CN102014636A - 治疗和动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法 - Google Patents
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Abstract
分层的页硅酸盐对于吸收和/或结合胆固醇是有用的,并因此,减少患者中的血液胆固醇。与此相应地,此处提供了降低哺乳动物中高胆固醇血症的方法,所述方法包括以有效降低所述哺乳动物中高胆固醇血症的量单独地给予所述哺乳动物质子化的以及至少部分剥落的分层的页硅酸盐材料,以及与其他减少胆固醇的试剂的组合给予。同时提供了治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,包括以有效减少所述受试者中的动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。
Description
相关申请的交叉引用
本申请为2008年5月21日递交的美国专利申请No.12/124,748的部分继续申请,其要求2008年2月27日递交的美国临时申请No.60/031,931的优先权。各个优先权申请的内容以其全文以参考方式结合于本文。
领域
本发明大体上涉及用于减少哺乳动物受试者中的高胆固醇血症的方法和组合物。也提供了治疗一种或多种心血管障碍的方法,所述心血管障碍与哺乳动物受试者中的动脉粥样硬化有关。
背景
根据美国心脏协会(American Heart Association)近期的信息,估计有100,870,000名美国成年人具有处于200mg/dl到239mg/dl的临界-高风险范围的总胆固醇水平。有40,600,000名美国成年人有240mg/dl或更高的高风险的胆固醇水平。有多种危险因子可以指示高胆固醇的倾向,例如年龄、体重、健康状况如糖尿病、抽烟、性别、民族及人种。上升的血胆固醇水平与心脏和血管的潜在致命的状况有关,所述状况例如动脉粥样硬化、冠状动脉机能不全及中风。
动脉粥样硬化是西方世界最常见的死亡以及严重发病的原因。动脉粥样硬化是动脉硬化的三种形态学上不同的形式之一。动脉硬化是动脉由于其增厚和弹性损失导致的变硬。当在弹性动脉的管的内表面中形成不正常分布的脂质沉积时,动脉粥样硬化发生,所述弹性动脉如主动脉、颈动脉和骨筋,或大的或中等尺寸的肌动脉,例如冠状动脉和腘动脉。这些脂质沉积,称为动脉粥样斑,引起纤维化以及钙化,后者导致冠心病及心肌梗塞。所述斑由细胞、巨噬细胞及其他白细胞、结缔组织细胞外基质以及细胞间和细胞外脂质沉积构成。动脉粥样硬化的发展可以通过减少血浆胆固醇水平及胆固醇LDL水平减缓。
由于细胞和血浆中胆固醇浓度的高胆固醇血症或上升的血液胆固醇水平也在美国人口中普遍存在。上升的总胆固醇水平及LDL胆固醇水平被认为是冠心病及心肌梗塞的心血管危险因子。
胆固醇是细胞膜中最丰富的类固醇,并对于细胞的生长和存活至关重要。胆固醇,游离的及酯化的形式,被分类为脂质并为脂蛋白的组分,所述脂蛋白为脂质(磷脂及甘油三酯)与蛋白质的复合物。有四种主要的脂蛋白:乳糜微粒,极低密度脂蛋白(VLDL),低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)。乳糜微粒将一些膳食胆固醇以及多数来自肠的甘油三酯转运到脂肪组织(也称为脂肪)以及肝脏。VLDL将肝脏产生的胆固醇及甘油三酯转运到脂肪及其他组织中。LDL是在脂肪细胞从VLDL除去甘油三酯后留下的副产品,其包括载脂蛋白和胆固醇。LDL将胆固醇转运到外周组织(肝脏和肠之外的细胞)并调节该处的内源性胆固醇水平。LDL通常被称为“坏的胆固醇”,这是由于其高的水平提高发展动脉硬化以及高胆固醇血症的风险。HDL被称为“好的胆固醇”,其将胆固醇从外周组织(以及动脉壁)向肝脏运输。HDL作为好的胆固醇运作,这是由于其具有与LDL相反的功能。据认为HDL的高水平能反转LDL活性的负面影响。胆固醇合成的主要位点在肝脏中,尽管一些胆固醇在肠中合成。肝脏在此通路中的功能是从血液中除去胆固醇。血浆LDL是外周组织中胆固醇的主要来源,所述外周组织不从头开始合成胆固醇。LDL通过LDL受体位点处的胞吞作用被吸收进这些细胞中。LDL受体的分子遗传学及细胞生物学已经由Goldstein及Brown表征了(Atheroscler Suppl.2004 Oct;5(3):57-9)。所述LDL受体对于胆固醇代谢是关键的。当胆固醇在细胞内丰富时,没有LDL受体的合成,因此从血浆胆固醇的胆固醇摄入被阻断。LDL受体的缺失导致高胆固醇血症及动脉粥样硬化。
通常,普通人每天消耗350-400mg的胆固醇,而建议的摄入量为约300毫克。增加的饮食胆固醇消耗,尤其和富含饱和脂肪摄取的饮食一起,可以导致上升的血清胆固醇。具有上升的血清胆固醇水平是已被广泛接受的心脏病危险因子,并因此有需要缓解胆固醇累积的非期望的效应。高的胆固醇水平通常被认为是那些水平:总胆固醇水平为200毫克或更高,或LDL胆固醇水平为130毫克或更高。通过降低总系统LDL胆固醇水平,据信特定的健康危险,例如冠心病以及可能地一些癌症,可以以非不显著的量降低,所述危险通常与高胆固醇水平相关。
与改变肠的脂质代谢相关的无数研究证明了这些效应可以降低高的胆固醇水平(Burnett等人,Expert Opin Investig Drugs.,5(11):1337-51,2006;Wang等人,Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.,287(3):G547-54,2004;Heidrich等人,BMC Pharmacology,4:5,2004;Borel等人,Am.J.Clin.Nutr.,49:1192-1202,1989;Malinow等人,Am.J.Clin,.Nutr.,30:2061-2067,1977)。妨碍甘油三酯、胆固醇或胆汁酸的吸收或这些机理的组合导致血清中胆固醇水平的降低(Lewis等人,Journal of Lipid Research,36:1098-1105,1995)。
存在制药学以治疗上升的胆固醇水平,然而其大多数导致显著的副作用,例如肝脏问题。例如,高胆固醇血症的患者通常以三种降低脂质的治疗试剂之一开始:(1)胆汁酸结合树脂,(2)尼克酸;或者(3)3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂。这些药物分别导致:(1)便秘,肠胃不适,恶心,痔流血;(2)心律失常,消化性溃疡疾病,葡糖不耐性,肝机能障碍;以及(3)异常的肝脏功能及肌炎。如果这些试剂,通常处以治疗的第一选择不成功的话,经常给予贝特酸衍生物如吉非罗齐。这类药物也有副作用,例如胆结石,恶心,异常的肝脏功能以及肌炎。
粘土包括蒙脱石在动物和人类中的饮食摄入在本领域中是已知的(Carretero,App.Clay ScL,21:155-163,2002)。有蒙脱石作为降低胆固醇的辅助物有效的附带报告。然而,尽管关于在体外胆固醇被分层的页硅酸盐材料吸收(Nikkila等人,Ann.Med.Exp.Biol.Fenn.,30:51-58,1952)和关于大鼠中食物级别的二氧化硅的高胆固醇血症效应(Peluso等人,J.Nutr.,124:853-860,1994)有一些报告,没有关于分层的页硅酸盐材料在动物和/或人中在肠吸收的效果或者其在动脉粥样硬化损伤上的效果的特别报告。
值得关注的是国际专利公开No.WO 2007/038596,其公开了含有膨润土的植物甾醇营养补充剂。此公开中公开了膨润土及其他硅酸盐赋形剂作为制造植物甾醇的药片、胶囊及悬浮液的传统的悬浮/增稠剂。该公开未公开或暗示这些赋形剂的饮食胆固醇降低活性。
尽管在各种药理学类别中提供了巨大的数量的药物,在本领域仍存在对与动脉粥样硬化有关的高胆固醇血症及冠心病的新的和有效治疗的需要。
发明概述
本发明包括材料(分子,组合物,试剂盒,单位剂量等)和用于治疗性或预防性处理心血管障碍的方法,以及用于诊断、评估或监控该障碍的方法。类似地,本发明包括材料的治疗上和预防上的应用,包括用于生产用于心血管障碍的药物的应用。
在一些方面,本发明包括用于治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法和组合物,其包括以有效减少在所述受试者中的动脉粥样硬化损伤形成的量,给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。典型的心血管障碍包括但不限于动脉粥样硬化、冠心病、脑动脉疾病、外周动脉疾病、心肌梗塞、中风、斑块破裂、斑块蚀损、急性冠状动脉综合征、短暂性脑缺血发作、心绞痛、不稳定心绞痛、血栓症、缺血性心脏病、冠心病以及移植引发的硬化。
在其他的方面,提供了降低哺乳动物中高胆固醇血症的方法,所述方法包括以有效降低高胆固醇血症的量给予哺乳动物分层的页硅酸盐材料,其中所述分层的页硅酸盐材料含有分层的页硅酸盐材料(包括但不限于氢质子化的分层的页硅酸盐材料)。在另一个实施方案中,所述方法还包括向需要治疗的哺乳动物给予治疗试剂的步骤(除了所述分层的页硅酸盐材料之外)。在一个方面,所述治疗试剂为胆固醇减少试剂。在另一个方面,所述治疗试剂为甘油三酯减少试剂。在特定的变化中,所述分层的页硅酸盐材料与治疗试剂一起给予。在其他的变化中,所述分层的页硅酸盐与治疗试剂在不同的时间给予。
在优选的实施方案中,哺乳动物受试者为人类受试者。也涵盖了在其他哺乳动物受试者中的本发明方法的实践,尤其是通常用于证明在人类中的治疗效果的模型的哺乳动物(例如,灵长类动物,猪,犬类或兔子动物)。在一个方面,所述受试者是患有动脉粥样硬化的人类。在另一个方面,所述受试者是对护理标准的胆固醇减少疗法有抗性的人类。
也提供了将治疗试剂递送到哺乳动物的方法,其包括向哺乳动物给予含有分层的页硅酸盐材料和治疗试剂的组合物,其中所述分层的页硅酸盐材料包括分层的页硅酸盐材料(包括但不限于氢质子化的分层的页硅酸盐材料),其中所述治疗试剂为降低脂质的治疗试剂或者减少胆固醇的治疗试剂。涵盖的治疗试剂描述于此并包括但不限于核酸、蛋白、多糖、药物及小分子药物。在具体的变化中,所述治疗试剂插入于分层的页硅酸盐材料中。
在一些实施方案中,在此描述的方法进一步包括向需要治疗的受试者给予护理标准治疗的步骤。在本发明的方法的环境下,“护理标准”指临床医师对于诊断为某种疾病的具体类型的患者所通常采取的治疗。例如对于心脏障碍来说,本发明的一个方面是使用此处描述的分层的页硅酸盐材料的综合疗法改进护理标准疗法。在一些实施方案中,所述护理标准治疗包括减少胆固醇的试剂,所述试剂选自斯达汀相关试剂(包括但不限于洛伐他汀、阿伐他汀、帕伐他丁、辛伐他汀及氟伐地汀),烟酸,贝特(包括但不限于苯扎贝特、环丙贝特、安妥明、吉非罗齐及非诺贝特),胆汁酸树脂(包括但不限于消胆胺、降脂树脂Ⅱ号及cholsevelam),胆固醇吸收抑制剂(包括但不限于依泽替米贝),水杨酸,植物甾醇(包括但不限于豆甾醇、谷甾醇、二氢谷甾醇及甘蔗脂肪醇),藻酸盐或果胶,卵磷脂及与减少胆固醇相关的营养食品(包括但不限于儿茶素没食子酸盐(EGCG)、Cholest-ArrestTM、CholestawayTM、CholestOffTM及KyolicTM)。在一些实施方案中,所述治疗试剂为甘油三酯减少试剂。在具体的变化中,所述分层的页硅酸盐材料与护理标准疗法一起给予。在其他的变化中,所述分层的页硅酸盐材料以及护理标准疗法在不同的时间给予(即,顺序地)。
本发明的另一个方面提供了治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,其包括以有效减少在所述受试者中的动脉粥样硬化形成的量给予所述受试者分层的页硅酸盐材料,其中所述受试者对于护理标准的减少胆固醇的试剂是有抗性的。典型护理标准的减少胆固醇治疗包括但不限于斯达汀相关的试剂、烟酸、贝特、胆汁酸树脂、胆固醇吸收抑制剂、水杨酸、植物甾醇、藻酸盐或果胶、卵磷脂及与减少胆固醇有关的营养食品。
在另一个方面,本发明提供哺乳动物受试者的预防性治疗的方法,所述哺乳动物处于发展与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的风险,所述方法包括以有效减少在所述受试者中动脉粥样硬化伤害累积的量,给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。
在又一个方面,本发明提供治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,在所述受试者中使用本文所述的护理标准治疗的治疗是治疗不当的,其中所述方法包括以在所述受试者中有效减少动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。
在此处描述的方法中有用的分层的页硅酸盐材料包括以下的粘土矿物:蒙脱石,特别是钠蒙脱石,质子化的氢蒙脱石,镁蒙脱石和/或钙蒙脱石;绿脱石;贝得石;锂皂石;绿铜膨润石;五角石;铬岭石;锂蒙脱石;皂石;铁皂石;锌蒙脱石;锂钠钛硅石;脂肪結石;sobockite;硅镁石;svinfordite;蛭石;合成粘土;混合的分层的伊利石/蒙脱石矿物,例如累托石(reetorite)、tarosovite、伊利石;伊利石与上述粘土矿物的掺和物,以及硅酸镁铝。上述粘土矿物的任一种或者两种或更多种的任意混合物能够吸收和/或离子地结合或以某种方式相互作用来减少胆固醇的吸收。在一个方面,所述分层的页硅酸盐材料为蒙造石粘土,其选自膨润土、蒙脱石、绿脱石、贝得石、锂皂石、锂蒙脱石及皂石。
在一些实施方案中,基于间层可交换的阳离子的总数,所述分层的页硅酸盐材料包含具有至少80%间层可交换的同素阳离子的蒙脱石粘土,所述阳离子优选为氢离子。在其他的实施方案中,基于间层可交换的阳离子的总数,所述分层的页硅酸盐材料包含具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多的间层可交换的同素阳离子的蒙脱石粘土。在一个实施方案中,所述间层可交换阳离子为氢离子。其他的涵盖的分层的页硅酸盐材料包括质子化的氢离子交换的分层的页硅酸盐材料;质子化的鎓离子交换的分层的页硅酸盐材料(质子化的有机土);具有小于74μm的粒度的蒙脱石粘土,优选地小于50μm,更优选地小于20μm;以及剥落的蒙脱石粘土,包括单独的粘土板以及5层或更少板层的类晶团聚体。
在一个实施方案中,分层的页硅酸盐材料可以以粉末或含水的和/或有机液体溶液或悬浮液的形式摄入,所述分层的页硅酸盐材料可以进一步地填入胶囊或压缩成片,以与已经摄取或即将摄取的膳食胆固醇在肠胃道内相互作用。所述胆固醇保持被吸附于粘土上并防止被吸收到血流中。
也提供了包括分层的页硅酸盐材料及药学上可接受的载剂、稀释剂或佐剂的药物组合物。
在另一个方面,提供了减少哺乳动物中高胆固醇血症的方法,其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的联合治疗,其包括(a)分层的页硅酸盐材料以及(b)护理标准疗法。
在一些实施方案中,所述护理标准疗法包括减少胆固醇的试剂,所述试剂选自斯达汀相关试剂(包括但不限于洛伐他汀、阿伐他汀、帕伐他丁、辛伐他汀及氟伐地汀),烟酸,贝特(包括但不限于苯扎贝特、环丙贝特、安妥明、吉非罗齐及非诺贝特),胆汁酸树脂(包括但不限于消胆胺、降脂树脂Ⅱ号及cholsevelam),胆固醇吸收抑制剂(包括但不限于依泽替米贝),水杨酸,植物甾醇(包括但不限于豆甾醇、谷甾醇、二氢谷甾醇及甘蔗脂肪醇),藻酸盐或果胶,卵磷脂及与减少胆固醇有关的营养食品(包括但不限于儿茶素没食子酸盐(EGCG)、Cholest-ArrestTM、CholestawayTM、CholestOffTM及KyolicTM)。在一些实施方案中,所述治疗试剂为甘油三酯减少试剂。在一些变化中,所述分层的页硅酸盐材料与护理标准疗法一起给予。在其他的变化中,所述分层的页硅酸盐材料以及护理标准疗法在不同的时间给予(即,顺序地)。
上述总结不用来定义本发明的每一个方面,以及描述于其他的部分中的附加的方面,例如在发明详述中。期待整个文件作为完整的公开涉及,以及应该理解此处描述的特征的所有组合应该被涵盖,即使特征的组合未共同发现于本文同一句,同一段,或同一节。
