) * | 1996-10-03 | 2000-12-26 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Heterocycle-fused pyrimidinone derivative and herbicidal composition |
US6083484A (en) * | 1996-10-17 | 2000-07-04 | Molecular Biosystems, Inc. | Microparticles stabilized by polynuclear chromium complexes and their use as ultrasound contrast agents |
US6245318B1 (en) * | 1997-05-27 | 2001-06-12 | Mallinckrodt Inc. | Selectively binding ultrasound contrast agents |
US6086540A (en) * | 1997-10-07 | 2000-07-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Methods of ultrasound imaging using echogenically persistent contrast agents |
US6531278B1 (en) * | 1998-01-14 | 2003-03-11 | Utah State University | Ligand-DNA composition for capture and detection of contaminants on a solid surface |
WO1999055837A2 (en) * | 1998-04-28 | 1999-11-04 | Nycomed Imaging As | Improvements in or relating to separation processes |
US8063190B2 (en) * | 1998-06-02 | 2011-11-22 | Tom Robin Caine Boyde | Nucleic acid-linked conjugates and methods for making and using them |
US6214566B1 (en) * | 1998-11-16 | 2001-04-10 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Method for detecting anti-squalene antibodies |
AU7896700A (en) * | 1999-10-13 | 2001-04-23 | University Of British Columbia, The | Methods to identify compounds that modulate neuronal activity |
CA2391534A1 (en) * | 1999-11-15 | 2001-05-25 | Drug Innovation & Design, Inc. | Selective cellular targeting: multifunctional delivery vehicles |
US7306904B2 (en) * | 2000-02-18 | 2007-12-11 | Olink Ab | Methods and kits for proximity probing |
US6511809B2 (en) * | 2000-06-13 | 2003-01-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for the detection of an analyte by means of a nucleic acid reporter |
US20020132260A1 (en) * | 2001-02-22 | 2002-09-19 | Erlander Mark G. | Quantitative immunohistochemistry (QIHC) |
SE0103839D0 (sv) * | 2001-11-16 | 2001-11-16 | Astrazeneca Ab | Pharmaceutical formulation & product |
JP2003238443A (ja) * | 2002-02-20 | 2003-08-27 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | 前立腺毛細血管萎縮剤 |
CN101537180B (zh) * | 2002-07-18 | 2016-02-10 | 莫鲁斯有限公司 | 抗体混合物的重组生产 |
US7649001B2 (en) * | 2002-08-12 | 2010-01-19 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Fused benzene derivative and use |
US20090176207A1 (en) * | 2004-06-23 | 2009-07-09 | Washington University | Methods for Determining Risk of Developing Regular Smoking Behavior |
-
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2013
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070077571A1 (en) * | 2000-06-15 | 2007-04-05 | Ellington Andrew D | Methods and apparatus for identifying allosterically regulated ribozymes |
CN1871517A (zh) * | 2002-02-19 | 2006-11-29 | 免疫公司 | 快速有效分离循环癌细胞的方法和试剂 |
WO2004042030A2 (en) * | 2002-11-01 | 2004-05-21 | Leucadia Technologies, Inc. | Displacement sandwich immuno-pcr |
WO2006137932A2 (en) * | 2004-11-03 | 2006-12-28 | Leucadia Technologies, Inc. | Homogeneous analyte detection |
WO2006126008A2 (en) * | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Oncimmune Limited | Improved immunoassay methods |
CN1945328A (zh) * | 2005-10-06 | 2007-04-11 | 横河电机株式会社 | 化学处理盒及其使用方法 |
CN101566626A (zh) * | 2008-07-22 | 2009-10-28 | 深圳市人民医院 | 一种抗原检测方法及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
MICHAEL W. KATTAN ET AL.: "A Preoperative Nomogram for Disease Recurrence Following Radical Prostatectomy for Prostate Cancer", 《JNCI J NATL CANCER INST》 * |
NOBUYUKI OYAMA, MD ET AL.: "C-Acetate PET Imaging of Prostate Cancer:Detection of Recurrent Disease at PSA Relapse", 《THE JOURNAL OF NUCLEAR MEDICINE》 * |
SETO YOSHIAKI ET AL.: "Development of ultra-high sensitivity bioluminescent enzyme immunoassay for prostate-specific antigen(PSA) using firefly luciferase", 《LUMINESCENCE(CHICHESTER)》 * |
STEPHEN J. FREEDLAND, MD ET AL.: "Risk of Prostate Cancer–Specific Mortality Following Biochemical Recurrence After Radical Prostatectomy", 《JAMA》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108959839A (zh) * | 2017-05-26 | 2018-12-07 | 长沙金域医学检验所有限公司 | 一种生化发光功能灵敏度评估方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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US20130224752A1 (en) | 2013-08-29 |
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