除了前述的,作为附加方面,本发明可以包括比此处具体的段落所定义的变化以任何方式在范围上更窄的本发明的所有实施方案。例如,描述为一类的本发明的具体的方面,应当理解一类的各种成员,各个地为本发明的方面。同时,描述为类或选择类中的成员的方面应该被理解为包括该类中两种或更多的成员的组合。
应当理解尽管在说明书中不同的实施方案以使用“包括”的语言给出,在不同的环境下,相关的实施方案也可以使用“由......组成”或“基本上由......组成”描述。应该注意术语“一种(a)”或“一种(an)”指一个或者多个,例如“分层的页硅酸盐材料”理解为代表一种或多种分层的页硅酸盐材料。依其本身,术语“一种(a)”(或“一种(an)”),“一种或多种”以及“至少一种”在此可以互换使用。
附图简述
图1显示在药物处理之前饲喂高脂肪/胆固醇四周的受试者的总血浆胆固醇水平。
图2显示在药物处理之前饲喂高脂肪/胆固醇四周的受试者的ApoB胆固醇水平。
图3显示在药物处理之前饲喂高脂肪/胆固醇四周的受试者的HDL胆固醇水平。
图4显示在药物处理之前饲喂高脂肪/胆固醇四周的受试者的总血浆甘油三酯水平。
图5显示相比对照,化合物A、B、C及辛伐他汀在总血浆胆固醇水平上的效应。
图6显示相比对照,化合物A、B、C及辛伐他汀在总血浆甘油三酯水平上的效应。
图7显示相比对照,化合物A、B、C及辛伐他汀在HDL胆固醇水平上的效应。
图8显示相比对照,化合物A、B、C及辛伐他汀在总ApoB水平上的效应。
图9显示相比对照,各种分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中的效应。
图10显示相比对照,各种氢质子化的分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中的效应。
图11显示相比对照,各种分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中的效应(按照曲线下面积数值计)。
图12显示相比对照,各种氢质子化的分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中的效应(按照曲线下面积数值计)。
图13显示相比豆甾醇和依泽替米贝,氢质子化的分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中的效应(按照曲线下面积数值计)。
图14显示在使用化合物A及多种对照处理的小鼠中的平均总血浆胆固醇(mg/dL)。
图15为显示各种处理组在动脉粥样硬化损伤形成上的效应的图。
图16为显示相比未处理的对照,处理化合物A(1.4%w/w)在动脉粥样硬化损伤形成上的效应的图。
图17显示在HF饮食中,使用1.4%w/w的化合物A处理12周后的代表性的主动脉弓(图17A)以及未处理的对照的主动脉弓(图17B)。
发明详述
本发明的一个实施方案涉及给予此处描述的分层的页硅酸盐材料在哺乳动物受试者中减少动脉粥样硬化损伤形成的惊人发现,所述哺乳动物受试者遭受与在人类中观察到的那些症状在分布和表现上类似的严重高胆固醇血症和动脉粥样硬化损伤。相应地,具体地涵盖了此处描述的分层的页硅酸盐材料的应用(包括但不限于氢质子化分层的页硅酸盐材料),所述分层的页硅酸盐材料作为疗法用于治疗与动脉粥样硬化损伤形成有关的心血管障碍。
本发明的另一实施方案涉及此处描述的分层的页硅酸盐材料给药降低了具有严重血脂异常的哺乳动物受试者的总血浆胆固醇的发现,并因此可被用作治疗学上的辅助物以减少和/或改变哺乳动物中的胆固醇水平。所述的分层的页硅酸盐材料可以可选地配方于组合物中,所述组合物包括护理标准疗法,该疗法通过相同或不同的机理减少哺乳动物中的动脉粥样硬化损伤形成(或胆固醇)。本发明因此描述了多种使用分层的页硅酸盐材料的治疗组合物及方法。本发明的所述分层的页硅酸盐材料的一个特别的好处是由于其表面电荷及分子尺寸的事实,该页硅酸盐材料无法被细胞摄取或通过粘膜,并因此可以避免在小分子药物中发现的毒性反应。
无论在说明书中何时使用,下列术语应该具有以下的含义:
范围可以在此被表示为从“约”或“近似地”一个具体的值和/或到“约”或“近似地”另外一个具体的值。当表达该范围时,另一实施方案包括从一个具体的值和/或到另外一个具体的值。类似地,当数值表示为近似值时,通过使用先行词“约”,应该理解该具体值形成另一个实施方案。
如此处所用的,术语“吸附(sorption)”或者“吸附(sorp)”指吸收或者吸附的动作。
如此处所用的,术语“治疗上有效的”或者“足够量的”指当本发明的组合物或方法被合适地在体内给予到包括人类的哺乳动物受试者时,发生可测量的有益效果。典型的有益效果包括哺乳动物受试者中动脉粥样硬化损伤形成的可测量的减少;哺乳动物血液中胆固醇和/或LDL和/或甘油三酯水平的可测量的减少;高胆固醇和/或LDL和/或甘油三酯水平的临床可证实的和/或患者报告的减少或上升的LDL和/或胆固醇和/或甘油三酯状况或其他疾病的完全消退或治愈。血液中总胆固醇、LDL和甘油三酯的正常的和上升的水平列于表1。胆固醇水平可以通过从患者抽血并随后执行标准血液化学测试进行测量。
表1.人类血液中总胆固醇、LDL和甘油三酯的正常的和上升的水平。
甘油三酯 | <150 | 150-199 | 200-499 | >500 |
此处所用的术语“高胆固醇血症(hypercholesteremia)”或者“高胆固醇血症(hypercholesterolemia)”表示在哺乳动物的血液中存在上升的胆固醇水平。
此处所用的术语“动脉粥样硬化”表示血管和动脉通过血管(包括动脉血管)内斑块的累积而随时间的逐步变窄。斑块通常由胆固醇及其他脂肪、钙沉积、细胞及细胞碎片组成。
此处所用的术语“动脉粥样硬化损伤”或者“动脉粥样硬化斑块”表示脂肪材料沿着血管及动脉的壁的沉积。动脉粥样硬化损伤以脂肪纹的形式开始,所述脂肪纹为不明确的黄色损伤-脂肪斑块,其发展出分界明确的边缘,所述边缘演化为纤维性斑块,带有富含脂肪的凝聚核心的发白的损伤,随着时间,其成为大动脉内膜中的由白血细胞、平滑肌细胞及细胞外基质组成的复杂斑块。
如此处所使用的,术语“同时存在的”及“同时给予”表示所述分层的页硅酸盐材料与治疗试剂(a)在时间上同时地给予受试者(可选地将这两者共同配方于普通的载体中)或者(b)在普通的治疗日程的过程中在不同的时间给予受试者。在后者的情况中,这两种化合物在充分接近的时间给予,以达到想要的效果。
术语“页硅酸盐”或者“分层的页硅酸盐材料”应表示粘土材料,例如蒙脱石,特别是钠蒙脱石,镁蒙脱石和/或钙蒙脱石;质子化的蒙脱石;绿脱石;贝得石;锂皂石;绿铜膨润石;五角石;铬岭石;锂蒙脱石;皂石;铁皂石;锌蒙脱石;锂钠钛硅石;脂肪結石;sobockite;硅镁石;svinfordite;蛭石;合成粘土;混合的分层的伊利石/蒙脱石矿物,例如累托石(reetorite)、tarosovite、伊利石;伊利石与上述粘土材料的掺和物,以及硅酸镁铝。
“同素离子的页硅酸盐”应表示已经通过离子交换纯化的分层的页硅酸盐材料,例如,描述于本受让人的美国专利No.6,050,509中,以含有相对于所有间层可交换阳离子的至少90%的单间层可交换阳离子,所述阳离子来自元素周期表1a,2a,3b,4b,5b,6b,7b,8,1b,2b,3a族,锡及铅;或质子化的鎓离子化合物,作为间层可交换阳离子。
“片”应表示页硅酸盐的单独的层。
“插层(Intercalate)”或者“插层的(Intercalated)”应表示包括鎓离子间隔试剂的页硅酸盐材料,所述试剂优选为质子化的鎓离子间隔试剂,其位于所述分层的页硅酸盐材料的相邻的片之间,以增加在相邻的片之间间层间隔至少优选地至少从而到间层间距为例如至少约优选地至少约
“内插(Intercalation)”应表示形成插层的过程。
“鎓离子插入剂(Intercalant)”或“鎓离子间隔试剂”或“鎓离子化合物”应表示有机化合物,优选为质子化的有机化合物,其包括至少一个带正电的原子,所述原子选自氮原子、磷原子、硫原子或者氧原子,优选地为季铵化合物,和当溶解于水中和/或有机溶剂中,阴离子从所述鎓离子间隔试剂解离,留下鎓阳离子,其可以与页硅酸盐的硅酸盐片的可交换阳离子发生离子交换,所述可交换阳离子例如Na+、Ca+2、Li+、Mg+2、Al+3或K+。
“内插载体”应表示载体,所述载体含有水和/或有机液体以形成能够实现鎓离子间隔试剂内插的内插组合物,所述试剂与分层的页硅酸盐的可交换的间层阳离子进行离子交换。
“类晶团聚体”应表示独立的粘土片层的堆积,所述堆积具有十个或更少的片,优选为五个或更少的片,其由分层的页硅酸盐材料部分地剥落产生。
“内插组合物”应表示包含一种或多种鎓离子间隔试剂、所述鎓离子间隔试剂的内插载体以及分层的页硅酸盐的组合物。
“片状剥落(Exfoliate)”或者“片状剥落的(Exfoliated)”应表示插层的分层的页硅酸盐的独立的片,以使所述插层的分层的页硅酸盐的相邻的片可以在整个载体材料中单独分散,所述载体材料例如水,聚合物,醇或多元醇,或其他任何有机液体,其带有或者没有2-20层的非片状剥落的或部分片状剥落的片的类晶团聚体。
“片状剥落”应表示由插层形成片状剥落的过程。
I.此处描述的方法中使用的分层的页硅酸盐材料
A.粘土纯化及离子交换
对与胆固醇相互作用有用的优选的分层的页硅酸盐材料包括蒙脱石粘土,作为起始材料,其具有钠或钙离子作为其主要的间层可交换阳离子,以及已经根据本受让人的美国专利No.6,050,509纯化和离子交换,所述专利在此引入作为参考。所述离子交换方法可用于提供同素离子的分层的分层的页硅酸盐材料,或可用于提供具有混合阳离子的页硅酸盐,所述阳离子来自元素周期表1a,1b,2a,2b,3a,3b,4b,5b,6b,7b,8族,锡,氢,铅和/或质子化的鎓离子,其在页硅酸盐可交换阳离子的任何比例(1-99%的可交换阳离子)内。根据美国专利No.6,050,509,蒙脱石粘土浆被泵入一系列的离子交换柱中,其中任何不期待的阳离子使用期待的阳离子交换。以这种方式,蒙脱石粘土粗品可被交换以产生纯化的具有单一(同素离子的)期待的阳离子或具有阳离子混合物的蒙脱石。以这种方式,通过使用合适的离子交换柱,任何元素都可被交换为用于胆固醇相互作用的页硅酸盐的阳离子,所述阳离子包括氢和/或一种或多种选自元素周期表下列族的元素:族1a(例如,锂、钠、钾)族2a(例如镁、钙、钡)族3b(例如镧),族4b(例如钛)族5b(例如钒),族6b(例如铬),族7b(例如锰)族8(例如铁、钴、镍、铂),族1b(例如铜、金、银),族2b(例如锌、镉)族3a(例如硼、铝)及族4a中选择的成员(例如锡和铅)。以此种方式,可以在蒙脱石粘土或任何分层的页硅酸盐材料表面上使用具有已知良好的抗胆固醇性质的金属或者金属阳离子进行交换,以产生具有超强抗胆固醇性质的材料。同素氢离子交换的分层的页硅酸盐如下形成:纯化的钠交换粘土分散到过滤的DI水中以产生3wt%的粘土浆。所述混合物使用Silverson均质器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为约10。将可购于Rohm & Hass的离子交换树脂Amberlite FPC23 H填充入两个直径为2英寸以及长度为20英寸的玻璃柱;在各个柱的顶端留1英寸的空间以促进珠粒的流动能力。3wt%纯化的钠交换的粘土浆连续地使用3英寸分散刀片混合,同时使用液体泵将该粘土浆以20ml/分钟泵送通过两个填充了树脂的柱。在通过第二个柱时后,所述粘土浆流出物的pH值为2.3。ICP及X-射线研究的分析数据显示基本完成到质子化形式的交换。
根据分层的页硅酸盐的这个实施方案,该分层的页硅酸盐沉淀物粗品一开始包括一种或多种下述的非蒙脱石杂质:(SiO2),长石(KAlSi3O8),蛋白石-CT(SiO2);石膏(CaSO4·2H2O);钠长石(NaAlSi3O8);钙长石(CaAl12Si2O8);正长石(KAlSi3O8);磷灰石(Ca5(PO4)3(F,Cl,OH));岩盐(NaCl);方解石(CaCO3);白云石(CaMg(CO3)2;碳酸钠(Na2CO3);菱铁矿(FeCO3)黑云母(K(Mg,Fe)3(AlSi3O10)(OH)2)白云母(KAl2(AlSi3O10)(OH)2);亚氯酸盐((Mg,Fe)6(Si,Al)4O10(OH)8);束沸石(NaCa2Al5Si13O36·14H2O);黄铁矿(FeS2);高岭石(Al2Si2O5·(OH)4);以及赤铁矿(Fe2O3)。
为了除去按重量至少90%的上述杂质,优选为至少99%的杂质,优选地,所述分层的页硅酸盐分散(调浆)在水中,优选地浓度为按重量基于页硅酸盐和水的总重的约10%到约15%。优选的分层的页硅酸盐为蒙脱石粘土,包括但不限于蒙脱石粘土,其主要(按重量大于约50%)的钠或钙(在相邻的粘土片之间的间层空间内的钠或钙离子多余其他任何离子)蒙脱石粘土,以使得分散在水中的粘土的浓度可以按重量高达约15%。如果,例如钠蒙脱石粘土分散到水中,钠蒙脱石在水中的更高的膨润能力将导致在浓度为按重量约6-10%时对于操作而言过高的粘度。相应地,为了达到蒙脱石粘土的最有效的纯化,优选所述分散在水中的粘土为在间层空间中主要地(按数量计至少50%)具有多价阳离子的蒙脱石粘土,所述阳离子即Ca2+,所述粘土例如钙蒙脱石粘土。如果该粘土不主要是多价的粘土,例如钙蒙脱石,其可以充分地离子交换以在蒙脱石粘土片之间的间层空间内提供主要多价离子。
粘土浆随后被引入一系列尺寸减少的级联阶式水力旋流中,每个水力旋流能够除去至少具体尺寸的杂质,具体地具有大于74微米尺寸的杂质。所产生的从杂质中分离出的粘土,其颗粒尺寸为按体积计算至少约90%的粘土颗粒尺寸低于约74微米,优选地低于约50微米,再优选地低于约20微米。使所述粘土浆随后向上通过阳离子交换柱,所述柱从蒙脱石粘土中除去多价间层阳离子(例如,二价和/或三价阳离子)以及将位于蒙脱石粘土片之间的间层空间内的多价阳离子替换为单价阳离子,例如钠、锂和/或氢。
在基本完成离子交换后,粘土在间层空间中具有按数量计的至少90%,优选地至少95%,更优选地至少99%的单价阳离子,优选地,粘土随后被引入高速离心机中,其中粘土被给予等于,例如至少约2,000G(重力)的到高达约4,000G的离心力,优选为约2,500G到约3,500G,其能够除去尺寸为约5微米到约74微米的粘土颗粒,从而剩余的蒙脱石粘土颗粒,具有按重量计少于约50的晶体及无定型非蒙脱石粘土杂质,优选地其中以重量计少于约5%的杂质,其具有约10微米或更小的颗粒尺寸,优选地约8微米或更小,以及具有小于约3微米的平均颗粒尺寸,优选地小于约2微米。
根据本实施方案的重要特征,为了具有直径小于约10微米尺寸的杂质的有效去除,粘土应该首先被调节或处理以通过将多价阳离子取代为一种或多种单价阳离子,例如钠离子或质子化的鎓离子,以除去所有多价的间层阳离子,例如二价和三价间层阳离子,其目的是提供最小的杂质的有效去除,例如,在高速(2,000-4,000G)离心机中。根据本实施方案的另一个重要特征,已经发现在单价离子如钠离子交换之前将粘土浆输送通过水力旋流,提供更有效得多的过程,这是由于输入到水力旋流的材料可以更高固体含量输入,而在输入到水力旋流的材料中没有过分的粘度上升。相应地,在所述粘土浆通过水力旋流后以及在将部分纯化的粘土浆传送到离心机以除去从产物除去的最小的杂质之前,完成离子交换。
通过重力将来自第一和第二个一英寸水力旋流的产物进料到离子交换进料罐中,其中粘土/水浆,包括杂质,以粘土浓度为基于离子交换进料罐中的材料总重的按重量约1-7%而被保持,优选地按重量约3-7%。来自离子交换进料罐中的粘土浆被泵入一系列离子交换柱中,在那里间层粘土阳离子用来自元素周期表族1a,1b,2a,2b,3a,3b,4b,5b,6b,7b,8,锡或铅的阳离子交换,优选钠。离子交换,例如,通过接触离子交换树脂完成,所述离子交换树脂优选为得自PUROLITE公司的PUROLITE C-100,一种与二乙烯苯交联的聚苯乙烯,以球形珠的形式,以钠离子的形式,具有按重量8%的二乙烯苯含量,以产生钠交换的粘土。可以使用可得自Rohm & Hass的Amberlite FPC23 H来产生质子化的形式。
来自第二个一英寸水力旋流的产物包括按数量至少约90%具有小于约50微米尺寸的颗粒,优选为小于约20微米,更优选为小于约10微米,平均颗粒尺寸小于约10微米,以及中值颗粒尺寸小于约5微米。
B.形成粘土片和/或类晶团聚体的片状剥落粘土
为了形成此处描述的优选的插层的和片状剥落的分层的页硅酸盐,所述页硅酸盐材料,例如,钠和/或钙膨润土,或者任何钠和/或钙蒙脱石粘土,应该被膨胀或插层,在优选的实施方案中,通过鎓离子间隔试剂的吸附进行。
尽管此处描述的组合物及方法通过优选的实施方案的形式进行描述,通过在硅酸盐片之间内插鎓离子而扩展分层的页硅酸盐材料相邻的片之间的层间距离,所增加的层间间隔也可以通过插入一种或多种聚合物,硅烷耦合试剂,或通过酸化技术,通过用氢取代(使用酸或离子交换树脂,利用氢离子交换间层阳离子)而实现,如Deguchi美国专利No.5,102,948,以及Lan等人的美国专利No.5,853,886中所公开的,两个专利都在此引入作为参考。在该粘土剥落实施方案中,单独的片及粘土类晶团聚体的极其小的尺寸应允许胆固醇的相互作用。
所述鎓离子间隔试剂以固体或液体组合物的形式(纯的或含水的,有或没有有机溶剂,例如,脂肪族碳水化合物,例如庚烷,如果必要,以帮助溶解鎓离子化合物)被引入分层的页硅酸盐,所述组合物的鎓离子间隔试剂浓度足以提供从按页硅酸盐的重量计约5%到约10%的浓度(90-95%的水),以及所述鎓离子化合物溶于页硅酸盐浆水中,优选地以鎓离子对可交换的间层阳离子摩尔比为至少约0.25∶1,更优选地至少约0.5∶1,最优选地至少约1∶1。所述鎓离子插层的分层的页硅酸盐随后从水中容易地分离,这是由于现在页硅酸盐是疏水的,并在与胆固醇相互作用之前于烘箱中干燥到少于约15%水,优选地到全干。所述鎓离子间隔试剂化合物可以以固体加入,及基于分层的材料的干重,优选地加入分层的页硅酸盐材料/鎓离子化合物共混物的至少约20%的水,更优选地至少约30%或更多的水。基于分层的材料的干重,优选地约30%到约50%的水,更优选地约30%到约40%的水,被包含于鎓离子内插组合物中,以使得在插层中更少的水被吸附,从而在鎓离子内插后需要更少的干燥能量。
通过离子交换插层到相邻分层的材料片之间的间层间隔的所述鎓离子间隔试剂阳离子为一级、二级、三级或四级鎓离子,其具有以下优选的结构:
其中X=N、P、S或O;以及
其中R1,R2,R3及R4为H或有机部分,例如具有1到约24个碳原子的直链的或支化的烷基、芳基或芳烷基。
更优选的质子化的C6+鎓离子优选为具有式1的季铵离子,如下:
其中R1为C6到C24的长链烷基部分,直的或支化的链,包括长链部分的混合物,即C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18、C20、C22及C24,单个的或以任意组合;以及R2,R3,及R4为相同或不同的部分,选自H、烷基、苯基、取代的苯基,例如,直的或支链的烷基取代的及卤素取代的;乙氧基化或丙氧基化的烷基;乙氧基化的或丙氧基化的苯基,例如,1-10摩尔的乙氧基化或1-10摩尔的丙氧基化。优选的质子化的鎓离子包括质子化的十八胺,质子化的己胺;质子化的辛胺;质子化的牛脂胺;质子化的牛脂二胺;质子化的牛脂三胺;质子化的牛脂四胺;质子化的氢化的牛脂胺;质子化的氢化的牛脂二胺;质子化的氢化的牛脂三胺;质子化的氢化的牛脂四胺;质子化的十八烷基胺;及其混合物。
R1-X+-R-Y+
其中X+及Y+,相同或不同,为铵、锍、膦或氧鎓基,如+NH3、+NH2-、+N(CH3)3、+N(CH3)2-、+N(CH3)2(CH2CH3)、+N(CH3)(CH2CH3)-、+S(CH3)3、+S(CH3)2-、+P(CH3)3、+P(CH3)2-、+NH4、+NH3-等;R为有机的间隔,骨架基,直的或支化的,优选地具有2到24个碳原子,更优选地3到10个碳原子,在骨架中共价地键连在其末端到N+,P+,S+和/或O+阳离子及R1上的有机间隔分子可以为氢或1到22个碳原子的,直的或支化的烷基,优选地具有至少6个碳原子。R的实例包括取代的或未取代的烯烃基,环亚烯烃基,环亚烷基,亚芳香基,烷基亚芳香基,未取代或用氨基取代的,烷基氨基,二烷基氨基,硝基,叠氮基,烯基,烷氧基,环烷基,环烯基,烷酰基,硫烷基,烷基,芳氧基,芳烷氨基,烷基氨基,芳基氨基,二烷基氨基,二芳基氨基,芳基,烷基亚砜基,芳氧基,烷基亚砜基,烷基砜基,硫芳基,芳基亚砜,烷氧羰基,芳基砜基或烷基硅烷。R1的实例包括不存在;H;具有1到22个碳原子的,直链的或支链的烷基;环烯基;环烷基;芳基;烷基芳基,未取代的或用氨基取代的,烷基氨基,二烷基氨基,硝基,叠氮基,烯基,烷氧基,环烷基,环烯基,烷酰基,硫烷基,烷基,芳氧基,芳烷氨基,烷基氨基,芳基氨基,二烷基氨基,二芳基氨基,芳基,烷基亚砜基,芳氧基,烷基亚砜基,烷基砜基,硫芳基,芳基亚砜,烷氧羰基,芳基砜基或烷基硅烷。可用的R基团的举例包括亚烷基,如亚甲基、亚乙基、亚癸基、亚壬基、亚四丁基,亚新戊基,亚异丙基,亚二丁基,亚十二烷基等;亚烯基如1-亚丙烯基,1-亚丁烯基,1-亚戊烯基,1-亚己烯基,1-亚庚烯基,1-亚辛烯基等;环亚烯基如环亚己烯基,环亚庚烯基等;烷氧基烯基例如丁氧基辛烯基,戊氧基癸烯基,辛氧基十五烯基,乙氧基十一烯基,丙氧基十六烯基等;烷基氨基烯基,例如甲基氨基十八烯基,乙基氨基十五烯基,丁基氨基十九烯基等;二烷基氨基烯基,例如二甲基氨基十八烯基,甲基乙基氨基十九烯基等;芳基氨基烯基如苯基氨基十八烯基,对-甲基苯基氨基十九烯基等;二芳基氨基烯基;二芳基氨基烯基,例如二苯基氨基十五烯基,对-硝基苯基-对-α-甲基苯基氨基十八烯基等;烷基芳基氨基烯基,例如2-苯基-4-甲基氨基十五烯基等;烷基亚砜基烯基,烷基砜基烯基,烷基巯基,芳基巯基,芳基亚砜基烯基以及芳基砜基烯基,如丁基巯基十八烯基,新戊基巯基十五烯基,甲基亚砜基十九烯基,苯基亚砜基十五烯基,苯基亚砜基十八烯基,丙基巯基十八烯基,辛基巯基十五烯基,十九烷基砜基十九烯基,十八烷基砜基十六烯基,甲基巯基十九烯基,异丙基巯基十八烯基,苯基砜基十五烯基,甲基砜基十九烯基,十九烷基巯基十五烯基,苯基巯基十八烯基,乙基巯基十九烯基,苯基巯基十一烯基,苯乙基巯基十五烯基,次丁基巯基十八烯基,苯酚基巯基十一烯基等;烷氧羰基烯基如甲氧羰基碳烯基,乙氧羰基碳烯基,丁氧羰基碳烯基等;环烯基如环己烯基,环戊烯基,环庚烯基等;环亚烯基如环亚己烯基,环亚戊烯基,环亚辛烯基,环亚庚烯基等;烷氧基亚烯基如甲氧基亚亚甲基,乙氧基亚甲基,丁氧基亚甲基,丙氧基亚乙烯基,戊氧基亚丁烯基等;芳氧基亚烯基及芳氧基亚芳香基如苯氧基亚苯基,苯氧基亚甲基等;芳氧基亚烯基如苯氧基癸烯基,苯氧基辛烯基等;芳基亚烯基如苯基亚甲基,苯基亚乙基,8-苯基亚辛烯基,10-苯基亚癸烯基等;烷基亚芳基如3-癸基亚苯基,4-辛基亚苯基,4-壬基亚苯基等;及聚丙二醇及聚乙二醇取代物如亚乙烯基,亚丙烯基,亚丁烯基,亚苯基,苯甲基,甲代亚苯基,p-styrylene,对-苯基亚甲基,亚辛烯基,亚癸烯基,亚十八烯基,甲氧基亚乙烯基,具有式-C3H6COO-,-C5H10COO-,-C7H10COO-,-C7H14COO-,-C9H18COO-,-C11H22COO-,-C13H26COO-,-C15H30COO-及-C17H34COO-及-C=C(CH3)COOCH2CH2-等的部分。这类四、三及二铵,锍,膦,氧鎓;铵/锍;铵/膦;铵/氧鎓;膦/氧鎓;锍/氧鎓;及锍/膦基是本领域公知的,并能从相应的胺,膦,醇或酯及亚砜得到。
其他有用的间隔试剂化合物为多鎓离子化合物,其包括至少两个具有下2式的一级、二级、三级或四级铵、膦、锍和/或氧鎓离子:
其中R为亚烯基,亚芳烷基或取代的亚烯基带电荷的原子间隔部分,对于相对高的电荷密度(150微当量/100克C.E.C.到70微当量/100克C.E.C.)分层的材料优选地从C3到C24,更优选地从约C3到C6;对于中等或低电荷密度(70微当量/100克C.E.C.到30微当量/100克C.E.C.)分层的材料优选地从C6到C12。R可以为直的或支化的链,包括此类部分的混合物,例如C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23及C24,单个的或以任意组合;以及R1,R2,R3及R4为相同或不同的部分,选自氢,烷基,芳烷基,苯基,取代的苯基,例如,直的或支链的烷基取代的及卤素取代的;乙氧基化或丙氧基化的烷基;乙氧基化的或丙氧基化的苯基,例如,1-10摩尔的乙氧基化或1-10摩尔的丙氧基化。Z1及Z2,相同或不同,可以为不存在,或可以为对于R1,R2,R3或R4描述的任意部分。Z1和Z2的一个或两者也可以含有一个或多个正电性的原子或鎓离子分子。
任何可膨胀的分层的页硅酸盐材料可用于本发明的实践中,所述页硅酸盐材料充分地吸附鎓离子间隔试剂以增加相邻页硅酸盐片之间的间层间隔至少约优选地至少约有用的可膨胀的分层材料包括页硅酸盐,例如蒙脱石粘土矿物,例如蒙脱石,特别是钠蒙脱石,镁蒙脱石和/或钙蒙脱石;绿脱石;贝得石;锂皂石;绿铜膨润石;五角石;铬岭石;锂蒙脱石;皂石;铁皂石;锌蒙脱石;锂钠钛硅石;脂肪结石;sobockite;硅镁石;svinfordite;蛭石;合成粘土;混合的分层的伊利石/蒙脱石矿物,如累托石,tarosovite及伊利石;伊利石与上述粘土材料的掺合物,镁铝硅酸盐;离子交换的页硅酸盐,包括同素离子的和/或质子化的页硅酸盐;及任意两种或多种上面列出的页硅酸盐的混合物。典型的混合物包括任意上面列出的页硅酸盐,其中上面列出的页硅酸盐的一种以约1%-99%wt.范围的量存在,以及另一种页硅酸盐以从99%-1%wt.范围的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐的一种以大于50%wt的量存在,以及另一种页硅酸盐以少于50%wt的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐的一种以50%wt的量存在,以及第二种页硅酸盐以50%的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐的一种以约10%wt的量存在,以及另一种页硅酸盐以约90%的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐的一种以约20%wt的量存在,以及另一种页硅酸盐以约80%的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐的一种以约30%wt的量存在,以及另一种页硅酸盐以约70%wt的量存在;或其中上面列出的页硅酸盐以约40%wt的量存在,以及另一种页硅酸盐以约60%wt的量存在。上面指出的重量百分数基于粘土混合物的重量。
优选的可膨胀分层材料为2∶1类型的页硅酸盐,其在层上具有负电荷以及在间层空间中有相等数量的可交换的金属阳离子,所述负电荷范围为每个分子式单元的约0.15到约0.9电荷。多数优选的分层的材料为蒙脱石粘土矿物,如蒙脱石,绿脱石,贝得石,铬岭石,锂蒙脱石,皂石,锌蒙脱石,sobockite,硅镁石及svinfordite。
如此处所用的,“间层间隔”指相邻的页硅酸盐层当其聚集于分层的材料中在任何解离(剥离)发生之前的内面之间的距离。优选的粘土材料一般包括间层阳离子,如Na+,Ca+,K+,Mg+2,Al+3+,NH4等,包括其混合物,并可被离子交换以包括其他阳离子,如来自周期表族1a,1b,2a,2b,3a,3b,4b,5b,6b,7b,8,锡及铅的元素。
鎓离子可以以多种方式引入(吸附入)分层的页硅酸盐的间层空间中。在将鎓离子内插入分层材料的相邻的片之间的优选方法中,所述页硅酸盐材料在水中制成浆,例如按重量5-20%的分层的页硅酸盐材料及按重量80-95%的水,以及所述鎓离子化合物溶于页硅酸盐制成浆的水中。如果必要,所述鎓离子化合物可首先溶解在例如丙醇的有机溶剂。所述页硅酸盐材料随后从浆水中分离并干燥悬浮在液体载体中单独的硅酸盐片及类晶团聚体。
为了实现分层的页硅酸盐的相邻片之间鎓离子的充分内插,基于页硅酸盐的干重,对于用蒙脱石粘土交换间层阳离子的鎓离子,所述页硅酸盐/鎓离子内插组合物优选地含有鎓离子与分层的页硅酸盐的摩尔比为至少0.25∶1,更优选地至少0.5∶1,最优选地1∶1,以使产生的鎓离子插层的页硅酸盐具有对于在液体载体中单个的片及类晶团聚体的剥落及悬浮来说充分疏水的以及充分间隔的内部片表面。所述鎓离子载体(优选地水,有或没有有机溶剂)可通过首先将所述鎓离子化合物溶解或悬浮在载体中添加;或者可混合干燥的鎓离子化合物及相对干的分层的页硅酸盐(优选地含有按重量至少约4%的水),并向混合物中加入内插载体,或者在加入干燥的鎓离子之前加入页硅酸盐中。当将以浆形式的鎓离子内插入到页硅酸盐时,水的量可以根本性地变化,例如,从按重量约4%,优选地从按重量至少约30%水的最小值,在内插入组合物中水的量无上限(所述页硅酸盐插层由于其鎓离子处理后的疏水性,被容易地从内插入组合物中分离)。
可选地,所述鎓离子内插载体,例如水,有或没有有机溶剂,可在加入鎓离子化合物之前干燥的或以溶液直接加入到页硅酸盐中。鎓离子化合物分子的吸附可以通过将页硅酸盐暴露于在鎓离子内插组合物中的干的或液体的鎓离子化合物而实施,基于分层的页硅酸盐材料的干重,所述鎓离子内插组合物含有按重量至少约2%的鎓离子化合物,优选地按重量至少约5%的鎓离子化合物,更优选地至少约10%鎓离子化合物。
根据在分层的页硅酸盐材料的片之间内插鎓离子的乳液方法,所述页硅酸盐,优选地含有按重量至少约4%的水,更优选地按重量约10%到约15%的水,其与鎓离子间隔试剂化合物的水和/或有机溶剂溶液混合,基于分层的页硅酸盐材料干重,混合比例为足以提供按重量至少约5%的鎓离子化合物,优选地按重量至少约10%鎓离子化合物。
所属鎓离子间隔试剂对页硅酸盐具有亲和性,故其被吸附入,并与硅酸盐片内表面上间层空间中的阳离子进行离子交换。
II.分层的页硅酸盐材料的治疗用途
在另一个实施方案中,本发明提供使用此处描述的分层的页硅酸盐的多种体内方法。
本发明的特定方面涉及通过给予此处描述的分层的页硅酸盐材料来治疗哺乳动物受试者中和动脉粥样硬化有关的心血管障碍。如果所述分层的页硅酸盐材料在不期待的症状(例如,冠心病,动脉粥样硬化,心梗或中风)临床表现之前给予,该治疗是预防性的,例如其减少(全部地或部分地)症状发展的程度。如果所述分层的页硅酸盐材料在不想要的症状显现后给予,该治疗是治疗性的(即其旨在减小、改善或维持存在的不想要的症状或其导致的副作用)。在优选的实施方案中,所述哺乳动物受试者为人类。
不受任何特定理论的约束,所述分层的页硅酸盐材料阻止胆固醇在或者从肠胃道内的合成和吸收,其导致受试者中动脉粥样硬化损伤的减少。
在一些实施方案中,所述动脉粥样硬化损伤与症状有关,所述症状如斑块破裂、斑块侵蚀、急性冠状动脉综合征、中风、短暂性脑缺血发作、心脏病、心绞痛、不稳定型心绞痛、血栓症、心肌梗死、缺血性心脏病、冠状动脉疾病、周边动脉疾病或移植引起的硬化。因此,术语“与动脉粥样硬化有关的心血管障碍”或“与动脉粥样硬化损伤形成有关的心血管障碍”指包括医学上与动脉粥样硬化相联系的上述任意的症状或疾病,只要其为动脉粥样硬化损伤的后果。“冠状动脉疾病”(“CAD”)为以冠状动脉涉及动脉粥样硬化为特征的病理学状态。CAD初期是温和的,其产生的动脉最小的变窄不削弱冠脉血流量,并因此不导致心肌缺血,并是无临床症状的。然而,这种斑块可能突然被侵蚀或破裂,并导致急性的冠脉综合征(ACS)。随着损伤发展,其产生充足的动脉阻塞以使缺血发生,在该时间疾病可能成为有症状的(例如,心绞痛及心肌梗塞)。如此处所用的,CAD包括有症状的或无临床症状的疾病。相同的考虑与为脑和腿供血的动脉血管涉及动脉粥样硬化相关。斑块蚀损或破裂最通常地在相对温和及尚未削弱血流量的损伤中发生。结果是,可能发生严重的动脉粥样硬化表现(例如心脏病发作,中风,突然死亡)作为该病的表现症,而没有已经发展的在先的,不太严重的症状。
在此处描述的一些方法的实施方案中,哺乳动物受试者患有心血管动脉粥样硬化、脑血管动脉粥样硬化、外周血管动脉粥样硬化、冠状动脉心脏动脉硬化(coronary heart atherosclerosis)或其组合。在另一些实施方案中,所述受试者患有肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病、高血压、高胆固醇血症或其组合。
在一个实施方案中,本发明提供治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,其包括以有效减少所述受试者中动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者此处所描述的分层的页硅酸盐材料。
在另一个实施方案中,本发明提供减少哺乳动物受试者中动脉粥样硬化损伤形成的方法,包括以有效减少所述受体中动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者此处所描述的分层的页硅酸盐材料。
遭受动脉粥样硬化的哺乳动物使用本领域公知的技术辨别(例如,血管造影术,心电描记法以及生理学及代谢试验)。有发展动脉粥样硬化风险的个体也使用此处描述的方法治疗。危险因子包括年龄增长、男性、遗传、香烟及烟草烟雾、高血液胆固醇水平、高血压、身体不活动、肥胖、压力和/或糖尿病。
在其他实施方案中,此处描述的分层的页硅酸盐材料在治疗哺乳动物中的高胆固醇血症以及对于提供治疗剂(包括但不限于降低胆固醇的试剂,降低甘油三酯的试剂及其他降低脂质的试剂)的载剂(delivery vehicle)是有用的。
在一个方面,所述分层的页硅酸盐材料通过从肠胃道中去除胆固醇来减少膳食胆固醇。不受任何具体理论的约束,此处描述的使用分层的页硅酸盐材料从肠胃道去除胆固醇是通过一种或多种机制进行的,所述机制选自有吸收、吸附、离子络合、静电络合、螯合、氢键键合、离子偶极、偶极/偶极、范德华力及其任意组合。在一个方面,所述分层的页硅酸盐材料干预胰脏的脂酶机制,类似抗肥胖药物Orlistat(Xenical)的机制。Orlistat通过抑制胰脏的脂酶来减少肠的脂肪吸收。另一种脂酶抑制剂,称为GT 389-255,正由Peptimmune开发。GT-389-255是抑制剂及聚合物的组合,其被设计以结合未消化的甘油三酯,从而使脂肪排泄增加而无副作用,所述副作用如Oristat导致的油腻的大便。在一个方面,所述分层的页硅酸盐材料通过阻断胆固醇在肠胃道内的降解过程来抑制胆固醇的吸收,导致在肠分散中降低的胆固醇溶解性(Wang等人,Annu.Rev.Physiol,69:221-48,2007)。
在另一个方面,所述分层的页硅酸盐材料增加覆盖小肠粘膜的未被搅动的水层的厚度,从而减少胆固醇扩散。
在另一个方面,所述分层的页硅酸盐材料干预肠胃道中的胆固醇周围的胆汁酸微团的形成。结果是,所述胆固醇仍为不可溶的并不被运输到并因此不被微绒毛的未被搅动的水层吸收。
在另一个方面,所述分层的页硅酸盐增加肠容纳物的粘度,并减少胆固醇的吸收效率(Carr等人,J.Nutr.126:1463-1469,1996)。
在再另一个方面,所述分层的页硅酸盐材料与含有胆固醇的微团相互作用,并减少胆固醇从微团扩散到小肠粘膜的速率。结果是,吸收的胆固醇的量减少了。
在一个实施方案中,本发明包括减少哺乳动物中高胆固醇血症的方法,其包括给予所述的哺乳动物此处描述的分层的页硅酸盐材料,所述材料为在所述哺乳动物中有效减少总血浆胆甾醇的量。在一个方面,所述分层的页硅酸盐材料制剂为含有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物。
在一个实施方案中,所述哺乳动物为人类。在其他的实施方案中,所述哺乳动物为动物。典型的动物包括但不限于农场动物,如马、牛、绵羊、猪、羊驼、美洲驼及山羊;宠物,如狗和猫;外来的和/或动物园动物;实验室动物,包括小鼠、大鼠、兔子、豚鼠及仓鼠。
在一个实施方案中,含有分层的页硅酸盐材料的组合物还进一步包括用于治疗高胆固醇血症和/或与动脉粥样硬化有关的心血管疾病的护理标准疗法。所述护理标准疗法可以为小分子或大分子,例如肽、蛋白质或核酸。在特定的方面,所述护理标准疗法选自胆固醇吸收抑制剂(包括但不限于,依泽替米贝(ZETIA,EZETROL,EZEMIBE,Merck,Schering-Plough);脂酶抑制剂,参见如美国专利No.6,432,200(包括但不限于Orlistat(Xenical)及GT 389-255);胆汁酸结合树脂,其干扰胆汁酸从肠到肝脏的回收(包括但不限于消胆胺(QUESTRAN LIGHT,Bristol-Myers Squibb),及降脂树脂Ⅱ号盐酸盐(COLESTID,Pharmacia & Upjohn Company);斯达汀,其通过阻断HMGCo A——涉及胆固醇生物合成的关键酶来抑制胆固醇合成(包括但不限于,洛伐他汀(MEVACOR,Merck & Co.,Inc.),得自曲霉的一个株的天然产品,帕伐他丁(PRAVACHOL,Bristol-Myers Squibb Co.)及阿伐他汀(LIPITOR,Warner Lambert)西立伐他汀(BAYCOR(Bayer),氟伐地汀(LESCOL(Sandoz))及辛伐他汀(ZOCOR(Merck));尼克酸,水溶性维生素B-络合物,其减少非常低密度脂蛋白(VLDL)的产生,并在降低低密度脂蛋白(LDL)中有效;贝特,包括但不限于,安妥明(ATROMID-S,Wyeth-Ayerst Laboratories)及吉非罗齐(LOPID,Parke-Davis),通过减少VLDL成分降低血清甘油三酯并且可以在一些患者人群中导致适中的血浆胆固醇的减少;雌激素替代疗法,其降低更年期后妇女的胆固醇水平;长链alpha,omego二羧酸已经被报道降低血清甘油三酯及胆固醇(参见如Bisgaier等,1998,J.Lipid Res.39:17-30;WO 98/30530;美国专利No.4,689,344;WO 99/00116;美国专利No.5,756,344;美国专利No.3,773,946;美国专利No.4,689,344;美国专利No.4,689,344;美国专利No.4,689,344;及美国专利No.3,930,024);其他化合物包括醚(参见如美国专利No.4,711,896;美国专利No.5,756,544;美国专利No.6,506,799),长醇磷酸酯(美国专利No.4,613,593),及噁二唑啉二酮衍生物(美国专利No.4,287,200)作为降低血清甘油三酯及胆固醇水平公开。
在再另一个实施方案中,所述分层的页硅酸盐材料用作载剂。在一个变化中,所述分层的页硅酸盐材料为核酸及蛋白质的载剂。在另一个变化中,所述分层的页硅酸盐材料为此处描述的治疗试剂的载剂。治疗试剂与分层的页硅酸盐材料的结合可以改进其通过粘膜的递送和吸收,所述粘膜包括眼睛、真皮、鼻的及肠膜。从所述分层的页硅酸盐的药物释放可以由pH,离子强度变化,和/或对温度、离子电流或超声波的响应而诱导。在一个实施方案中,所述分层的页硅酸盐材料为载剂。
在其它实施方案中,所述分层的页硅酸盐材料用于替代其他药物载剂或与其他药物载剂共同使用以增加细胞靶向膜的透过性及吸收,所述其他药物载剂在本领域内公知。本领域内典型的药物递送系统包括但不限于描述于美国专利No.6,838,528;6,797,704;6,730,334;6,706,289;6,482,439;6,443,989;6,383,478;6,165,440;5,780,044;5,759,563;5,565,215;及美国专利申请公开Nos.2007/0059327;2007/0053845;2007/00036278;2007/0031340;2007/0026048;2007/0003610;2006/0193787;2006/0188543;2006/0149392;2006/0105049;2006/0057206;2006/0034925;2005/0266090;2005/0260276;2005/0249798;2005/0249774;2005/0220754;2005/0209345;2005/0058603;2005/0152965;2005/0089572;2005/0058701中的那些,所述内容以全文的方式结合作为参考。
给药途径和剂量
所述分层的页硅酸盐材料单独或与一种或多种此处描述的护理标准疗法联用,通过任何途径给予,所述途径将有效剂量递送到想要起效的位点,带有可接受的(优选地最小的)副作用。很多给予途径为已知的,包括例如,经口服、经直肠、经阴道、穿粘膜、经颊或经肠给予;肠胃外递送,包括腹膜内、肌肉内、皮下注射、髓内的注射,以及鞘内的,皮肤上的或皮内的注射;呼吸或吸入,经鼻,肺的及局部敷用,包括眼睛及透皮的敷用。
当用于上述或其他治疗中,分层的页硅酸盐材料或含有分层的页硅酸盐材料的组合物的“治疗上有效量”或“有效量”意味着在可应用于任何医学治疗的合理的益处/风险比例下,提供充足量的所述分层的页硅酸盐材料以达到可测量的有益效果。典型的有益效果包括哺乳动物受试者中动脉粥样硬化损伤形成的可测量的减少;哺乳动物血液中胆固醇和/或LDL和/或甘油三酯水平的可测量的减少;高胆固醇和/或LDL和/或甘油三酯的临床可证实的和/或患者报告的减少或上升的LDL和/或胆固醇和/或甘油三酯状况或其他疾病的完全消退或治愈。血液中总胆固醇、LDL和甘油三酯的正常的和上升的水平列于表1。胆固醇水平可以通过从患者抽血并随后执行标准血液化学测试测量。然而,应当理解,所述分层的页硅酸盐材料的总日常使用应由主治医师在合理的医学判断的范围内决定。对于任一特定患者的特定的治疗上有效剂量水平将取决于多种因素,包括治疗的障碍及该障碍的严重性;采用的特定的化合物的活性;所使用的特定的组合物;患者的年龄、体重、一般健康、性别及饮食;给予的时间,给予的途径以及所使用的特定化合物的排泄速率;治疗持续时间;共同使用的药物或与所使用的特定化合物巧合的药物;及医学领域内公知的类似因素。例如,在本领域技术范围内以低于达到期望治疗效果所需的化合物剂量水平开始,然后逐渐增加剂量直到达到想要的效果。
给予哺乳动物受试者的分层的页硅酸盐材料的总日常剂量范围为约0.001到约200mg/kg/天。如果想要的话,所述有效的日常剂量可以被分为用于给予的多剂;从而,单剂的组合物可以含有此量或其因数,以组成日常的剂量。此处描述的用于抗胆固醇治疗中的页硅酸盐组合物单独或组合的剂量疗程将由主治医师考虑各种因素而决定,所述因素改变页硅酸盐的效果,例如患者的年龄、性别及食谱、任何感染的严重性、给予的时间以及其他的临床因素。
经口服的剂型包括片、胶囊、囊片、溶液、悬液和/或糖浆,并还可以包括多种微粒、珠粒、粉末或片,其可以封装或可以不封装。这些剂型使用药学制剂领域人员的公知常规方法制备,并描述于有关的教科书中,例如,在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,supra)中。片和胶囊代表最方便的经口服的剂型,在这种情况中使用固体药学载体。
片可以使用标准片处理方法及设备生产。用于形成片的一种方法为粉末的、晶体或颗粒化的组合物的直接压缩,所述组合物含有单独的或与一种或多种载剂、添加剂等组合的活性试剂。作为直接压缩的替代,片可以使用湿法造粒或干法造粒过程制备。片也可以是塑型的而不是压缩的,以湿的或除此之外易处理的材料开始。
除了此处描述的单独的或组合的分层的页硅酸盐材料,制备用于口服给予的片通常含有其他材料,如粘合剂、稀释剂、润滑剂、崩解剂、填料、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、着色剂、芳香剂等。粘合剂用于赋予片粘聚性,从而保证片在压缩之后保持完整。合适的粘合剂材料包括但不限于,淀粉(包括玉米淀粉及预胶凝的淀粉),明胶,糖类(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖及乳糖),聚乙烯醇,聚丙烯醇,蜡及天然和合成的胶,例如阿拉伯树胶海藻酸钠,聚乙烯吡咯烷酮,纤维素的聚合物(包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素等),及硅酸镁铝。稀释剂通常在增加体积中是必要的,以最终提供实用尺寸的片。合适的稀释剂包括磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、纤维素、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、干燥的淀粉及粉碎的糖。润滑剂用于促进片剂的生产;合适的润滑剂包括,例如,植物油,例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油及可可油,甘油,硬脂酸镁,硬脂酸钙及硬脂酸。崩解剂用于促进片的崩解,并通常为淀粉、粘土、纤维素、藻酸、胶或交联的聚合物。填料包括,例如,材料如二氧化硅、二氧化钛、氧化铝、滑石、高岭土、粉碎的纤维素及微晶纤维素,以及如甘露糖醇、尿素、蔗糖、乳糖、右旋糖苷、氯化钠及山梨醇的可溶性物质。稳定剂用于抑制或阻碍药物分解反应,包括例如,氧化反应。表面活性剂可以为阴离子型、阳离子型、两性的或非离子型表面活化试剂。
剂型也可以为胶囊,在该情况下含有分层的页硅酸盐材料的组合物可以以液体或固体(包括微粒、颗粒、粉末或片等粒子)的形式装入胶囊。合适的胶囊可以为硬的或者软的,并通常由明胶、淀粉或纤维素的材料制成,明胶的胶囊为优选。两片的硬明胶胶囊优选地为密封的,例如使用明胶带等。(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,supra)中,其描述了用于制备装入胶囊的药品的材料和方法。
如期望,固体剂型,无论是片、胶囊、囊片或颗粒,可以被包被以提供延时的释放。有延时释放包衣的剂型可以使用标准包被步骤及仪器生产。该步骤对于本领域技术人员已知,并描述于相关的教科书(参见,例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,supra)中。一般地,在制备固体剂型后,延时释放包被组合物使用包被盘,无空气的喷雾技术,流化床涂布设备等施加。延迟释放包被组合物包括聚合物材料,例如邻苯二甲酸丁酸酯纤维素,氢酞酸酯纤维素,丙酸酯酞酸酯纤维素,聚醋酸乙烯酞酸酯,邻苯二甲酸醋酸纤维素,醋酸偏苯三酸纤维素,邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素,羟丙基甲基纤维素醋酸酯,二氧丙基甲基丁二酸酯,羧甲基乙基纤维素,羟丙基甲基纤维素丁二酸乙酸酯,由丙烯酸、甲基丙烯酸和/或其酯形成的聚合物和共聚物。
持续释放剂型提供延长的时间段的药物释放,并可以为或可以不为延迟释放。通常地,如本领域技术人员所理解的,持续释放剂型通过将药物分散在可逐渐生物腐蚀(可水解的)材料的基质内进行制剂,所述材料如不溶的塑料,亲水性聚合物或脂肪化合物,或者通过用这类材料包被固体的、含药物的剂型。不溶的塑料基质可以由例如聚氯乙烯或聚乙烯组成。提供持续释放包衣或基质纤维素聚合物的亲水性聚合物包括而非限制:纤维素聚合物,如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素酯、醋酸偏苯三酸纤维素酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素酯、羟丙基纤维素邻苯二甲酸酯、六氢邻苯二甲酸纤维素酯、六氢邻苯二甲酸醋酸纤维素酯以及羧甲基纤维素钠;丙烯酸聚合物和共聚物,优选地由丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯等形成,例如丙烯酸、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯的共聚物,丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和三甲铵乙基甲基丙烯酸氯的三元聚合物(以商品名Eudragit R销售)为优选;乙烯聚合物和共聚物,如聚乙酰吡咯烷酮、聚醋酸乙烯酯、聚醋酸乙烯酞酸酯、醋酸乙烯丁烯酸共聚物和乙烯醋酸乙烯酯共聚物;醇溶蛋白;以及虫胶、氨化虫胶、虫胶-乙酰醇以及虫胶硬脂酸正丁酯。用作缓释基质材料的脂肪化合物包括但不限于,通常地蜡(例如加洛巴蜡)及甘油三硬脂酸酯。
尽管本组合物可以经口服给予,其他给予的模式也被涵盖。典型的给予的方式包括经粘膜(如美国专利No.5,288,498;6,248,760;6,355,248;6,548,490,其内容在此以全文形式结合作为参考),经尿道(例如,如美国专利No.5,919,474及5,925,629,其内容在此以全文形式结合作为参考),阴道或阴道周(例如美国专利No.4,211,679;5,491,171及6,576,250,其内容在此以全文形式结合作为参考)以及鼻内或经吸入(例如美国专利No.4,800,878;5,112,804;5,179,079;6,017,963;6,391,318及6,815,424,其内容在此以全文形式结合作为参考)。本领域技术人员能够改变含有此处描述的单独的或组合的分层的页硅酸盐材料的组合物,以用于任意此处描述的给予的模式。
本发明的组合物可用于与常规的赋形剂混合,所述赋形剂即,适于局部敷用的药学上可接受的有机或无机载体基质,其不有害地与组合物中的酸或醇反应。本发明的组合物还可以包括稀释剂、填料、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂及其他本领域公知的材料(Remington′s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.1980)。
本发明的分层的页硅酸盐材料以约0.1%到约20%的浓度(w/v)范围给予,或约11%到约10%,或为约2%、约3%、约4%、约2%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、或约20%的浓度。
联合治疗
本发明进一步涵盖给予护理标准疗法,所述疗法具有减少动脉粥样硬化损伤形成的能力,和/或减少哺乳动物血液中胆固醇和/或LDL和/或甘油三酯和/或其它脂质的能力,并被认为在根据本发明的分层的页硅酸盐材料联合的组合物中有用。在一个实施方案中,所述分层的页硅酸盐材料及所述护理标准疗法以结合的量同时给予,所述量对于产生想要的治疗结果有效。这通过给予单独的组合物或包括所有活性试剂的药学制剂实现,或通过同时给予受试者两种不同的组合物或制剂实现,其中一种组合物包括所述分层的页硅酸盐材料,而第二种组合物包括护理标准疗法。所述分层的页硅酸盐材料及其他的护理标准疗法可以显示或可以不显示相同的机理,通过所述机理它们减少哺乳动物的总胆固醇(即高胆固醇血症)和/或其他脂质的水平和/或动脉粥样硬化损伤形成。
可选地,所述分层的页硅酸盐材料治疗可以先于或后于使用其他治疗试剂的疗法,其间隔范围为从数分钟到数周。在两种或多种治疗组合物分别给予的实施方案中,通常能确定一段显著的时间段,其不超过在每种递送之间的时间,以使得护理标准疗法及分层的页硅酸盐材料仍然能发挥有利结合的效果。在这种情况下,涵盖了应该在彼此的约12-24小时内给予一种或多种组合物,或彼此的约6-12小时,或仅约12小时的延迟时间。在一些情况下,可以想要显著地延长治疗的时间段,然而,在分别给予之间间隔几天(2,3,4,5,6或7)到几周(1,2,3,4,5,6,7或8)。
A.斯达汀相关的试剂
在一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为斯达汀相关的试剂。术语“斯达汀相关的”指当前市场上的任何斯达汀药物,或由当前上市的斯达汀药物修饰的,并当与此处描述的分层的页硅酸盐材料结合时具有疗效。因此应当理解已经存在的斯达汀类的类似物及变体在此涵盖为是有用的。该类似物或变体可通过本领域技术人员所知的合理的药物设计技术来生产。尤其是,斯达汀药物已知为HMGCoA还原酶抑制剂。这些药物当前作为针对高胆固醇及控制心脏病发作的努力中的药物而用于临床,所述心脏病发作为复发的和第一次心脏病发作。这些试剂一般副反应不多,并且不仅辅助降低总胆固醇,LDL胆固醇及甘油三酯,也增加HDL胆固醇。其他化合物在联合疗法中的应用被认为是本发明的一个方面,所述其他化合物干扰HMGCoA还原酶的活性。
斯达汀以洛伐他汀为例(CAS注册号No.75330-75-5;也称为mevinolin或洛伐他汀K),以及此化合物的类似物已经在许多出版物和专利中描述。商业可获得的典型的斯达汀组合物包括LipitorTM(阿伐他汀),PravacholTM(帕伐他丁),ZocorTM(辛伐他汀),MevacorTM(洛伐他汀)及LescolTM(氟伐地汀)。制备该化合物的方法为本领域技术人员熟知(参见,例如美国专利No.6,521,762;4,420,491;4,342,767;4,319,039;4,294,846;4,444,784;4,582,915及4,820,850)。如此前的专利中所描述的,斯达汀传统上使用曲霉属、红曲霉属、侧茸属、小盾壳霉属等的微生物通过发酵生产(参见美国专利No.6,521,762以回顾该发酵过程)。
此外,在如Physician′s Desk Reference中已经描述了斯达汀作为药学上的药物的制剂。例如,片剂LipitorTM(阿伐他汀钙)描述于Physician′s Desk Reference(第七版,2003)的2547-2551页(Parke-Davis,NJ.)及2610-2613页(Pfizer,NY)。提供的这些制剂为含有10mg、20mg、40mg、50mg及80mg的阿伐他汀钙的片。这些片以10mg/天到80mg/天的剂量范围给予。当前用于降低人类的胆固醇的LipitorTM组合物可用于本发明的综合疗法,以产生HADDS及相关的脂肪营养不良的治疗上的改善。
PravacholTM(帕伐他汀钠;Bristol-Myers Squibb,NY)为另一种典型的可商购的能用于本发明的综合疗法的斯达汀。PravacholTM以10mg、20mg、40mg及80mg的片给予。这些片可以10mg/天到80mg/天的日常剂量范围给予。在典型的高胆固醇血症的治疗中,40mg/天作为单次的每天剂量给予,与食物一起或不与食物一起。然而,通常地认为该剂量可以增加或降低,取决于所治疗的患者的肾脏和肝脏功能。PravacholTM的给予剂量及治疗规则在Physician′s Desk Reference(第57版,2003)的1101-1105页进一步地详细讨论,并可以被用于为本发明方法中斯达汀的应用提供指导。
ZocorTM(辛伐他汀;Merck & Co.,Inc.,NJ)为另一种典型的可与本发明的分层的页硅酸盐材料结合使用的斯达汀组合物。辛伐他汀制剂描述于Physician′s Desk Reference(第57版,2003)的2126-2131页。其日常剂量可以为5mg/天到80mg/天的范围,并且本领域技术人员求助Physician′s Desk Reference以获得关于治疗规程的进一步指导,所述规程可以使用或经修改用于本发明。
MevacorTM(洛伐他汀;Merck & Co.,Inc.NY)及LescolTM(氟伐他汀)为其他的典型的斯达汀,其分别描述于Physician′s Desk Reference(第57版,2003)中的2036-2041页及2283-2287页。本领域技术人员能容易地改变前面引用的药学组合物,所述组合物含有不同的斯达汀相关的用于本发明的方法的试剂。
对于治疗规程而言,本领域技术人员可以使用用于任何上述引用的制药上的斯达汀的指导。含有斯达汀的普通片剂每天给药一次、两次、三次或更多次数。相应地,技术人员可以使用此前已证明对上述适应症有效的剂量作为前文引用的斯达汀的起始措施的量,以用于本发明的治疗方法中。
尤其涵盖了斯达汀的口服剂量。该口服剂量可以包括给予日常基础上的约5mg到约80mg的斯达汀药物。然而,更大的剂量,例如高达200mg/天也可以使用。因此,受试者可以经口服接受5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg或更多的斯达汀药。当然应当理解所述受试者可以接受更多或更少的斯达汀。同时应当理解相似的剂量可以通过其他惯常的给予途径给予。所述斯达汀可以以单独的剂量递送或可选地可以以多个剂量划分并经一段给定的时间给予。
B.烟酸
在另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为烟酸。烟酸(尼克酸)降低总的及LDL胆固醇并升高HDL胆固醇,还降低甘油三酯。降低胆固醇所需的尼克酸的剂量为超过尼克酸推荐每日允许量(RDA)的约100倍,因此可能潜在地为有毒性的。因此,该药物必须在医生的照料下摄入。
C.贝特类
在另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为贝特。苯氧酸衍生物(贝特类)是一类降低血液甘油三酯水平的药物。贝特类通过减少肝脏产生VLDL及通过加速血液中甘油三酯的去除来降低血液甘油三酯水平。贝特类也在增加血液HDL胆固醇水平中有一定用处;然而,贝特对降低LDL胆固醇中无效。典型的贝特类包括但不限于,苯扎贝特(如Bezalip),环丙贝特(如Modalim),安妥明,吉非罗齐(如Lopid)及非诺贝特(如TriCor)。
D.胆汁酸树脂
在再另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为胆汁酸树脂。胆汁酸树脂,也称胆汁酸螯合剂,主要用于治疗LDL-胆固醇中度升高的患者以及当降低胆固醇的药物疗法对年轻成年男性和绝经前期的妇女来说必要的时候。它们有时也与其他降低胆固醇的药物如“斯达汀”联合以降低非常高水平的胆固醇。典型的胆汁酸树脂包括但不限于消胆胺,降脂树脂Ⅱ号(Colestid)及Cholsevelam(Welchol)。
E.胆固醇吸收抑制剂
在再另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为胆固醇吸收抑制剂。依泽替米贝(Zetia,Ezetrol,Ezemibe)是此类中当前仅有的处方药。该药物防止膳食胆固醇从小肠吸收及进入血液,从而降低血液胆固醇水平。尤其涵盖含有胆固醇吸收抑制剂及此处描述的分层的页硅酸盐材料的协同组合物。
F.水杨酸
也涵盖的联合疗法中的护理标准疗法为水杨酸(阿司匹林)。阿司匹林已显示对具有血管阻塞的患者的心脏病发作有保护效果,并也可以用于根据本发明的组合物中。降低胆固醇的机理据信基于阿司匹林的酸性,据此而言,该酸使胆汁酸胆固醇复合物(或胆固醇微团)解离,降低生物利用度。
G.植物甾醇类
在另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为植物甾醇。植物甾醇,也称为植物甾醇(plant sterol)或甾烷醇,为具有类似胆固醇的化学结构的脂质,其存在于所有植物中,包括但不限于蔬菜、水果和谷物,尤其在坚果、种子及植物油中。植物甾醇抑制肠的胆固醇吸收,从而降低血浆总的及低密度脂蛋白(LDL)胆固醇水平。植物甾醇的日常的约一到两克的摄取降低心血管疾病的风险约25到约28%,而不引起任何不良效果。每天两次摄取约0.40克植物甾醇或0.65克植物甾醇酯也显示出降低总胆固醇水平及LDL胆固醇水平达10%。大豆萃取物-谷甾醇-以称为Take Control(Lipton)的产品可得。以及松针萃取物-谷甾醇-以称为Benechol(McNeil)的类似产品可得。也涵盖了植物甾醇的用途,其得自不同的植物的蜡,所述植物包括但不限于甘蔗及甜菜。也涵盖了豆甾醇(Sigma Aldrich)的用途。
H.藻酸盐及果胶
在再另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为多糖,所述多糖包括但不限于藻酸盐、果胶、结冷胶、黄原胶及菌胶团。据报道藻酸盐、果胶及其修饰物与膳食胆固醇相互作用并影响其吸收和排泄(参见美国专利No.5,141,927;5,597,810;7,026,302,日本专利No.09235234,及Kimura等,J.Ethnopharaiacol,54(1):4754(1996),所述内容以全文形式引入作为参考)。
I.卵磷脂
在另一个实施方案中,联合疗法中的护理标准疗法为卵磷脂(CAS # 8002-43-5)。卵磷脂通常用作磷脂酰胆碱的同义词,是磷脂,其为分离自蛋黄或大豆中的磷脂组分的主要成分。卵磷脂可以高纯度作为食物添加剂及作为药物用途在商业上获得。例如,卵磷脂19颗粒在柜台销售并被报道降低胆固醇。
J.营养食品
也涵盖营养食品作为用于联合疗法中的护理标准疗法。在一个的实施方案中,所述营养食品为绿茶萃取物。绿茶含有挥发性油、维生素、矿物质以及咖啡因,然而主要的感兴趣的成分为多酚,尤其是称作儿茶素没食子酸盐(EGCG)的八茶酸。据信所述多酚为大多数绿茶在促进良好健康的功能的原因。
在大多数研究中(Kono等,Japan.Prev Med.,21:526-31,1992;Yamaguchi等,Nip Yak Zas.,97:329-37,1991;Sagesaka-Mitane等,Chem Pharm Bull.,;38:79O-3,1990;Stensvold等,Prev Med.,21:546-53,1992)然而不是所有的(Tsubono等,Ann Epidemiol,7:280-4,1997)研究中,已显示绿茶温和地降低总胆固醇水平并改进胆固醇型(降低LDL胆固醇并提高HDL胆固醇)。绿茶也可以通过使得血液中的血小板更不粘来促进心血管健康。
在另一个实施方案中,所述营养食品为膳食补充剂,其选自Cholest-ArrestTM(500mg大蒜及200mg卵磷脂);CholestawayTM(700mg碳酸钙、170mg氧化镁、50μg吡啶甲酸铬),Cholest-OffTM(900mg植物甾醇/甾烷醇),Guggul Bolic(750mg gugulipid(没药树脂),及Kyolic(600mg陈年大蒜提取物和380mg卵磷脂)。
试剂盒和单位剂量
在前述的实施方案的相关变化中,可以以例如试剂盒或包装或单位剂量来设置含有分层的页硅酸盐材料的组合物,所述组合物单独或与一种或多种此处描述的护理标准疗法结合,以允许其与一种或多种护理标准疗法共同给予,然而所述分层的页硅酸盐材料组合物及一种或多种护理标准疗法不混合。在另一个方面,所述分层的页硅酸盐材料组合物及一种或多种护理标准疗法为混合的,在一些实施方案中,试剂盒/单位剂量的两种组分与说明一起包装,以将这两种试剂给予哺乳动物受试者,以治疗上述障碍或疾病中的一种。
本发明的其他的方面和优点在考虑以下说明性实施例基础上理解,所述实施例不意为以任何方式的限制性的。
实施例
实施例1
本实施例演示了蒙脱石粘土从钙形式或钠/钙混合形式到富含钠的蒙脱石粘土的离子交换过程。
未加工的的蒙脱石粘土分散到水中产生3wt%的粘土浆。所述粘土具有0.20wt%的钠含量及2.10wt%的钙含量。元素分析通过X-射线荧光方法测量。所述混合物使用机械混合器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为7-8。离子交换树脂,如Amberlite 200C Na,可得自Rohm & Hass,其装于直径为2英寸及长度为20英寸的玻璃柱中。液体泵被用于将粘土浆以20ml/min泵送通过柱。完成的粘土的元素分析指示钠含量为3.45wt%,及钙含量为0.17wt%,所述粘土为从浆中干燥得到。所述离子交换粘土称作E1-Na-Clay。该粘土具有的底面间距。
实施例2——氢质子化的分层的页硅酸盐材料的制备。
本实施例演示了将钠蒙脱石粘土转化为氢质子化的蒙脱石粘土(即化合物A)的离子交换过程。
含有约80%钠及约20%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被延理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。
纯化的钠交换粘土分散到过滤的DI水中以产生3wt%的粘土浆。所述混合物使用Silverson均质器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为约10。氢离子交换树脂,可购于Rohm & Hass的Amberlite FPC23 H填充入两个直径为2英寸以及长度为20英寸的玻璃柱;在各个柱的顶端留1英寸的空间以促进珠粒的流动能力。使用3英寸的分散刀片在800rpm下缓慢地混合粘土浆,同时使用液体泵将该粘土浆以20ml/分钟泵送通过两个填充了树脂的柱。在通过第二个柱后,所述粘土浆的pH值为2.3。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所产生的氢质子化的蒙脱石粘土命名为化合物A并用于一些此处描述的体内分析中。
使用Coulter LS230颗粒尺寸分析仪测量化合物A的颗粒尺寸分布。循环速度被设置为75%。分布使用夫琅和费(Fraunhofer)模型计算。化合物的1 A 1:10稀释使用混合机在7,000rpm下5分钟制备。化合物A的颗粒尺寸测量如下:
也测量了zeta电势及pH值。化合物A稀释到0.1wt%并使用混合机在7000rpm下混合3分钟,然后测量pH及zeta电势(mV)。所得到的zeta电势为-45.66mV,及pH为3.1。
实施例3
本实施例演示了由实施例1的离子交换的钠蒙脱石粘土(E1-Na-粘土)使用乙酰十八铵形成质子化的十八烷基铵处理的蒙脱石粘土。
100g钠蒙脱石粘土E1-Na-粘土通过机械混合器分散到3000ml水中。所述粘土浆加热到80℃。41.5g得自KAO Chemicals的乙酰十八烷基铵被加入粘土浆中。粘土在所述乙酰十八烷基铵加入后显示优秀的凝聚性。粘土反应浆的pH为约4。所述粘土使用常规的定量过滤试纸在机械真空泵的帮助下过滤。随后,所述粘土在烘箱中在80℃下干燥过夜并粉碎以作为细粉通过300目的筛。该修饰的粘土称为E2-ODA-粘土。
实施例4
本实施例演示了使用十八烷基铵离子的稀盐酸溶液形成质子化的十八烷基铵处理的蒙脱石粘土。(E3-ODA-粘土)。本实施例使用粉末X射线衍射测量以确定离子交换之后粘土的底面间距。结果列于表1中。
100g钠蒙脱石E1-Na-粘土通过机械混合器分散到3000ml水中。该粘土浆加热到80℃。33.8g的十八烷基胺加入1000ml 70℃的水中,并与17.1g的10.5 N HCl混合。所述十八烷基胺-盐酸溶液被加入粘土浆中,随后混合。所述反应浆具有4的pH。粘土在所述十八烷基胺-HCl溶液加入后显示优秀的凝聚性。所述粘土使用常规的定量过滤试纸在机械真空泵的帮助下过滤。随后,所述粘土在烘箱中在80℃下干燥过夜并粉碎以作为细粉通过300目的筛。该修饰的粘土称为E3-ODA-粘土。本样品使用粉末X射线衍射测量以确定离子交换之后粘土的底面间距。结果列于表2中。
表2.不同方法制备的ODA处理的粘土的总结
实施例5——质子化的卵磷脂页硅酸盐材料的制备。
本实施例演示了使用卵磷脂的稀盐酸溶液形成质子化的卵磷脂(CAS # 8002-43-5)处理的蒙脱石粘土(E3-ODS-粘土)(即化合物B)。
卵磷脂分散液的制备:在干净干燥的烧杯中,10g卵磷脂加入到150ml的去离子水中。粗混合物加热到60-70℃并使用磁力搅拌器搅拌直到完全分散。
表面修饰的纯化粘土的制备:在分开的烧杯中,10g的高度纯化的钠膨润粘土加入到~600ml去离子水中。所述溶液加热到>60℃并使用机械搅拌器搅拌直到所述粘土被完全地分散(约15-30分钟)。将浓的(12M)HCl缓慢加入到完全分散的粘土中直到所述分散液具有2的pH。所述分散液的粘度会随着pH的降低而上升。
卵磷脂修饰的粘土的制备:将卵磷脂分散液缓慢加入到温的修饰的粘土分散液中,搅拌并加热约1小时直到所述分散液颜色从棕色变为棕黄色/粉色。所述分散液使用布氏漏斗及真空过滤器其过滤。收集滤饼并放入初始的烧杯。所述滤饼再分散于~800mL去离子水中并在60℃下搅拌60分钟。所述分散液使用布氏漏斗及真空过滤器具第二次过滤。收集滤饼并于约60℃下干燥过夜。干燥的滤饼随后粉碎到想要的颗粒尺寸,100%的颗粒小于45微米。所产生的蒙脱石粘土命名为化合物B并用于一些此处描述的体内分析中。
使用Coulter LS230颗粒尺寸分析仪进一步测量化合物B的颗粒尺寸分布。循环速度被设置为75%。分布使用夫琅和费模型计算。化合物B的1%溶液使用混合机在7,000rpm下5分钟制备。化合物B的颗粒尺寸测量如下:
也测量了zeta电势及pH数据。化合物B稀释到0.1wt%并使用混合机在7000rpm下混合3分钟,然后测量pH及zeta电势(mV)。所得到的zeta电势为-32.06mV,及pH为3.6。
实施例6—用表面酸处理的分层的页硅酸盐材料的制备(化合物C)
本实施例演示了用表面酸处理的分层的页硅酸盐材料的制备(即化合物C)。
膨润土随着其在带上向挤出机运行,被压碎,造粒并随后喷水。随后使用75%的H2SO4喷雾挤出的膨润土,所述酸与间层阳离子形成盐。膨润土随后再次挤出到更小的尺寸。酸化的粘土颗粒继续沿着带向活化罐。该罐同时装入膨润土及酸2小时。在到达罐之前,向H2SO4酸流加入蒸汽以降低浓度到35%及到达90℃的温度,其维持于整个酸活化过程中。
使膨润土在不搅拌下在循环的酸中浸透一定量的时间,所述时间取决于活化的粘土的应用。
酸处理后,将新鲜活化的膨润土进行两个洗涤步骤(即洗涤A及洗涤B)以除去酸处理产生的盐。在洗涤A期间,90℃的4%H2SO4在罐周围循环,而洗涤B的酸浓度为2%。洗涤B之后,罐被排干并且活化的膨润土挤出物从罐中铲入储藏堆中。所述活化的膨润土挤出物随后送入干燥器中,其中减少湿气并破碎成颗粒。所产生的表面酸处理的纳米膨润土化合物命名为化合物C并用于一些此处描述的体内分析中。
使用Coulter LS230颗粒尺寸分析仪测量化合物C的颗粒尺寸分布。循环速度被设置为75%。分布使用夫琅和费模型计算。化合物C的1%溶液使用混合机在7,000rpm下5分钟制备。化合物C的颗粒尺寸测量如下:
也测量了zeta电势及pH值。化合物C稀释到0.1wt%并使用混合机在7000rpm下混合3分钟,然后测量pH及zeta电势(mV)。所得到的zeta电动势为-1.71mV,及pH为4.1。
实施例7——其他分层的页硅酸盐材料的制备
本实施例描述了此处命名为化合物G、化合物H、化合物I、化合物J、化合物K、化合物L及化合物M的分层的页硅酸盐材料的制备。
化合物G的制备:含有约5%钠及约95%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。
纯化的钠交换粘土分散到过滤的DI水中以产生2.7wt%的粘土浆。所述混合物使用Silverson均质器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为约10。氢离子交换树脂,Amberlite FPC23 H(Rohm & Hass)填充入两个直径为2英寸以及长度为20英寸的玻璃柱;在各个柱的顶端留1英寸的空间以促进珠粒的流动能力。使用3英寸的分散刀片在800rpm下缓慢地混合粘土浆,同时使用液体泵将该粘土浆以20ml/分钟泵送通过两个填充了树脂的柱。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的粘土被命名为化合物G。
化合物H的制备:含有约70%钠及约30%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。
纯化的钠交换粘土分散到过滤的DI水中以产生2.6wt%的粘土浆。所述混合物使用Silverson均质器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为约10。氢离子交换树脂,Amberlite FPC23 H(Rohm & Hass)填充入两个直径为2英寸以及长度为20英寸的玻璃柱;在各个柱的顶端留1英寸的空间以促进珠粒的流动能力。使用3英寸的分散刀片在800rpm下缓慢地混合粘土浆,同时使用液体泵将该粘土浆以20ml/分钟泵送通过两个填充了树脂的柱。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的粘土被命名为化合物H。
化合物I的制备:含有约80%钠及约20%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理称为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的粘土被命名为化合物I。
化合物J的制备:含有约80%钠及约20%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。纯化的蒙脱石粘土及过滤的去离子水的2.8wt%混合物使用混合机在7000rpm下3-5分钟制备。得到的粘土浆随后使用6N HCl逐滴处理直到获得2.2的pH。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的表面酸处理的蒙脱石粘土被命名为化合物J。
化合物K的制备:含有约80%钠及约20%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。
纯化的钠交换粘土分散到过滤的DI水中产生3wt%的粘土浆。所述混合物使用Silverson均质器彻底混合。初始的粘土浆的pH值为约10。氢离子交换树脂,Amberlite FPC23 H(Rohm & Hass)填充入两个直径为2英寸以及长度为20英寸的玻璃柱;在各个柱的顶端留1英寸的空间以促进珠粒的流动能力。使用3英寸的分散刀片在800rpm下缓慢地混合粘土浆,同时使用液体泵将该粘土浆以20ml/分钟泵送通过两个填充了树脂的柱。在通过第二个柱后,所述粘土浆的pH值为2.3。粘土浆随后使用NaOH逐滴处理直到获得10的pH。最终混合浆2.7wt%。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的粘土被命名为化合物K。
化合物L的制备:含有约70%钠及约30%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的钠离子交换的粘土被命名为化合物L。
化合物M的制备:含有约5%钠及约95%钙/镁作为可交换离子的蒙脱石粘土被处理成为颗粒尺寸约74μm,并通过描述于美国专利No.6,050,509中的方法纯化。在纯化后,所述蒙脱石粘土主要含有钠离子。所述粘土随后被伽玛辐照,以预防细菌污染。所得到的钠离子交换的粘土被命名为化合物M。
实施例8—分层的页硅酸盐材料在体外减少胆固醇
实施本实施例,以确定各种页硅酸盐材料从含水的溶液中吸收胆固醇的效果。
胆固醇粉末得自Aldrich Chemical公司(Milwaukee,WI)。胆固醇的储备溶液通过将纯晶体溶于乙腈制备,随后将一定量注入纯水(pH 6.8)中以得到浓度为4mg/mL的溶液。储备溶液的准确浓度通过液相色谱鉴定。
每条等温线由三个5mL含水的胆固醇样品组成,所述样品由储备液的稀释制备,以产生大致浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5及4.0ug/mL,并置于无菌的17×100mm的聚丙烯离心试管中。分层的页硅酸盐材料的悬浮液通过以下制备:称取10mg分层的页硅酸盐材料置于25mL爱伦美氏烧瓶中并将合适体积的水移液入烧瓶中,使得粘土浓度为1mg/mL。在烧瓶中加入搅拌子,混合所述悬浮液以保证该浆为均质的。使用自动移液器从此悬浮液中移液出50uL(含有50ug粘土),并加入到各个5mL试样中。也制备了四个对照:不含胆固醇的水对照,含有0.5及4.0ug/mL胆固醇的胆固醇对照,以及含有5mL水及50μg粘土的对照。样品加盖并在37℃下1000rpm震荡混合2小时。
混合结束之后,样品在37℃ 10000rpm下离心15分钟以将分层的页硅酸盐材料从上层清液中分离。所述样品随后使用液相色谱分析。所述样品的分析显示在上层清液中保留了胆固醇的不可检出水平,标志着胆固醇被分层的页硅酸盐材料从含水的液体中的定量吸收和除去。
实施例9—分层的页硅酸盐材料在动物模型中减少高胆固醇血症
实施本实施例,以确定各种分层的页硅酸盐材料在兔子中对血浆脂质的效果。
兔子是用于研究降低脂质的试剂效果的合适动物,这是由于可以操纵饮食以诱导高胆固醇血症(Kroon等人,Atherosclerosis,44:41-48,1982;Prior等人,Archives of Pathology,71:82-94,1961;Kolodgie等人,Arterioscler ThrombVase Biol.,16:1454-1464 1996)。胆固醇饲喂的兔子模型此前已用于证明斯达汀的降低脂质的效果(Nielsen等人.Pharmacol Toxicol,72(3):148-151,1993)。在本研究中,将使用新西兰白色雄兔(2.0到2.5kg;Jeo-Bet Rabbits LTD,Aldon B.C.,Canada),其呈现由富含脂肪/胆固醇的饮食诱导的高胆固醇血症,如此前Verd等人公开的(Br.J.of Pharmacology,127:1479-1485,1999)。所述富含脂肪/胆固醇的饮食由补充14.0%(重量/体积)椰子油及0.50%(重量/体积)胆固醇的Purina兔食组成。
将雄性的新西兰白兔(n=30;对照组,辛伐他汀组(Risovic等人,Drug Dev.Industry Pharm.,32:1-7,2006),组A分层的页硅酸盐材料(分散于去离子水中的纳米膨润土),组B分层的页硅酸盐材料(表面酸处理的纳米膨润土)及组C分层的页硅酸盐材料(表面修饰以卵磷脂的纳米膨润土)在湿度及温度(22℃)不变的房间里,置于独立的笼子里经历12小时的光-暗循环,并饲喂标准饮食7日。在7天后,动物被饲喂10克的常规饮食加100克补充了0.5%(重量/体积)胆固醇及14.0%(重量/体积)椰子油的同样的饮食28天。最终给予这些兔子的饮食(在100g高脂肪/胆固醇饮食使用10克常规的食稀释后)含有0.45%(w/v)胆固醇及12.75%(w/v)椰子油。在此饮食28天后,动物按照其餐后16小时血浆胆固醇及甘油三酯浓度,分为五组,每组六只动物,各个在总血浆胆固醇及甘油三酯浓度上无统计学上显著的差别。
在额外的28天里(本研究的第28天到第56天),对照动物组(n=6)将维持相同的饮食(10克常规饮食加100g的胆固醇/椰子油饮食)以及四组动物将饲喂以100g的胆固醇/椰子油饮食及含有辛伐他汀(3mg/kg/天;n=6)、制剂A(20mg/kg/天;n=6)、制剂B(20mg/kg/天;n=6)和制剂C(20mg/kg/天;n=6)的10克常规食物饮食。在处理开始之前及28天之后,收集全血(3ml)以确定血浆脂质。
血浆总胆固醇及甘油三酯浓度将使用酶试剂盒(Sigma Aldrich)直接定量。HDL胆固醇浓度使用Warnick等人(Clin Chem.,28:1379-1388,1982)开发的右旋糖苷硫酸酯-Mg2+沉淀法测定。用于确定LDL胆固醇的Friedewald公式不能用于此兔子饲喂模型(Friedewald等人,Clin Chem.,18:499-502,1972)。然而,apoB胆固醇的测量(其计入LDL胆固醇)浓度将通过从总胆固醇浓度减去HDL胆固醇浓度进行确定。
本研究中选用的3mg/kg/天的辛伐他汀剂量为基于在Verd等人在相同的动物模型中完成的结果(Br.J.of Pharmacol.,127:1479-1485,1999)。
结果将表示为平均值±平均值的标准差(SEM)。统计学分析使用偏差分析进行(PCANOVA;Human Dynamic Systems),并假定不等方差(Newman Keuls post-hoc试验;我们假定不等方差)。处理组之间比较的变量包括重量的增加、总血浆胆固醇、总血浆甘油三酯、HDL-胆固醇及ApoB胆固醇。少于0.05的p值指示在处理的和未处理的组之间显著的差异。
预期当与对照相比时,使用分层的页硅酸盐材料A、B、C的处理导致更低的总血浆胆固醇,更低的血浆甘油三酯,更低的LDL-胆固醇及更低的ApoB胆固醇水平。
实施例10—分层的页硅酸盐材料在其他动物模型中减少高胆固醇血症
重复了在Nishide等人,J.Appl.Phycology,5:207-211,1993中实施的研究,使用此处描述的分层的页硅酸盐材料联合藻酸盐。单独使用藻酸盐的处理作为对照。预期在与对照比较时,分层的页硅酸盐材料及藻酸盐的联合处理导致更低的总血浆胆固醇。
实施例11—分层的页硅酸盐材料在动物模型中减轻高胆固醇血症
随后的实施例证实了分层的页硅酸盐材料在严重的血脂异常模型中显示降低胆固醇的效果(Nielsen等人,Pharmacol Toxicol,72(3):148-151,1993)。
雄性的新西兰白兔(n=24;对照组[n=5],辛伐他汀组[n=4],化合物A组[n=5],化合物B组[n=5]和化合物C组[n=5],在湿度及温度(22℃)不变的房间里,置于独立的笼子里经历12小时的光-暗循环,并饲喂标准饮食7日。在7天后,动物被饲喂10克的常规饮食加100克补充了0.5%(重量/体积)胆固醇及14.0%(重量/体积)椰子油的同样的饮食28天。最终给予这些兔子的饮食(在100g高脂肪/胆固醇饮食使用10克常规的食稀释后)含有0.45%(w/v)胆固醇及12.75%(w/v)椰子油。在此饮食28天后,动物按照其餐后16小时血浆胆固醇及甘油三酯浓度被分为五组,各个在总血浆胆固醇及甘油三酯浓度间无统计学上显著的差别。药物处理之前的受试者的总的血浆胆固醇、ApoB、HDL及甘油三酯浓度分别示于图1-4中。
在额外的21天里(本研究的第35天到第56天),对照动物组(n=5)维持相同的饮食(10克常规食物饮食加100g的胆固醇/椰子油饮食)以及四组动物饲喂以100g的胆固醇/椰子油饮食加10克的含有辛伐他汀(3mg/kg/天;n=4)、化合物A(氢质子化的分层的页硅酸盐材料(按照实施例2中前述的制备);20mg/kg/天;n=5)、化合物B(表面以卵磷脂修饰的分层的页硅酸盐材料,按照实施例5中前述的制备);20mg/kg/天;n=5)和化合物C(表面酸处理的分层的页硅酸盐材料,按照实施例6中前述的制备);20mg/kg/天;n=5)的常规食物饮食。在处理开始前及其开始后7、14及21天,收集全血(3ml)以确定血浆脂质。
血浆总胆固醇及甘油三酯浓度直接使用酶试剂盒(Sigma Aldrich)定量。HDL胆固醇浓度使用Warnick等人开发的右旋糖苷硫酸酯-Mg2+沉淀法测定(9)。用于确定LDL胆固醇的Friedewald公式不能用于此兔子饲喂模型(10)。然而,apoB胆固醇的测量(其计入LDL-胆固醇)浓度通过从总胆固醇浓度减去HDL-胆固醇浓度确定。
本研究中选用的3mg/kg/日的辛伐他汀剂量基于Verd等人在同样的动物模型中完成的结果(Br.J.of Pharmacol.,127:1479-1485,1999)。
统计学分析:结果表示为平均值±平均值的标准差(SEM)。统计学分析使用偏差分析进行(PCANOVA;Human Dynamic Systems),并假定不等方差(Newman Keuls post-hoc试验;假定不等方差)。处理组之间比较的变量包括重量的增加、总血浆胆固醇、总血浆甘油三酯、HDL-胆固醇及ApoB-胆固醇。少于0.05的p值指示在处理的和未处理的组之间显著的差异。
结果:
下文表3列出高胆固醇饮食对药物处理前的总血浆胆固醇、HDL、ApoB及甘油三酯水平的影响。
表3.椰子油/胆固醇的饲喂1对血浆胆固醇、HDL-胆固醇、ApoB-胆固醇及甘油三酯浓度的影响
数据表示为平均值±SEM(n=24)。ap<0.05对第7天。
缩写:Chol,胆固醇;HDL,高密度脂蛋白;ApoB,Apo脂蛋白B;TG,甘油三酯;
BLQ*;在定量限以下。
1高胆固醇饮食包括0.45%w/v胆固醇加12.75%w/v椰子油。
总体重及食物摄取。在本研究持续期间,在不同的处理组之间,未观测到体重增加的显著的区别。然而,观察到了食物摄取中的一些区别。向所有兔子提供设定的饮食,并接受每天110g的食物。
胆固醇及甘油三酯总浓度。辛伐他汀在血浆总胆固醇中的效果在表4及表5中报告。辛伐他汀在甘油三酯水平中的效果在表6中报告。
表4.在药物处理的开始(第35天)及在末尾(第56天),在饲喂高胆固醇饮食@的新西兰雄兔中的总血浆和ApoB胆固醇浓度。
数据表示为平均值±SEM;在每个处理组中n=5,除了SVT中n=4;@高胆固醇饮食包括0.45%w/w胆固醇加12.75%椰子油。*p<0.05对CON。
缩写:ApoB,Apo脂蛋白B;CON,对照;辛伐他汀3mg/kg/天;A,化合物A 20mg/kg/天;B,化合物B 20mg/kg/天;C,化合物C 20mg/kg/天;%C,从第35天到第56天的百分比变化。
表4及图5中显示化合物A、B、C及辛伐他汀的处理在总血浆胆固醇水平上的效应。与未处理的对照相比,辛伐他汀处理显著地减少在药物处理的开始(第35天)及结束(第50天)间的总血浆胆固醇和甘油三酯浓度的增长(图5及6)。与未处理的对照相比,化合物A处理减少化合物A处理的开始(第35天)和结束(第56天)间的总血浆胆固醇浓度上升(表4及图5)。化合物B和C在总血浆胆固醇浓度中无影响。除此之外,化合物A、B及C不影响总血浆甘油三酯浓度(图6)。化合物A产生的作用说明其活性主要在肠胃道中并仅影响膳食胆固醇吸收,而辛伐他汀的作用主要涉及于胆固醇的细胞合成。
HDL及apoB胆固醇浓度。辛伐他汀在血浆apoB及HDL胆固醇浓度中的效果分别地在表7及表8中报告。和未处理的对照相比,在辛伐他汀组中,药物处理开始(第35天)和结束(第56天)间,血浆HDL胆固醇水平中未观察到统计学上的显著差异(图8)。与未处理的对照相比,辛伐他汀处理显著减少药物处理的开始(第35天)和结束(第56天)间的apoB-胆固醇浓度上升(图7)。
与未处理的对照相比,用化合物A处理减少药物处理的开始(第35天)和结束(第56天)间的apoB-胆固醇浓度上升(图7)。化合物B和C在apoB胆固醇浓度中无作用,除此之外,化合物A、B及C不影响HDL胆固醇浓度(图8)。
前述结果证实了化合物A(氢质子化的分层的页硅酸盐材料)在严重的血脂异常模型中显示降低胆固醇的活性。因此,特别涵盖了将氢质子化的分层的页硅酸盐材料用于治疗高胆固醇血症的用途。
实施例12—分层的页硅酸盐材料在大鼠模型中减少高胆固醇血症
进行的随后的实施例,采用Wassan等人,J.Pharmaceut.Sci,90:23-28,2001中报告的方法学,用于确定在雄性Sprague Dawley大鼠口服不同的分层的页硅酸盐化合物后的膳食胆固醇的生物可利用度及药代动力学。
胆固醇制剂的制备:使用乳液的外相稀释商业可得的20%Intralipid以达到甘油三酯浓度为10%v/v。冷的胆固醇溶解在100%乙醇(1mg/75μl)中,该溶液在磁力搅拌下缓慢地添加到10%Intralipid中。[3H]胆固醇的甲苯溶液(25μl/ml)随后缓慢加入,并涡旋震荡30秒。该制剂随后由磁力搅拌混合额外地30分钟直到适于给予。最终的制剂含有90%的所述10% Intralipid、7.5%乙醇和2.5%甲苯。冷的及放射素标记的胆固醇的最终浓度分别为1mg/ml及25μCi/ml。
依泽替米贝制剂的制备:商业上可得的依泽替米贝药片压碎并悬浮于双蒸水中,以达到依泽替米贝的最终浓度为5mg/ml。该悬浮液被大致地涡旋震荡并随后使用磁力搅拌器搅拌约1小时直到适于给予。
豆甾醇制剂的制备:豆甾醇使用Tween 80(1%v/v最终浓度)预湿,并悬浮于2%羧甲基纤维素钠的双蒸水溶液中。该悬浮液大致地涡旋震荡约3分钟,室温下超声处理(Bransonic3510)2小时并随后使用磁力搅拌器搅拌30分钟直到适于给予。悬浮液中豆甾醇的最终浓度为25mg/ml。
实验设计:用于本研究的所有大鼠按照加拿大动物保护协会及英国哥伦比亚大学颁布的原则看护。成年的雄性Sprague Dawley大鼠(称重为约350g)得自UBC动物护理单位(温哥华,B.C.,加拿大)。大鼠在12小时光照(0700-0900)/黑暗循环中培育并给予标准实验室饮食(PMI Feeds,Richmond,VA,USA)及随意给水。右侧外部颈静脉使用由两件式的导管插入,所述导管由PE50组成并连接到0.02英寸的短长度的硅酮管上,所述硅酮管插入超过锁骨3.2cm(Hauss等,Contemp Top Lab Anim ScL,37(3):56-581998)。颈部套管穿过皮肤下并通过颈后的小刺伤伤口取出。本研究持续期间,动物配备以夹套-及栓绳的部件,并放置于代谢试笼中。
在外科步骤结束后,动物禁食过夜并允许其恢复16-20小时。操作后及在本研究期间,允许自由地得到饮用溶液,所述溶液含有5%的葡萄糖的乳酸盐Ringer溶液。使用随后的处理规程。在禁食过夜之后(12-16小时),大鼠被分为下列十四个处理组之一,并以0700h的以下任一接受单剂量的口服填喂(1g英脱利匹特乳液)
(1)[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特+NS(空白对照),n=11;
(2)二氢谷甾醇(豆甾醇)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特(阳性对照),n=6;
(4)单独的钠膨润土化合物(钠膨润土参考对照-蒙脱石粘土,其中可交换离子为约80%钠离子及约20%钙/镁离子)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=7;
(5)化合物A(按照实施例2中所述制备)(按重量20mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=5;
(6)化合物A(按照实施例2中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(7)化合物A(按照实施例2中所述制备)(按重量100mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(8)化合物G(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(9)化合物H(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(10)化合物I(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(11)化合物J(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=5;
(12)化合物K(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;
(13)化合物L(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6;或
(14)化合物M(按照实施例7中所述制备)(按重量50mg/kg)+[3H]胆固醇(25μCi)+1mg胆固醇/1g 10%英脱利匹特,n=6。
设计处理组1-3以证明动物模型按照期待地起效,并显示二氢谷甾醇及Zetia与空白对照相比在减少胆固醇吸收上的作用。设计处理组4-14以证明各种分层的页硅酸盐材料在严重血脂异常模型中在减少胆固醇上的作用。将所有的测试化合物A、G、H、I、J、K、L或M作为单独的浆通过口服管饲法给予动物。
在经口服给予后,在给予剂量前和给予剂量前10分钟及在给予剂量后0.5、1、2、4、6、10、24、28、32及48小时收集系列血液样本到涂布EDTA的管中。取出的血液由等体积的生理盐水取代,以防止血容量过低。在血液取样持续的时间中大鼠保持空腹(剂量给药前12小时+剂量给药后24小时=40小时总空腹)。通过离心获得血浆,并通过放射能力分析[3H]胆固醇。血浆中给予的胆固醇的浓度参照外标曲线通过放射能力的方式确定,并表示为ng/ml当量。之前显示在大鼠经口服给予[3H]胆固醇后,血浆中多于90%的放射能力计数与被酯化或未酯化的胆固醇有关(Wasan等,J.Pharm.ScL,90:23-28,2001)。
[3H]胆固醇的分析:血浆中放射性标记的胆固醇浓度参照外标曲线(经淬灭和发光的校正)使用放射性能测定。使用购自Sigma Diagnostics(St.Louis Mo.)的酶测定试剂盒测定总胆固醇浓度。
胆固醇吸收及药动力学数据分析:[3H]胆固醇在独立的动物中的血浆浓度对时间的数据由非分割方法,使用适用于DOS的WinNonlin软件(版本1.1)分析。
统计学分析:所有的分析使用SAS系统(SAS Institute Inc.)进行。AUC,最大浓度(Cmax)及最大浓度的时间(Tmax)将使用方差分析(ANOVA)进行统计上的比较。
结果:结果指示化合物A、G、H、I及M相比对照,在减少大鼠中的胆固醇吸收中是成功的。参见下文的表5及图9。
表5.当给予不同的分层的页硅酸盐材料化合物时,由胆固醇的血浆浓度-时间曲线图计算的AUC。
*%对照组意味着胆固醇与对照相比的降低%。例如,对于依泽替米贝而言,吸收的胆固醇的数量与对照相比为8.6%。因此,依泽替米贝的给予导致血浆中测得的91.4%更低的标记的放射性胆固醇。
放射性胆固醇在其经口服给予测试的材料后的血浆-浓度曲线图:在给予胆固醇及分层的页硅酸盐材料、依泽替米贝(阳性对照)或豆甾醇(阳性对照)以及生理盐水(阴性/空白对照)后的放射性胆固醇血浆浓度-时间曲线图(表示为ng/ml当量)示于图9中。图9显示暴露的量级,而非由不同的处理影响的曲线图的外形。这指示了观察到的差别通常地与吸收阶段有关,而不是与随后的分布或消除问题有关。这并不令人意外,这是由于分层的页硅酸盐材料在经口服给予之后不被吸收,其作用局限于肠腔中。应该指出,两种阳性对照、依泽替米贝及豆甾醇的作用机制也与胆固醇体内平衡的肠吸收阶段有关。
分层的页硅酸盐材料的氢质子化在其抑制肠胆固醇吸收上的效应:从生理盐水组(空白对照)、钠膨润土对照组、化合物A(50mg/kg)、化合物K(50mg/kg)的血浆浓度-时间曲线图计算的曲线下的面积(AUC0-48h)示于图10及11中。与对照动物(AUC0-48h=80861±5911h*mg/ml,平均值±SEM)相比,在使用化合物A(AUC0-48h=55400±7555h*mg/ml,平均值±SEM)处理的大鼠中胆固醇吸收有统计学上显著的31.5%的减少。与此相对比,在对照动物及接受同样剂量(50mg/kg)的钠膨润土对照(AUC0-48h=79744±4707h*mg/ml,平均值±SEM)或者化合物I(AUC0-48h=70718±9019h*mg/ml,平均值±SEM)的大鼠中没有显著的差异。化合物A回到钠形式(即化合物K)的转化导致在胆固醇吸收(AUC0-48h=90992±13460h*mg/ml,平均值±SEM)上的作用的损失。这些结果暗示通过离子交换柱方式的分层的页硅酸盐材料的氢质子化增加了其抑制肠胆固醇吸收上的效力。考虑到前述胆固醇分子到膨润土粘土的报告(Nikkila等人,Ann.Med.Exp.Biol.Fenn.,30:51-58,1952),结果暗示化合物A(氢质子化的分层的页硅酸盐材料)通过在肠胃道中直接吸收胆固醇分子而减少胆固醇吸收的程度。在体内条件下其他的机制也是可能的。例如,胆汁酸、脂肪酸、甘油单酯或含有胆固醇的混合微团的其他成份在分层的页硅酸盐材料中的吸收或在共同给予基于脂质的制剂的脂肪分解过程中的改变。该结果也由食品级二氧化硅在胆汁盐吸收中(Peluso等人,J.Nutr.,124:853-860,1994)及胆汁盐由氧铋基碱式水杨酸盐和蒙脱石的吸收的体外作用支持,所述氧铋基碱式水杨酸盐和蒙脱石为Pepto-Bismol(Kocoshis等人,Dig.Dis.ScL,24:1148-1152,1984)中的活性成分。令人感兴趣地,将分层的页硅酸盐材料使用盐酸质子化(即化合物J)在此化合物抑制胆固醇吸收(AUC0-48h=99511±7415h*mg/ml,平均值±SEM)的效力上失败了。
胆固醇吸收的抑制程度与化合物A剂量的依赖性:图12显示对放射性胆固醇的暴露与给予的化合物A的剂量的相关性,所述化合物A以0mg/kg(对照)、20mg/kg、50mg/kg及100mg/kg给予。50mg/kg(AUC0-48h=55400±7555h*mg/ml,平均值±SEM)及100mg/kg(AUC0-48h=49609±2090h*mg/ml,平均值±SEM),而非20mg/kg(AUC0-48h=72227±10560h*mg/ml,平均值±SEM)的给予与对照相比,导致胆固醇吸收的显著降低。随着化合物A的剂量增加,在作用中有增加的趋势,而对治疗响应的可变性下降。然而,当剂量从20mg/kg增加到50mg/kg,随后到100mg/kg时,尽管有胆固醇吸收下降的连续趋势,发现在组间(剂量的相关性)该作用的增加不是统计学上显著的。
化合物A与临床上使用的胆固醇吸收抑制剂的比较:图13显示了当给予生理盐水(空白对照)(AUC0-48h=80861±5911h*mg/ml,平均值±SEM)、50mg/kg化合物A(AUC0-48h=55400±7555h*mg/ml,平均值±SEM)、50mg/kg豆甾醇(AUC0-48h=55742±3764h*mg/ml,平均值±SEM)或给予10mg/ml依泽替米贝(AUC0-48h=6937±462h*mg/ml,平均值±SEM)时暴露于放射性标记的胆固醇的比较。结果指示,与对照相比,化合物A及豆甾醇都诱导同样在统计学上显著的肠胆固醇吸收的抑制。使用依泽替米贝的处理导致比化合物A或豆甾醇更高的肠胆固醇吸收抑制。
总结:结果暗示,表面修饰的分层的页硅酸盐材料,例如此处所描述的那些,显示为在肠的胆固醇吸收抑制的水平上,对大鼠中高胆固醇血症的有效的辅药疗法。通过离子交换柱的分层的页硅酸盐材料的质子化导致减少胆固醇吸收效力的上升。
前述的结果证实了化合物A、G、H及I在严重的血脂异常模型中显示降低胆固醇的活性,当与其他分层的页硅酸盐材料比较时,化合物A证明了增加的效力。因此,作为本发明的一个方面,考虑将化合物A,或任何其他氢质子化的分层的页硅酸盐材料用作高胆固醇血症的疗法。同时涵盖纯化的钠分层的页硅酸盐材料用作高胆固醇血症的疗法的应用。
实施例13—分层的页硅酸盐材料在ApoE-缺失的小鼠中减少血浆胆固
醇浓度
将进行在Lukic等人(Metabolism,52:425-431,2003;其内容在此以其全文结合作为参考)中报道的实验,并测定在此描述的分层的页硅酸盐材料在ApoE缺失的小鼠的血浆胆固醇水平上的作用。预期在与对照比较时,使用在此描述的分层的页硅酸盐材料的处理导致降低的总血浆胆固醇浓度。
实施例14—分层的页硅酸盐材料在ApoE-缺失的小鼠中减少动脉粥样
硬化损伤的形成
随后的实施例显示了分层的页硅酸盐材料的给予在Apo-E缺失小鼠中减少动脉粥样硬化的损伤形成(Lukic等人Metabolism,52:425-431,2003),其超过基于所测试小鼠血液胆固醇期待的降低水平。Apo-E小鼠选做合适的动物模型,这是由于这些小鼠产生严重的高胆固醇血症及动脉粥样硬化损伤,其与在人类中观察到的那些症状在分布和外观上类似。
动物模型:C57B1/6 B6.129P2-ApoETM1USN小鼠,4周龄,带有ApoE基因的纯合删除,购自Jackson Laboratories,U.S.A.。这些动物在摄取高胆固醇饮食后显示严重的高胆固醇血症(Moghadasian等人,Atheroscler.Thromb.Vase.Biol.,17:119-126,1997;Moghadasian等人,Life ScL,64:1029-1036,1999,其内容以其全文在此结合作为参考)。
啮齿目动物饮食:低脂肪(LF)及高脂肪高胆固醇(HF)饮食购自Research Diets,Inc.LF=10kcal%脂肪。HF=45kcal%脂肪。不同剂量的化合物A(按照实施例2中前述制备)、豆甾醇和辛伐他汀混入商业可得的饮食中(Research Diets,Inc.)。各种饮食的组成列于下文表6中,其附加于此处。
处理组:小鼠分入下列九个处理组中之一:(1)含有0.11%w/w化合物A的HF饮食:(2)含有0.6%w/w化合物A的HF饮食;(3)含有1.4%w/w化合物A的HF饮食:(4)含有2%w/w化合物A的HF饮食;(5)含有2%w/w豆甾醇的HF饮食(阳性对照);(6)含有0.03%w/w辛伐他汀的HF饮食(阴性对照);(7)单独的HF饮食(无处理)(对照);(8)单独的LF饮食(无处理);以及(9)含有2%w/w化合物A的LF饮食。在处理开始之前,几只ApoE小鼠由于与化合物A无关的疾病及体重降低被从本研究中去除。
实验设计:在收到后,61只小鼠被随机地分为9组,置于笼中,并饲喂以LF饮食。在驯化两周之后,所述小鼠基于其总血浆胆固醇水平及重量(在总血浆胆固醇和重量之间没有统计学上的显著差异)分为前面标出的9个处理组之一。所有动物具有饮食和水的无限制的使用权。每两周测量重量,每周测量食物摄取。从隐静脉在基线,及随后每两周取血液样品,并收集于EDTA管中,离心(10,000rpm 4℃ 15分钟),收集血浆。总血浆胆固醇及甘油三酯水平使用酶试剂盒测定。在12周末,所有的小鼠使用CO2处死。从右心室取血。动物的心脏使用1mL10%的缓冲的福尔马林溶液(BFS)通过左心室缓慢地灌注。具有主动脉的心脏被取出并储存于10%BFS中,以进行动脉粥样硬化损伤的分析。本研究总共持续14周。
动脉粥样硬化损伤的定性分析:去除主动脉周围的组织,包括脂肪,并在液氮中冷冻。将主动脉从主动脉根部上5mm切割成3个连续的薄片(10μmol/L)。薄片使用Oil-Red-O、Movat′s Pentachrome及苏木素-伊红着色。对处理组不清楚的独立病理学家基于四个准则评价所述损伤的形成(1)暴露面积;(2)损伤的最大厚度;(3)生存力;及(4)具有一些损伤的主动脉%。
统计学分析:结果表示为平均值±SEM。为了为了得到处理组和未处理对照组间的差别,使用单因素ANOVA试验,之后使用Tukey-Kramer多重比较试验或Dunnet多重比较试验。<0.05的p值指示组之间显著的差异。
结果:基于身体的表现,没有动物表现由于化合物A的给予任何有害的作用。其皮毛是白色、闪光和健康的。所述动物的活力和行为在所有组之间类似,并与ApoE缺失的表现型一致。
体重的基线为19g(平均)及在12周之后为33.2(平均)。在所有研究阶段中相似的食物及饮水的摄取的结果是,体重在实验期间,在所有的组中(处理及对照)以相同的量增长。在本研究持续期间所有处理及对照组的平均食物摄取为3.14g/天。
血浆总胆固醇水平。化合物A在血浆总胆固醇上的作用在图14及表7中显示。与基线相比,对照的ApoE缺失小鼠表现出高的血浆胆固醇水平。
表7.使用化合物及多种对照处理的小鼠的总血浆胆固醇水平(mg/dL)。
所有浓度下的化合物A给予:与未处理的对照相比,HF饮食中0.11;0.6;1.4,及2%减少了从处理的开始(第0周)到结束(第12周)间的总胆固醇的上升。与非处理对照相比,HF饮食中1.4%的剂量的化合物A给予显著地降低了(29%)总胆固醇的增长(在结束(第12周)和开始(第0周)之间Δ(W12-W0))。(p<0.05)
如同期待地,豆甾醇显著地降低(49.8%)总胆固醇的升高。(p<0.05)
血浆甘油三酯水平。相对于对照动物,在所有处理组间,所有的时间点上未观察到统计上显著的甘油三酯水平的差别。该观察,以及在研究期间在体重和食物摄取中无变化这一事实(数据未显示)表示化合物A与胆固醇吸收抑制之间的相对选择性。
动脉粥样硬化损伤。各种治疗组在损伤形成中的作用示于下文图15中。与未处理的HF对照动物的损伤面积相比,化合物A 1.4%处理组中的总损伤面积为统计上显著的(即总面积56%的减少)。(图16)。与未处理的HF对照相比,2%剂量的豆甾醇也具有统计上显著的减少(即58%的总面积的减少)。与未处理的LF对照相比,化合物A以LF饮食中2%的剂量的给予具有总面积71%的减少。
与未处理的HF对照相比,化合物A以HF饮食中1.4%的剂量的给予具有损伤的最大厚度32%的减少。与未处理的HF对照相比,豆甾醇以HF饮食中2%的剂量具有损伤的最大厚度50%的减少。
对照组及1.4%w/w化合物A处理组的主动脉根部中的代表性损伤的图像(示于图17A中)将图16中表示的面积差异可视化。
总结:与未处理的对照相比,本试验的结果证实了使用化合物A以1.4%w/w的剂量处理12周显著地减少总血浆胆固醇浓度达30%以上。出人意外地,与未处理的对照相比,血浆胆固醇浓度的这一减少被认为是动脉粥样硬化损伤形成的多于50%的减少。令人感兴趣的是,使用化合物A在1.4%w/w的剂量的处理表现为最有效的,而更低或更高的化合物A的剂量的作用较低。
化合物A的给予在胆固醇吸收中的作用看起来是相对地有选择性的,如血浆甘油三酯浓度无变化及体重和食物摄取缺少变化所证明的。具有化合物A的高脂肪/高胆固醇饮食的补充对动脉粥样硬化损伤形成所显示出的显著作用是尤其重要的,这是由于降低胆固醇的处理的最终目的是降低动脉粥样硬化的发展。
不愿意受任何特定的理论所限制,在本研究的持续期间(即12周),与血浆胆固醇浓度降低相比,损伤的更多减少可以被归因为减少的胆固醇水平的累积作用。可选地,肠运输时间的改变、胆固醇微团的破坏、在胆固醇胞旁及穿过细胞的运输上的作用、肠转运子的流入和流出的改变以及负责脂分解或胆固醇微团形成的肠胃酶的潜在变化可能是使用化合物A处理后的动脉粥样硬化损伤的令人惊奇的减少的成因。
不管小鼠中动脉粥样硬化损伤减少的实际机制,此处提供的该结果证明了化合物A是在哺乳动物受试者中用于治疗与动脉粥样硬化(或至少治疗动脉粥样硬化损伤的治疗)有关的心血管障碍的候选的疗法。
在小鼠中2%甾烷醇剂量,而在人类中3g/天/70kg受试者的剂量是有效的。相比于2%的甾烷醇剂量,此处呈现的数据证明了化合物A在剂量为1.4%的时候是有效的。因此,在一些实施方案中,具体地涵盖了化合物A以约3g/天/70kg受试者的剂量给予。
所有的本说明书中引用的和/或列于应用信息表中的上述美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请及非专利出版物在此以其全文结合用于参考。
从前文应该认识到,尽管本发明具体的实施方案已经在此为了例证进行描述,可以在不悖离本发明的精神和范围下进行各种变化。
Claims (44)
1.治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,其包括以有效减少所述受试者中动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。
2.权利要求1所述的方法,其中所述心血管障碍选自动脉粥样硬化、冠心病、脑动脉疾病、外周动脉疾病、心肌梗塞、中风、斑块破裂、斑块蚀损、急性冠状动脉综合征、短暂性脑缺血发作、心绞痛、不稳定心绞痛、血栓症、缺血性心脏病、冠心病以及移植引发的硬化。
3.权利要求1所述的方法,其中所述哺乳动物受试者患有心血管动脉粥样硬化、脑血管动脉粥样硬化、外周血管动脉粥样硬化、冠状动脉心脏动脉硬化或其组合。
4.权利要求1所述的方法,其中所述哺乳动物受试者患有肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病、高血压、高胆固醇血症或其组合。
5.权利要求1所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括相对于所有间层可交换阳离子的至少90%同素离子的间层可互换阳离子,并具有小于74μm的颗粒尺寸。
6.权利要求1所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括主要为质子化的氢阳离子的间层可交换阳离子。
7.权利要求1所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括主要为钠阳离子的间层可交换阳离子。
8.权利要求1所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料阻碍胆固醇在肠胃道内或从肠胃道的合成和吸收,从而减少所述受试者中的动脉粥样损伤形成。
9.权利要求1所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料还包括药学上可接受的载体、稀释剂或佐剂。
10.权利要求1所述的方法,其中所述哺乳动物受试者为人类。
11.权利要求10所述的方法,其还包括给予所述受试者护理标准治疗。
12.权利要求11所述的方法,其中所述护理标准治疗为减少胆固醇的试剂。
13.权利要求12所述的方法,其中所述减少胆固醇的试剂选自斯达汀相关的试剂、烟酸、贝特、胆汁酸树脂、胆固醇吸收抑制剂、水杨酸、植物甾醇、藻酸盐或果胶、卵磷脂及与减少胆固醇相关的营养食品。
14.权利要求13所述的方法,其中所述斯达汀相关的试剂选自洛伐他汀、阿伐他汀、帕伐他丁、辛伐他汀以及氟伐地汀。
15.权利要求13所述的方法,其中所述贝特选自苯扎贝特、环丙贝特、安妥明、吉非罗齐及非诺贝特。
16.权利要求13所述的方法,其中所述胆汁酸树脂选自消胆胺、降脂树脂Ⅱ号及cholsevelam。
17.权利要求13所述的方法,其中所述胆固醇吸收抑制剂为依泽替米贝。
18.权利要求13所述的方法,其中所述植物甾醇选自豆甾醇、谷甾醇、二氢谷甾醇以及甘蔗脂肪醇。
19.权利要求13所述的方法,其中所述降低胆固醇相关的营养食品选自儿茶素没食子酸盐(EGCG)、Cholest-ArrestTM、CholestawayTM、CholestOffTM及KyolicTM。
20.权利要求11所述的方法,其中所述护理标准治疗为减少甘油三酯的试剂。
21.权利要求11所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料与治疗试剂一起给予。
22.权利要求11所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料与护理标准治疗顺序给予。
23.治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,其包括给予所述受试者联合治疗,所述联合治疗包括(a)分层的页硅酸盐材料和(b)护理标准治疗,
其中所述联合治疗以有效减少所述受试者中动脉粥样硬化损伤形成的量给予。
24.权利要求23所述的方法,其中所述心血管障碍选自动脉粥样硬化、冠心病、脑动脉疾病、外周动脉疾病、心肌梗塞、中风、斑块破裂、斑块蚀损、急性冠状动脉综合征、短暂性脑缺血发作、心绞痛、不稳定心绞痛、血栓症、缺血性心脏病、冠心病以及移植引发的硬化。
25.权利要求23所述的方法,其中所述哺乳动物受试者患有心血管动脉粥样硬化、脑血管动脉粥样硬化、外周血管动脉粥样硬化,冠状心脏动脉粥样硬化或其组合。
26.权利要求23所述的方法,其中所述哺乳动物受试者患有肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病、高血压、高胆固醇血症或其组合。
27.权利要求23所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括相对于所有间层可交换阳离子的至少90%同素离子的间层可互换阳离子,并具有小于74μm的颗粒尺寸。
28.权利要求23所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括主要为氢阳离子的间层可交换阳离子。
29.权利要求23所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料包括主要为钠阳离子的间层可交换阳离子。
30.权利要求23所述的方法,其中所述哺乳动物受试者为人类。
31.权利要求23所述的方法,其中所述护理标准治疗为减少胆固醇的试剂。
32.权利要求31所述的方法,其中所述减少胆固醇的试剂选自斯达汀相关的试剂、烟酸、贝特、胆汁酸树脂、胆固醇吸收抑制剂、水杨酸、植物甾醇、藻酸盐或果胶、卵磷脂及与减少胆固醇相关的营养食品。
33.权利要求32所述的方法,其中所述斯达汀相关的试剂选自洛伐他汀、阿伐他汀、帕伐他丁、辛伐他汀及氟伐地汀。
34.权利要求32所述的方法,其中所述贝特选自苯扎贝特、环丙贝特、安妥明、吉非罗齐及非诺贝特。
35.权利要求32所述的方法,其中所述胆汁酸树脂选自消胆胺、降脂树脂Ⅱ号及cholsevelam。
36.权利要求32所述的方法,其中所述胆固醇吸收抑制剂为依泽替米贝。
37.权利要求32所述的方法,其中所述植物甾醇选自豆甾醇、谷甾醇、二氢谷甾醇以及甘蔗脂肪醇。
38.权利要求32所述的方法,其中所述降低胆固醇相关的营养食品选自儿茶素没食子酸盐(EGCG)、Cholest-ArrestTM、CholestawayTM、CholestOffTM及KyolicTM。
39.权利要求23所述的方法,其中所述护理标准治疗为减少甘油三酯的试剂。
40.权利要求23所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐与护理标准治疗一起给予。
41.权利要求23所述的方法,其中所述分层的页硅酸盐材料与护理标准治疗顺序给予。
42.治疗哺乳动物受试者中与动脉粥样硬化有关的心血管障碍的方法,在所述受试者中使用护理标准治疗的治疗是治疗不当的,其中所述方法包括以有效减少所述受试者中动脉粥样硬化损伤形成的量给予所述受试者分层的页硅酸盐材料。
43.权利要求42所述的方法,其中所述护理标准治疗为降低胆固醇的试剂。
44.权利要求42所述的方法,其中所述护理标准治疗为植物甾醇。
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